瘦素(leptin)在胚胎围着床期的作用

瘦素是脂肪组织分泌的多肽激素,参与调节食物摄入和能量平衡,影响哺乳动物的生殖功能。瘦素及其受体在人和小鼠的生殖道和胚胎中均有表达,对着床前胚胎发育和胚胎植入具有重要作用。     

骨形态发生蛋白4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡发育中的作用及作用机制

目的:探讨骨形态发生蛋白4(BMP4)/Smad信号通路在小鼠原始卵泡发育中的作用及作用机制。方法:取3日龄昆明雌性小鼠卵巢体外培养,添加重组BMP4,并以不添加BMP4为对照,采用HE染色和TUNEL法,检测BMP4在原始卵泡存活和发育中的作用;采用免疫组织化学、Westernblotting与RT-PCR检测BMP4对原始卵泡中p-Smad1/5/8、sohlh2及c-kit表达的影响。结果:①BMP4组卵巢直径明显变大(1.17±0.24 mm vs 0.65±0.13 mm,P<0.05),原始卵泡数(45.3±4.2枚)明显低于对照组(55.0±5.0枚)(P<0.05),而初级卵泡的数(25.3±2.5枚)明显多于对照组(19.0±1.0枚)(P<0.05)。②TUNEL结果显示BMP4组凋亡卵母细胞比例明显低于对照组(P<0.05)。③免疫组织化学、Western blotting与RT-PCR结果显示,与对照组相比,BMP4组原始卵泡卵母细胞中p-Smad 1/5/8、Sohlh2及C-kit的表达均显著升高(P<0.01)。结论:BMP4/Smad信号通路可促进小鼠原始卵泡向初级卵泡转变,并抑制卵母细胞的凋亡;其可能通过上调Sohlh2及C-kit基因的表达而发挥作用。     

始基卵泡活化的分子机制研究进展

始基卵泡是哺乳动物整个生殖期限中各级卵泡及卵子发育的源头。始基卵泡的激活既需要卵母细胞内如PI3K-PTEN-AKT-FOXO3、mTORC1及p27Kip1-CDK体系等信号通路的正常激活,也需要一些卵母细胞特异性的分子如Nobox和Sohlh1等的参与,除此之外,始基卵泡周围的前颗粒细胞也发挥巨大作用,其首先在m TORC1等信号通路的调节下分化为立方形颗粒细胞,改变自身形态,启动始基卵泡活化,其次可通过分泌KITL与卵细胞表面KIT结合后激活调节卵细胞生长的关键通路——PI3K信号通路,最终导致卵母细胞生长及始基卵泡的正常激活。了解始基卵泡活化过程有助于阐明卵子发生的分子机制,为女性不孕提供新的治疗靶点。     

糖尿病对卵巢卵泡发育的影响

随着糖尿病患者数量急剧增加,女性糖尿病患者不孕不育及生殖内分泌异常疾病的问题日益严重。研究表明糖尿病患者体内的高血糖水平,异常的胰岛素浓度和瘦素浓度能够阻碍下丘脑和垂体对卵巢的调控或直接作用于卵巢影响卵泡的正常发育和卵母细胞的成熟导致排卵障碍,损伤卵巢的正常功能进而影响妊娠和内分泌稳态。本文结合最新的研究进展,深入讨论了糖尿病对卵巢卵泡发育影响的具体机制,为相关疾病的治疗提供新的思路和见解。     

参与调控始基卵泡激发过程的细胞信号通路

始基卵泡占卵巢所有卵泡的99%以上,人卵巢组织中最后一批由初级卵母细胞分化形成的始基卵泡的寿命可长达50余年。始基卵泡的有序激活受多种信号通路的调控作用。许多细胞因子可以通过PI3K-AKT信号通路,激活叉头蛋白转录因子O3a(Fox O3a),促进始基卵泡的启动,而该作用可以被抑癌基因PTEN编码的蛋白所抑制;结节性硬化综合征(TSC)蛋白能够负向调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(m TORC1),在始基卵泡保持静止状态的过程中发挥重要作用;转化生长因子-β(TGF-β)家族成员众多,对始基卵泡的激活作用存在争议,主要通过蛋白分子Smads控制靶基因的转录;近期有研究表明,Hippo信号通路在卵泡激活调节过程中有重要作用,对卵巢组织进行机械切割,可以抑制Hippo信号通路,促进卵泡激活。上述不同的信号通路之间存在频繁的交叉对话。对多种信号通路之间进行联系,能够为整体理解始基卵泡的激活机制提供新的思路。     

哺乳动物黄体生成素(LH)峰效应由颗粒细胞向卵母细胞传递的分子通路

血液中黄体生成素(luteinizing hormone,LH)在排卵前形成一个极大的峰值,LH与壁层颗粒细胞中的LH受体(LHR)结合诱导类表皮生长因子(EGF)的表达,通过自分泌和旁分泌的作用激活颗粒细胞与卵丘细胞中的EGF受体(EGFR)、大鼠肉瘤病毒致癌基因(KRAS)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),激活的ERK1/2诱导表达前列腺素合成酶2(PTGS2)、类固醇合成快速调节蛋白(STAR)、透明质酸合成酶2(HAS2)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白6(TNFAIP6)产生的前列腺素又和卵丘细胞上的PTGER2结合,激活p38MAPK,这一LH作用的信号转导通路最终刺激卵丘扩展卵母细胞成熟并最终排卵。     

不同浓度血管活性肠肽(VIP)对新生大鼠原始卵泡体外发育影响的实验研究

目的:观察不同浓度血管活性肠肽(VIP)对新生4 d大鼠卵巢体外培养过程中原始卵泡存活和生长发育的影响。方法:取新生4 d大鼠的卵巢72个,随机分为6组:新鲜组、基础培养组和不同浓度VIP组(10-9~10-6 mol/L)。新鲜组不经培养、其余各组体外培养14 d行组织形态学检查、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学和TUNEL凋亡分析。结果:①各培养组的1级(早期初级)卵泡百分比明显高于新鲜组(P<0.05),且VIP 10-7 mol/L组最高。②各培养组PCNA阳性率与新鲜组比较均有统计学差异(P<0.001);不同浓度VIP组与基础培养组比较有统计学差异(P<0.05);VIP 10-7 mol/L组卵泡PCNA阳性率最高,与其他VIP浓度组比有显著差异(P<0.05),③各培养组卵泡凋亡率均显著高于新鲜组(P<0.001),培养组中以VIP 10-7 mol/L组较低,与VIP 10-8 mol/L组和VIP 10-9 mol/L组间有统计学差异(P<0.05)。结论:在卵巢体外培养过程中,VIP可以促进新生4 d大鼠的原始卵泡向初级卵泡转化;不同浓度的VIP均可降低卵巢组织卵泡细胞的凋亡,提高卵泡体外存活能力,VIP10-7 mol/L较其他浓度更明显地促进卵泡细胞的增殖,降低卵泡细胞的凋亡。     

抑癌基因PTEN及其蛋白与原始卵泡启动生长凋亡的关系

抑癌基因PTEN是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。原始卵泡的启动受各种基因的调节。PTEN及其表达产物PTEN蛋白主要在原始卵泡的卵母细胞表达。PTEN基因抑制原始卵泡的活化并使原始卵泡保持在静止状态。其通过PTEN-PI3K/PI3K/Akt信号级联发挥原始卵泡生长启动的作用。敲除PTEN基因的小鼠,其原始卵泡向初级卵泡的转化加速。     

hCG对卵泡及子宫内膜发育作用的研究进展

人绒毛膜促性腺激素(hCG)可以改善内膜容受性(ER)、延长种植窗口期,有利于胚胎着床,还可以调节子宫内膜的免疫耐受性,从而提高种植率;在卵泡早期或者中晚期添加低剂量的h CG可以提高卵子以及胚胎质量,从而获得更高的妊娠率。     

卵泡液中白血病抑制因子(LIF)和血清中E_2在早期胚胎发育中的作用

目的:阐述卵泡液中白血病抑制因子(LIF)和血清中E2在早期胚胎发育中的作用。方法:利用临床62例控制性超促排卵(COH)IVF-ET患者治疗过程中测定的血清E2数据和取卵时收集到的卵泡液,采用ELISA法测定卵泡液中LIF含量,分析LIF在取卵日不同E2组中的差异,并进一步分析其在卵母细胞、胚胎发育中的作用。结果:LIF在E2=1500-4000pg/ml组最高,在E2<1500pg/ml组中表达最低;在不同年龄组表达无差异。LIF<15pmol/L和≥15pmol/L组间受精率、可用胚胎率均存在显著性差异。LIF浓度与受精率、可用胚胎率成正相关。结论:受精率及早期胚胎的质量可能与卵泡液中LIF含量有关。卵泡液中LIF的浓度受周围血E2的影响;合适的E2浓度有利于卵泡液中LIF的提高。     

程序化冷冻对人始基卵泡与初级卵泡保存效果的影响

目的:探讨程序化冷冻对人卵巢组织内的始基卵泡与初级卵泡形态与凋亡的影响。方法:采用慢速程序化冷冻保存人的卵巢皮质,采用组织形态学、电镜及原位凋亡检测观察冷冻前后的始基与初级卵泡的形态学变化及凋亡情况。结果:冷冻前后人正常形态的始基卵泡比例无显著变化,而冷冻后形态正常的初级卵泡的比例较新鲜组显著下降(P<0.05)。冷冻后的初级卵泡内线粒体肿胀,胞浆及线粒体出现空泡化,而始基卵泡的超微结构保持良好。冷冻前后2种卵泡的凋亡率比较无差异。结论:程序化冷冻对人初级卵泡的形态损伤严重,对始基卵泡保存较好。     

Follicle loss and PTEN/PI3K/mTOR signaling pathway activated in LepR-mutated mice

Female mice (Y123F) with substitution mutations introduced through homologous gene targeting, replacing the three tyrosine residues of LepR, Tyr985, Tyr1077, and Tyr1138 with phenylalanine, could induce infertility. This study aimed to describe the reproductive alteration and to explore its mechanism. We compared the reproductive characteristics in the female homozygous (HOM) Y123F mice and wild-type (WT) littermates, analyzing the expression of downstream molecules of LepR, like protein kinase B (Akt)/mammalian target of rapamycin (mTOR), phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 (PTEN) and insulin receptor substrate (IRS) in the ovaries. The results showed that 10-week old female Y123F HOM exhibited no reproductive periods, declined anti-mullerian hormone (AMH) levels in the serum and ovaries, reduced primordial follicles, primary follicles, secondary follicles, antral follicles and hardly no corpus lutea (all p?<?.05). The phosphorylation of downsream Akt, mTOR, S6K1 and eIF4B of LepR were all elevated in the ovaries of the mutated female mice. They also presented a decreased phosphorylation of IRS-1, IRS-2, and PTEN, and a strengthened phosphorylation of FOXO-3A in the ovaries. In conclusions, LepR mutation could result in follicle loss and activation of PTEN/PI3K/Akt/mTOR pathway in adult female mice, independent of insulin signaling pathway.     

新生大鼠卵巢体外培养体系的研究

目的:探讨最适宜于大鼠原始卵泡体外生长发育的培养体系。方法:取出生2d的SD大鼠卵巢,分别在Waymouth和DMEM中培养8d,石蜡制片,HE染色,统计分析各级正常卵泡数;于培养d4、d8观察各级卵泡形态;并用免疫组化方法检测在这两种培养体系的卵巢中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达定位情况。结果:①在Waymouth中,由原始卵泡启动生长成为初级卵泡和次级卵泡的百分率分别是25.51%和6.93%,高于DMEM中的17.06%和3.56%(P<0.01)。②在Waymouth中培养的卵泡形态都较正常,而在DMEM中培养的异常卵泡较多。③PCNA作为原始卵泡生长的指标,也说明卵巢在Waymouth中能良好生长。结论:Waymouth培养体系是研究原始卵泡生长的一个理想的培养体系。     

干细胞因子和白血病抑制因子对冻融后人原始卵泡体外生长发育的研究

目的:探讨干细胞因子(stem cell factor,SCF,又称KIT配体)和白血病抑制因子(leukaemiainhibitory factor,LIF)对冻融后人原始卵泡体外培养生长发育的影响。方法:收集18例卵巢良性肿瘤手术患者的正常卵巢皮质,采用直接覆盖玻璃化冷冻法保存卵巢组织,冻融后分离卵泡,随机分成5组:对照组(A组)、10 ng/ml SCF组(B组)、10 ng/ml LIF组(C组)、10 ng/ml SCF+10 ng/ml LIF组(D组)和100 ng/ml SCF+10 ng/ml LIF组(E组),行体外培养,比较SCF和/或LIF对人原始卵泡生长发育的影响。结果:①随培养天数的增加,对照组卵泡直径增长缓慢,明显小于各实验组(P<0.05);D、E组中卵泡直径增长迅速,较B、C组差异有统计学意义(P<0.05)。②随着培养天数的增加,各组卵泡均能分泌激素。4 d后对照组卵泡激素水平增长缓慢,明显低于各实验组(P<0.05),而D、E组中卵泡激素分泌增长迅速,较B、C组差异有统计学意义(P<0.05),D、E组中卵泡激素增长速度相差不大,但在第4日差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在体外培养液中添加SCF或LIF以及两者联合添加有利于促进卵泡的生长发育,提高E2分泌功能,且SCF和LIF联合其作用更加明显。     

人绒毛膜促性腺激素在卵泡发育中的作用

目的:过去多年,由于人绒毛膜促性腺激素(hCG)与黄体生成素(LH)高度相似,hCG已代替LH被应用于促进卵子的最后成熟。最近,人们发现LH/hCG受体遍布所有的生殖器官,提示hCG的作用不限于此。与LH相比,hCG的半衰期更长、与LH/hCG受体结合更为紧密,效应可能更强。已经有研究报道低剂量hCG可独立于卵泡刺激素(FSH)支持中晚期卵泡的发育与成熟。在控制性超促排卵(COH)之前以及早期添加hCG可能是个有效的减少重组FSH的用量,提高卵子质量,提高妊娠率的方法。本文主要从LH在激素合成以及卵泡发育中的作用,hCG与LH的异同,hCG在中晚期卵泡和早期卵泡发育中的作用等方面进行介绍hCG的最新应用进展。     

The Antral Follicle Count Predicts the Outcome of Pregnancy in a Controlled Ovarian Hyperstimulation/Intrauterine Insemination Program

Purpose: Our purpose was to test whether age-related changes in antral follicle counts can predict the pregnancy outcome in the early follicular phase of a controlled ovarian hyperstimulation/intrauterine insemination (COH/IUI) program. Methods: A selected group of 107 women (36 healthy women requesting child sex preselection, 52 women with unexplained infertility, and 19 with minimal endometriosis) who underwent controlled ovarian hyperstimulation with clomiphene citrate (CC) plus human menopausal gonadotrophin (hMG) and subsequent intrauterine insemination were enrolled in the study. Transvaginal ultrasonography (7.0 MHz) was used to determine the total number of antral follicles (2–8 mm) in the right and left ovaries. The association among the antral follicle count, age, dominant follicle, and estradiol (E ₂ ) level on the day of human chorionic gonadotropin (hCG) was analyzed. The association of the pregnancy rate and OHSS with the antral follicle count, dominant follicle count, and age was also examined. Results: The total antral follicle number decreased with age (P<0.0001). Dominant follicle number increased with total antral follicle number in women who received CCplus hMG/ IUI (P<0.0001). The pregnant group had a higher number of antral follicle and dominant follicles in comparison with the nonpregnant group (P<0.01 and P<0.02, respectively). The E ₂ level on the day of hCG injection increased positively with the total number of antral follicles (P<0.0001) and the total number of dominant follicles (P<0.0001). In women aged younger than 35 years, the pregnancy rate and dominant follicle number rose as the number of antral follicles increased (P<0.03 and P<0.0001, respectively). The pregnancy rate was low (2/39) in women aged older than 35 years regardless of the number of antral follicles (P<0.05) and the extent of hMG administration (P<0.02). Women aged older than 35 also produced fewer dominant follicles (P<0.001). No pregnancy was achieved in a patient with an antral follicle number of less than five (17 cases). Conclusions: Age-related changes in antral follicle count significantly predicted the dominant follicle count and the pregnancy outcome. In women with antral follicle counts of less than five or who are older than 35 years, the application of COH/IUI may not be indicated.