核酶—慢性髓细胞白血病基因治疗新方法

核酶是具有酶催化活性的ＲＮＡ分子可以特异性地结合和切割靶序列抑制基因表达。目前利用核酶慢性髓细胞白血病才刚刚起步，研究发展与反义核酸相比具有高效性，稳定性等特点。本文概述了核酶对ＣＭＬ细胞抑制作用的研究进展和应用前景。     

核酶技术的研究进展

核酶是一类具有酶活性剂ＲＮＡ分子，可序列特异性定点切割靶ＲＮＡ，从而在发子水平和细胞水平真正实现对失控基因或有害其因表达的粗效阻断，本文对目前发现的几种核酶，特别是锤头状核酶及发夹状核酶的研究进展进行了简要介绍。     

核酶在肿瘤中的应用

核酶是一类具有催化活性的ＲＮＡ分子，可序列特异性地切割 ＲＮＡ，从而实现对失控基因或有害基因表达的效阻断。本文对核酶的分子结构类型、一物学功能、核酶的设计、核酶的转导及其在肿瘤中的应用作一综述。     

双位点核酶抑制细胞内HBV表达的图像分析

目的：利用ＬＥＩＣＡＱ５００ＭＣ图像分析系统观察针对ＨＢＶＣ区双位点核酶对细胞质中Ｃ区基因表达的抑制作用。方法：采用亚克隆技术,从ｐＧＥＭＲｚ１２３（含针对ＨＢＶＣ区双位点核酶）上切下双位点核酶的片段,定向克隆于真核表达载体ｐＢＢＳ２１２中,利用Ｌｉｐｏｆｅｃ－ｔａｍｉｎｅ介导,将重组质粒ｐＢＢＳ２１２－Ｒｚ转染入２２１５细胞中,采用原位杂交观察核酶的表达,采用免疫组化、图像分析法分析ＨＢｃＡｇ的表达。结果：筛选２周后,原位杂交证实可表达针对ＨＢＶＣ区双位点核酶。免疫组化及图像分析证实该核酶可抑制Ｃ区基因表达。结论：应用图像分析法可定量地观察到核酶对Ｃ区基因表达有阻断作用,抑制ＨＢｃＡｇ的合成。     

端粒酶的检测与肿瘤诊治进展

端粒酶 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ)是一种能延长端粒末端的核糖核蛋白酶 ,由具有模板功能的ＲＮＡ组分和催化活性蛋白质组分组成。它能以自身ＲＮＡ为模板反转录合成端粒ＤＮＡ序列 (ｔｅｌｏｍｅｒｉｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅ ,ＴＥＬ)添加到染色体末端 ,以补偿细胞分裂时染色体末断的缩短 ,从而使端粒的功能得以恢复。自从 1989年Ｍｏｒｉｎ[1] 首次在人子宫颈癌Ｈｅｌａ细胞中检测到端粒酶活性以来 ,有关端粒酶的检测及其与肿瘤诊断和治疗的研究已成为近年来肿瘤分子生物学领域较热门的课题之一。1　端料酶活性的检测检测端粒酶活性最初是利…     

会议消息

Ｔｉｍｅ　 5Ａｐｒｉｌ 2 0 0 3 --9Ａｐｒｉｌ 2 0 0 3时间　 2 0 0 3年 4月 5～ 9日Ｍｅｅｔｉｎｇ　ＡＡＣＲ’ｓ 2 0 0 3ＡｎｎｕａｌＭｅｅｔｉｎｇ会议　 2 0 0 3年第 94届ＡＡＣＲ年会Ｐｌａｃｅ地点　ＭｅｔｒｏＴｏｒｏｎｔｏＣｏｎｖｅｎｔｉｏｎＣｅｎｔｒｅ　加拿大安大略省多伦多市　Ｔｏｒｏｎｔｏ ,Ｏｎｔａｒｉｏ ,Ｃａｎａｄａ　ＭｅｔｒｏＴｏｒｏｎｔｏＣｏｎｖｅｎｔｉｏｎＣｅｎｔｒｅＭａｉｌ联系地址　ＡＡＣＲ　ＡＡＣＲ　 (ＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ)　 (Ａｍｅ…     

环境致癌(突变)物和药物代谢相关的人细胞色素P450 cDNA的克隆和转基因细胞系的建立

目的：建立环境致癌（突变）物和药物代谢相关的人细胞色素Ｐ４５０１Ａ２,２Ａ６,２Ｅ１,３Ａ４ｃＤＮＡ的克隆和转基因细胞系。方法：从人肝组织中提取总ＲＮＡ,用逆转录酶生成ｃＤＮＡ。以各个ｃＤＮＡ编码序列两端设计引物,ＰＣＲ扩增各个人细胞色素Ｐ４５０基因的ｃＤＮＡ,并将其连接到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－Ｔ或ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,通过内切酶图谱分析及全序列测定,再将该ｃＤＮＡ片段重组于哺乳动物细胞表达质粒ｐＲＥＰ９。用改良磷酸钙共沉淀法转入ＣＨＬ细胞中,通过Ｇ４１８抗性筛选,扩大培养。提取细胞的Ｓ９组分,…     

环氧化酶与肿瘤关系的研究进展

环氧化酶 (Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ,ＣＯＸ)是前列腺素 (ＰＧｓ)合成过程中一个重要的限速酶 ,可将花生四烯酸 (ＡＡ)代谢成各种前列腺素产物 ,从而维持机体的各种生理病理过程。哺乳动物的环氧化酶至少有两种形式 :ＣＯＸ1和ＣＯＸ2 ,ＣＯＸ1结构性表达于大多数细胞内     

反义转染细胞HL_（60）~R－9的c-myc基因表达及其生物大分子的生物合成

作者构建了体外能双向转录ｃ－ｍｙｃ基因的重组质粒ＰＧＣ，以制备ＲＮＡ探针用于检测ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ转染细胞ＨＬＲ６０－９的ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及反义ＲＮＡ表达。结果显示，Ｃｄ２＋诱导的ＨＬＲ６０－９细胞的ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ表达随Ｃｄ２＋浓度及作用时间的增加而增强，但ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达在诱导过程中逐渐减少，两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出ｃ－ｍｙｃＰ６２蛋白的表达。３Ｈ－ＴｄＲ、３Ｈ－ＵＲ及３Ｈ－Ｌｅｕ掺入试验表明其ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质生物合成明显抑制。以上结果表明，ＨＬＲ６０－９细胞的恶性表型逆转及现所示的大分子生物合成抑制，与ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ阻断了ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达有关。     

微卫星不稳定性与肿瘤的关系

人类基因组中广泛存在微卫星ＤＮＡ (ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ) ,亦称简单重复序列 (ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｒｅｐｅａｔｓ ,ＳＳＲｓ) ,约占人类基因组的 10 %。核心序列碱基数一般为 1～ 10个碱基 ,重复 8次或更多。人类基因组中以 (ＣＡ/ＧＴ )ｎ(简称 (ＣＡ )ｎ) ,重复序列最多 ,总共有 5× 10 4 ～ 10 5个 ,平均每 6～ 6 0ｋｂＤＮＡ就存在 1个(ＣＡ )ｎ ,ＣＡ重复次数约 15～ 16次[1] 。在微卫星区域出现的突变率远高于非重复ＤＮＡ序列。微卫星因其高度多态性常被用来进行人类染色体的基因绘图。大多数微卫星无特殊的…     

反义转染细胞HL^R60—9的c—myc基因表达及其生物大分子的…

作者构建了体外能双向转录ｃ－ｍｙｃ基因的重组质粒ＰＧＣ，以制备ＲＮＡ探针用于检测ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ转染细胞ＨＬ＾Ｒ６０－９的ｃ－ｍｙｃ及反义ＲＮＡ表达，结果显示，Ｃｄ＾２＋诱导的ＨＬ＾Ｒ６０－９细胞的ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ表达随Ｃｄ＾２＋浓度及作用时间的增加而增强，但ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达在诱导过程中逐渐减少，两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出ｃ－ｍｙｃＰ６２蛋白的表达，＾３Ｈ－ＴｄＲ，＾３Ｈ     

国际肿瘤会议(2000年4月)

会议联系方式可在 Ｉｎｔｅｒｎｅｔ网中 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｉｃｃ．ｏｒｇ／下的“Ｔｈｅ ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒ Ｃａｌｅｎｄａｒ”中检索到。美国癌症研究学会９１次年会Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ９１ｓｔ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ美国旧金山２０００年４月１日～５日饮食、营养与癌症关系的流行病学国际学习班Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｕｒｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆＤｉｅｔ，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ＆Ｃａｎｃｅｒ意大利Ｓ…     

宫颈癌组织差异表达环状ＲＮＡ筛选及通路分析

目的：筛选宫颈癌组织中差异表达的环状 ＲＮＡ（ｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡ，ｃｉｒｃＲＮＡ），并对其结合的微小 ＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲ ＮＡ，ｍｉＲＮＡ）及靶向的信使 ＲＮＡ（ｍｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡ，ｍＲＮＡ）进行生物信息学分析。方法：从 ＧＥＯ数据库中检索并下载 宫颈癌组织芯片数据，利用 Ｒ４．１软件进行差异分析，选择表达上调／下调最显著的各 ５个 ｃｉｒｃＲＮＡ，通过 ｃｉｒｃｉｎｔｅｒａｃ ｔｏｍｅ网站预测 ｍｉＲＮＡ和 ３个生物信息学网站（ｍｉＲＤＢ、ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ、ｍｉＲＴａｒＢａｓｅ）联合预测靶 ｍＲＮＡ，通过 Ｍｅｔａｓｃａｐｅ数 据库对其进行功能富集分析。应用 ＳＴＲＩＮＧ在线工具预测 ｍＲＮＡ的蛋白互作网络并获得关键 ｍＲＮＡ，最后预测关键 ｍＲＮＡ与患者预后的关系。结果：通过差异分析，发现宫颈癌组织中共有 ７５个差异表达的 ｃｉｒｃＲＮＡ，通过上调／下调 最显著的共 １０个 ｃｉｒｃＲＮＡ预测获得 ２０２个 ｍｉＲＮＡ和 ５个预后相关 ｍＲＮＡ（ＰＯＬＲ２Ｄ、ＪＵＮ、ＣＴＮＮＢ１、Ｈ２ＡＦＺ、 ＲＢＢＰ７），最后确定了 ８条 ｃｉｒｃＲＮＡ ｍｉＲＮＡ ｍＲＮＡ调控路径可能参与宫颈癌的发生发展。结论：在宫颈癌组织中异 常表达的 ｃｉｒｃＲＮＡ及其相关通路将可能成为宫颈癌诊断和治疗的新靶点。     

国际肿瘤会议(2000年3月)预告

会议联系方式可在 Ｉｎｔｅｒｎｅｔ网中 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｉｃｃ．ｏｒｇ／下的“Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃａｌｅｎｄｅｒ中检索到。第３０届放射肿瘤学临床研究研讨会３０ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　ＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｍｉｎａｒ美国Ｇａｉｎｅｓｖｉｌｌｅ２０００年３月２日～４日第１７次国际乳腺癌年会１７ｔｈ Ａｎｎｕａｌ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｒｅａｓｔ　ＣａｎｃｅｒＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ美国迈阿密２０００年３月２日～４…     

检测多项肿瘤标志物诊断肺癌的研究

为了探索检测多项肿瘤标志物诊断肺癌的可能性,我们对肺癌(ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ,ＬＣ)和胸部良性疾病(ｂｅｎｉｇｎｃｈｅｓｔｄｉｓｅａｓｅ,ＢＣＤ)患者的血清脂质结合唾液酸(ＬＳＡ)、唾液酸总量(ＴＳＡ)和α1抗胰蛋白酶(ＡＡＴ)同时进行检测,并采用相对操作特征(ｒｅｌａｔｉｖｅｏｐｅｒａｔｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ,ＲＯＣ)分析[1～3]和多元判别分析进行客观评价。现报告如下。1　材料与方法1.1　病例　85例ＬＣ和ＢＣＤ患者来自本市第三纺织职工医院及崇明县中心医院。回顾性病例分析揭示ＬＣ30例,包括原发性肺癌21例和…     

人胃癌细胞定向克隆表达cDNA文库的构建及鉴定

克隆胃癌的相关基因，方法，提取人胃癌细胞总ＲＮＡ，分离共ｍＲＮＡ。以ＮｏｔｔＩ／ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１２－１８为引物合成双链ｃＤＮＡ，除去小于４００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段后，连接ＥｃｏＲＩ接头，经ＮｏｔＩ酶酶切，插入定向克隆表达载体λＥｘｃｅｌｌＮｏｔＩ／ＥｃｏｒＲＩ／ＣＩＰ，体外包装后转染大肠杆菌ＮＭ５２２，构建了人胃癌细胞ＭＧＣ－８０３定向克隆表达ｃＤＮＡ文库。结果：文库含１．２＊１０＾６个重组子，     

芳香化酶与乳腺癌

芳香化酶 (Ａｒｏｍａｔａｓｅ)即雌激素合成酶 ,它催化雄激素转化为雌激素 ,是雌激素生物合成中的限速酶。研究表明它属于细胞色素Ｐ4 50家族 ,故又叫芳香化酶细胞色素Ｐ4 50 (ＡｒｏｍａｔａｓｅＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ4 50 )。该酶在人体见于卵巢、胎盘、睾丸、脑、乳腺、脂肪组织、骨与皮肤及某些病理组织如乳腺癌组织、子宫内膜肿瘤组织、异位的子宫内膜组织、子宫平滑肌瘤组织 ,正常无病的成年肝、肾上腺和子宫组织没有芳香化酶的表达。研究表明 ,经由芳香化酶催化雄激素转化而来的雌激素不仅作用于生殖系统和生殖行为 ,也影响肿瘤发…     

bcl-2反义基因调控对人宫颈癌裸鼠移植瘤体内治疗的探讨

ｂｃｌ－２基因与宫颈癌关系密切，本研究采用回体转移法（Ｅｘ ｖｉｖｏ）和活体直接转移法（Ｉｎ ｖｉｖｏ）观察反义ＯＤＮ及反义ＲＮＡ作用于移植瘤的治疗效果。１材料与方法１．１一般资料 硫代磷酸修饰ｂｃｌ－２脱氧寡核苷酸（上海生工生物工程有限公司），反义链（ＡＯＤＮ）５＇－ＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＣ—３＇；无义链（ＮＯＤＮ）５＇－ＴＣＧＣＣＡＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＣＣＧ—３＇。含反义 ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ部分序列（６２２ｂｐ）的质粒ｐＤＯＲ－ＡＢ（７．１２ｋｂ）由第四军医大学王成济教授惠赠…     

选择性β_2-肾上腺受体激动剂提高非小细胞肺癌细胞系对顺铂的敏感性[英]

顺铂是肺癌化疗中的一个关键药物。已有报道,顺铂在细胞内积聚是影响顺铂耐药性的一个重要步骤,而细胞内积聚可能受Ｎａ+、Ｋ+ＡＴＰａｓｅ酶活性调节。另有报道,去甲肾上腺素是一种β肾上腺受体激动剂,可提高非小细胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)细胞系对顺铂的敏感性。在该研究中,采用人类非小细胞肺癌细胞系评价选择性β1、β2和β3肾上腺受体激动剂对Ｎａ+、Ｋ+ＡＴＰａｓｅ酶活性和对顺铂敏感性的影响。经Ｐｒｏｃａｔｅｒｏｌ,一种选择性β2肾上腺受体激动剂作用后,ＮＳＣＬＣ细胞系对顺铂的敏感性得以改善,而且Ｎａ+、Ｋ+ＡＴＰａｓｅ酶激活,使…     

大肠癌浸润转移的分子病理学研究进展

 大肠癌的浸润转移是患者致死的主要原因 ,在其转移的每一步都涉及多个分子的相互作用以及不同基因在ＤＮＡ或ＲＮＡ水平上的一过性或永久变化。因此 ,加强对其分子基础和作用机制的研究 ,必将为抗癌治疗带来广阔前景。下面就大肠癌浸润转移的分子病理学研究作一综述。1　浸润转移的分子基础　　大肠癌的浸润是其转移的前提。首先 ,癌细胞与细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ )粘附 ,分泌或诱导宿主细胞分泌一系列蛋白溶解酶降解ＥＣＭ ,然后定向移动以侵入循环及继发部位。因此 ,粘附、降解和移动为浸润转移奠定了基础。1.1　粘附与粘附分子　癌细胞与ＥＣＭ的粘附是通过一大类细胞粘附分子 (ｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ,ＣＡＭｓ)介导的 ,包括钙粘蛋白 (ｃａｄｈｅｒｉｎｓ)、整合素(ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ)、选择素 (ｓｅｌｅｃｔｉｎｓ)以及ＣＤ4 4等。1.1.1　钙粘蛋白家族　根据抗原性和分布的不同 ,将之分为Ｅ 、Ｎ 、Ｐ 、Ｒ 钙粘蛋白等。其中上皮型钙粘蛋白 (Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ ,Ｅ ｃａｄ)与大肠癌浸润转移关系密切。它是一种跨膜糖蛋白 ,位于相邻细胞连接面 ,通过Ｃａ...