自然流产蜕膜及绒毛组织中钙网蛋白的表达及意义

目的:检测早期自然流产蜕膜及绒毛组织中钙网蛋白(CRT)和凋亡蛋白酶Caspase-3的表达及定位,初步探讨其在早期自然流产过程中的作用及相关性。方法:正常早孕者和早期自然流产者(先兆流产组、稽留流产组)行负压吸引人工流产术,取蜕膜及绒毛组织,HE染色比较其形态学变化,免疫荧光法检测CRT及Caspase-3的表达,统计学分析其相关性。结果:(1)CRT及Caspase-3在早期自然流产蜕膜及绒毛组织中表达高于正常早孕组;(2)稽留流产组蜕膜及绒毛组织中CRT及Caspase-3的表达均高于先兆流产组;(3)CRT与Caspase-3呈正相关。结论:CRT及Caspase-3异常表达可能参与早期自然流产的发生机制。     

自然流产患者绒毛组织PAI-14G/5G多态性和uPA基因的表达及其意义

目的:探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)4G/5G多态性和纤溶酶原激活剂(uPA)与自然流产的关系及其在妊娠中的作用。方法:正常早孕(对照组)人工流产和自然流产(实验组)稽留流产的绒毛组织各30例,应用免疫组织化学PV法检测绒毛组织中PAI-1和uPA蛋白表达情况,等位基因特异性-PCR(AS-PCR)法检测PAI-1 4G/5G多态性的表达情况,RT-PCR法检测uPA mRNA表达情况。结果:①PAI-1蛋白主要在绒毛组织的滋养细胞质中表达,其表达对照组低于实验组(P<0.05)。uPA与PAI-1蛋白在细胞中分布一致,其表达水平对照组高于实验组(P<0.05)。②PAI-1 4G/4G基因型和4G等位基因表达水平对照组低于实验组(P<0.05),uPA mRNA表达水平对照组高于实验组(P<0.05)。③PAI-1和uPA蛋白在自然流产患者绒毛组织中的表达呈负相关(r=-0.639)。结论:PAI-1 4G/5G多态性和uPA异常表达可能与自然流产的发生有关。     

组蛋白去乙酰化酶1蛋白在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白在早期自然流产发生中的病理生理作用及临床意义。方法:应用免疫组织化学和Western blot法检测早期自然流产和早期正常妊娠者绒毛及蜕膜组织中HDAC1蛋白的表达。结果:免疫组化示:HDAC1主要定位于绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和子宫蜕膜细胞、腺上皮细胞的胞核;早期自然流产绒毛组织中HDAC1的表达强度低于早期正常妊娠组,而蜕膜组织中,早期自然流产组织HDAC1的表达强度高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Westernblot示:早期自然流产绒毛组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.38±0.63,明显低于正常妊娠组(1.92±0.82),差异有统计学意义(P<0.05);而早期自然流产蜕膜组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.02±0.53,明显高于正常妊娠组(0.71±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HDAC1在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的异常表达可能在早期自然流产的发生、发展中起重要作用。     

复发性自然流产患者绒毛滋养细胞凋亡相关蛋白配体的表达

凋亡相关蛋白(factor associated suicide，Fas)的配体(Fas ligand，FasL)，属于Ⅱ型跨膜糖蛋白，与细胞表面的Fas分子结合，可导致表达Fas的细胞发生凋亡。已知Fas大量表达在活化的T细胞表面，Fas-FasL介导的活化T细胞的凋亡在外周免疫耐受中起重要作用。近年来的研究发现，Fas-FasL在母胎免疫耐受中也起重要作用，即表达FasL的滋养细胞能够杀伤入侵到胎盘绒毛的表达Fas的淋巴细胞，从而使滋养细胞免受母体免疫细胞的破坏。     

TNF-α在IVF-ET后自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在胚胎早期发育过程中的作用及其与流产的关系.方法应用免疫组织化学标记法(SP法),比较IVF-ET后自然流产(10例,A组)、复发性流产(20例,B组)、人工流产(20例,C组)3组患者早孕绒毛、蜕膜组织中TNF-α的表达情况.结果TNF-α在3组绒毛及蜕膜组织中均有表达,A、B组蜕膜及绒毛组织中表达的平均光密度与C组相比差异有非常显著性(P＜0.01).结论TNF-α调节生殖免疫过程,参与了母-胎间相互作用,TNF-α表达异常,在自然流产发病中起重要作用,是导致自然流产的原因之一.     

自然流产患者绒毛中ADAM19、MMP-9和KISS-1基因的表达及其意义

目的:探讨解聚素金属蛋白酶19(ADAM19)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和肿瘤转移抑制因子(即亲吻素-1,KISS-1)与自然流产的关系及其在妊娠中的作用。方法:正常妊娠(对照组)和自然流产(实验组)的绒毛组织各30例,应用免疫组织化学SP法和RT-PCR检测ADAM19、MMP-9及KISS-1的表达情况。结果:①ADAM19、MMP-9蛋白主要在滋养细胞的细胞膜上表达,在细胞质中仅有少量表达。其表达对照组高于实验组(P<0.05)。KISS-1蛋白主要在细胞质中表达,细胞膜上也有少量表达。其在对照组中的表达低于实验组(P<0.05)。②对照组ADAM19 mRNA和MMP-9 mRNA表达高于实验组(P<0.05),KISS-1 mRNA的表达低于实验组(P<0.05)。结论:患者ADAM19、MMP-9和KISS-1 mRNA和蛋白的表达变化影响滋养细胞的浸润能力,可能与自然流产的发生有关。     

早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2基因及其蛋白表达

目的研究早期自然流产患者绒毛肿瘤转移抑制基因KiSS-1与基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)mRNA及蛋白的表达,探讨其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测30例正常早期妊娠和30例早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2的mRNA及蛋白水平,用明胶酶谱分析法检测上述样本孵育液MMP-9、MMP-2的酶活性。结果(1)自然流产患者绒毛组织中MMP-9及MMP-2mRNA表达水平低于正常早期妊娠组(P<0.05),KiSS-1mRNA的表达高于正常早期妊娠组差异有统计学意义(P<0.05);(2)Westernblotting分析显示自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2蛋白表达低于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05),KiSS-1蛋白表达高于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05);(3)明胶酶谱分析结果显示,自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2酶活性低于正常早期妊娠者差异有统计学意义(P<0.05)。结论自然流产患者绒毛促浸润基因MMP-9、MMP-2mRNA及其蛋白表达水平降低,同时抑制浸润基因KiSS-1mRNA及其蛋白表达增加,造成滋养细胞浸润能力下降,可能与自然流产的发生有关。     

cFLIP在早期自然流产绒毛组织的表达及意义

目的:检测早期正常妊娠及自然流产绒毛组织中细胞凋亡抑制蛋白cFLIPmRNA及其蛋白产物的表达,分析并探讨cFLIP与自然流产的关系。方法:应用RT-PCR法及免疫组化SP法检测cFLIP mRNA及其蛋白产物在20例自然流产患者(研究组)绒毛组织的表达,以同期正常妊娠要求人工流产20例为对照组。结果:研究组绒毛组织中cFLIP mRNA及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:细胞凋亡抑制蛋白cFLIP参与维持正常妊娠,绒毛组织中其表达下降可能在自然流产的发生中起重要作用。     

FISH技术在检测自然流产绒毛组织非整倍体异常中的应用研究

目的:探讨运用荧光原位杂交(FISH)检测自然流产绒毛组织的临床价值,评价它与传统经典的核型分析方法的关系。方法:对157例孕早期自然流产的绒毛组织进行FISH检测,均采用16、22、13、21、18、X、Y号染色体荧光探针检测,判断染色体非整倍体异常情况。同时进行绒毛细胞培养染色体核型分析,作为对照诊断标准。结果:核型分析成功率为48.4%,FISH检测成功率为100%。核型分析成功的76例样本中,64例结果与核型分析结果相一致,以细胞遗传学作为诊断标准,诊断的符合率为84.2%。结论:FISH技术与传统的绒毛细胞培养染色体核型分析相比,过程迅速,方法简单,提高了诊断的成功率,但无法完全取代传统的染色体核型分析,应两者结合应用于临床。     

肿瘤抑癌蛋白PTEN、P53在子宫内膜癌组织中的表达

目的 研究肿瘤抑癌蛋白PTEN、突变型P53在子宫内膜组织中的分布和表达,探讨其在子宫内膜癌发病中的意义。方法 选择30例子宫内膜癌组织及癌旁组织标本,分别采用Western印迹半定量方法研究PTEN的相对表达量,采用免疫组织化学法进行PTEN、P53蛋白表达研究,并与临床分期、病理分级、淋巴结转移和雌孕激素受体状态的相关性进行分析。结果 Western印迹定量结果显示PTEN蛋白在子宫内膜癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。免疫组化结果显示PTEN主要分布于细胞浆中,而P53主要分布于细胞核中。17/30例(56.7％)子宫内膜癌中PTEN完全缺失,9/30例(30.0％)部分缺失。PTEN在子宫内膜癌的表达与临床分期有关,其中Ⅱ期的表达缺失率明显高于临床Ⅱ、Ⅲ期,但与病理分级、肌层浸润及淋巴结转移无明显相关性。突变型P53在子宫内膜癌的阳性表达率为36.7％;与病理分级、临床分期有关,而与肌层浸润、淋巴结转移无关。PTEN表达缺失率在雌孕激素受体阳性的癌组织中明显高于雌孕激素受体阴性的癌组织。结论K-PTEN与子宫内膜癌的发生有关,是相对早期的分子事件;P53的突变提示肿瘤预后不良,是相对晚期的分子事件,可能在子宫内膜癌的发展中发挥作用。     

抑癌基因PTEN及其蛋白与原始卵泡启动生长凋亡的关系

抑癌基因PTEN是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。原始卵泡的启动受各种基因的调节。PTEN及其表达产物PTEN蛋白主要在原始卵泡的卵母细胞表达。PTEN基因抑制原始卵泡的活化并使原始卵泡保持在静止状态。其通过PTEN-PI3K/PI3K/Akt信号级联发挥原始卵泡生长启动的作用。敲除PTEN基因的小鼠,其原始卵泡向初级卵泡的转化加速。     

早期自然流产患者绒毛Notch受体mRNA和蛋白表达及与妊娠关系的初步探讨

目的:初步探讨早期自然流产患者绒毛Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)mRNA及蛋白表达及对滋养细胞的调控作用。方法:用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测6例自然难免流产患者和12例正常早期妊娠妇女绒毛Notch1、Notch2、Notch3、Notch4的mRNA和蛋白的表达水平。结果:(1)自然流产组绒毛Notch1和Notch3 mRNA表达水平高于正常早期妊娠组(P<0.05);(2)Western-blot检测显示早期自然流产患者绒毛中Notch1、Notch2、Notch3受体蛋白的表达水平高于正常早期妊娠组(P<0.05)。结论:Notch受体蛋白在早期自然流产患者绒毛中表达上调,可能与自然流产的发病原因有关。     

硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白-2在子宫内膜异位症的表达及意义

目的:探讨血清和腹水中硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)及硫氧还蛋白结合蛋白-2(Trxbinding protein-2,TBP-2)的含量与子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)的相关性。方法:应用病例-对照研究的方法,分别收集34例EMs患者(病例组)和32例非EMs妇女(对照组)的外周血清和腹水样本,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清及腹水中TRX、TBP-2的水平。结果:TRX在病例组血清、腹水中的表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。TBP-2在病例组血清、腹水中的表达量均明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:EMs患者血清和腹水中TRX及TBP-2表达的变化可能与EMs的发生、发展有关。     

卵巢上皮性癌组织中磷酸化蛋白激酶B和PTEN蛋白的表达及其意义

目的探讨磷酸化蛋白激酶B（pAKT）和FYEN蛋白在卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中的表达及其相互关系,并分析两者与卵巢癌患者预后的关系。方法应用免疫组化法,检测12份正常卵巢、20份卵巢良性上皮性肿瘤、12份卵巢交界性上皮性肿瘤、80份卵巢癌组织中pAKT和PTEN蛋白的表达,并分析两者间的关系。采用单因素和多因素生存分析法分析pAKT和FYEN蛋白表达与卵巢癌患者预后的关系。结果pAKT蛋白在正常卵巢、卵巢良性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率分别为8％、10％。显著低于卵巢癌组织的55％（P〈0．01）;而FYEN蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为45％,显著低于正常卵巢和良性上皮性肿瘤组织的100％、80％（P〈0．01）。pAKT和FYEN蛋白在交界性肿瘤组织中的阳性表达率分别为25％、67％,分别与卵巢癌组织比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。pAKT和FYEN蛋白表达与卵巢癌手术病理分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移有关（P〈O．05）,而与年龄、病理类型、有无腹水无关（P〉0．05）。卵巢癌组织中pAKT和PTEN蛋白间的表达呈明显负相关关系（r=-0．444,P〈0．01）。单因素生存分析显示,手术病理分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移、pAKT和FrEN蛋白阳性表达与患者预后有关（P〈0．05）。Cox回归多因素分析表明,FYEN蛋白阳性表达和手术病理分期是影响卵巢癌患者预后的独立危险因素（P〈0．05）。结论pAKT蛋白过度表达伴随PTEN蛋白表达缺失可能参与卵巢癌的发生、发展,PTEN蛋白表达缺失是卵巢癌患者预后不良的独立危险因素。     

HLA-G蛋白在早孕绒毛及葡萄胎中的表达及意义

目的:探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)蛋白在早孕绒毛和葡萄胎中的表达及意义。方法:应用免疫组化法检测30例早孕绒毛、20例葡萄胎和11例侵蚀性葡萄胎中HLA-G蛋白的表达情况。结果:①在早孕绒毛,HLA-G蛋白仅表达于绒毛外滋养层细胞,而在其他滋养层细胞则未见表达;②HLA-G蛋白在早孕绒毛、葡萄胎和侵蚀性葡萄胎中表达依次增强,三者比较,差异非常显著(P<0.001)。结论:HLA-G蛋白的表达可能与滋养细胞的侵袭行为有关,在滋养细胞肿瘤的侵袭中有一定作用。     

STAT4和STAT6在复发性自然流产患者外周血清中的表达及意义

目的:探讨信号传导及转录激活因子(STAT)4和STAT6在复发性自然流产(RSA)患者外周血清中表达水平的变化.方法:应用酶联免疫吸附法( ELISA)对比检测STAT4和STAT6在20例正常早孕妇女(对照组)及50例RSA患者(研究组)成功保胎治疗前后外周血清中的表达水平.结果:①研究组治疗前血清STAT4水平明显高于对照组,STAT6水平明显低于对照组;②研究组经过成功保胎治疗后,血清STAT4水平明显下降,STAT6水平明显上升;③研究组外周血清中STAT4和STAT6表达水平呈显著负相关.结论:①RSA患者治疗前外周血清中STAT4水平上调,STAT6水平下降,诱导Th1/Th2平衡失调,可能是RSA的发病机制之一;②RSA患者成功保胎治疗后外周血清中STAT6水平上调,STAT4水平下降,可以作为临床治疗效果的观察指标.     

早孕绒毛组织中HOXA7、9、10基因的表达及米非司酮对其的影响

目的:探讨米非司酮抗早孕的作用机理。方法:因非意愿妊娠要求终止妊娠的正常早孕妇女60例,分为3组,分别为常规负压吸宫对照组、负压吸引术前服用米非司酮100mg组和150mg,每组20例。运用RT-PCR及免疫组织化学方法检测各组绒毛组织中HOXA7、9、10mRNA和蛋白的表达。结果:①正常早孕绒毛组织在mRNA和蛋白水平均可见HOXA7、9、10基因的表达,表达主要在滋养细胞胞质,间质少量表达。②不同剂量的米非司酮均可以降低绒毛组织中HOXA7、9、10mRNA及蛋白的表达量,但对不同基因的降表达程度有所不同。150mg米非司酮对早孕绒毛组织中HOXA7、10基因的降表达作用明显大于100mg米非司酮(P<0.01)。服用不同剂量米非司酮后的早孕绒毛组织中HOXA7、9、10蛋白的表达位置仍以滋养细胞胞质为主,间质少量表达。结论:HOXA7、9、10基因表达于正常早孕绒毛组织中,服用米非司酮后可降低其表达,呈一定的剂量依赖性,但未改变蛋白的表达位置。米非司酮的抗早孕作用可能是通过对绒毛组织中HOXA7、9、10基因的调控来达到的,且以150mg的米非司酮作用明显。     

胎盘绒毛血管生成状况及VEGF、MMP-2和MMP-9表达与早期自然流产的关系

目的:探讨VEGF、MMP2和MMP9表达变化对胎盘绒毛血管生成的影响及与早期自然流产的关系。方法:选用CD34作为微血管标记物,应用免疫组化检测30例早期自然流产病例(自然流产组)和20例早期人工流产病例(人工流产组)胎盘绒毛微血管密度(MVD);RT-PCR检测胎盘绒毛VEGFmRNA的表达;酶谱分析法测定MMP-2和MMP-9的表达。结果:自然流产组VEGF121mRNA表达及MVD均明显低于人工流产组(P<0.01)。相关分析显示,两组中VEGF121mRNA相对表达量与MVD值均呈显著正相关(rθ=0.9794,rλ=0.9183)。自然流产组酶原型MMP-9的表达量显著低于人工流产组(P<0.01),激活型MMP-2的表达量显著高于人工流产组(P<0.01)。结论:孕期胎盘绒毛内VEGF121mRNA低表达所致的血管生成障碍以及MMP-2和MMP-9表达失调可能共同参与了早期自然流产的发生发展过程。     

RNA结合蛋白Rbpms 2在小鼠卵母细胞及早期胚胎中的表达及意义

目的:检测分析多重剪接RNA结合蛋白2(RNA binding protein with multiple splicing 2,Rbpms2)在小鼠卵母细胞及早期胚胎中的表达及分布情况。方法:运用生物信息学资源分析Rbpms2基因表达的组织分布情况以及Rbpms2蛋白的功能结构域;通过免疫印迹法、免疫组织化学及免疫荧光检测,分析Rbpms2在小鼠卵母细胞及早期胚胎中的表达和分布。结果:生物信息学检索显示Rbpms2 mRNA在卵细胞及受精卵中高表达,其蛋白具有一个RNA识别结构域。免疫印记法证实Rbpms2蛋白在小鼠卵母细胞中高表达,同时免疫组织化学显示阳性信号主要集中在卵母细胞胞质中,免疫荧光显示在早期胚胎中,Rbpms2的信号集中在细胞核中。结论:Rbpms2在小鼠卵母细胞及早期胚胎中呈高水平表达,提示其可能在卵母细胞和早期胚胎的发育过程中发挥重要作用。     

复发性流产病人绒毛组织中FK506结合蛋白52的表达及意义

目的 探讨复发性流产（RSA）病人及正常早孕妇女绒毛组织中FK506结合蛋白52（FKBP52）基因和蛋白的表达。方法　 选取2012年2月至2013年6月广西医科大学第一附属医院妇产科门诊就诊的30例RSA妊娠妇女（复发性流产组）及同期正常早孕妇女30例（对照组）,收集其新鲜绒毛组织,分别应用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学方法检测两组绒毛组织中FKBP52 基因和蛋白的表达。结果　 FKBP52在两组妇女的绒毛组织中均有表达,但与对照组相比,复发性流产组凝胶成像系统半定量分析FKBP52 mRNA（1.484 ± 0.198对1.109 ± 0.292,P<0.05）及蛋白表达（91.8 ± 5.3对68.2 ± 8.4,P<0.01）均明显降低。结论　 FKBP52的表达可能在胚胎着床和早期妊娠的维持中起重要作用,其表达降低可能与RSA的发病密切相关。