蒙古口蘑与双孢蘑菇原生质体融合育种研究

以蒙古口蘑和双孢蘑菇为出发菌株,研究了酶浓度、酶解时间、菌龄和渗透压稳定剂、再生培养基等对蒙古口蘑和双孢蘑菇原生质体制备和再生的影响.结果表明,蒙古口蘑原生质体制备和再生的最佳条件是,培养5 d的菌丝体用2.5%(w/w)的溶壁酶酶解4 h,渗透压稳定剂为0.6 mol/L KCl,MB为再生培养基,制备率为7.53×1010个/L,再生率为8.4×10-4;双孢蘑菇原生质体制备和再生的最佳条件是,培养5 d的菌丝体用2%(w/w)的溶壁酶酶解3 h,渗透压稳定剂为0.6 mol/L KCl,PQA为再生培养基,制备率为6.96×1010个/L,再生率为7.4×10-4.对两种菌原生质体的释放过程进行形态观察,均为顶端释放.采用双亲灭活原生质体融合技术对蒙古口蘑和双孢蘑菇原生质体融合进行研究,蒙古口蘑原生质体采用热灭活,65℃处理30 min,灭活率达100%,双孢蘑菇采用紫外灭活,在15 W紫外灯下,距离30 cm,处理20 min,灭活率达100%,两菌株按1∶1混合,以30%PEMG(6 000)为促融剂,融合10 min,融合率为5.6×10-5.经遗传稳定性检验,融合菌株的遗传稳定率为80%,从菌落特征、菌丝形态、菌丝生长量、酯酶、游离全蛋白、乳酸脱氢酶、乙醇脱氢酶和过氧化物酶等同工酶方面对融合子进行筛选,获得一株具有双亲性状的融合株.     

双孢蘑菇原生质体融合子的特性与分子鉴定

采用原生质体技术, 以双孢蘑菇主推品种As2796和浙农1号为亲本, 获得性状优异的融合子Z 3和Z 7, 二者均可在34 ℃生长良好, 菌丝纤维素酶活性和漆酶活力均比As2796高,酯酶同工酶谱显示与亲本差异明显, ITS序列证实二者与As2796同源性分别为997%, 993%.栽培试验得出新菌株Z 3和Z 7的产量分别比As2796高125% 和51%.从其经济性状的综合指标看, 可考虑进一步的区域试验与示范推广栽培.     

双孢蘑菇盆景栽培技术研究

对不同保存时间的菌丝体进行出菇时间、出菇品质以及生物学效率的比较分析.结果表明,菌丝体经过干燥保存后仍可正常出菇,但随着保存时间的延长,出菇时间也相应延长,出菇粒数和粒重以及生物学效率都呈现出递减趋势.综合分析认为,保存期在360 d内为宜.通过喷施营养液复壮,可以有效缩短出菇时间和提高生物学效率.     

双孢蘑菇保鲜技术的研究

本文研究了在不同条件下贮藏双孢蘑菇dd、7d、10d、12d后,其色泽、氨基酸含量的变化,分析了这种变化对蘑菇鲜度、风味、褐变程度的影响关系,最后本文提出了适宜的贮藏条件——低温自发气调贮藏即MA贮藏(10℃、高密度聚乙烯薄膜包装),结果表明:在该条件下贮存7d、其氨基酸含量未见下降;贮存12d菇体仍无褐变和异味产生、其氨基酸总量仍占贮存前氨基酸总量的59.2％、起到了良好的保鲜作用。     

利用ISSR分析野生蘑菇与双孢蘑菇的遗传多样性

摘要：利用Inter- Simple Sequence Repeat ,简单序列重复区间扩增(ISSR )分子标记对一批野生蘑菇进行分子鉴别，在选用的60 个ISSR 引物中，从中筛选出11 个引物，能对供试的14个菌株基因组DNA 进行扩增，获得的指纹图谱清晰稳定、多态性强。结果表明，在获得的116个条带中，74.1％是多态性条带,相似系数从0.32到0.72.用NTSYS 软件进行聚类分析，野生蘑菇与双孢蘑菇的相似系数有较低，最高的仅在0.7的水平上。研究结果表明，该批野生蘑菇有明显的遗传多样性，可以作为蘑菇杂交育种的资源。     

双孢蘑菇新品种引进筛选试验研究

通过试验筛选出抗逆性强、产量高、品质好的优良茵株，其产量高，效益好，深受市场欢迎。     

利用ISSR分析野生蘑菇与双孢蘑菇的遗传多样性

利用ISSR分子标记对一批野生蘑菇进行分子鉴别，从选用的60 个ISSR 引物中，筛选出11 个引物，对供试的14个菌株基因组DNA 进行扩增，获得的指纹图谱清晰稳定、多态性强.结果表明，在获得的116个条带中，74.1％是多态性条带,相似系数从0.32到0.72.用NTSYS 软件进行聚类分析，野生蘑菇与双孢蘑菇的相似系数较低，最高的仅在0.7的水平上.研究结果表明，该批野生蘑菇有明显的遗传多样性，可以作为蘑菇杂交育种的资源.     

提高双孢蘑菇（Agaricus bisporus）生产效益的新技术

采用培养料一次性翻堆发酵露地垄式菇床，播种后随即覆土，菇床如覆盖层栽培双孢蘑菇。它比同等营养水平的常规室外荫棚栽培产量增加２１．７％，成本降低２７．１，利率达７４．６％，则室外荫棚栽培的２．８倍。     

正交设计法探讨茯苓原生质体的最佳制备条件

应用正交设计法研究了不同因素对茯苓原生质体制备的影响.实验结果表明，渗稳剂的种类和酶解时间对茯苓原生质体产量的影响最显著；培养5 d的菌丝体在30 mg/L溶壁酶＋20 mg/L蜗牛酶的酶液中，以0.6 mol/L的蔗糖作为渗稳剂，30℃酶解1 h，茯苓原生质体的产量最高.     

霍山石斛原生质体制备条件初探

本实验采用机械法和酶解法对霍山石斛原生质体的分离条件进行研究。结果表明,机械法制备霍山石斛原生质体,得率很低。正交试验法优选出的酶解法最佳组合条件为:纤维素酶1.5% 果胶酶1.5% 离析酶1.0%的酶液组合(溶于0.6mol/L的甘露醇),pH值5.4,28℃温育18 h。     

钝齿棒杆菌AS1.542原生质体形成和再生条件的研究

本文研究了钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenatum AS1.542)原生质体形成和再生的条件。结果表明:菌体培养至对数生长期,用1.Oμg/ml青霉素G处理4小时,再以1000μg/ml蛋清溶菌酶在37℃下处理14小时原生质体形成率达99.0％,在含0.5M蔗糖的高渗完全基上,它的再生率为20.0～50.0％。高渗缓冲液DF比NSM和SMM更适合于原生质体的再生,高渗稳定剂0.5mol/L蔗糖优于0.5mol/LNaCl。用电镜观察了菌体和原生质体的形态结构。     

不同物理条件对南方紫花苜蓿原生质体游离的影响

以选育的XN-1型紫花苜蓿种子发育5~7天的无菌苗叶片为材料,研究了不同的材料预处理技术、渗透压稳定剂、质膜稳定剂等因子对其原生质体游离的影响,结果表明:以在CPW13g/L液中预质壁分离1h最为有效,可明显提高原生质体的完整性,完整产率达到14.02×106个/g;渗透压稳定剂以0.6mol/L葡萄糖最好;质膜稳定剂以0.1%2-(N-吗啉)-乙烷磺酸(MES)最好.     

用原生质体融合法优化啤酒酵母的凝絮性和发酵性能

以发酵度较高、凝絮性较差的啤酒酵母菌株H38的原生质体为受体,以凝絮性较强、发酵度较低的啤酒酵母菌株N1热灭活的原生质体为供体进行融合.用正交试验法分别优化两亲株的原生质体制备和再生的条件以及原生质体融合的条件.用制霉菌素抗性为遗传标记选择融合子.融合子初筛时以凝絮性为指标,复筛时以发酵度和发酵液中的主要风味物质的含量为指标.对得到的融合子进行了异核体和遗传稳定性的检验,结果得到两株凝絮性以及发酵特性较好的菌株HN31和HN40.     

3种杜鹃属植物原生质体制备纯化条件的研究

以云锦杜鹃、西洋杜鹃、锦绣杜鹃的组培苗叶片为试验材料,研究了酶液组成、酶解时间、酶液pH值、材料生理状态对其原生质体分离效果的影响以及离心速度和离心时间对原生质体收集纯化的影响,实验结果表明:杜鹃组培苗叶原生质体分离最佳条件是酶液组成为2%纤维素酶+1%果胶酶,酶解总时间为14 h,酶液pH值为6.0;杜鹃原生质体收集纯化的离心适宜条件为1 000 r/min转速下离心6 min,能收集到大量有活力的原生质体,有活力的原生质体达79.27%.     

钝齿棒杆菌AS1.542原生质体形成和再生条件的研究

本文研究了钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenatum AS1.542)原生质体形成和再生的条件。结果表明:菌体培养至对数生长期,用1.0 μg/ml青霉素G处理4小时,再以1000μg/ml蛋清溶菌酶在37℃下处理14小时原生质体形成率达99.0％,在含0.5M蔗糖的高渗完全基上,它的再生率为20.0～50.0％。高渗缓冲液DF比NSM和SMM更适合于原生质体的再生,高渗稳定剂0.5 mol/L蔗糖优于0.5 mol/L NaCl。用电镜观察了菌体和原生质体的形态结构。     

褐球固氮菌和荧光假单胞菌原生质体制备条件的研究

为了利用原生质体融合技术获得同时具备固氮、解磷、抑病等活性的多功能菌株,本文对褐球固氮菌A41和荧光假单胞菌P32原生质体的制备条件进行了研究。通过对菌龄、酶解温度、酶浓度、酶解时间等影响因素的正交实验确定了褐球固氮菌A41和假单胞菌P32原生质体制备的最佳条件。实验结果表明,固氮菌A41最佳制备条件为菌龄20h、酶解温度37℃、酶浓度3mg/mL、酶解时间45min;假单胞菌P32最佳制备条件为菌龄20h、酶解温度37℃、酶浓度2mg/mL、酶解时间30min。     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.