抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与特性研究

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)感染是人类最常见的慢性细菌感染 ,可导致胃炎、消化性溃疡和胃癌等 ,还可引起口腔溃疡 ,与一些非胃肠疾病如发育不良、冠心病、糖尿病和胆石症等的发生有关[1,2 ] 。幽门螺杆菌粪抗原 (Ｈｐｓｔｏｏｌａｎｔｉｇｅｎ ,ＨｐＳＡ)检测是一种诊断Ｈｐ感染的新技术 ,其诊断准确性可达 90 %以上 ,同时具有简便快速、价格低廉、对病人无任何创伤 ,可不需任何仪器等优点[3 ,4 ] 。本研究采用传统的杂交瘤细胞技术 ,通过制备效价高、特异性好的抗Ｈｐ单克隆抗体 ,为Ｈｐ抗原检测技术的建立…     

hAR-N单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用

前列腺癌组织中雄激素受体 (ＡＲ)含量与术后采用抗雄激素疗法的反应程度、术后复发、转移率的发生密切相关〔1〕。ＡＲ的检测方法多为免疫组化法〔2〕。其所需试剂———ＡＲＭｃＡｂ国内尚无 ,为此我们研制ＡＲＭｃＡｂ。以美国Ｚｙｍｅｄ公司ＡＲ多抗为标准对自制ＡＲＭｃＡｂ性能进行鉴定 ,以便为临床和科研工作提供性能稳定可靠、质优价廉的免疫试剂。材料与方法动物 :ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,雌性 ,6～ 8周龄 ,购自北京医科大学动物实验中心。抗原 :ｈＡＲ Ｎ段 2 0个氨基酸合成肽 (该区具有高亲水性 ,与其它类固醇激素具有很少同源性 )由北…     

重组抗RSV单克隆抗体的免疫学特性

通过中和试验（ＮＴ）、治疗试验、预防试验以及对来自９例呼吸道合胞体病毒（ＲＳＶ）感染的小儿呼吸道分泌物涂片进行间接免疫荧光检测，比较了抗ＲＳＶ小鼠单克隆抗体ＭａＢ１９与重组构建的人源化单克隆抗体ＲＳＨＺ１９的免疫特性。结果表明：ＲＳＨＺ１９仍保留鼠源ｍＡｂ１９的抗体特异性，其对ＲＳＶ的中和力与ｍＡｂ１９对ＲＳＶ的中和力基本相同。当每只小鼠给予１００μｇ剂量时，在预防和治疗试验中均可得到完全保护。     

抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定

目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论 :用单克隆抗体杂交瘤技术     

肿瘤碱性蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了４株抗人血清肿瘤碱性蛋白（Ｔｕｍｏｕｒｂａｓｉｃｐｒｏ－ｔｅｉｎ，ＴＢＰ）杂交瘤细胞株（１Ｃ３、４Ｆ４、５Ｆ４、３Ｇ９），并以制备的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ｉｇ亚类测定：均为ＩｇＧ２ａ，腹水效价为１×１０－６～１×１０－８。特异性测定：ＴＢＰＭｃＡｂ与ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ和Ａｌｂ无交叉反应。单抗相加试验证实：５Ｆ４、４Ｆ４和１Ｃ３为识别ＴＢＰ上同一抗原决定簇，３Ｇ９则为识别ＴＢＰ上另一抗原决定簇。分别利用单株和混合株ＭｃＡｂ标酶建立了可应用于人血清ＴＢＰ含量测定的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法，并用于人血清ＴＢＰ含量测定。     

产毒性大肠杆菌菌毛F41抗原单克隆抗体及其免疫学特性的鉴定

产毒性大肠杆菌(ETEC)是婴儿和幼畜急性腹泻的重要病原之一，其致病因子主要有腑毒素和定居因子(又称粘附素)。现已证明，菌毛抗原是介导ETEC粘附肠上皮细胞的定居因子；是该茁感染的第一步．也是人们注目的预防该菌感染的菌毛疫苗组分。F41菌毛抗原是近年来才发现的畜源性ETEC的一种新的定居因子。因此．F41菌毛抗原单克隆抗体及其免疫学特性的研究，对探讨ETEC的致病与免疫机制，检验诊断及特异预防将提供有用的制剂。     

幽门螺杆菌空泡毒素基因克隆、表达及其重组蛋白免疫学特性的鉴定

已发现幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ ,Ｈｐ)疫苗具有预防和治疗Ｈｐ感染的效果〔1〕。大多数Ｈｐ菌株均能产生空泡毒素 (ｖａｃｕｏｌａｔｉｎｇｃｙｔｏｔｏｘｉｎ ,ｖａｃＡ) ,其前体蛋白在分泌过程中只有相对分子质量 (Ｍｒ)约87× 10 3的ＶａｃＡ被转运到细胞外 ,Ｍｒ 为 4× 10 3氨基末端信号肽和 5 0× 10 3羧基末端多肽分别留于细菌内、外膜中〔2〕。Ｈｐ感染者血清中可出现ＶａｃＡ抗体 ,重组ＶａｃＡ在ＨｐＳＳ1株小鼠感染模型中有 80 %的保护率〔3〕。我们构建了ｖａｃＡ原核表达系统 ,所表达的重组ＶａｃＡ…     

抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位单克隆抗体制备和鉴定及其应用

目的制备抗幽门螺杆菌(Hp)的单克隆抗体(mAb),并对该Hp mAb进行分析鉴定,建立一种检测患者由于Hp感染而在血清中产生Hp抗体的竞争ELISA检测方法。方法用灭活的Hp免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备Hp mAb。我们采用Hp混合蛋白包括毒素相关蛋白A(CagA)、空泡毒素A(VacA)和尿素酶以及灭活的Hp菌体筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA和Western blot等技术对所获得的Hp mAb进行鉴定。利用辣根过氧化物酶(HRP)标记所筛选的Hp mAb来建立一个可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。结果通过大规模的杂交瘤筛选,我们选择了1株将其命名为C3 Hp mAb,其抗体亚型为IgG2a,腹水效价可达1×107。Western blot法、ELISA和质谱检测结果显示,该C3 Hp mAb能特异地识别Hp的尿素酶B亚单位。用这个C3 Hp mAb,我们建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。结论成功获得一种可以特异识别Hp尿素酶B亚单位的mAb,建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。     

抗重组幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的制备

目的 制备抗重组幽门螺杆菌致细胞空泡毒素抗原(VacA)的单克隆抗体(mAb).方法 用基因工程菌pQr30-v-DH5α大最表达重组蛋白VaeA,经Ni2+-NTA树脂纯化后,Western blot鉴定抗原性,免疫家兔后ELISA法检测血清VacA抗体鉴定其免疫原性.用重组vacA免疫Balb/c小鼠.取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/O细胞融合,HAT选择性培养和间接EIJSA进行筛选,并检测所分泌抗体的效价和分析Ig类别.结果 获得4株能稳定分泌VacA mAb的杂交瘤细胞,能分泌IgG2b、lgM和IgG1 3类抗体,轻链均为k型.其中,IgG1 mAb经Western blot鉴定能与重组VacA发牛特异性反应.结论 应用纯化的重组VacA,成功获得了能稳定分泌幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备了单克隆抗体.为进一步研制检测VacA的试剂盒及探讨VacA的致病机制奠定了基础.     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究

目的 纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法 大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2H4效价及抗体亚类;Western blot鉴定其特异性;免疫荧光试验(IFA)检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果 纯化后2H4抗体的纯度高达93％;效价为1:1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体(MoPn)、鹦鹉热嗜农原体(6BC)质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体(Cpn).结论 获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.     

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析

目的:制备环丙沙星单克隆抗体,并分析其免疫学特性,为建立环丙沙星残留的免疫学检测方法服务。方法:用人工抗原环丙沙星-小牛血清白蛋白偶联物免疫BALB/c小鼠,产生预期免疫应答后,将小鼠脾细胞与瘤细胞融合,经初筛、复筛和再克隆,筛选得到1C9、3F6、6H2、6A7、6G11和8F56株分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞。对单克隆抗体的亚型、纯度、亲和力、灵敏度及特异性等免疫学特性进行鉴定和分析。结果:1C9、3F6和6A7的抗体亚型为IgG2a;6H2和8F5的抗体亚型为IgG1;6G11的抗体亚型为IgG3。SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50kD,轻链分子量约为25kD。6株细胞产生的单抗均具有良好的特异性和灵敏度。其中,细胞株1C9细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6.4×102和1∶5.6×105,亲和力常数可达2.85×109L/mol,IC50值可达245.86ng/ml,最低检测限为45.25ng/ml,对氧氟沙星、双氟沙星、沙拉沙星、左氧氟沙星、孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林等药物几乎不存在交叉反应,与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为84.6%。结论:本方法制备的环丙沙星单克隆抗体具有较好的亲和力和特异性,可用于环丙沙星残留免疫学检测。     

抗TSH独特型抗体的制备及免疫学特性的研究

抗激素抗体的抗原结合部位（即独特型）本身可以作为抗原刺激机体产生独特型抗体，该独特型抗体能与该激素的膜受体特异性结合并诱导模拟激素样作用［１］。根据这种免疫网络理论，我们用人促甲状腺激素（ＴＳＨ）免疫小鼠获得ＴＳＨ单克隆抗体，并以此为抗原进一步免疫动物产生抗ＴＳＨ独特型抗体，并研究了其免疫学特性。材料与方法１．ＴＳＨ单抗制备、纯化［２］用ＴＳＨ（活性：７ＩＵ／ｍｇ，Ｓｉｇｍａ）为抗原，常规制备ＴＳＨ单抗。蛋白Ａ－琼脂糖凝腔ＣＬ－４Ｂ亲和层析后，冷冻干燥，获Ｔ５Ｈ单抗纯品。２．ＴＳＨ抗独特型抗体（…     

酸性同功铁蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究

目的：探讨抗不同组织酸性同功铁蛋白（ＡＩＦ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫学特性。方法：和聚焦层析技术分别从人胎盘和原发性肝癌组织中分离出低ｐＩ值的ＡＩＦ,常规制备ＭｃＡｂ和进行免疫组织化学测定。结果：共筛先到５株抗人胎盘ＡＩＦ和２株抗人原发性肝癌（ＰＨＣ）ＡＩＦ）的ＭｃＡｂ即２ｆ８、４ｇ７、４ｇ８、５ｃ３、７ａ９和４ｃ９、４ｅ２。抗ＡＩＦ ＭｃＡｂｓ ５ｃ３和４ｅ２作用于同一抗株决定簇。使用ＭｃＡ     

人Hb抗原的分离,纯化及其McAb,PcAb的制备与免疫学特性分析

人Ｈｂ抗原的分离、纯化及其ＭｃＡｂ、ＰｃＡｂ的制备与免疫学特性分析赵满仓马蕾刘菊林孙朝安（空军石家压医院，石家庄０５００８１＊河北省公安厅）近年来用于诊断消化道肿瘤的方法较多，如消化道钡餐造影、乙状结肠镜、胃镜，以及粪便隐血试验等。这些方法中对早期肿...