精氨酸升压素对心肌成纤维细胞胶原合成和一氧化氮合成的影响

目的 :探讨精氨酸升压素 (AVP)对心肌成纤维细胞 (CFs)胶原合成和—氧化氮 (NO)合成的影响。方法 :胰酶消化法分离培养新生SD大鼠CFs,3 H -脯氨酸掺入法测定CFs胶原合成功能 ,硝酸还原酶法测定CFsNO含量。结果 :①不同浓度AVP干预下CFs的3 H -脯氨酸掺入率随AVP浓度增加而增高 ,其中 10 -6mol·L-1AVP组的3 H -脯氨酸掺入率显著高于对照组 ;10 -7mol·L-1AVP干预下CFs的3 H -脯氨酸掺入率随培养时间延长而增高 ,其中 36h组的3 H -脯氨酸掺入率显著高于 6h组。②不同浓度AVP干预下CFs的NO含量随AVP浓度增高而增加 ,其中 10 -7mol·L-1AVP组和 10 -6mol·L-1AVP组的NO含量显著高于对照组、10 -9mol·L-1AVP组和 10 -8mol·L-1AVP组 ;10 -7mol·L-1AVP干预下CFs的NO含量随培养时间延长而增加 ,其中 2 4h组和 36h组的NO含量显著高于 6h组和 12h组。结论 :AVP促进CFs胶原合成和NO合成 ,NO合成增加能够拮抗AVP的促CFs胶原合成作用 ,延缓心肌纤维化发生。     

精氨酸升压素对心肌成纤维细胞增殖和一氧化氮合成的影响

目的探讨精氨酸升压素(AVP)对心肌成纤维细胞(CFs)增殖和一氧化氮(NO)合成的影响。方法采用胰酶消化法分离培养新生SD大鼠CFs,MTT法测定CFs细胞增殖数目,硝酸还原酶法测定CFsNO含量。结果在不同浓度AVP干预下,CFs的MTT光密度值(OD值)随AVP浓度的增加而增高,其中10^-6mol／L AVP组的MTT OD值显著高于对照组,在10^-7mol／L AVP干预下CFs的MTT OD值随培养时间延长而增高,其中36h组的显著高于6h组;在不同浓度AVP干预下CFs的NO含量随AVP浓度的增高而增加,其中10^-7mol／L AVP组和10^-6mol／L AVP组的NO含量显著高于对照组、10^-9mol／L AVP组和10^-8mol／L AVP组,在10^-7mol／L AVP干预下CFs的NO含量随培养时间延长而增加,其中24h组和36h组的NO含量显著高于6h组和12h组。结论AVP能促进CFs增殖和NO合成,NO含量增加能够拮抗AVP的促CFs增殖作用,延缓心肌纤维化发生。     

细胞内钙调控对心肌成纤维细胞增殖的作用

目的:探讨不同来源的细胞内Ca2+([Ca2+]i)对心肌成纤维细胞(fibroblasts,PBs)丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)介导的增殖反应的作用。方法:以培养的大鼠FBs为模型,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激FBs细胞外Ca2+跨膜内流、三磷酸肌醇(IP3)刺激胞内Ca2+释放,应用钙荧光指剂Fura-2/AM动态观测心肌细胞[ca2+]i浓度,γ-32P-ATP掺入法和免疫印迹(westen blot)测MAPK活性及蛋白含量,氚-亮氨酸(3H-Leu)、氚-胸腺嘧定(3H-TdR)掺入量作为FBs增殖的指标。结果:AngⅡ、IP3均能显著增加FBs[Ca2+]j浓度、MAPK活性及蛋白含量,并提高3H-Leu、3H-TdR掺入量,与对照组FBs相比差异显著,P<0.01。结论:激活[Ca2+]i使MAPK活性及含量明显增加而促进FBs的增殖,FBs的增殖与[ca2+]i浓度增加有关,与[Ca2+]i的来源无关。     

离体热损伤成纤维细胞所涉及的细胞信号通路

利用已建立的成纤维细胞热损伤诱导凋亡模型观察离体培养的成纤维细胞热烫伤后信号通路的活化情况。首先将原代培养的人成纤维细胞经5～6传代后，45℃水中孵育10min，造成单纯热损伤刺激，加入5％小牛血清继续培养，分别在伤后0、30、60和180min 4个时相点冻存细胞，运用Western blot进行MAPKs信号通路磷酸化蛋白印迹检测，同时采用荧光显微镜检测热损伤成纤维细胞caspase3蛋白的表达情况。结果显示，经过热损伤刺激的成纤维细胞，c-jun N末端激酶(JNK)首先开始表达，并在60min达到高峰，能持续至180min。细胞外信号调节激酶(ERK)的表达高峰在伤后30min，随后迅速消退。损伤早期，成纤维细胞内caspase3阳性标记的细胞数较少，至伤后60min，caspase3的表达明显增强。研究表明，ERK和JNK信号通路在热损伤诱导成纤维细胞生物学特性变化过程中具有重要意义。     

自发性高血压大鼠心肌肥大与心肌MAPK及AngⅡ的实验研究

通过观察高血压心肌肥厚与心肌丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＤＫ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的关系，探讨高血压心肌肥厚的可能细胞内信息传递机制，４个月的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和Ｗｉｓｔａｑｒ－ＫｙｏｔｏＷＫＹ）大鼠各８只。采用放地因主心肌组织ＡｎｇⅡ含量，凝胶内磷酸化法心肌ＭＡＰＫ活性，以心脏重／体重的比值表示心肌肥厚程度，与ＷＫＹ大鼠比较，ＳＨＲ心肌ＭＡＰＫ活性增加１０７．０％，血浆及心肌组织Ａｎ     

心肌局部血管紧张素Ⅱ激活MAPK参与运动性心肌肥大

在长期游泳训练的大鼠心肌组织中，观察了ＡＲⅡ（心肌局部血管紧张素Ⅱ）的促细胞肥大效应与ＭＡＰＫ（丝裂素活化蛋白激酶）活性的关系，以探讨ＡＴⅡ促进运动心肌肥大的信息传递机制。结果表明：运动组心系数增加了２３．８％，心肌局部ＡＴⅡ和ＭＡＰＫ活性分别增加了４８．７６％和４４５．４％，二者显著相关，相关系数ｒ＝０．７８７，提示心肌局部ＡＴⅡ通过激活ＭＡＰＫ参与运动性心肌肥大的发生。     

醛固酮对鼠心肌成纤维细胞NOS-NO系统活性的影响

目的　探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞 (CFs)增殖及对一氧化氮合酶 —氧化氮 (NOS NO)系统活性的影响。方法　采用胰酶消化法分离培养新生SD大鼠CFs,采用MTT比色法、硝酸还原酶法、分光光度法和半定量RT PCR技术 ,观察不同浓度醛固酮对CFs的增殖、NO含量、NOS活性和iNOSmRNA表达的影响。结果　 1× 10 -11～ 1× 10 -7mol/L的醛固酮能明显促进CFs的增殖 ,且呈剂量依赖方式 ;不同浓度醛固酮干预下CFs的NO含量、NOS活性及iNOSmRNA表达逐渐下降 (P均 <0 0 5 ) ,呈剂量依赖性 ;醛固酮干预下NO含量随NOS活性降低而降低 ,二者呈显著正相关 (r=0 95 8,P <0 0 1) ;螺内酯能阻断醛固酮诱导的CFs的NO含量、NOS活性和iNOSmRNA表达下降。结论　醛固酮能剂量依赖性地降低CFs的NOS NO系统活性 ,螺内酯能逆转此作用 ,可能是其致心肌纤维化的机制之一。     

罗格列酮对成纤维细胞条件培养液诱导心肌肥大的作用及机制

目的探讨罗格列酮(RSG)对成纤维细胞无血清条件培养液(FCGM)诱导心肌肥大的作用及其机制。方法分离获取新生大鼠成纤维细胞,用含10g/L胰岛素+转铁蛋白+硒化钠复合物(ITS)的无血清高糖DMEM培养,分别于第3、5、79、天收集FCGM,ELISA法检测其中内皮素-1(ET-1)的浓度。采用FCGM培养新生大鼠心肌细胞,检测其蛋白含量和蛋白激酶C(PKC)活性,并观察白屈菜季氨碱(che)、RSG对FCGM诱导心肌蛋白质合成的影响。结果 FCGM中含有ET-1,且培养3d时的浓度最高。FCGM可促进心肌细胞蛋白质合成,而RSG和che可阻断FCGM促心肌细胞蛋白质合成的作用并抑制心肌细胞PKC的活性。结论 FCGM诱导心肌肥大与其中的ET-1有关,RSG抑制心肌肥大的作用与抑制ET-1和PKC的活性有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对辐射诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的抑制作用

碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)作为一种多肽类生长因子 ,有着广泛的生理功能。对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有促有丝分裂的作用 ,在胚胎发育和组织分化中 ,是形态形成、促细胞分裂和诱导细胞分化不可缺少的因子[1 ] 。近年来 ,许多实验结果表明体外许多因素 ,如化学药物、细胞因子、辐射等都可诱导细胞凋亡[2 ] 。本研究ｂＦＧＦ对辐射诱导的免疫系统胸腺细胞凋亡的调节作用 ,旨在从一个侧面探讨ｂＦＧＦ作用于免疫系统的机理及其在辐射防护中的意义。一、材料和方法1 ｂＦＧＦ :由暨南大学生物工程研究所提供。2 动物照射 :昆明…     

反义核酸抑制放疗诱导的肝癌细胞VEGF高表达

目的：探讨放疗过程中放疗患者血清血管内皮生长因子（VEGF）升高的机理，以及VEGF反义硫代寡核苷酸（Antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODNs）对肝癌细胞VEGF表达分泌的抑制作用。方法。动态观察肿瘤患者放疗期间血清VEGF变化，体外培养肿瘤细胞，观察放疗对肿瘤细胞VEGF表达分泌的诱导作用及反义寡核苷酸的抑制效应。结果：肿瘤患者血清VEGF浓度在放疗期开始后逐渐升高，1－2周达到峰值后开始下降，到第6周时基本恢复到正常，肝癌细胞受X射线照射后VEGF的分泌量较对照组明显升高，VEGF反核组癌细胞VEGF蛋白表达水平较单纯照射组显著下降（P＜0．01）。结论：放射可诱导肿瘤细胞中VEGF的表达分泌。放疗患者放疗过程中血清VEGF浓度升高可能是由于癌细胞受照射后VEGF表达，分泌增加所致，VEGF反义寡核苷酸对放疗诱导的VEGF高表达有较好的抑制作用。     

急性颅脑损伤后精氨酸加压素动态变化的临床研究

目的研究急性颅脑损伤后血浆中精氨酸加压素（arginine vasopressin，AVP）的动态变化，探讨AVP与急性颅脑损伤后继发性脑水肿及其预后的关系。方法用放射免疫法检测45例急性颅脑损伤住院患者伤后12h、伤后3，5d血浆中AVP含量，并结合临床表现、影像学检查及格拉斯哥预后评分（GOS）进行比较分析。结果本组45例急性颅脑损伤患者伤后早期（12h内）血浆AVP含量随着格拉斯哥昏迷评分（GCS）下降均有不同程度的升高。颅脑损伤越严重，AVP升高越明显，脑水肿程度越重，脑水肿高峰持续时问越长（P〈0．01）。颅脑损伤早期血浆AVP含量与脑水肿严重程度（r=0．731，P〈0．01）和脑水肿高峰持续时问（r=0．776，P〈0．01）呈正相关。此外，不同GOS组之问AVP差异亦有统计学意义，其中预后不良组血浆AVP水平在伤后5d持续升高，而且显著高于预后良好组和正常对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论急性颅脑损伤后血浆中AVP的动态变化与急性颅脑损伤预后密切相关，AVP参与了颅脑损伤后继发性脑水肿形成的病理生理过程。     

辅酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对肼引起心肌成纤维细胞凋亡的保护作用

目的探讨辅酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)对肼引起的体外培养心肌成纤维细胞(CBF)凋亡的保护作用及机制。方法原代体外培养的心肌成纤维细胞分为对照组、肼(HZ)损伤组、NADH预处理组和NADH对照组。NADH预处理组采用NADH预处理2h后加入HZ作用72h,其余组加入相应的溶媒作用72h。采用Ho-echst33258染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡形态变化;AnnexinⅤ/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率和坏死率;Rodamine123荧光染色,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位的变化。结果NADH预处理组有核浓缩、聚集等凋亡形态的细胞明显减少,细胞凋亡率和坏死率降低,细胞内线粒体膜电位增高。结论NADH可使线粒体膜电位增高,从而减少HZ引起的CBF凋亡。     

反义寡聚核苷酸对阿片类药物药理作用的影响

阿片受体及受体后信号转导分子的反义寡聚核苷酸能影响相应阿片受体亚型激动剂的药理作用 ,其中包括阿片类药物的镇痛及其所致的耐受和依赖。其作用机制可能与抑制阿片受体表达 ,减少阿片受体量 ,影响受体后信号转导分子功能有关。这方面的研究对直接在分子水平探讨特定阿片受体的功能 ,阿片受体分型 ,分析阿片类药物产生镇痛、耐受和依赖等一系列药理作用的确切机制具有重要意义     

PTEN反义寡核苷酸对辛伐他汀调控心肌细胞肥大的影响

目的:观察抑癌基因—PTEN的反义寡核苷酸对辛伐他汀调控心肌细胞肥大的影响。方法:应用图像分析系统及[3H]-亮氨酸掺入法分别测定心肌细胞表面积及蛋白合成速率,RT-PCR检测心钠素(ANP)mRNA表达,RT-PCR和West-ern blot法检测PTEN的mRNA和蛋白表达水平。结果:辛伐他汀 PTEN反义链组心肌细胞表面积、[3H]-亮氨酸掺入率、ANP mRNA水平均明显高于辛伐他汀组(P<0.01),PTEN mRNA及蛋白表达水平明显低于辛伐他汀组(P<0.01)。结论:PTEN反义寡核苷酸能够抑制PTEN表达、部分逆转辛伐他汀对心肌细胞肥大的抑制作用。     

脂质体介导C-myc基因反义寡核苷酸对人膀胱癌细胞系Biu-87的生物学影响

目的 :探讨应用脂质体 (LR )介导C -myc基因反义寡核苷酸 (ASODN)对人膀胱癌细胞系Biu - 87的生物学影响。方法 :采用细胞计数、MTT比色法评价反义C -myc寡核苷酸对Biu - 87细胞体外增殖的影响 ,应用免疫组化 (SABC)、DAB显色检测C -myc反义寡核苷酸作用癌细胞后C -myc蛋白的表达情况。结果 :脂质体介导C -myc反义寡核苷酸组与对照组相比 ,Biu - 87细胞增殖活性受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,12h后可抑制C -myc基因蛋白表达。结论 :脂质体介导C -myc反义寡核苷酸可抑制人膀胱癌细胞体外增殖活性。应用反义技术封闭C -myc癌基因表达 ,为膀胱癌的基因治疗提供了新的思路     

阿托伐他汀对心脏成纤维细胞MMP-9/TIMP-1表达的影响

目的：观察阿托伐他汀（atorvastatin）对心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-9/组织型基质金属蛋白酶抑制因子-1（MMP-9/TIMP-1）表达的影响。方法：体外培养乳鼠心脏成纤维细胞（CF）,做细胞形态观察和心脏成纤维细胞标志性波形蛋白免疫荧光组化检测,明胶酶谱法测定MMP-9的活性,RT-PCR检测MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果：AngⅡ增加MMP-9的活性及mRNA的表达（P〈0.05）,同时TIMP-1的mRNA表达减少（P〈0.05）,阿托伐他汀在某种程度上可逆转上述变化（P〈0.05）。结论：Aorvastatin通过对MMP-9/TIMP-1表达的影响作为预防和治疗房颤的重要机制之一。     

正、负加速度交替急性大鼠脑组织NO、NOS及血浆ET的含量变化

目的：研究正、负加速度交替暴露后急性大鼠脑组织一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）及血浆内皮素（ET）的含量变化，探讨正、负加速度交替暴露后，易发生加速度引起意识丧失（G-indnced less of consciousness,G-LOC)的机制。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分成3组：对照组、正加速（ Gz）组和正、负加速度（ Gz和-Gz）交替组。于暴露后即翔麻醉采血、取脑。测定脑组织NO、NOS及血浆中ET的含量。结果： Gz组和 Gz、-Gz交替组与对照组比较，脑组织中的NO、NOS及血浆中ET的含量增多，有显著性差异； Gz、-Gz交替组与 Gz组比较，脑组织中的NO、NOS及血浆中ET的含量增多，有差异性。结论： Gz、-Gz交替暴露和单纯 Gz、-Gz暴露均可使脑组织中的NO、NOS及血浆中ET的含量增多；且 Gz、-Gz交替暴露增多明显。说明 Gz、-Gz交替暴露对大脑所致损伤程度更重。