大黄酸通过miR-29c-3p调节FSCN1的表达影响胃癌细胞的生物学行为

目的探讨大黄酸(Rhein)对人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其机制。方法通过qRT-PCR检测大黄酸处理后细胞中miR-29c-3p的表达以及miR-29c-3p的转染效率;miR-29c-3p mimics组、NC mimics组、Rhein+miR-29c-3p inhibitor组、Rhein+NC mimics组均使用脂质体转染试剂转染至SGC-7901细胞中,再使用50μM的大黄酸处理48h;CCK-8法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI和流式细胞术联合检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性;Western blot检测FSCN1蛋白表达。结果与NC组相比较,大黄酸处理后可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;过表达miR-29c-3p可抑制细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;抑制miR-29c-3p表达可逆转大黄酸对SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭的抑制和细胞凋亡促进作用。miR-29c-3p可靶向作用于FSCN1。结论大黄酸可抑制人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-29c-3p/FSCN1有关,为大黄酸用于治疗胃癌提供一定的科学依据。     

miR-200c-3p靶向XIAP调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨miR-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p组(转染anti-miR-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAP组(转染pcDNA-XIAP)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-NC组(共转染anti-miR-200c-3p和si-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-XIAP组(共转染anti-miR-200c-3p和si-XIAP),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-200c-3p与XIAP的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中miR-200c-3p表达明显上调,XIAP表达明显下调;抑制miR-200c-3p、过表达XIAP均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved Caspase-3、Bax,上调Bcl-2;miR-200c-3p可显著抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAP的表达;敲减XIAP可逆转抑制miR-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论 miR-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAP有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

miR-194-5p靶向MEX3A调控肝癌细胞活性和凋亡的机制

目的研究miR-194-5p对肝癌细胞活性和凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测肝癌细胞HepG2、正常肝细胞L02中miR-194-5p和MEX3A的表达;根据分组:miR-194-5p组(转染miR-194-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-MEX3A组(转染si-MEX3A)、si-con组(转染si-con)、miR-194-5p+pcDNA-MEX3A组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA-MEX3A)、miR-194-5p+pcDNA组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA),均用脂质体法将相关质粒转染至HepG2;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2中miR-194-5p表达明显降低,MEX3A表达明显升高(P0.05);过表达miR-194-5p、敲减MEX3A均可抑制HepG2细胞的活性,促进细胞凋亡;miR-194-5p可抑制野生型MEX3A细胞的荧光活性;过表达MEX3A能逆转miR-194-5p对HepG2细胞活性的抑制和凋亡的促进作用。结论 miR-194-5p可抑制肝癌细胞的活性,促进凋亡,其机制可能与靶向MEX3A有关,将可为肝癌的治疗提供新靶点。     

TGIF2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响

目的探讨同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响。方法将培养的人脐静脉内皮(HUVECs)细胞分为对照组(未处理)、高糖组(葡萄糖处理)、空载体阴性对照质粒(NC)高糖组(葡萄糖+转染NC质粒)和TGIF2高糖组(葡萄糖+转染psiC HECK2-TGIF2 3'-UTR质粒),处理24 h和48 h后,以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖;处理48 h后,以RT-PCR和Western印迹检测各组细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达,Transwell法检测细胞迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与对照组相比,高糖组、NC高糖组和TGIF2高糖组HUVECs细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、迁移能力均显著降低,凋亡率显著升高(P0.05);与高糖组相比,TGIF2高糖组中TGIF2 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移能力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论高糖诱导下,TGIF2在血管内皮细胞中表达下降,上调其表达对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡具有一定的保护作用。     

蒲葵子总黄酮对帕金森病细胞模型中人神经母细胞瘤细胞的保护作用

目的探讨蒲葵子总黄酮(TFFL)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的帕金森病细胞模型中人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)损伤的影响。方法以正常培养的SK-N-SH作为正常组。SK-N-SH用2000μmol/L MPP~+处理48 h建立帕金森病细胞模型,依据不同处理分为模型组、低浓度组(5μg/ml TFFL)、中浓度组(15μg/ml TFFL)、高浓度组(45μg/ml TFFL)、阴性组、干扰组(转染BLACAT1小分子干扰RNA)、对照组、转染组[转染微小RNA(miR)-29c-3p]、质粒组、载体组(转染pcDNA-BLACAT1)。试剂盒检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、还原性谷胱甘肽(GSH)水平;甲基噻唑基四唑检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测BLACAT1、miR-29c-3p表达量。结果与正常组比较,模型组细胞存活率和GSH水平降低,miR-29c-3p表达降低(0.29±0.05 vs 1.00±0.03,P0.05),MDA水平和LDH活性升高,细胞凋亡率升高,BLACAT1表达水平升高(4.01±0.42 vs 1.00±0.04,P0.05)。低、中、高浓度组较模型组;干扰组较阴性组;转染组较对照组细胞存活率升高,GSH水平升高,MDA水平和LDH活性降低,细胞凋亡率降低(P0.05,P0.01)。BLACAT1可靶向调控miR-29c-3p; BLACAT1过表达逆转TFFL对MPP~+诱导的细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论 TFFL可通过调控BLACAT1/miR-29c-3p分子轴,抑制MPP~+诱导的SK-N-SH氧化应激、凋亡及促进细胞增殖,进而保护神经细胞。     

miR-204-5p靶向JARID2调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖侵袭迁移的机制

目的研究miR-204-5p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR、Western印迹检测人葡萄膜黑色素瘤MUM-2B、正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19中miR-204-5p、JARID2的表达;将miR-204-5p组(转染miR-204-5p模拟物)、miR-con组(转染miR-con)、si-JARID2组(转染si-JARID2)、si-con组(转染si-con),miR-204-5p+pcDNA组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA)、miR-204-5p+pcDNA-JARID2组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA-JARID2),均用脂质体法转染至MUM-2B细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19相比,葡萄膜黑色素瘤MUM-2B中miR-204-5p表达显著降低,JARID2表达显著升高(P<0.05);过表达miR-204-5p、敲减JARID2均可明显抑制MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭;miR-204-5p可靶向负调控JARID2的表达;过表达JARID2可逆转过表达miR-204-5p对MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论miR-204-5p可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向JARID2有关,将可为葡萄膜黑色素瘤的靶向治疗提供新靶点。     

过表达miR-489-3p通过靶向调控MCM2抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制

目的探讨miR-489-3p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及潜在的作用机制。方法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-489-3p组(转染miR-489-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-微小染色体维持蛋白(MCM)2组(转染si-MCM2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-489-3p组(转染anti-miR-489-3p)、miR-489-3p+pcDNA组(共转染miR-489-3p和pcDNA)、miR-489-3p+pcDNA-MCM2组(共转染miR-489-3p和pcDNA-MCM2)、miR-NC+WT-MCM2组(共转染miR-NC和WT-MCM2)、miR-NC+MUT-MCM2组(共转染miR-NC和MUT-MCM2)、miR-489-3p+WT-MCM2组(共转染miR-489-3p和WT-MCM2)、miR-489-3p+MUT-MCM2组(共转染miR-489-3p和MUT-MCM2),均用脂质体法转染至肺癌A549细胞;运用qRT-PCR检测miR-489-3p和MCM2 mRNA的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果相较于正常肺上皮细胞BEAS-2B,肺癌细胞A549、H1299、SPC-A1中miR-489-3p表达水平均显著降低,MCM2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05)。miR-489-3p过表达、MCM2抑制表达均可抑制A549细胞增殖活力,促进细胞凋亡;抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白表达水平,促进p21、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)-3、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达。miR-489-3p可靶向调控MCM2表达;MCM2过表达逆转了miR-489-3p过表达对肺癌A549细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-489-3p可抑制肺癌A549细胞的增殖、促进其凋亡,其机制可能与靶向MCM2有关,将可为肺癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-34c-3p调控脑胶质瘤细胞增殖、分化、凋亡的机制研究

目的探讨miR-34c-3p调控脑胶质瘤U87细胞增殖、分化、凋亡的机制。方法用脂质体分别将miR-34c-3p mimics和miR-34c-3p inhibitors转入U87细胞中,用RT-PCR检测转染效果;用MTT检测转染miR-34c-3p对U87细胞增殖的影响;用平板克隆法检测转染miR-34c-3p对U87细胞分化的影响;用流式细胞仪检测转染miR-34c-3p对U87细胞凋亡的影响;通过Pic Tar、miRanda和Target Scan靶基因预测库预测miR-34c-3p的靶基因,用双荧光素酶表达系统进行靶基因鉴定,RT-PCR检测转染miR-34c-3p对靶基因mRNA表达的影响,Western-blot检测转染miR-34c-3p对靶基因蛋白表达的影响。结果 miR-34c-3p在U87细胞中的表达显著低于正常胶质细胞,转染miR-34c-3p mimics后,U87细胞miR-34c-3p mRNA的表达上调,细胞存活率降低,细胞形成克隆的能力下降,细胞凋亡率升高,与对照组相比均具有显著性差异;转染miR-34c-3p inhibitors后,U87细胞miR-34c-3p mRNA表达量下降,细胞存活率显著升高,细胞形成克隆的能力上升,细胞凋亡率下降,与对照组相比差异均具有显著性。靶基因库预测Notch2是miR-34c-3p的靶基因,转染miR-34c-3p mimics后,Notch2的mRNA表达和蛋白表达下降,转染miR-34c-3p inhibitors后,Notch2的mRNA表达和蛋白表达上升,共转染miR-34c-3p mimics和wt Notch2后荧光素酶活性显著降低,与对照组相比均具有显著性差异。结论 miR-34c-3p通过靶基因Notch2抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖、分化,促进细胞凋亡。     

MiR497HG靶向miR-588调控肺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的机制研究

目的研究MiR497HG对肺癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用RT-PCR法检测永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B、肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG、miR-588的表达;将blank组(不做任何处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-MiR497HG组(转染si-MiR497HG)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-588组(转染anti-miR-588)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-588组(转染miR-588 mimics)、si-MiR497HG+anti-miR-NC组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-NC)、si-MiR497HG+anti-miR-588组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-588),均用脂质体法转染至NCI-H1975细胞;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞的迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MiR497HG与miR-588的结合力。结果与永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B相比,肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG表达显著升高,miR-588表达显著降低(P0.05);抑制MiR497HG或过表达miR-588均可抑制NCI-H1975细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;miR-588可抑制野生型MiR497HG细胞的荧光活性,且可负向调控MiR497HG的表达;过表达MiR497HG可逆转miR-588对肺癌细胞的增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA MiR497HG可促进肺癌细胞增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其机制可能与靶向抑制miR-588有关,将可为肺癌的治疗提供新靶点。     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成; miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡. miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+siPIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1mRNA的表达水平; Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后, TNF-α和IL-6的表达显著升高; miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低. miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

lncR-HOXA-AS3靶向miR-29a对前列腺癌细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncR)HOXA-AS3和微小RNA-29a(miR-29a)对前列腺癌（PCa）细胞凋亡、自噬的影响。方法 体外培养人PCa细胞（DU-145、LNCaP、C4-2B）和人正常前列腺细胞RWPE-1,采用RT-qPCR法检测细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达。应用双荧光素酶报告基因实验验证lncR-HOXA-AS3和miR-29a之间的靶向调控关系。取对数生长期LNCaP细胞,分为si-NC组、si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组和si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组,利用脂质体转染法分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC、si-HOXA-AS3+anti-miR-29a转染至各组LNCaP细胞,应用RT-qPCR法检测各组细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3及自噬相关蛋白LC3II、LC3I、Becl...     

长链非编码RNA CASC2通过靶基因miR-514b-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用机制

目的探讨肿瘤易感候选基因(CASC)2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中CASC2和miR-514b-5p的表达水平;将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CASC2组(转染pcDNA-CASC2 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-CASC2组(转染si-CASC2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-514b-5p组(转染anti-miR-514b-5p)、pcDNA-CASC2+miR-NC组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-NC)、pcDNA-CASC2+miR-514b-5p组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-514b-5p)、WT-CASC2+miR-NC组(共转染WT-CASC2和miR-NC)、WT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染WT-CASC2和miR-514b-5p mimics)、MUT-CASC2+miR-NC组(共转染MUT-UCA1和miR-NC)、MUT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染MUT-CASC2和miR-514b-5p mimics)均用脂质体法转染至SW480细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果结直肠癌SW480细胞于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460、CASC2的表达水平显著降低,miR-514b-5p的表达水平显著升高(P0.05);过表达CASC2、抑制表达miR-514b-5p均可抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭;CASC2可靶向调控miR-514b-5p的表达。miR-514b-5p过表达可部分逆转CASC2过表达对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论长链非编码RNA CASC2可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-514b-5p基因有关,将可为结直肠癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-217靶向SPRY1调控血管内皮细胞增殖和凋亡的分子机制

目的探讨miR-217对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法运用25μmol/ml高糖建立血管内皮细胞EAhy926损伤;运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-217、软脂酰化磷蛋白(SPRY1)的表达;将HG+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、HG+anti-miR-217组(转染anti-miR-217)、HG+pcDNA组(转染pcDNA)、HG+pcDNA-SPRY1组(转染pcDNA-SPRY1)、HG+anti-miR-217+si-con组(共转染anti-miR-217和si-con)、HG+anti-miR-217+si-SPRY1组(共转染anti-miR-217和si-SPRY1)用脂质体法转染至EAhy926细胞,再用高糖处理;Western印迹检测细胞中SPRY1、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测miR-217与SPRY1的靶向结合关系。结果成功建立高糖诱导的血管内皮细胞EAhy926;与NG组相比,HG组细胞中miR-217表达明显上调,SPRY1表达明显下调(P 0.05);抑制miR-217、过表达SPRY1均可促进高糖诱导的EAhy926细胞增殖,抑制凋亡,上调p21、Bcl-2,下调Bax;miR-217可抑制野生型SPRY1细胞的荧光活性,负向调控SPRY1表达;敲减SPRY1可逆转抑制miR-217对高糖诱导的EAhy926细胞增殖、凋亡的调控及相关蛋白表达的影响。结论 miR-217可调控血管内皮细胞的增殖、凋亡,其机制可能与靶向SPRY1有关,可为高糖引起的心血管疾病的治疗提供新方向。     

LINC00176下调miR-761对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨LINC00176对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法 miR-NC组(转染miR-NC)、miR-761组(转染miR-761 mimics)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LINC00176组(转染pcDNA3.1-LINC00176)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00176组(转染si-LINC00176)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-761组(转染anti-miR-761)、miR-NC+WT-LINC00176组(共转染miR-NC和WT-LINC00176)、miR-NC+MUT-LINC00176组(共转染miR-NC和MUT-LINC00176)、miR-761+WT-LINC00176组(共转染miR-761和WT-LINC00176)、miR-761+MUT-LINC00176组(共转染miR-761和MUT-LINC00176)、pcDNA3.1-LINC00176+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-LINC00176和miR-NC)、pcDNA3.1-LINC00176+miR-761组(共转染pcDNA3.1-LINC00176和miR-761)均用脂质体法转染至SGC-7901细胞;采用qRT-PCR检测LINC00176和miR-761的表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于正常胃黏膜细胞GES-1,胃癌细胞MGC-803、SGC-7901中LINC00176的表达水平显著降低(P0.05);过表达LINC00176、抑制表达miR-761均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡;抑制Bcl-2、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MPP)-2蛋白表达,促进Bax蛋、E-钙黏蛋白(cadherin)、P21蛋白表达。LINC00176靶向调控miR-761表达。过表达miR-761能逆转LINC00176对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡的促进作用。结论长链非编码RNA LINC00176可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与靶向miR-761基因有关,将可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-132在动脉粥样硬化中的表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响

目的探讨miR-132在动脉粥样硬化表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响。方法 RT-PCR检测动脉粥样硬化中miR-132的表达;空转染组、阴性对照组和miR-132抑制剂组转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),转染48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-132 mRNA表达;后续实验分为正常培养组、缺氧组、缺氧+miR-132抑制剂组,各组细胞培养48 h后,CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)3、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果 miR-132在动脉硬化组中的表达显著高于对照组(P0.05);转染组miR-132 mRNA表达显著低于空转染组(P0.05);缺氧组和缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达均显著低于正常培养组(P0.05),细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于正常培养组(P0.05),缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达显著高于缺氧组,细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著低于缺氧组(P0.05)。结论 miR-132在动脉粥样硬化中高表达,抑制其表达可促进血管内皮细胞增殖及降低细胞的凋亡,其机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-24-3p靶向HAP1基因对STZ诱导胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA-24-3p(miR-24-3p)靶向亨廷顿蛋白相关蛋白(HAP)1基因表达对链脲佐菌(STZ)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法培养小鼠胰岛β细胞NIT,分别将anti-miR-NC、anti-miR-24-3p、pcDNA、pcDNA-HAP1转染入NIT细胞,加入STZ诱导细胞;不做任何处理为Con组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24-3p及HAP1 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹(Western印迹)实验检测HAP1及B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证miR-24-3p的靶基因。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 STZ处理后胰岛β细胞中miR-24-3p相对表达量明显高于Con组(P0.05),而HAP1 mRNA及蛋白表达均明显降低(P0.05);STZ可增加胰岛β细胞凋亡率,抑制miR-24-3p表达可降低胰岛β细胞凋亡率,还可上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达;HAP1过表达与抑制miR-24-3p表达均可抑制STZ诱导的胰岛β细胞凋亡;HAP1是miR-24-3p的靶基因,miR-24-3p可负向调节HAP1表达;抑制HAP1表达可促进胰岛β细胞凋亡。结论 miR-24-3p表达可通过抑制靶基因HAP1表达进而促进STZ诱导的胰岛β细胞凋亡。     

miR-181a-5p调控LIF的表达调节胰腺腺泡细胞凋亡的分子机制

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病迅速,并发全身感染,因此早期的高效治疗对控制病情起到关键作用.微小RNA(microRNA, miRNA)在AP中的作用机制及临床应用的研究成为近几年的热点.其在AP发生发展及转归中的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新思路.目的探讨miR-181a-5p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J凋亡的影响及机制.方法运用ELISA法检测雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞中AMY、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达;将Cerulein+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Cerulein+si-con组(转染si-con)、Cerulein+si-白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)组(转染si-LIF),均用脂质体法转染至AR42J细胞,再用15 nmol/L的雨蛙素处理8h;流式细胞术法检测各组细胞的凋亡; qRT-PCR检测各组细胞中miR-181a-5p mRNA和LIF mRNA的表达; Western blot检测各组细胞中LIF、caspase-3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.结果与对照组相比,雨蛙素处理8 h是AMY、TNF-α和IL-6的含量均升高的时间点,且细胞凋亡率显著降低(P 0.05);与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-181a-5p mRNA表达显著下调, LIF mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05);过表达miR-181a-5p、敲减LIF均可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡的促进作用; miR-181a-5p可抑制野生型LIF细胞的荧光活性,且可负向调控LIF的蛋白表达.结论 miR-181a-5p可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的凋亡,其机制可能与靶向LIF有关,将可为AP的治疗提供新方向.     

MiR-499靶向HMGB1保护缺氧复氧心肌细胞损伤的分子机制探讨

目的研究miR-499对缺氧复氧心肌细胞H9c2损伤的影响,并探讨其作用机制。方法运用免疫印迹法(Western blot)检测缺氧复氧心肌细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、免抗人单克隆抗体(Bax)、caspase-3的蛋白表达;将H/R+miR-con组(转染miRcon)、H/R+miR-499组(转染miR-499 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、miR-499组(转染miR-499mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-499组(转染anti-miR-499)、H/R+si-con组(转染si-con)、H/R+si-HMGB1组(转染si-HMGB1)、H/R+miR-499+Ctrl组(miR-499 mimics和pcDNA3.1共转染)、H/R+miR-499+HMGB1组(miR-499 mimics和pcDNA3.1-HMGB1共转染),均以脂质体法转染至H9c2细胞;实时荧光定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测各组细胞中miR-499的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与NC组相比,H/R组细胞中HMGB1蛋白表达显著升高,miR-499表达显著降低(P0.05);过表达miR-499或敲减HMGB1均可显著下调H/R H9c2细胞凋亡率,显著下调Bax、caspase-3的蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达(P均0.05);过表达HMGB1可逆转miR-499对H/R H9c2细胞凋亡的抑制作用。结论 MiR-499可抑制缺氧复氧心肌细胞H9c2凋亡,保护心肌细胞,其机制与靶向HMGB1有关,将可为心脏病的治疗提供新靶点。