三聚氰胺单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

采用牛血清白蛋白偶联的三聚氰胺( melamine- BSA)完全抗原免疫BALB/C小鼠,应用杂交瘤技术制备抗三聚氰胺的特异性单克隆抗体.所得单克隆抗体效价可达5.0×105,且抗体的亚类类型为IgG1,抗体的亲和常数为3.21×109 L/mol.与三聚氰酸、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺的交叉反应率分别为30％、93％和46％.说明该单抗可用于三聚氰胺类物质的检测,为研制高质量的三聚氰胺ELISA试剂盒和胶体金试纸条奠定了基础.     

免疫比浊法定量检测葡聚糖的研究

葡聚糖影响甘蔗品质及制糖生产,主要表现在糖分损失、糖液粘度增加、过滤困难、结晶异常、糖产品适用性受限等,从而降低提糖率,增加制炼成本,影响糖产品质量。本文对单克隆抗体比浊法测定葡聚糖的方法学进行研究,结果表明,该方法能快速准确测定糖厂蔗汁等在制品及产品中葡聚糖含量,线性范围10～500 mg/L,检测限为10 mg/L,加标回收率98%～102%,RSD〈4%,灵敏度1.3 mg/L。     

腈菌唑单克隆抗体制备与胶体金检测方法的建立

目的 制备高灵敏度腈菌唑单克隆抗体,建立芹菜样本中腈菌唑胶体金快速检测方法。方法 对腈菌唑化学结构进行改造,合成两种半抗原,与载体蛋白偶联,免疫小鼠,制备单克隆抗体。结合胶体金技术,优化抗体标记参数等,建立胶体金的检测方法,并对检测性能进行评价。结果 由所制备的单克隆抗体开发的胶体金试纸条半数抑制浓度为2.10μg/L,线性范围为0.62～7.25μg/L,与其他三唑类杀菌剂和芹菜中常见杀虫剂的交叉反应率均小于5%;可定性检测芹菜样本中腈菌唑是否超过GB2763—2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》限量,检出限为50μg/kg;通过实际阳性样本测试与气相色谱-串联质谱法比较,符合性较好,结果可靠。结论 基于两种半抗原免疫制备的抗体,可建立腈菌唑胶体金检测方法,检出限满足国家标准限量要求,可应用于现场的快速筛查。     

葡聚糖酶应用于甘蔗制糖过程的试验研究

2013/14年榨季在广西农垦的多家糖厂进行了葡聚糖酶应用的生产性试验。结果表明葡聚糖酶可有效清除制糖物料中的葡聚糖,除去率达到98%以上,清混汁纯度差达到2 AP以上,煮炼回收率提高1个百分点以上。使用葡聚糖单抗试剂盒能快捷、准确测定甘蔗原料、在制品和产品中的葡聚糖含量,解决制糖生产中葡聚糖测定的大难题。     

葡聚糖对制糖工业的影响及对策(上)

由甘蔗或甜菜带来的肠膜明串珠菌形成的葡聚糖会造成制糖过程处理困难和糖分损失,从而明显地影响糖厂的经济效益.本文主要介绍葡聚糖对制糖工业的负面影响及其在制糖过程中产生的原因、预防措施、测定和去除的方法.     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为157.33ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到11 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39ng/mL,且特异性强。说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

呋喃西林代谢物单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

为建立呋喃西林代谢物氨基脲（semicarbazide,SEM）的免疫学检测方法,采用碳化二亚胺法成功合成人工免疫抗原SEM-牛血清白蛋白（bovine serum albumen,BSA）（SEM-BSA）,并用该抗原免疫BALB/c小鼠,采用聚乙二醇介导的细胞融合技术制备SEM的单克隆抗体（SEM mAb）,采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单抗,并对其效价、敏感性、特异性和亲和力等免疫学特性进行鉴定。结果表明：成功制备SEM单克隆抗体SEM-3D9,抗体效价达到1∶5×106,敏感性半抑制质量浓度为0.42 μg/L,亚型为IgG1,亲和常数Ka=2.1×108 L/mol,与呋喃唑酮代谢物2-NP-3-氨基-2-恶唑酮、呋喃它酮代谢物2-NP-5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮类似物的交叉反应率（cross reaction,CR）均小于0.01%,与呋喃妥因代谢物2-NP-1-氨基-2-乙内酰的CR为0.016 8%,特异性良好。     

低热量葡聚糖制备的工艺条件研究

低热量葡聚糖是水溶性食物纤维的一种。由于其中含有难消化成分，因而热量低。本文研究了低热量葡聚糖制备的几个工艺条件，主要对真空条件、葡萄糖分离对产品的影响进行了探讨。     

大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子（BBI）单克隆抗体（mAb）,以50 μg/只的免疫剂量将BBI免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA试验鉴定多抗血清效价和敏感性。选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到分泌BBI mAb的稳定杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备BBI mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明：1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度（IC50）为868.58 ng/mL。经细胞融合筛选得到5株杂交瘤细胞,其中3B7-B10 mAb效价达到1 ∶ 4.096×105以上,亚型为IgG1型,IC50为83.07 ng/mL,具有亲和力较高且特异性强的优点,表明所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立大豆及其制品中BBI的免疫学检测方法提供良好的抗体基础。     

抗Cry1c蛋白兔单克隆抗体的制备和鉴定

通过原核质粒表达重组Cry1c晶体蛋白,将其纯化后作为特定抗原免疫兔子。经多抗血清效价的测定,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选,构建重组载体等步骤获得抗Cry1c单克隆抗体。通过ELISA方法测定单克隆抗体相关特性,结果表明,Cry1c兔单克隆抗体效价超过3.2×104,其亲和常数为2.4×109L/mol,该单克隆抗体与Cry1Ac蛋白有微量交叉反应,与Cry1Ab蛋白无明显交叉反应。间接ELISA检测抗原Cry1c蛋白时,当包被量为400ng/mL时,判定为阳性。     

抗鸡蛋清提取物单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备和鉴定小鼠抗鸡蛋清提取物单克隆抗体.方法:以纯化后的蛋清提取物为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合.通过间接ELISA法筛选可特异性分泌抗蛋清提取物McAb的杂交瘤细胞.采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定McAb的Ig类与亚类;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定McAb的特异性.结果:获得2株可稳定分泌抗蛋清提取物McAb的的杂交瘤细胞,分别命名为5E12和4F1,其分泌的McAb均为IgGl.Western Blotting分析表明,McAb 4F1所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为44kD.间接ELISA法检测两株McAb5E12、4F1的冻融前后效价分别为1:3000、1:300.结论:成功制备了两株抗蛋清提取物McAb、5E12和4F1,为变应原的提取、纯化及鉴定提供了有效的实验基础.     

α-葡聚糖酶在甘蔗制糖中的应用研究进展

国外研究表明,α-葡聚糖酶可用于整个制糖生产过程,最佳添加点为提汁车间,α-葡聚糖酶的使用可取得良好的经济效益。国内还未见有相关工业应用研究的报导。本文简要分析葡聚糖对制糖生产的影响,并介绍国内外α-葡聚糖酶研究情况及其在甘蔗制糖生产过程中的应用进展,以期为α-葡聚糖酶的后续深入研究提供一定参考。     

葡聚糖对原糖精炼过程的影响

在生产线上通过不添加或添加葡聚糖酶,营造高葡聚糖浓度环境和低葡聚糖浓度环境。利用葡聚糖单克隆抗体试剂盒测定葡聚糖含量,并统计两试验期各生产和成品质量指标变化情况,从而推断葡聚糖对原糖精炼过程的影响。结果表明,加入葡聚糖酶能有效降低葡聚糖含量,营造低葡聚糖环境。对比两试验期数据发现高浓度葡聚糖会减弱澄清和脱色工艺效果,澄清脱色率、树脂脱色率、总脱色率和R1糖浆简纯度分别降低3.2%、0.4%、1.0%和0.23%。煮糖系统的前期糖浆纯度下降而后期明显上升,证明更多蔗糖从糖蜜中损失,产糖率下降1.60%,糖蜜损失蔗糖量对糖比上升0.15%。最后,葡聚糖进入成品糖,使产品葡聚糖含量超过130mg/kg。可见,葡聚糖对原糖精炼存在较大的负面影响。     

鸭骨骼肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及其特性

提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I（skeletal muscle troponin I,sTnI）用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行 评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE）测定,取凝胶条带免疫小鼠,融合后经筛选获得分泌抗鸭sTnI的杂交瘤细胞株,用 酶联免疫吸附测定法检测抗体效价、亚型及特异性等特性。结果表明：鸭骨骼肌提取物经SDS-PAGE后出现2 条 颜色较深的条带,取分子质量24 kDa条带用于免疫;筛选后获得2 株单克隆抗体,其中3E7特异性较好,效价在 1∶1.0×105以上,为IgG1亚型,亲和常数（Ka）为5.9×105 L/mol;免疫印迹结果显示,抗体3E7能与鸭骨骼肌提取 物反应,与牛、羊、鸡、鱼骨骼肌提取物无明显反应。     

抗莱克多巴胺单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定

莱克多巴胺(RAC)经化学修饰引入功能基团羧基,合成半抗原RAC- 戊二酸酐半醛化合物(RAC-SA),用混合酸酐法(MA)将RAC-SA 偶联于牛血清白蛋白(BSA),合成人工抗原BSA-RAC,用红外(IR)、紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对其进行鉴定;用BSA-RAC免疫Balb/C 小鼠,细胞融合技术建立抗RAC的单克隆抗体(RAC mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb,并鉴定其免疫学特性。结果表明,BSA-RAC 偶联成功,偶联率为24.5:1;筛选出3F10、3H12、4D8 共3 株杂交瘤细胞,其中最好的4D8 株间接ELISA 效价细胞培养上清为1:1.28 × 103,腹水为1:6.4 × 105,同种型为IgG1/κ,亲和常数(Ka)为1.65 × 1010L/mol,对RAC 的半数抑制浓度(IC50)为5.7ng/ml,与多巴酚丁胺的交叉反应率(CR)为22.3%,与其他化合物无CR。     

制备抗五氯酚钠单克隆抗体及其应用于酶联免疫试剂盒的初步研究

本文通过五氯酚钠与4-溴丁酸乙酯经过一系列反应,得到半抗原,制备出抗五氯酚钠单克隆抗体,然后利用酶联免疫技术研制了一种快速检测鱼肉、虾肉中的五氯酚钠试剂盒,经过测试,该试剂盒对鱼肉、虾肉样本的检测限为0.75μg/kg,IC50为0.31μg/L,平均回收率为71.5%¹04.7%,试剂盒的标准曲线范围为0.05⁴.05μg/L,批内、批间相对标准偏差小于10%,稳定性良好。