人α1,2岩藻糖苷转移酶基因在猪动脉内皮细胞的表达

目的通过基因工程技术使人α1,2岩藻糖苷转移酶(HT)基因在猪动脉内皮细胞(PAEC)表达,削减异种抗原αGal的表达。方法构建pcDNA3HTcDNA重组质粒,体外培养PAEC,脂质体转染法将pcDNA3HTcDNA转染PAEC,新霉素(G418)筛选具有抗性的细胞克隆,对其用PCR检测重组质粒的整合,流式细胞术(FCM)检测转染细胞H抗原和异种抗原αGal的表达。分别以未转染的PAEC和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为对照。结果重组质粒转染PAEC经筛选得到抗性细胞克隆,PCR扩增出人HT基因片段,FCM检测转染细胞H抗原表达升高,αGal表达明显降低。结论成功构建了pcD NA3HTcDNA重组质粒,并使人HT基因在PAEC表达,抑制了αGal的合成。     

α-1,6岩藻糖基转移酶与肿瘤

由α-1,6岩藻糖基转移酶(α1,6-fucosyltransferase,Fut8)催化的核心岩藻糖基化是糖蛋白重要的翻译后修饰和功能调控方式,直接影响细胞一系列生物学特性,而这种糖基化的异常改变往往是疾病状态的特点.本文就Fut8的表达调控特征、生物学功能及其与各种肿瘤的关系研究进展作一综述.     

α1,2-岩藻糖转移酶基因转染增加卵巢癌细胞系RMG-I Lewis y抗原的表达

目的 将人α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-FT)基因转染卵巢癌细胞系RMG-I并探讨细胞表面Lewis y及其他相关糖脂抗原的变化.方法 采用PCR方法 克隆人α1,2-FT基因编码区HFUT-H,构建表达载体pcDNA3.1(-)-HFUT-H,利用磷酸钙法将其转染入卵巢癌细胞系RMG-I,建立α1,2-FT基因稳定高表达细胞株RMG-I-H.通过酶活性测定证明转染前后细胞系α1,2-FT活性的改变,采用薄层层析、薄层层析免疫染色方法 测定转染前后细胞脂质及糖脂,特别是Ⅱ型寡糖的变化. 结果 基因转染后细胞RMG-I-H中H-1抗原及Lewis y抗原显著增加,特别是Lewis y抗原为转染前的20倍;而Ⅰ型糖链Lewis b显著减少.转染前后细胞膜上的主要脂质成分胆固醇和磷脂质的含量没有变化,且中性糖脂质也没有明显变化.结论 α1,2-FT基因转染增加α1,2-FT活性的同时,增加卵巢癌细胞系RMG-I Lewis y抗原的表达;RMG-I Lewis y高表达细胞系的建立为研究Lewis y抗原与卵巢癌生物学行为提供了细胞模型.     

乳腺癌中α-1,6岩藻糖基转移酶表达的相关性研究及其临床意义

目的探讨乳腺癌组织中α-1,6岩藻糖基转移酶mRNA和蛋白的表达水平及其临床意义。方法应用蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测40例乳腺癌患者术后的癌组织、癌旁组织以及40名健康者的正常乳腺组织中α-1,6岩藻糖基转移酶在的表达情况,并分析其与乳腺癌之间的关系。结果 FUT8 mRNA和蛋白在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织和正常乳腺组织,差异有统计学意义（P〈0.05）;Ⅲ期乳腺癌组织中FUT8蛋白表达水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期,差异有统计学意义（P〈0.001）;有淋巴结转移的乳腺癌组织中FUT8蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义（P〈0.001）。结论高FUT8蛋白的表达与乳腺癌密切相关,其可能的调控机制及生物学效应有待进一步研究。     

α1,2-岩藻糖转移酶基因转染增加卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ Lewis y抗原的表达

目的将人α1,2-岩藻糖基转移酶（α1,2-FT）基因转染卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ并探讨细胞表面Lewisy及其他相关糖脂抗原的变化。方法采用PCR方法克隆人α1,2-FT基因编码区HFUT-H,构建表达载体pcDNA3.1（-）-HFUT-H,利用磷酸钙法将其转染入卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ,建立α1,2-FT基因稳定高表达细胞株RMG-Ⅰ-H。通过酶活性测定证明转染前后细胞系α1,2-FT活性的改变,采用薄层层析、薄层层析免疫染色方法测定转染前后细胞脂质及糖脂,特别是Ⅱ型寡糖的变化。结果基因转染后细胞RMG-Ⅰ-H中H-1抗原及Lewisy抗原显著增加,特别是Lewisy抗原为转染前的20倍;而Ⅰ型糖链Lewisb显著减少。转染前后细胞膜上的主要脂质成分胆固醇和磷脂质的含量没有变化,且中性糖脂质也没有明显变化。结论α1,2-FT基因转染增加α1,2-FT活性的同时,增加卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ Lewisy抗原的表达;RMG-Ⅰ Lewisy高表达细胞系的建立为研究Lewisy抗原与卵巢癌生物学行为提供了细胞模型。     

α1,2岩藻糖基转移酶基因复合突变引起类孟买型血型一例

患者女，浙江籍汉族，交叉配血时出现疑问。1名无血缘关系的健康献血者作为对照。突变点频率调查所采集的140份随机无血缘关系的样本来自本中心的无偿献血者。     

雌孕激素对SMMC-7721人肝癌细胞α-1,6岩藻糖基转移酶的调控

目的　探讨雌孕激素在肝癌细胞中对于α - 1 ,6岩藻糖基转移酶表达的调控。方法　通过对SMMC- 772 1细胞分别按不同时间点和不同浓度给予雌二醇和孕酮处理 ,观察细胞生长状态和形态学的改变 ,并进行半定量逆转录 -聚合酶链式反应和小扁豆凝集素 (LCA)印迹分析以检测α - 1 ,6岩藻糖基转移酶基因 (FUT8)转录水平和底物蛋白核心岩藻糖基化水平的改变。结果　雌激素能明显上调FUT8基因的转录 ,并显著提高Mr 为1 35× 1 0 3 、1 0 0× 1 0 3 和 6 0× 1 0 3 LCA反应阳性的糖蛋白的表达水平 ,同时改善了细胞的生长状态 ;而孕激素则可以明显下调FUT8基因的转录 ,并显著降低Mr 为 1 35× 1 0 3 、1 1 5× 1 0 3 、1 0 0× 1 0 3 和 6 0× 1 0 3 的LCA反应阳性的糖蛋白的表达水平 ,同时改变了细胞的正常形态。结论　雌孕激素能通过调节α - 1 ,6岩藻糖基转移酶的表达 ,改变靶蛋白的核心岩藻糖基化修饰 ,从而参与肿瘤的发生发展过程。     

α-1,3-半乳糖苷转移酶基因沉默小鼠的建立初探

目的获得转α-1，3-半乳糖苷转移酶沉默基因的小鼠。方法将α-1，3-半乳糖苷转移酶沉默基因用显微注射的方法导入小鼠受精卵。结果移植注射胚853枚，其中移植312枚1．细胞胚于11只爱体鼠，6只受孕（54．5％）均中途流产（解剖发现子宫角明显增粗、充血、残骸）；移植注射胚541枚2-细胞胚于23只受体鼠，18只受孕（78．3％），11只受孕均中途流产了，3只足目剖宫产荻14只死胎，平均体重214g，未检测到阳性；4只12日龄左右剖宫获21只残骸有7只阳性。结论通过显微注射的方法，α-1，3-半乳糖苷转移酶沉默基因可以整合，但要得到整合成活个体还有待进一步研究。     

α 1,6岩藻糖基转移酶与肿瘤

由α-1,6岩藻糖基转移酶(α1,6-fucosyltransferase,Fut8)催化的核心岩藻糖基化是糖蛋白重要的翻译后修饰和功能调控方式,直接影响细胞一系列生物学特性,而这种糖基化的异常改变往往是疾病状态的特点。本文就Fut8的表达调控特征、生物学功能及其与各种肿瘤的关系研究进展作一综述。     

中国近交系版纳微型猪α1,3-半乳糖基转移酶基因剪接变异体的克隆及其在人类细胞中的表达

目的克隆中国近交系版纳微型猪(Chinese Banna Minipig Inbred Line,BMI)的α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)基因并分离其剪接变异体,构建其真核表达载体并观察BMIα1,3-GT基因在人肺腺癌A549细胞中的表达和功能。方法提取BMI肝组织总RNA,RT-PCR扩增全长的α1,3-GTcDNA,并克隆到pMD18-T载体,挑选15个阳性克隆进行测序,获得GT1、GT2两种基因剪接变异体。将GT1、GT2克隆到pEGFP-N1上构建其真核表达载体,分别命名为pN-GT1、pN-GT2。将pN-GT1、pN-GT2分别转染人肺腺癌A549细胞,RT-PCR检测转染细胞中α1,3-GT mRNA的表达,倒置荧光显微镜和流式细胞术观察转染细胞上α-半乳糖基(α-Gal)的表达,流式细胞术检测人血清中IgM抗体和补体C3与转染细胞上α-Gal的结合。结果在BMI中发现了碱基长度为1116bp和1080bp的两个α1,3-GT基因剪接变异体,后者缺失了外显子5。pN-GT1或pN-GT2转染的A549细胞中,均检测到了α1,3-GT mRNA和α-Gal的表达,转染细胞膜上也检测到IgM和C3的沉积,且两种转染细胞中α-Gal的表达及IgM和C3的沉积没有差异(P>0.05)。结论成功克隆了BMI的α1,3-GT基因,并发现两种α1,3-GT基因剪接变异体。两种基因剪接变异体转染的细胞中,均检测到α1,3-GT mRNA的表达且α1,3-GT能催化合成具有生物学效应的α-Gal,这为BMI用于异种移植中涉及α1,3-GT基因操作的研究提供了基因背景资料。     

小鼠3种α1,2岩藻糖转移酶的底物特异性

目的对比小鼠3种GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-FT)的底物特异性.方法利用RT-PCR方法克隆小鼠3种α1,2-FT基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,测序后分别将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-Ⅰ、pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ及pcDNA3.1-MFUT-Ⅲ;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过检测3种酶对不同种底物特性比较酶的特异性.结果小鼠基因MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ分别与人类H基因(77%)、Se基因(79%)和Sec1基因(75%)具有序列同源性.MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因转染后的COS-7细胞均具有α1,2-FT活性,而MFUT-Ⅲ基因转染的COS-7细胞无此活性.MFUT-Ⅱ同时对底物缺乏唾液酸的神经节苷脂(GA1)及单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)存在活性,分别生成产物岩藻糖基化GA1(FGA1)及岩藻糖基化神经节苷脂GM1(FGM1);而MFUT-Ⅰ仅对底物GA1存在活性.MFUT-Ⅱ对GA1的比活性约为MFUT-Ⅰ的80～90倍.MFUT-Ⅱ对GA1的比活性为GM1的10～20倍.MFUT-Ⅱ不仅具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1活性,同时具有对乳丁糖神经酰胺(Lc4Cer)及异乳丁糖神经酰胺(nLc4Cer)的活性,可合成Ⅰ型及Ⅱ型H抗原.结论MFUT-Ⅱ是小鼠的主要α1,2-FT,具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1的功能;MFUT-Ⅰ仅有合成Ⅳ型H抗原FGA1的功能;MFUT-Ⅲ无α1,2-FT活性.     

岩藻糖基转移酶2研究进展

岩藻糖基转移酶2(FUT2)作为岩藻糖基转移酶的一种,分布在口腔黏膜上皮、呼吸道上皮、泌尿生殖道细胞以及体液中。FUT2与ABO血型、原发性硬化性胆管炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、急性胃肠炎等相关。其中,FUT2与H抗原相关,原发性硬化性胆管炎患者中发现FUT2相关位点,克罗恩病与FUT2非分泌型相关,在诺如病毒感染急性肠胃炎的患儿中,民族、种族、遗传等因素与FUT2相关。FUT2在原发性硬化性胆管炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病等疾病的病因及发病机制等方面发挥作用。     

肝细胞癌癌组织 α-1，3 岩藻糖基转移酶各亚型 mRNA 的半定量研究

目的　探讨肝癌组织α 1,3岩藻糖基转移酶 (α 1,3 fucosyltransferase,FucT)的各亚型Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ的mRNA表达及其与肝癌转移的关系。方法　应用异硫氰酸胍一步法获得无DNA污染的RNA ,经RT PCR扩增后对各亚型FucTPCR产物测序鉴定并扫描定量。结果　肝癌组织未发现FucT Ⅲ、ⅤmRNA的表达 ,FucT Ⅶ在癌和癌周组织的表达都很低 ,且两者无显著性差异。肝癌组织FucT Ⅳ、Ⅵ的表达明显高于癌旁肝组织与正常肝组织 ,转移性肝癌FucT Ⅳ、Ⅵ的表达显著高于非转移性肝癌者。结论　FucT Ⅳ、Ⅵ与肝癌的转移有关。     

PNP法测定血清α-岩藻糖苷酶的实验室探讨

目的:建立PNP法测定血清α-岩藻糖苷酶(AFU)自动分析方法.方法:根据测定条件的优化实验采用AFU作用于以CPNP为底物的连续监测法直接测定.结果:批内CV<4.8%,批间CV<6.8%,总CV<5.9%,回收率达101.8%,线性:0～313U/L(Y=0.9945X 1.1233r=0.9954);加入TG<4.6mmol/L,BIL<171μmol/L;Hb<100g/L;UA<440μmol/L时无显著干扰.结论:本法简便、准确、快速,适合全自动分析.     

检测碱性磷酸酶与α-岩藻糖苷酶活性水平对正常孕妇的临床意义

目的：探讨血清中α-岩藻糖苷酶（AFU）、碱性磷酸酶（ALP）的活性水平在正常孕妇中的临床价值。方法：采用酶法测定102例正常孕妇血清中AFU、ALP的活性水平。结果：正常孕妇组与正常非孕妇组和正常男性组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,正常非孕妇组与正常男性组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：联合检测AFU、ALP在正常孕妇中的活性水平,为妇女和胎儿的优生优育起到积极的临床作用。     

过表达α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ通过增强p38MAPK信号通路抑制UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

 目的 初步探讨α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ（简称FUT7）在UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721(简称7721)细胞凋亡过程中的作用及机制。方法 用RT-PCR检测转染pcDNA3-FUT7质粒的7721细胞及转染空质粒pcDNA3的7721细胞中FUT7基因的转录水平；用流式细胞仪检测细胞表面FUT7产物SLex的表达水平；利用DAPI染核计算UVC照射后细胞的凋亡比率；用结晶紫染色法测定细胞的存活率；利用Western blot检测Caspase3的剪切情况及p38MAPK、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化水平。结果 过表达FUT7能抑制UVC照射诱导的7721细胞凋亡，同时还增强了细胞中p38MAPK信号通路的活性，而用p38MAPK的特异性抑制剂处理则可削弱FUT7的抗凋亡作用。结论 在UVC照射诱导的7721细胞凋亡过程中FUT7具有抗凋亡的作用，这种作用可能部分通过增强p38MAPK信号通路活性而实现。     

岩藻糖基转移酶Ⅱ、Ⅲ基因多态性的研究进展

岩藻糖基转移酶Ⅱ(FUT2)和岩藻糖基转移酶Ⅲ(FUT3)基因作为FUT家族中与人类血型密切相关的两个成员,其多态性在人类遗传学、法医学以及疾病相关性等领域均有重要意义.目前对两个基因的多态性研究主要集中在编码区,因它们具有高度多态性和明显的种族特异性,在人类遗传学及法医学领域广泛应用.FUT2和FUT3基因的单核苷酸...     

a-1, 2岩藻糖基转移酶II在肺鳞癌组织中的表达及对肺鳞癌细胞增殖的影响

目的：探讨a-1,2岩藻糖基转移酶II（FUT2）在肺鳞癌中的表达情况及其对肺鳞癌细胞增殖的影响。方法：应用UALCAN数据库分析FUT2在临床肺鳞癌患者组织中的差异表达及其与肺鳞癌患者临床TNM分期、年龄及性别因素的相关性;采用瞬时转染技术,将FUT2的shRNA质粒转染进H226细胞株中构建FUT2低表达的肺鳞癌细胞模型;利用CCK-8、平板克隆及Western blot实验检测FUT2对肺鳞癌细胞的生长、单克隆细胞团形成及PCNA蛋白表达的影响。结果：FUT2在肺鳞癌尤其是肺鳞癌TNM早中期呈现高表达趋势（P＜0.05）,而与年龄和性别无关。低表达FUT2可以抑制肺鳞癌细胞的生长速率和单克隆细胞团的形成数,同时,可以抑制肺鳞癌细胞PCNA蛋白的表达水平,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：FUT2在肺鳞癌中高表达且促进肺鳞癌细胞的增殖能力,有望成为肺鳞癌的早期诊断指标。     

α1，3-岩藻糖基转移酶Ⅶ真核表达载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pIRES2-EGFP—FUT7真核表达载体。方法采用RT—PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ（FUT7）全长基因,克隆至pMD18-TSim—pie载体后,将FUT7亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体并进行鉴定。结果测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT7基因,FUT7基因正确插入plRES2-EGFP中。结论成功构建了绿色荧光蛋白为报告基因的FuT7真核表达载体,为研究FuT7及其合成的糖抗原sLex在乳腺癌转移中的作用奠定了基础。     

α-2,8唾液酰基转移酶在肿瘤发生发展中的作用

唾液酸化修饰属于一种重要的糖基化修饰,不仅与生物体生长发育密切相关,还直接或间接地影响肿瘤的生物学行为。唾液酰基转移酶介导唾液酸化反应,将供体唾液酸连接到糖蛋白或者糖脂的末端。现已知的唾液酰基转移酶有四大家族,它们分别是ST3GalI-VI,ST6GalI-II,ST6GalNAcI-VI和ST8SiaI-VI。在许多肿瘤中唾液酰基转移酶的表达量和唾液酸结构均发生改变,并影响肿瘤细胞增殖、转移、血管形成、免疫逃逸等生物学行为。本文对α-2,8唾液酰基转移酶（ST8Sia）的功能及其在不同肿瘤发生发展的机制作一综述。