ECG、EGCG对两株耐药肿瘤细胞的细胞毒增敏作用研究

目的：研究两种儿茶素成分ECG、EGCG是否对人耐药肝癌细胞BEL-7404／Adr和耐药口腔癌细胞KBV200存在细胞毒增敏作用及可能的机制方法：用MTT法检测药物对体外培养的细胞的毒性作用，用RT-PCR法检测MDR；表达，流式细胞仪测定P-gp表达及细胞内Rh-123含量。结果：两种儿茶素成分在100μgml-1以下剂量对两株耐药肿瘤细胞的抑制率均小于10％，60μgml-1ECG或14μgml-1EGCG联合0．8μgml-1ADM或0．12μgml-1VCR时MDR1下降23．9％～38．6％，两种儿茶素成分与抗肿瘤药物联合应用可使P-gp表达下降，能明显提高细胞内Rh-123的含量结论：儿茶素成分ECG、EGCG与ADM或VCR联合应用可增强耐药肿瘤细胞BEL-7404／Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒作用，其机制可能与降低MDR1-mRNA表达、下调P-gp表达及抑制P-gP的功能有关。     

肠胃清药物血清对人结肠癌细胞株HCT-8/V多药耐药的逆转作用及机制研究

目的:研究肠胃清方对大肠癌耐药细胞株HCT-8/V的逆转作用及其抑制P-gp表达的影响。方法:MTT法测定肠胃清对HCT-8/V细胞株的逆转作用,流式细胞术测定P糖蛋白(P-gp)的表达。结果:HCT-8/V细胞株对VCR、DDP、5-FU、MMC的耐药指数分别为18.6、22.3、4.3、3.7。经肠胃清方药物血清作用48h后,其对化疗的耐药性显著下降,对VCR、DDP的逆转指数分别为3.3和7.5,静息状态下HCT-8/V细胞的P-gp表达显著高于HCT-8(P<0.01),而经肠胃清药物血清作用后P-gp表达显著降低(P<0.01)。结论:肠胃清方可以逆转人大肠癌耐药细胞株HCT-8/V的多药耐药性,其机制可能与其下调P-gp的表达有关。     

川芎嗪对HL60/HT耐药细胞多种化疗药物的增敏作用

目的:观察中药钙通道阻滞剂川芎嗪(TMP)对 HL60/HT 耐药细胞多种化疗药物的增敏作用。方法:采用四氮唑蓝(MTT)法细胞毒性实验作为药物敏感实验,用流式细胞仪测量细胞内药物浓度。结果:TMP 对多药耐药 HL60/HT 细胞系具有抑制生长作用并表现出剂量依赖关系,32、100μg/ml 非细胞毒剂量的 TMP 和多种化疗药物联合应用可以提高化疗药物的细胞毒性作用,逆转倍数为1.25～8.0,相对逆转效率为21.42%～87.90%。流式细胞仪测量细胞内柔红霉素(DNR)浓度发现,TMP 可以增加 HL60/HT 细胞内 DNR 的浓度。结论:TMP 可能是一个有潜力的中药白血病化疗药物增敏剂。     

加味生脉散对鼻咽癌裸鼠移植瘤放射增敏作用研究及机制探讨

目的探讨加味生脉散对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗增敏作用及相关机制。方法构建带绿色荧光蛋白的鼻咽癌细胞HONE1稳定株,并接种裸鼠成瘤,实验分为对照组、药物组、放疗组、药物+放疗组,通过测量肿瘤体积及计算抑瘤率,观察药物加味生脉散的放疗增敏作用;荧光定量PCR及Western-blot检测瘤组织MDR1基因的表达差异。结果与对照组相比,放疗组及药物+放疗组的肿瘤抑制率均明显升高(P<0.05),其中以药物+放疗组最明显(P<0.01);MDR1的mRNA及蛋白的表达水平在单纯放疗组与药物+放疗组之间差异明显(P<0.01)。结论加味生脉散对鼻咽癌的放疗具有增敏作用,其增敏机制可能与抑制MDR1基因的表达相关。     

基于P糖蛋白研究仙茅对顺铂耐药非小细胞肺癌细胞的增敏机制

目的：探究中药仙茅水煎液及其主要入血成分苔黑酚葡萄糖苷(OG)对非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂耐药细胞(A549/cis)耐药性的影响及其潜在机制。方法：用AutoDock Vina分子对接软件评估P糖蛋白(P-gp)与OG的结合能力;CCK-8法检测顺铂、仙茅水煎液、OG及其联用对A549/cis细胞活力的抑制率;蛋白质免疫印迹法检测A549/cis中P-gp的表达水平。结果：P-gp与OG模拟分子对接的结合自由能为-7.6 kcal/mol(1 cal=4.184 J),二者具有良好的结合活性;顺铂对A549/cis的半抑制浓度(IC₅₀)约为5.5μg/mL,仙茅水煎液与OG在梯度浓度下对A549/cis活力均无明显影响;顺铂低剂量(1.5μg/mL)与仙茅水煎液高、低剂量(1 000μg/mL、500μg/mL)或OG高剂量(5×10^-5mol/L)联用组、顺铂中剂量(4μg/mL)与仙茅水煎液高、低剂量(1 000μg/mL、500μg/mL)或OG高、低剂量(5×10^-5mol/L、1×10^-5     

海洋天然产物中P糖蛋白介导的多药耐药抑制剂研究进展

肿瘤的多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的最常见因素,P糖蛋白介导MDR是MDR最重要途径也是研究最透彻的途径。目前所用的P糖蛋白介导MDR逆转剂临床效果欠佳,从海洋寻找新的P糖蛋白介导MDR逆转剂已经成为研究热点。介绍了近年来从各种海洋生物中提取的各种具备P糖蛋白介导MDR抑制活性的化合物。研究表明,海洋天然产物以其新颖结构和生物活性强的特点逐步成为P糖蛋白介导的第三代逆转剂的新来源。     

姜黄素逆转P糖蛋白介导的膀胱肿瘤多药耐药的实验研究

目的 研究姜黄素对P糖蛋白(P-gp)介导的膀胱肿瘤多药耐药的逆转作用.方法 采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术测定细胞内罗丹明浓度.结果 姜黄素不增加阿霉素对BIU-87的细胞毒性作用(P＞0.05);而对于BIU-87/ADR,姜黄素明显增加阿霉素细胞毒性(P＜0.05),逆转指数为4.0.姜黄素明显抑制P-gp的药物外排作用可能是关键因素.结论 姜黄素通过抑制P-gp的药物外排作用有效逆转多药耐药.     

苦参碱对获得性多药耐药小鼠S180肿瘤细胞基因表达产物P170、LRP及TOPOⅡ表达的影响

目的:实验观察苦参碱口服给药对化疗诱导的多药耐药基因表达产物P170、肺耐药蛋白LRP和拓扑异构酶Ⅱ的影响,探讨其干预多药耐药的分子生物学基础,以指导临床应用苦参碱干预化疗多药耐药的产生.方法:以亚于治疗剂量的联合化疗PFC方案,建立小鼠S180肿瘤细胞多药耐药模型,同时给予苦参碱4周,流式细胞仪荧光检测P170、LRP、TOPOⅡ.结果:苦参碱明显降低化疗诱导后耐药细胞P170、LRP的表达率和ROPOⅡ活性.说明苦参碱可通过对相关生物活性物质的调节,干预化疗诱发的肿瘤细胞多药耐药的产生.     

三物白散逆转胃癌细胞多药耐药效应机制研究

目的:研究三物白散对胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药(MDR)的逆转作用,明确其耐药逆转机制。方法:分别以不同浓度的三物白散作用于体外培养的SGC7901和SGC7901/DDP细胞,以MTT法检测细胞增殖抑制率,确定三物白散的非毒性剂量;以不同浓度顺铂(DDP)作用上述细胞,确定没有三物白散干预时各组细胞生长抑制50%的DDP浓度(IC50)和SGC7901/DDP细胞的耐药指数(RF);采用非毒性剂量三物白散,分别与不同浓度顺铂(DDP)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的DDP浓度,计算RF和耐药逆转倍数(RI);利用流式细胞术检测三物白散联合DDP作用后SGC7901/DDP细胞内DDP的荧光强度、P-gp的表达和P-gp功能活性。结果:三物白散的非细胞毒性剂量为10-7g/mL;单独顺铂作用后SGC7901/DDP细胞的耐药指数(RF)为3.94;三物白散协同DDP作用后,SGC7901/DDP细胞的RF为3.75,RI为6.12;与三物白散未干预组比较,三物白散可显著增加DDP在SGC7901/DDP细胞内的蓄积(P0.05),SGC7901/DDP细胞的P-gp表达亦显著降低(P0.01),而P-gp功能显著抑制(P0.01)。结论:三物白散与DDP联合运用既有复合抗癌之效,又能逆转胃癌细胞SGC7901/DDP多药耐药。其主要机制可能是通过三物白散下调SGC7901/DDP细胞P-gp表达、抑制P-gp功能实现的。     

中药拮抗P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药机制的研究进展

综述了近年来中药提取物拮抗P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药机制的研究进展。中药通过多种途径抑制P-糖蛋白的表达和其功能而拮抗多药耐药。许多中药成分既可以从转录和翻译水平抑制P-糖蛋白的表达，还可以通过与抗癌药物竞争P-糖蛋白的药物或ATP结合位点、或通过对肿瘤细胞膜或Ca^2 浓度的影响等而抑制P-糖蛋白的功能。另外，有的中药可以通过增强细胞免疫功能而拮抗P-糖蛋白介导的多药耐药。     

绿茶提取物EGCG对牙本质抗酸蚀作用的初步研究

目的观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对牙本质抗酸蚀作用的影响。方法选取酸蚀症志愿者40名,随机分成2组。制作个别托盘,对照组托盘内注入羧甲基纤维素凝胶(CMC),实验组注入添加了EGCG的CMC凝胶,于夜间睡时佩戴,清晨取下。实验当天及第4周收集培养液,用放射免疫试剂盒测量Ⅰ型胶原羧基端肽(ICTP)的含量。结果凝胶种类对ICTP的含量均有影响,EGCG能有效降低ICTP的表达水平(P<0.05)。结论 EGCG能有效减少脱矿牙本质胶原的降解,提高牙本质抗酸蚀的能力。     

余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡机制的研究

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404产生凋亡的机制。方法:采用PI和Hoechst33342双染色法流式检测对人肝癌细胞株BEL-7404各周期的影响;细胞荧光免疫染色法和Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:PI和Hoechst33342双染色法分析结果表明,余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞72 h后,G2/M期细胞数增多,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。荧光免疫染色显示,药物作用人肝癌细胞株BEL-7404 72 h后Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达则降低。Western blot法实验亦显示Bax蛋白表达升高。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能阻滞G2/M期细胞,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase,最终导致细胞死亡,可能是其诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的分子机制之一。     

吴茱萸碱逆转K562/Adr细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对白血病K562细胞及其耐药株K562/Adr的增殖、细胞周期及多药耐药性(MDR)的影响。方法用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测EVO和/或柔红霉素(DNR)对细胞增殖的影响,并计算耐药指数(RI)和逆转倍数(RF);流式细胞仪检测EVO和/或DNR对K562及K562/Adr细胞周期的影响;流式细胞仪检测K562及K562/Adr细胞内DNR的荧光强度;定量PCR检测K562及K562/Adr细胞中MDR1基因的表达;Western blotting检测K562及K562/Adr细胞中MDR1、BCRP蛋白的表达。结果EVO、DNR作用于K562和K562/Adr细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量和时间依赖性;与K562细胞相比,K562/Adr细胞对DNR的RI为30.54,K562/Adr细胞对EVO的RI为19.09。当EVO(0.125 gmol/L)与不同浓度DNR联合作用后,能使DNR对K562/Adr细胞的IC_(50)明显下降,DNR+EVO对K562/Adr细胞的RF为12.07;EVO、DNR单独或联合作用于K562及K562/Adr细胞后,能够使K562/Adr细胞BCRP、MDR1蛋白及mRNA表达水平均明显下降。结论EVO能有效逆转白血病K562/Adr细胞对DNR的耐药现象,而这种作用可能与EVO通过减少细胞膜上多药耐药蛋白MDR1的表达有关。     

绿茶提取物EGCG对舌癌Tca8113细胞凋亡的影响

目的探讨绿茶提取物EGCG对人舌癌细胞株Tca8113体外凋亡的影响。方法体外培养人舌癌Tca8113细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用AO/EB荧光染色法和DNA琼脂糖凝胶电泳法检测其对舌癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,舌癌Tca8113细胞的凋亡具有浓度依赖性。结论 EGCG可能通过增加细胞凋亡达到抗癌作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠草酸钙肾结石形成的影响及其机制研究

观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肾结石的治疗作用及对肾脏的保护作用,并对其可能机制进行探讨.采用乙二醇联合氯化铵灌胃的方法建立大鼠草酸钙肾结石模型,并以EGCG对其进行干预.采集大鼠J血液标本,检测大鼠血肌酐、尿素氮以及血钙等生化指标;收集大鼠尿液标本,观察并比较大鼠24h尿量、尿草酸以及尿钙水平;取大鼠肾脏标本制成组织切片,观察大鼠草酸钙肾结石的病理变化.采用实时定量PCR及Western blot对肾组织中骨桥蛋白(OPN)的表达水平进行检测.结果发现,与正常组大鼠相比,结石组大鼠血肌酐、尿素氮、尿钙、尿草酸水平以及肾组织内OPN表达水平均显著升高(P＜0.05),而24h尿量则显著降低(P＜0.05);与肾结石组大鼠相比,在EGCG处理后,大鼠血肌酐、尿素氮、尿钙以及尿草酸水平显著降低(P＜0.05),同时24h尿量显著升高(P＜0.05),呈浓度依赖性.与对照组相比,肾结石组大鼠肾组织草酸钙结石病理改变明显,而在EGCG处理后,大鼠肾脏病理改变明显改善,呈浓度依赖性.此外,EGCG处理后大鼠肾脏OPN表达水平显著降低,也呈浓度依赖性.结果可推知EGCG能够抑制大鼠肾脏内草酸钙肾结石的形成,并对肾功能有明显的保护作用.     

表没食子儿茶素没食子酸酯抗流感病毒作用的研究

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法：在体外用MTT法检测EGCG对狗肾传代MDCK细胞的毒性浓度，用CPE法观察EGCG抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用；在体内建立流感病毒感染小鼠模型，通过观察小鼠病死率、生命延长率及肺病变程度指标判定其对小鼠肺炎的抑制作用和染毒小鼠的死亡保护作用。结果：EGCG在体外能有效抑制甲型流感病毒CPE的产生；口服EGCG能减少流感病毒A H1N1病毒株感染小鼠的病死率，延长存活时间，减轻小鼠肺组织病变程度。结论：EGCG具有很好的抗甲型流感病毒的作用，呈剂量效应关系。     

EGCG增强食管癌细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外增强顺铂(DDP)对食管癌CaEs-17细胞化疗敏感性的作用,并探讨可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、DDP组(培养液中DDP终浓度为20μmol/L)、EGCG组(培养液中EGCG终浓度为20 mg/L)、联合组(培养液中EGCG终浓度为20 mg/L,DDP浓度为20μmol/L),各组作用24 h。应用CCK-8法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率,金氏公式评价二药的协同效果;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;Transwell法检测细胞侵袭力;免疫印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平。结果 EGCG、DDP均可抑制CaEs-17细胞增殖、诱导细胞凋亡、降低细胞存活率和侵袭力;EGCG可阻滞细胞于G0/G1期,DDP或联用EGCG可阻滞细胞于G2/M期,并能下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05),二药联用上述作用效果更为显著(P0.01)。结论 EGCG能够增强DDP对食管癌CaEs-17细胞的化疗敏感性,这种作用部分是通过下调Bcl-2蛋白实现的。     

穿山龙粗提物抗肿瘤体外实验研究

目的观察穿山龙粗提物是否具有抗癌活性,为穿山龙有效组方或单体成分抗肿瘤应用基础研究奠定基础.方法采用细胞体外培育技术,以Mosmann法略加改进的MTT实验检测药物细胞毒效应.结果穿山龙粗提物对人口腔上皮鳞癌KB细胞株有明显的细胞毒作用,IC50为(4.13±0.40)μg/mL,对其相应的多药耐药株KBv200细胞也很敏感,IC50为(4.20±0.63)μg/mL,且不表现交叉耐药.结论穿山龙粗提物具有明显的抗肿瘤作用.     

番荔枝内酯类化合物基于耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的构效关系研究

研究12种番荔枝内酯类化合物对耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的作用,并初步探究其构效关系。实验利用实时荧光定量PCR法检测12种番荔枝内酯类化合物:annosquamin A(1),annosquamin B(2),annotemoyin~(-1)(3),uvariamicinⅡ(4),annosquacin D(5),annosquacin B(6),isodesacetyluvaricin(7),uvarigrandin A(8),squamostatin D(9),squamostatin E(10),squamostatin A(11),12,15-cis-squamostatin A(12)对SMMC-7721/ADR细胞中相关基因NDUFV2的表达量。该研究发现所有受试化合物均使SMMC-7721/ADR中NDUFV2表达量有所下调,邻双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最强,而间双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最弱。内酯环与邻近的四氢呋喃环间碳数越少,作用越强;对于邻双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越多,化合物作用可能越强;对于间双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越少,化合物作用可能越强;且受试化合物中均是含有3个羟基取代的化合物作用较强;相对构型为苏式的番荔枝内酯的作用比赤式的强,四氢呋喃环为顺式构型的番荔枝内酯的作用比反式的强;在其他基团完全相同的情况下,长链烷基端部与邻近的四氢呋喃环之间的碳数越少,作用越强。     

Antiproliferative effect of Erycibe elliptilimba on human breast cancer cell lines

Erycibe elliptilimba Merr. & Chun., family Convolvulaceae, is a Thai traditional medicine which has long been prescribed for various infectious and malignant diseases. Bio-assays of extracts from Erycibe elliptilimba Merr. & Chun. showed that a fraction (fraction 3) from an methanolic extract had an antiproliferative effect on SKBR3 and MDA-MB435 human breast cancer cells. The ED50 value of Erycibe elliptilimba Merr. & Chun. fraction 3 was 56.07 and 30.61 μg/ml for SKBR3 and MDA-MB435, respectively. After 48 h of exposure, this fraction at a concentration of 100 μg/ml significantly reduced cell proliferation in both cancer cells. In MDA-MB435 cells, cell cycle analysis showed that the herb extract fraction 3 induced the accumulation of cells in G2/M phase, whereas no significant change in cell cycle was detected in SKBR3 cells. The results indicated that the extract fraction 3 could induce cell cycle arrest in some way. However, further investigation is needed to assess the molecular mechanisms mediated anticancer activities of this plant.