正常人结膜上皮细胞的体外培养及扫描电镜观察

人结膜上皮细胞不仅在体内只有较高的再生能力,而且在体外培养同样表现出较高的繁殖活性。细胞接种后4～5d即长成单层,紧密连接,细胞形态多为多边形,部分细胞显示类啤酒杯外观。细胞表面超微结构可见丰富的微绒毛,显示出旺盛的代谢及分泌功能,为体外研究药物毒理及药物筛选提供了一个良好模型的组织结构基础。     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类,进一步研究颌下腺对血发生的调控,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示,小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）在体外培养中,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用,实验组集落数远远高于阴性对照组（Ｐ〈０．０５）;晚期红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雄性组（Ｐ〈０．０５）,早期红系祖 细胞（ＢＦＵ－Ｅ）培养体系没有明显差异（Ｐ〉０．０５）,贫血模型小鼠颌下腺促进ＢＦＵ－Ｅ和ＣＰＵ－Ｅ增殖和分化的活性高于正常小鼠（Ｐ〈０．０５）,ＩＬ－３与ＳＧＣＭ有协同刺激作用,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子,雄性小鼠颌下腺促进ＣＦＵ－Ｅ增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。     

正常人结膜上皮细胞的体外培养及扫描电镜观察

人结膜上皮细胞不仅在体内具有较高的再生能力，而且在体外培养同样表现出较高的繁殖活性。细胞接种后４￣５ｄ即长成单层，紧密连接，细胞形态多为多边形，部分细胞显示类啤酒株外观。细胞表面超微结构可见丰富的微绒毛，显示出旺盛的代谢及分泌功能，为体外药物毒理及药物筛选提供了一个良好模型的组织结构基础。     

兔机械性角膜上皮损伤对结膜杯状细胞及结膜上皮细胞的作用研究

目的 探讨机械性角膜上皮损伤对结膜杯状细胞及结膜上皮细胞的作用.方法 选取雄性新西兰大白兔12只,建立机械性角膜上皮损伤模型(角膜中央直径8 mm上皮刮除),建模后使用盐酸林可霉素滴眼,用法为3次/日,1滴/次,观察时间为7d.在模型建立后第l、4、7天共3个时间点进行结膜印迹细胞学检查、结膜组织透射电镜检查,对结膜上皮细胞及杯状细胞数量及形态进行分析.结果 成功建立机械性角膜上皮损伤模型.结膜印迹细胞学检查显示,造模前结膜杯状细胞数量平均值为66.367±2.466(个/每200 pan×150 μm面积),Nelson 0级;造模后第1天,结膜杯状细胞数量明显下降,平均值为2.933±0.242(个/每200 μm×150 μm面积),Nelson 3级;造模后第4天,结膜杯状细胞数量开始恢复,平均值为17.350±0.991(个/每200μm×150 μm面积),Nelson 2级;造模后第7天,结膜杯状细胞数量已明显恢复,平均值为32.467±2.244.(个/每200 μm×150μm面积),Nelson 1级.结膜组织透射电镜检查可见到造模后结膜杯状细胞大量减少,分泌颗粒排空,细胞凋亡,结膜上皮细胞脱落坏死,胞核固缩,胞质中可见溶酶体,上皮下及上皮细胞间炎症细胞浸润;随时间推移,结膜杯状细胞数量及形态逐渐恢复,初期细胞形态欠规则,结膜上皮细胞胞间隙大,连接松散;后期杯状细胞数量明显恢复,形态饱满,分泌功能开始恢复.结膜上皮细胞分化好,细胞连接较为紧密.结论 机械性角膜上皮损伤可造成结膜杯状细胞的数量下降及分泌增加,同时可造成结膜上皮细胞凋亡增加,炎症细胞浸润.结膜杯状细胞的数量、功能以及结膜上皮细胞正常结构可在一定时间内自行修复.     

小鼠颌下腺组织培养上清液对造血干细胞和骨髓细胞增殖影响的实验研究

本实验采用脾集落形成法和流式细胞术等技术,研究了小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）对造血干细胞和骨髓细胞增殖的影响。结果表明：正常雄性和雌性ＳＧＣＭ对小鼠造血干细胞增殖和分化有明显促进作用：ＳＧＣＭ能能效促进小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）由相对静止期（Ｇ０／Ｇ１）进行增殖活跃期（Ｓ＋Ｇ２／Ｍ）,并能提高骨髓有核细胞数。研究提示,正常小鼠颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进小鼠造血干细胞增殖和全化并加     

体外培养鉴定恒河猴结膜上皮细胞的研究

[目的]通过在体外培养鉴定恒河猴结膜上皮细胞,探讨结膜上皮细胞的正常的生长环境,为深入研究眼表疾病的发病机理奠定基础.[方法]取健康恒河猴结膜上皮在体外进行分离培养,通过组织块培养法进行原代培养,传代培养后进行鉴定.分别采用倒置显微镜观察,细胞免疫化学,以及RT-PCR技术进行鉴定.[结果]恒河猴结膜上皮细胞在24 h内从组织块爬出,上皮细胞成层状向周边铺展,平均7 d左右细胞可以融合成单层.原代培养生长的细胞以结膜上皮细胞为主,混杂有少许的成纤维细胞.传至第3代细胞,基本纯化为上皮细胞,无成纤维细胞混杂.原代和第1、2、3代的结膜上皮细胞,皆呈现细胞胞浆粘蛋白4和角蛋白4阳性.但是,原代的部分细胞呈现MUC5AC和角蛋白7染色阳性,第1代少数细胞染色阳性,而第3代细胞基本上未见阳性细胞.原代培养的细胞进行RT-PCR检测,显示421 bp和632 bP明亮的特异性条带.[结论]对恒河猴结膜上皮体外取材培养,可以获取纯度较高的结膜上皮细胞,其生理特征与体内相同,可以在体外模拟类似的眼表环境.     

胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

目的 比较不同培养条件下原代人胸腺上皮细胞生长情况,观察上清液对Ｔ细胞株８５细胞增殖及存活的效应。方法 原代胸腺上皮细胞培养、８５细胞增殖测定、台盼兰试验及ＦＡＣＳ分析。结果 含血清的培养基与含生长因子的培养基均能培养出原代胸腺上皮细胞,ＴＥＳ上清单独能促使８５细胞增殖且能提高８５细胞的存活率。结论 研究发现含血清的培养基与含生长因子的培养基培养效果无明显差异,仅剪切也能培养纯净的胸腺上皮细胞。Ｔ     

艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549活性及凋亡的影响

目的观察艾烟冷凝物(PM10采取人体可吸入的艾烟部分)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)活性及凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜来观察其对A549的细胞活性以及细胞凋亡的影响。结果 MTT法结果显示:与对照组相比,A549的细胞存活率随浓度和时间发生改变,具有明显的时间浓度依赖性;0.12g/L浓度的艾烟冷凝物作用于细胞12 h后可显著提高细胞存活率(P=0.005<0.01);荧光显微镜下观察发现艾烟冷凝物可以引起细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性。结论 A549细胞随着艾烟冷凝物浓度的增加、刺激时间的增加而引起细胞活力逐渐下降,表明一定浓度的艾烟冷凝物和一定的刺激时间对细胞具有毒性作用;一定浓度的艾烟冷凝物在较短刺激时间内具有细胞增殖作用,故认为艾烟对细胞的增殖作用可能是艾烟发挥有效作用的重要因素之一;能够引起细胞的凋亡可能是毒性作用的重要因素之一。     

EB病毒潜伏膜蛋白对鼻咽上皮细胞生物学表型的影响

EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是一种全球性分布、人群感染率颇高的具有致瘤潜能的DNA疱疹病毒,90％以上的人群建立了EBV终生潜伏状态感染。目前的研究发现其致瘤谱越来越广,除与传染性单核细胞增多症相关外,还与某些恶性淋巴瘤（Burkitt淋巴瘤,霍奇金病,某些T、B细胞源性非霍奇金淋巴瘤如血管中心性淋巴瘤、间变性大细胞性淋巴瘤、Lennert淋巴瘤、器官移植后及免疫缺陷者淋巴瘤等）、鼻咽癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、喉癌、宫颈癌等恶性肿瘤相关。     

下颌下腺的研究进展

下颌下腺是人体颌下区颌下三角的主要解剖结构,属于消化腺之一,其位置重要、功能独特,多年来,国内外学者对其进行了广泛、深入的研究。本文从其解剖、密度、影像学检查方法、生物活性物质、生物学意义等方面进行了综述,可为深入研究下颌下腺对肌体的影响提供更多的依据。     

Hoechst 33342标记恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化

 [目的]探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。[方法]在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Transwell非接触共培养10d,然后对诱导后的细胞用细胞免疫化学以及流式细胞术检测结膜上皮细胞的特异性表面标志,包括角蛋白4和粘蛋白4,同时检测细胞的Hoechst 33342表达情况。[结果]纯化后的皮肤干细胞比例接近90%。Hoechst 33342标记后的皮肤干细胞胞核显示蓝色荧光。在与结膜上皮细胞共培养10d后,皮肤干细胞显示结膜上皮细胞的标志粘蛋白4和角蛋白4阳性,流式细胞术检测阳性细胞比例分别为49.9%和95.6%,同时细胞还显示胞核的Hoechst 33342表达。[结论]灵长类动物恒河猴的皮肤干细胞,在体外的适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞。     

Hoechst 33342标记恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化

[目的]探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。[方法]在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Transwell非接触共培养10d,然后对诱导后的细胞用细胞免疫化学以及流式细胞术检测结膜上皮细胞的特异性表面标志,包括角蛋白4和粘蛋白4,同时检测细胞的Hoechst 33342表达情况。[结果]纯化后的皮肤干细胞比例接近90%。Hoechst 33342标记后的皮肤干细胞胞核显示蓝色荧光。在与结膜上皮细胞共培养10d后,皮肤干细胞显示结膜上皮细胞的标志粘蛋白4和角蛋白4阳性,流式细胞术检测阳性细胞比例分别为49.9%和95.6%,同时细胞还显示胞核的Hoechst 33342表达。[结论]灵长类动物恒河猴的皮肤干细胞,在体外的适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞。     

表皮干细胞分化结膜上皮细胞基因检测的实验研究。

目的通过实时RT～PCR方法检测经定向诱导分化的表皮干细胞分子生物学特性,探讨干细胞疗法用于眼表重建的可行性。方法实验组细胞以结膜上皮细胞为饲养细胞进行共培养,并设立空白对照组细胞培养相同时间,分别于第1、3、5、7天取各组细胞提取RNA进行实时RT—PCR定量检测β2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达水平。结果实验组细胞共同培养3d后出现β2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达,第5、7天的表达量显著提高（P〈0．01）。结论经本实验方法定向诱导分化后表皮干细胞可表达与正常结膜上皮细胞相类似的分子生物学特征。     

养阴润目丸对苯扎氯铵诱导的干眼兔模型结膜上皮细胞焦亡的影响

目的 研究养阴润目丸对干眼兔结膜上皮细胞焦亡的调控作用。方法 将40只雌雄各半的健康普通级新西兰兔采用随机数字表法,取8只作为空白组,剩余32只均采用双眼局部滴注0.1%苯扎氯铵溶液制备干眼模型,模型成功后随机分为空白组,模型组,养阴润目丸低、中、高剂量组,每组8只。养阴润目丸低、中、高剂量组分别按剂量0.435、0.869、1.738 g·(kg·d)-1给予养阴润目丸水溶液灌胃。连续灌胃2周后,分别进行泪液分泌试验（Schirmer’s test, SIT）、泪膜破裂时间（break up time, BUT）和角膜荧光素染色评分;取兔结膜上皮细胞,透射电镜下观察结膜上皮的细胞形态;Western blot检测结膜中NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3, NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine aspartate-specific proteinase-1, Caspase-1)、消化道皮肤素D(Gasdermin D, GS...     

不同淋巴细胞分离液对小鼠骨髓单个核细胞生物学活性的影响

目的:探讨不同淋巴细胞分离液对小鼠骨髓单个核细胞生物学活性的影响.方法:使用Ficoll、Percoll和小鼠淋巴细胞分离液分离小鼠骨髓单个核细胞,分别在显微镜下观察细胞形态,胎盘蓝染色法计数细胞数量并检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖能力,采用流式细胞仪检测细胞周期,并分别计数三种淋巴细胞分离液分离出的小鼠骨髓单个核...     

实验性铅中毒对小鼠颌下腺神经生长因子的影响

目的：观察实验性铅中毒对小鼠颌下腺神经生长因子（ＮＧＦ）的影响。方法：小鼠以０．５％醋酸铅染毒８周，采用原子吸收分光光度法测定其血铅和颌下腺铅含量。采用免疫组化法，观察铅染毒染毒对小鼠颌下腺ＮＧＦ免疫阳性复合物分布的影响。结果：与对照组相比，实验性铅中毒小鼠体重下降，血铅和颌下腺铅含量显著升高。免疫组化结果显示，铅染毒小鼠颌下腺ＮＧＦ免疫阳性反应明显弱于正常小鼠。结论：铅可减少颌下腺ＮＧＦ的生成。     

海带多糖对放疗后颌下腺细胞凋亡的影响

目的 探讨海带多糖(LJP)对放疗后颌下腺细胞凋亡的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、放疗对照组,放疗LJP A组(LJP 30 mg/kg)及放疗LJP B组(LJP 300 mg/kg).放疗对照组、放疗LJP A组及放疗LJP B组的大鼠颌下腺给予一次性γ射线照射,每只总剂量15 Gy.采用免疫组化法及原位切口末端标记(TUNEL)法分别检测大鼠颌下腺细胞的Bcl-2,Bax表达及凋亡情况.结果 与放疗对照组比较,放疗LJP A组及放疗LJP B组大鼠颌下腺细胞的Bcl-2表达水平明显增强(P＜0.05),Bax水平无明显改变(P＞0.05);与正常对照组比较,放疗对照组的凋亡细胞明显增加(P＜0.05),而与放疗对照组比较,放疗LJP A组及放疗LJP B组的凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论 LJP可调节细胞Bcl-2及Bax的表达水平,抑制细胞凋亡,从而保护颌下腺免受放疗损伤.     

颌下腺切除对小鼠睾丸影响的流式细胞分析

本实验对切除颌下３５天、５２天和７０天的小鼠做了睾丸生精细胞ＤＮＡ含量的流式细胞分析。结果表明（１）各实验组的１Ｃ细胞群（精子和精子）和４Ｃ细胞群（初级精母细胞）比例明显低于相庆的对照组（Ｐ〈０．０１），２Ｃ细胞群（精原细胞和次级精细胞等）比例高于细胞对照组（Ｐ〉０．０１）。（２）实验组各上均道值低于对照组（Ｐ〈０．０１），即ＤＮＡ含量低于对照组。（３）细胞周期分析显示实验组的Ｇ０／Ｇ１期和Ｓ期细