弓形虫感染家兔血液中虫体的动态观察

目的探明虫体在家兔血液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子105个/只的剂量腹腔感染雄性家兔16只。在家兔感染前后分别采集家兔血液,抗凝处理后,-40℃冻存备用,用实时定量PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫DNA,依据对照计算虫体拷贝量,绘制感染后时间与血液中虫体含量的动态曲线图。结果雄兔弓形虫感染后4d血液中即可检测到虫体DNA,血液中虫体含量为217.887×103个/ml,血液中虫体含量在感染后8 d达到高峰期,血液中虫体含量为248.019×103个/ml,然后虫体含量逐渐下降,在感染后121 d雄兔血液中虫体密度为1.45×103/ml。结论弓形虫感染雄兔血液中虫体含量随感染后时间不同而变化。     

弓形虫感染家兔精液中虫体DNA检测初报

目的了解弓形虫感染家兔精液中是否有虫体存在，探明虫体在精液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子不同剂量经腹腔感染家兔6只。在家兔感染前后分别采集精液，-40℃冻存备用，分别用普通PCR检测弓形虫感染家兔精液中弓形虫DNA。结果5只家兔在感染后的8～14d死亡，仅1只家兔在感染后的8d和72d，用PCR检测手段在精液中均可检测到弓形虫DNA。结论弓形虫感染雄兔精液中有虫体存在。     

家兔精液传播弓形虫的实验研究

目的 了解弓形虫能否通过精液传播，并探讨雌兔阴道不同健康状态对精液传播弓形虫的影响。 方法 8只健康新西兰雄兔经腹腔分别感染1×10⁵个RH株弓形虫速殖子，分别于感染前、后用假阴道采集雄兔精液，每周将采集到的精液混合液化后0.1 ml/只， 分别经宫腔内人工受精管感染4组阴道健康状态不同的成年新西兰雌兔（阴道正常组、阴道损伤组、滴虫性阴道炎组和霉菌性阴道炎组）， 共采集8周，将所得8份混合精液分别感染8次。每次受精后第2～3天耳缘静脉采血2 ml， 分别用ELISA和PCR检测血清抗弓形虫抗体和全血中弓形虫B1基因片段。 结果 ELISA结果显示，雌兔在初次受精后第16天可检测到抗弓形虫抗体，第1～4组抗体阳性家兔数分别有2、1、3和1只，ELISA阳性率为25.9％（7/27）。PCR检测最早在受精后3 d和最晚51 d可扩增出弓形虫B1基因片段200 bp， 第1～4组阳性家兔数分别有2、1、2和0只，PCR阳性率为18.5%（5/27）。其中两种检测结果均为阳性的3只。 结论 弓形虫可通过精液感染雌兔。雌兔的阴道健康状态对经精液感染弓形虫无影响。     

应用双单克隆抗体ELISA夹心法检测循环抗原诊断弓形虫病实验研究

应用ELISA双单抗夹心法检测弓形虫不同感染度的家兔各临床期循环抗原(CA_g),并与双多抗法等检测CA_g进行比较,探讨该法检测CA_g诊断弓形虫病的敏感性和特异性。 人工感染弓形虫家兔分重度、中度及轻度感染组,分别感染13、6、15只。健康对照兔5只。各组同时分期采血。另设血吸虫感染兔42只。球虫感染兔8只,分别     

感染弓形虫家兔血清循环抗原、免疫复合物及抗体的消长规律

应用ELISA观察人工感染弓形虫家兔90d内血清循环抗原(C_Ag)、循环免疫复合物(CIC)及抗体(Ab)的消长规律,探讨检测C_Ag、CIC及Ab诊断弓形虫病的价值及诊断指标。 弓形虫感染组兔6只,对照组兔5只,两组同时分期采血分离血清。FLISA方法采用双单抗夹心法检测C_Ag;单抗二抗法检测CIC;一般间接法检测Ab. 一、家兔感染弓形虫的临床发病观察结果:接种后第1～3d无临床症状,可定为潜伏期。第4d有6兔     

应用PPA-ELISA检测实验家兔弓形虫抗体的研究

本文报告了应用过氧化物酶标记金葡菌A蛋白取代酶标第二抗体,进行酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA)检测弓形虫实验感染家兔的结果。以胰蛋白酶处理纯化后的弓形虫速殖子制成可溶性抗原,对24只感染兔和32只正常兔血清进行检测。结果感染兔全部呈阳性反应,正常兔全部阴性。与爱美尔球虫病兔的     

弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原的检测

目的：探索弓形虫感染早期诊断方法。方法：用快速ＥＬＩＳＡ检测弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原。结果：在轻、中、重３个感染组,分别于感染后ｄ４、ｄ４及ｄ３检测到弓形虫循环抗原。结论：感染虫体数量越多则弓形虫循环抗原测出时间越早,ＯＤ值亦越高。检测弓形虫循环抗原具有早期诊断价值。     

日本血吸虫性别与循环抗原检出的关系

本研究用单性尾蚴感染家兔，追踪观察循环表膜抗原检出情况。结果９只雄性尾蚴感染兔（检虫１５—１３３条，平均５３．１条）及９只雌性尾蚴感染兔（检虫１—１０２条，平均３６．１条）用斑点－ＥＬＩＳＡ法定期检查１年，循环表膜抗原始终为阴性。而７只复性感染兔（检虫４－１６１条，平均６７．１条）于感染后６—１０ｗｋ先后出现斑点－ＥＬＩＳＡ阳性反应。单性雌虫在家兔体内发育不良，呈螺旋状，其寿命至少１年。单性雄虫则可发育成熟，虫体肥厚、粗壮。     

弓形虫既往感染在孕期内对胎儿的影响

目的探讨既往感染者孕期内弓形虫的活动情况及对胎儿的影响。方法对68例抗弓形虫抗体IgG阳性、IgM阴性孕妇的血清、脐血采用酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体IgG、IgM、弓形虫循环抗原（CAg）,PCR法检测虫体DNA;胎盘样本采用直接涂片、匀浆涂片及PCR法观察弓形虫感染情况。结果68例弓形虫抗体IgG阳性孕妇中脐血弓形虫抗体IgG阳性28例,IgG胎盘垂直传播率41.2%;脐血弓形虫DNA阳性6例,宫内感染发生率8.8%;胎盘组织中虫体DNA阳性9例,宫内感染发生率13.2%。结论既往弓形虫感染孕期内仍可导致垂直传播。     

地塞米松诱发家兔弓形虫病的动物模型

目的建立弓形虫感染免疫抑制的动物模型,探讨宿主的免疫力与感染弓形虫的关系.方法将弓形虫抗体（IgM和IgG）阴性的家兔20只随机分4组：正常对照组（A组）、免疫抑制组（B组）、接种虫体组（C组）和免疫抑制接种虫体组（D组）.A组家兔肌注生理盐水,B组肌注地塞米松,C组腹腔注射活的、纯化的弓形虫速殖子,D组除肌注地塞米松外,在注药48 h后腹腔接种活的、纯化的弓形虫速殖子.观察C、D组是否感染成功,比较4组家兔的健康和发病情况,观察弓形虫抗原的分布及致病情况.结果 A组未见异常.B组仅出现食量减少.C组第6天出现体毛疏松,但在整个实验中没有出现死亡现象.D组第4天出现体毛疏松,10 d后出现脱毛、怠惰、厌食、体重下降,腹胀、眼内有分泌物,但停药后症状渐减轻.第2次重复给药后呼吸加快、眼底视乳头轻度充血,1只家兔肢体抽风、瘫痪、昏迷而死亡.结论成功建立弓形虫感染免疫缺损的动物模型.正常家兔感染弓形虫可转为隐性感染.免疫抑制剂对宿主感染弓形虫可起协同作用.     

弓形虫ITS-1序列PCR诊断方法的建立

目的本文旨在为弓形虫感染的临床病例检测建立特异性PCR诊断方法。方法本研究以弓形虫ITS-1序列为种特异性遗传标记,采用有限稀释法稀释速殖子DNA,经PCR扩增,检测该方法的敏感性;用同一引物扩增鸡柔嫩艾美耳球虫原虫和弓形虫,检测PCR方法的特异性。人工感染小鼠和家兔,用组织触片法和PCR方法检测感染动物的组织,并检测10头临床疑似病猪的肺脏、肺门淋巴结、脾脏、肾脏和肝脏等组织,比较两者的敏感性。结果该PCR方法最低可以检测1pg弓形虫速殖子DNA(相当于10个速殖子的DNA);鸡柔嫩艾美耳球虫原虫未扩增出特异条带,仅弓形虫出现特异条带(300bp)。组织触片和PCR方法对人工感染小鼠组织DNA的检出率均为87.5%(7/8),对人工感染家兔的检出率分别为50%(3/6)和66.7%(4/6),对临床疑似弓形虫病猪检测的阳性率均为20%,两种方法的检查结果基本一致。结论本试验结果表明,PCR技术可以作为弓形虫感染动物的诊断与检测方法。     

急性弓形虫病兔循环抗原动态的实验观察

用Dot-ELISA观察人工感染2株不同剂量的弓形虫家兔血清循环抗原(CAg)动态。结果感染RH株弓形虫速殖子10~4/只和10~2/只的两组家兔,CAg出现和全部阳转时间均在感染后3d。但RH株的感染量影响宿主血清CAg动态。感染PP株10~6/只和10~4/只的两组家兔,血清CAg变化无明显差异。RH株CAg水平变化急骤,而PP株变化较平缓,表明宿主血清CAg动态与弓形虫虫株毒力密切相关。     

Parasite stage-specific recognition of endogenous Toxoplasma gondii-derived CD8+ T cell epitopes

BACKGROUND: BALB/c mice control infection with the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii and develop a latent chronic infection in the brain, as do immunocompetent humans. Interferon-gamma-producing CD8+ T cells provide essential protection against T. gondii infection, but the epitopes recognized have so far remained elusive. METHODS: We employed caged major histocompatibility complex molecules to generate approximately 250 H-2L(d) tetramers and to distinguish T. gondii-specific CD8+ T cells in BALB/c mice. RESULTS: We identified 2 T. gondii-specific H-2L(d)-restricted T cell epitopes, one from dense granule protein GRA4 and the other from rhoptry protein ROP7. H-2L(d)/GRA4 reactive T cells from multiple organ sources predominated 2 weeks after infection, while the reactivity of the H-2L(d)/ROP7 T cells peaked 6-8 weeks after infection. BALB/c animals infected with T. gondii mutants defective in establishing a chronic infection showed altered levels of antigen-specific T cells, depending on the T. gondii mutant used. CONCLUSIONS: Our results shed light on the identity and the parasite stage-specificity of 2 CD8+ T cell epitopes recognized in the acute and chronic phase of infection with T. gondii.     

Protracted Treponema pallidum-induced cutaneous chancres in rabbits infected with human T-cell leukemia virus type I

In a preliminary study, two of four rabbits infected with human T-cell leukemia virus type I (HTLV-I) demonstrated prolonged primary chancres following superinfection with Treponema pallidum, the causative agent of syphilis. Two rabbits inoculated with 1 x 10(7) HTLV-I-infected human MT-2 cells and two with infected rabbit cells from a line established in this laboratory (RLT-P), developed latent HTLV-I infection as detected by seroconversion 10 weeks after infection and by detection of HTLV-I sequences in the DNA of peripheral blood lymphocytes after amplification by polymerase chair reaction (PCR) 15 weeks after infection. The rabbits remained clinically normal and had normal blood counts. Six months after infection, the four HTLV-infected rabbits and two noninfected controls were challenged by the intradermal inoculation of 1 x 10(6) Treponema pallidum into eight sites on the shaved back. The lesions of two of the HTLV-I-infected rabbits had a time course similar to non-HTLV-I-infected controls and were completely healed by 4 weeks. The lesions of one of the other two rabbits with progressive disease began to heal about 7 weeks after T. pallidum challenge. The cutaneous lesions in the other rabbit remained dark-field positive and became a confluent eschar at 8 weeks; healing only after treatment with penicillin. Four months after the primary challenge none of the six rabbits previously challenged with T. pallidum had developed lesions after rechallenge and thus expressed chancre immunity. These results demonstrate that rabbits with latent HTLV-I infections may have defective cell-mediated immunity.     

弓形虫ROP2-P30重组真核表达质粒的构建及其免疫效应的初步分析

目的构建弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（P30）融合的重组真核表达质粒,观察融合抗原ROP2-P30以DNA免疫方式在体内的免疫学效应。方法以重组质粒pET28b/ROP2-P30为模板,利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/ROP2-P30,经PCR和酶切鉴定正确后,体外转染COS-7细胞,Westernblot检测ROP2-P30表达。重组质粒pcDNA3.1/ROP2-P30以每鼠100μg混合透明质酸酶10U的剂量肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,以弓形虫虫体裂解抗原作包被抗原,ELISA法测定免疫小鼠血清IgG抗体,免疫结束2周后,以约100个弓形虫速殖子攻击感染小鼠,观察小鼠生存状况。结果PCR和酶切鉴定表明重组质粒pcDNA3.1/ROP2-P30构建正确;Westernblot显示该重组质粒在COS-7细胞中瞬时表达的产物可被重组ROP2-P30免疫兔血清识别;ELISA检测重组质粒免疫小鼠血清特异性IgG抗体水平升高;重组质粒免疫小鼠感染弓形虫后的存活时间较对照组有所延长。结论重组真核表达质粒pcDNA3.1/ROP2-P30构建成功,用该重组质粒DNA直接免疫小鼠,能够诱导产生特异的体液免疫反应,具有一定的免疫保护性;该重组质粒表达的融合抗原分子ROP2-P30具有免疫原性,可作为疫苗候选抗原深入研究。     

小鼠口服弓形虫DNA混合疫苗的免疫保护反应

目的 观察携带弓形虫表面抗原复合基因重组沙门氏菌经口免疫BALB/c小鼠所诱导的免疫反应。 方法 构建弓形虫主要表面抗原SAG1、SAG2复合基因真核表达质粒，将其转入减毒鼠伤寒沙门氏菌BRD509 (BRD509/pSAG1/SAG2)，经口服免疫BALB/c小鼠，以携带空载体质粒的减毒沙门氏菌BRD509及生理盐水（NS）组为对照，分别于每次免疫前和免疫后断尾取血，并于末次免疫后第4周取小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性、天然杀伤细胞（NK细胞）活性和T细胞亚群；ELISA法测定IgG抗体及血清中的细胞因子干扰素（IFN-γ），白介素-4（IL-4）。与末次免疫后4周，每只小鼠腹腔注射0.1 ml(10⁵)弓形虫RH株速殖子攻击，观察小鼠存活时间。 结果 免疫组小鼠的IgG抗体水平明显提高，滴度为1∶100；NK细胞杀伤活性和T细胞增殖活性也明显增强，其中NK细胞杀伤活性为85%±7%，T细胞增殖指数为2.83，与对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)。免疫鼠攻击感染后平均存活时间比对照组长5 d。 结论 弓形虫口服DNA混合疫苗可诱导小鼠产生保护性免疫。     

弓形虫RH株在实验小鼠脑组织内的动态分布

目的通过观察实验小鼠脑组织内不同部位弓形虫的动态分布,进一步探讨弓形虫感染与血脑屏障的关系,为弓形虫脑病患者的早期诊断和治疗提供帮助。方法弓形虫（RH株）经静脉途径感染小鼠,应用直接涂片法动态观察小鼠脑组织弓形虫感染情况。结果弓形虫感染第8d,小鼠大脑皮质及间脑内查获虫体,第10d,虫体出现于脑干、中脑及海马。结论实验小鼠静脉途径感染弓形虫后,第8d脑内开始出现虫体,但脑组织各部位出现虫体的时间不一致。脑组织不同部位血脑屏障对弓形虫的阻隔作用存在差异。