二苯乙烯苷、远志皂苷元2∶1配伍抗Aβ_(25-35)损伤PC12细胞作用的最适浓度研究

目的:研究不同浓度下二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞的作用,以筛选最适配伍浓度。方法:采用MTT比色法筛选Aβ25-35最适造模浓度,在所得最适Aβ25-35浓度基础上采用MTT比色法筛选TSG-TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的最适浓度。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P0.01);与模型组比较,合用4组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN)的细胞存活率最高(P0.01)。结论:在本实验所选取的浓度范围内,TSG与TEN 2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞以"100μmol/L TSG+50μmol/L TEN"合用浓度为最佳。     

远志皂苷元对PC12细胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响

[目的]观察远志皂苷元对体外培养的PC12细胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响.[方法]应用低糖培养PC12细胞模拟O-GlcNAc糖基化水平的下降,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测细胞存活率;采用Western blot方法检测O-GlcNAc糖基化和tau蛋白磷酸化水平.[结果]远志皂苷元能明显改善PC12细胞存活率,与对照组相比,模型组O-GlcNAc糖基化表达降低,tau蛋白磷酸化水平升高.与模型组相比,远志皂苷元处理组未发生O-GlcNAc糖基化表达降低,tau蛋白未发生过度磷酸化.[结论]tau蛋白磷酸化在某些位点受到O-GlcNAc糖基化修饰的负性调节,远志皂苷元在一定程度上可以升高O-GlcNAc糖基化表达,降低tau蛋白磷酸化水平.     

远志皂苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的：观察远志皂苷（Tenuigenin TEN）对过氧化氢（H202）所致PCI2细胞损伤的保护作用。方法：以H2O2损伤PCI2细胞为氧化应激损伤模型，MTT法检测细胞存活率；采用紫外分光光度法测定LDH漏出量，观察细胞的损伤程度；硫代巴比妥酸法测定MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。结果：TEN能明显改善H：0：导致的细胞损伤，与H2O2处理组相比，20、10mg／L组可使细胞存活率升高，LDH漏出量明显降低，降低MDA含量，提高SOD活性。结论：TEN对H2O2诱导的PCI2细胞损伤具有明显的保护作用。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度;增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的。结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

细叶远志皂苷通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对氧化应激及炎症因子的影响

目的 探讨细叶远志皂苷（Tenuifolin, Ten）对Aβ_25-35诱导PC12细胞氧化应激及炎症因子的影响。方法 根据前期实验结果,20μM Aβ_25-35作用于PC12细胞,建立细胞损伤模型。40μg/ml TEN予以细胞保护作用。实验分为空白组、模型组、TEN组。试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）表达水平;Western Blot检测白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）蛋白水平。结果 高与空白组比较,SOD、GSH水平下降,MDA水平升高;细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达升高;与模型组比较,TEN能提高SOD、GSH水平,降低MDA水平;降低细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平。结论 TEN能减轻Aβ_25-35诱导PC12细胞的细胞炎性反应及氧化应激,起到细胞保护作用。     

远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用研究

目的:观察远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用,初步探讨其可能作用机制。方法:以肺癌A549细胞为实验对象,通过不同浓度的远志皂苷元(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理A549细胞,MTT观察细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞的凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的活性;Real Time PCR检测凋亡相关基因TNF-α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的表达。结果:远志皂苷元可显著抑制A549细胞增殖(P0.05)、诱导A549细胞凋亡(P0.05)。同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,显著改变TNF-α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的基因表达(P0.05)。结论:远志皂苷元可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关。     

哈巴苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞毒性的保护作用

目的探讨哈巴苷对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞毒性的影响。方法 PC12细胞以哈巴苷(20、40、80μmol/L)预孵育3 h后以Aβ25-35(30μmol/L)损伤24 h;MTT法检测细胞增殖;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;检测活性氧(ROS)的生成;Western blotting法检测Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,Aβ25-35使PC12细胞的存活率显著降低(P0.01),细胞上清液中MDA水平显著升高(P0.01)、GSH和SOD水平显著降低(P0.01),细胞内ROS水平显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著增加(P0.01),细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达下调(P0.01),Bax蛋白表达显著上调(P0.01);哈巴苷预孵育PC12细胞3 h,使细胞上清液中的MDA水平降低,GSH和SOD水平显著升高(P0.05、0.01);明显剂量依赖性抑制细胞凋亡;上调p-Akt和Bcl-2蛋白表达(P0.05、0.01),并下调Bax蛋白表达(P0.05、0.01)。结论哈巴苷改善Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性,可能通过激活PI3K/Akt信号通路和上调细胞内SOD水平发挥作用。     

柚皮苷对Aβ25-35诱导PC12细胞保护作用的代谢组学研究

目的 基于气质联用代谢组学方法研究柚皮苷对Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞的保护作用机制.方法 以Aβ25-35干预PC12细胞,建立损伤模型.采用MTT法检测细胞增殖率,同时利用GC-MS技术检测空白组、模型组和给药组细胞内源性代谢物的差异,并分析其内在生物学意义.结果 柚皮苷能够增加Aβ25-35诱导的PC12...     

新北美圣草苷对Aβ 25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:研究新北美圣草苷对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ 25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用,探讨其防治AD的作用机制。 方法:采用MTT法检测新北美圣草苷对正常PC12细胞及Aβ 25-35损伤PC12细胞增殖的影响,筛选新北美圣草苷溶液的干预浓度。将PC12细胞按随机数字表...     

三七总皂苷保护PC12细胞对抗过氧化氢损伤的作用

目的:考察三七总皂苷在PC12细胞中对过氧化氢引起损伤的细胞保护作用.方法:采用MTT法考察0.01～100mg·L-1三七总皂苷对正常PC12细胞活力的影响,并在H2O2刺激的PC12细胞中考察0.1～10 mg·L-1的三七总皂苷对细胞活力的影响,通过对细胞活力的考察选择三七总皂苷合适的实验剂量,测定三七总皂苷0.1,1 mg·L-1对H2O2刺激的PC12细胞中活性氧水平、过氧化氢酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响以及对丙二醛(MDA)含量的影响.结果:三七总皂苷在0.1～10 mg·L-1浓度能提高正常PC12细胞活力,并能显著提高H202刺激的PC12细胞活力(P＜0.01).0.1,1mg·L-12个剂量的三七总皂苷均能显著减少H2O2刺激的PC12细胞中活性氧水平,提高SOD活力(P ＜0.001)和GSH-Px活力(P ＜0.001),并减少MDA生成(P ＜0.001).结论:三七总皂苷能通过增强细胞内抗氧化酶活力,保护PC12细胞对抗氧化损伤.     

黄芩苷对鱼藤酮致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨黄芩苷对鱼藤酮致PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法:建立鱼藤酮损伤PC12细胞模型,采用终浓度分别为0.1,1,10μmol·L-1的黄芩苷进行药物干预;四氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,并用显微镜观察细胞形态;应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;采用荧光探针二氯荧光素-双乙酸盐(DCF-DA)测定细胞内氧自由基(ROS);采用蛋白免疫印记法检测凋亡信号蛋白Bcl-2,Bax及Caspase-3表达。结果:PC12细胞经1.5μmol·L-1鱼藤酮孵育24 h后细胞活力显著降低,黄芩苷对鱼藤酮所致的细胞损伤呈现剂量依赖性的保护作用;流式细胞术分析表明黄芩苷可明显减少鱼藤酮致PC12细胞凋亡比例;荧光显微镜观察发现黄芩苷能明显减少鱼藤酮损伤PC12细胞ROS含量,免疫印迹实验表明黄芩苷可上调模型细胞Bcl-2及下调Bax表达并减少活化Caspase-3含量。结论:黄芩苷对鱼藤酮诱导的PC12损伤具有保护作用活性,其机制可能与黄芩苷减少鱼藤酮诱导PC12细胞ROS含量,抑制线粒体凋亡通路有关。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

木犀草素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响

目的 探讨木犀草素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系.方法 实验分为空白组、Aβ25-35组、木犀草素+Aβ25-35组、木犀草素+Aβ25-35+LY294002(PI3K/Akt阻断剂)组.MTT法检测细胞增殖率,DCFH-DA为荧光探针检测细胞总R...     

远志皂苷元对AD模型小鼠学习记忆能力的影响及其机制研究

目的观察远志皂苷元对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的学习记忆能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用对小鼠海马立体定向注射Aβ1-42的方法建立AD动物模型,并随机分为假手术组,模型组,低剂量、中剂量、高剂量治疗组,连续治疗30 d后,运用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力,随后进行活性氧簇(ROS)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、3-硝基酪氨酸(3-NT)等氧化应激指标检测。结果与模型组相比,各治疗组小鼠的潜伏期明显缩短,穿台次数明显增多,海马组织的ROS、8-OHdG、3-NT含量均有明显减少(P均<0.05)。结论远志皂苷元能明显改善AD模型小鼠的学习记忆能力,其机制可能与抗氧化应激作用有关。     

金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞的保护作用

目的利用PC12细胞的抗抑郁损伤模型研究金丝桃苷的抗抑郁作用及其可能机制。方法金丝桃苷、盐酸氟西汀与0.01 mmol.L-1皮质酮共孵PC12细胞48 h,采用形态学法、MTT比色法、LDH法、Fura-2/AM荧光标记法测定胞内Ca2+浓度。结果高浓度皮质酮处理PC12细胞后,细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;OD490值显著升高(P<0.01),LDH释放量较少(P<0.01),胞内[Ca2+]i升高,表明细胞受到损伤或部分死亡;当给予金丝桃苷或盐酸氟西汀后,细胞存活率升高,表明细胞损伤减少或接近正常。结论与经典抗抑郁剂盐酸氟西汀的作用效果一样,金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞有明显的保护作用和抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用有关。     

红景天苷对百草枯诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究红景天苷保护百草枯(PQ)诱发PC12细胞损伤的作用及其机制。方法:实验分对照组、PQ诱导组、不同剂量(10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L)红景天苷治疗组。采用MTT法检测细胞活力,利用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;罗丹明123(Rh123)染色观察细胞线粒体膜电位(MMP)变化,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽还原酶(GSHPX)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性;免疫组织化学染色检测细胞色素C(CytC)的表达。结果:800μmol/L PQ明显抑制PC12细胞增殖、诱导细胞凋亡;以不同剂量(10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L)红景天苷预处理后,保护了PQ所致的PC2细胞增殖抑制,降低凋亡率(P0.01)。机制上,红景天苷抑制了MMP下降(P0.05),导致LDH、CytC的释放减少,增强了GSH-PX、SOD的活力(P0.05)。结论:红景天苷保护了PQ诱导的细胞损伤,抑制了PQ所致的细胞凋亡,这可能与抑制CytC的释放和MMP下降,提高GSH-PX、SOD的活性有关。     

三七总皂苷在氧化应激的PC12细胞中抑制Aβ蛋白生成的作用

目的考察三七总皂苷在氧化损伤的PC12细胞中对Aβ蛋白生成相关代谢酶基因和蛋白表达的影响。方法采用H2O2损伤PC12细胞,建立氧化应激的PC12细胞模型,以ELISA法及Western blot法测定PC12细胞中淀粉样前体蛋白(APP)、早老素-1(PS-1)、金属蛋白酶结构蛋白-10(ADAM10)、α-分泌酶、β-分泌酶及γ-分泌酶蛋白水平,并以RT-PCR法检测PS-1,β-分泌酶(BACE)及ADAM10 mRNA表达的变化。结果三七总皂苷显著降低PC12细胞中的APP、PS-1蛋白(P0.05)及γ-分泌酶水平(P0.01),增加α-分泌酶及ADAM10蛋白水平(P0.05)。并且显著增加ADAM10 mRNA的表达(P0.01),减少PS-1 mRNA的表达(P0.05)。结论三七总皂苷能抑制由于氧化应激而引发的PC12细胞内Aβ蛋白的堆积,减轻PC12细胞在氧化应激后继发的Aβ级联损伤。     

阿魏酸和芍药苷混合剂对PC12细胞损伤的影响

目的观察阿魏酸和芍药苷混合剂对FeSO4和H2O2诱导的PCI2细胞损伤的影响,初步探讨其作用机制。方法采用FeSO4和H2O2作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞损伤模型。倒置相差显微镜进行细胞形态学观察;采用MTT比色分析测定细胞存活率;硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与FeSO4和H2O2损伤组进行比较,阿魏酸和芍药苷的混合剂能明显改善PC12细胞的存活数量,降低MDA的含量和提高SOD活性。结论浓度为5～50μmol／L的阿魏酸和浓度为1～10μmol／L的芍药苷混合剂对FeSO4和H2O2诱导PC12细胞损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与阿魏酸和芍药苷清除自由基和抑制脂质过氧化有关。     

补肾益智方含药血清保护Aβ_(25-35)-3损伤PC12细胞的实验研究

目的:探讨补肾益智方含药血清对由Aβ25-35-3诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)老年性痴呆(AD)细胞模型的保护作用。方法:建立PC12细胞培养方法,用倒置显微镜进行形态学观察,利用WST-8法检测细胞活力以及荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位等方法,观察补肾益智方含药血清对AD细胞模型的影响。结果:补肾益智方5%含药血清对AD细胞模型的保护作用优于5%正常血清,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:补肾益智方含药血清能在一定程度上减少Aβ25-35-3对PC12细胞的神经毒性作用。     

二苯乙烯苷对基因转染PC12细胞α-突触核蛋白过表达和泛素-蛋白酶体系统的影响

目的 观察何首乌有效成分二苯乙烯苷（TSG）在体外实验中对α-突触核蛋白（α-synuclein, α-Syn）过表达的影响及其作用机制。方法 不同浓度的TSG与α-Syn基因转染PC12细胞共孵育24 h,应用噻唑蓝（MTT）法和乳酸脱氢酶漏出法确定该药对培养细胞的无毒范围,RT-PCR法检测细胞中α-Syn mRNA含量的变化,蛋白质印迹（Western blotting）法检测α-Syn、泛素化蛋白羧基端水解酶（UCH-L1）和parkin蛋白的表达,观察TSG对它们的影响。结果 TSG对培养细胞的无毒范围为6.25～100 μmol·L。在此剂量范围内的TSG与α-Syn基因转染PC12细胞孵育24 h,能够明显减少模型细胞α-Syn mRNA含量,抑制α-Syn蛋白表达和聚集,增强UCH-L1和parkin蛋白表达。结论 TSG在体外对基因转染细胞的α-Syn过表达和聚集有明显抑制作用,其作用机制与抑制α-Syn合成和增强α-Syn降解有关。