热休克蛋白70、葡萄糖调节蛋白94和IgG在人肺癌组织中的表达

目的:探讨热休克蛋白70(Hsp70)、葡萄糖调节蛋白94(Grp94)、IgG在人肺癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学方法结合病理学图像分析系统研究40例肺癌组织中Hsp70、Grp94和IgG的表达.并用免疫荧光双标染色及激光共聚焦技术研究三者的定位关系.结果:人肺癌组织中Hsp70、Grp04、IsG都有高表达,阳性率分别为65%(26/40)、45%(18/40)和82.5%(33/40),Hsp70阳性定位胞核胞质,Grp94和IgG阳性定位主要在胞质,平均光密度值分别为(5.10±0.32)、(3.52±0.35)和(8.12±0.31).26例Hsp70阳性的肺癌病例中有10例与IsG有共定位关系,18例Grp94与IgG有共定位关系.结论:Hsp70、Grp94和IgG在肺癌组织中高表达,提示三者在肺癌的发生发展中起重要作用;肺癌肿瘤细胞表达的ISG与rap70、Grp94分别存在一定共定位关系,其在肿瘤的发展中可能具有协同作用或者在肺癌组织中存在Hsp70-IgG、Grp94-IgG和Hsp70-GW94-IgG复合物的形式.     

GRP94的功能及其与肿瘤的相关性

葡萄糖调节蛋白94(gloucose requlated protein 94,GRP94)是HSP90家族的成员,主要定位于内质网中.GRP94作为分子伴侣参与蛋白质的折叠、转运和分泌外,还参与了细胞凋亡以及抗原的提呈.GRP94与肿瘤的发生以及进展密切相关,肿瘤的分化程度越低,GRP94的表达也越高.GRP94又可将肿瘤特异性抗原提呈给专业提呈细胞启动特异性的免疫反应.GRP94在肿瘤的发生及转归中发挥了重要的作用.     

热休克蛋白与胚胎发育

热休克蛋白是生物体在应激条件下产生的一组应激蛋白 ,具有维持细胞自身稳定等多种生理功能 ,与胚胎的正常发育及畸形发生关系密切。在一定的应激强度范围内 ,热休克蛋白可以保护胚胎 ,抵抗更强烈的刺激。但当应激强度超过一定阈值 ,热休克蛋白则干扰胚胎的生长发育。热休克蛋白不同家族通过各自不同的作用方式调节胚胎发育     

葡萄糖调节蛋白在肿瘤的表达和治疗中的作用

葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)是内质网应激(endoplasmic reticulum stress)相关的重要分子伴侣,涉及到多种肿瘤的增殖、存活、转移等演化过程.作为一种应激蛋白,GRP78在机体正常组织中几乎不表达,而在处于缺氧应激状态下的肿瘤组织中高...     

葡萄糖调节蛋白78在宫颈癌细胞衰老过程中的表达研究

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein,GRP78）在顺铂诱导宫颈癌细胞衰老过程中的表达变化情况及相关机制。方法亚凋亡剂量顺铂诱导宫颈癌细胞衰老;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;P1染色流式细胞仪检测细胞周期变化;Western blot检测GRP78蛋白表达情况;siRNA反义抑制GRP78表达,western blot检测DNA损伤修复基因ATM（ataxia—telangiectasia mutated）通路相关基因表达情况。结果亚凋亡计量顺铂能够成功诱导宫颈癌细胞衰老,细胞主要阻滞于G2／M期。Western blot检测表明在宫颈癌细胞衰老过程中GRP78蛋白表达明显降低。反义抑制GRP78蛋白表达后ATM通路相关蛋白P53及p-Cdc2表达明显升高,而Cdc2蛋白表达明显降低。结论GRP78蛋白在顺铂诱导宫颈癌细胞衰老过程中起抵抗作用,主要可能通过影响ATM通路相关基因的表达发挥作用。     

葡萄糖调节蛋白78与肝脏应激损伤

葡萄糖调节蛋白78(GRP78),又称为免疫结合球蛋白(Bip),是细胞应激时产生的应激蛋白.作为热休克蛋白70家族的一员,在应激条件下,GPR78蛋白通过在内质网中协助多聚体蛋白质复合物的形成,起到保护和维持细胞正常代谢作用.肝脏是机体物质代谢的重要器官,各种酶和蛋白的生化加工厂,故应激反应下肝细胞GRP78/Bip的表达显得尤为重要.     

葡萄糖调节蛋白58的结构和功能

葡萄糖调节蛋白58是蛋白二硫化物异构酶家族成员之一。此蛋白在结构上具有两个硫氧还蛋白结构域CGHC,在功能上作为一种分子伴侣调节蛋白质的折叠和转运,参与重要物质的组成,STAT3的信号转导和神经细胞的保护作用。它在多种肿瘤细胞中呈高表达,对肿瘤细胞的抗化疗药物的性质及抗原表达有重要意义。     

葡萄糖调节蛋白78真核表达载体及稳定转染人视网膜色素上皮细胞株的构建

背景：葡萄糖调节蛋白78是存在于内质网上最多的分子伴侣蛋白,具有保护细胞对抗细胞调亡的作用。 目的：构建携带并正确表达外源性人葡萄糖调节蛋白78基因的重组真核表达载体,建立葡萄糖调节蛋白78基因稳定转染的人视网膜色素上皮细胞系。 方法：扩增人葡萄糖调节蛋白78全长编码序列,将该目的基因与真核表达载体PEGFP-N1进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,以PCR方法鉴定阳性克隆,并进行测序和分析比对,获得融合蛋白表达质粒载体pEGFP-grp78。通过阳离子脂质体介导将重组质粒pEGFP-grp78转染入体外培养的人视网膜色素上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达细胞系。 结果与结论：体外培养的人视网膜色素上皮细胞株作为真核细胞表达系统,经荧光显微镜和RT-PCR方法检测,G418筛选的稳定转染细胞系中GFP大量表达,葡萄糖调节蛋白78 mRNA的表达量是正常视网膜色素上皮细胞的4倍左右,表示脂质体介导的pEGFP-grp78质粒成功转染视网膜色素上皮细胞,并高效稳定表达葡萄糖调节蛋白78。     

SREBP-1C、GRP-94在小鼠肝细胞脂质代谢中的作用

目的探讨高同型半胱氨酸(Hcy)血症中肝细胞固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1C)与葡萄糖调节蛋白94(GRP-94)的表达变化,评价内质网应激蛋白对肝细胞脂质代谢的影响。方法高蛋氨酸饮食诱导小鼠高Hcy血症,分析肝细胞内甘油三酯(TGE)、胆固醇(CHO)含量的变化,RT-PCR、Western blot分别检测内质网应激蛋白SREBP-1C和GRP-94mRNA及其蛋白表达。结果高蛋氨酸饮食后小鼠各时点血浆Hcy及肝细胞内TGE、CHO含量均显著升高,而血浆TGE、CHO含量升高并不明显;小鼠肝细胞内质网应激蛋白SREBP-1C和GRP-94mRNA及其蛋白表达也显著升高(P<0·05)。结论Hcy诱导的内质网应激可引起SREBP-1C、GRP-94的表达变化及内源性固醇调节通路失调。     

肝肾综合征大鼠肾组织葡萄糖调节蛋白与Toll样受体4的表达

目的：探讨肾组织葡萄糖调节蛋白78、94（GRP78、94）和Toll样受体4（TLR4）的表达及其在肝。肾综合征发生中的作用。方法：采用胆总管结扎诱导肝硬化及肝。肾综合征大鼠模型（BDL组），术后1、2、4和6周各选6只大鼠取血及组织标本。从股静脉取血，监测血浆丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBil）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）。用ELISA检测血浆肿瘤坏死因子-α（TNF—α）含量。取肝、肾组织称其质量，并制备标本；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、蛋白质Western blot分别检测。肾组织GRP78、94和TLR4的mRNA及蛋白表达。同时以假手术组设为对照（C组）。结果：与C组比较，BDL组各时间点大鼠肝脏、。肾脏质量及血浆ALT、TBil和血浆TNF—α均明显升高（P〈0．05），4周和6周BUN和Cr也明显升高（P〈0．05）。BDL组各时间点。肾组织GRP78、94 mRNA及其蛋白表达均明显低于C组（P〈0．01），而TLR4 mRNA及其蛋白表达量却明显高于C组（P〈0．01）。结论：肾组织GRP78、94表达减少可能有助于TLR4炎性信号通路激活。并可能与肝硬化并发的肝。肾综合征发生相关。     

小鼠不同组织器官热休克蛋白70表达的研究

目的　研究热休克恢复期小鼠大脑、垂体、肾、肾上腺中HSP70的表达规律。　方法　昆明系小鼠随机分为对照组和实验组。实验组动物 :1 分别以 40℃ ,42℃ ,44℃ ,46℃热休克处理 30min ,恢复 2h和 8h ;2 以46℃热休克处理 30min ,恢复 2、4、6、8、12、2 4、48、72h ,以免疫组织化学结合图像分析技术观察HSP70的表达。　结果　 1 42℃ ,44℃ ,46℃均能诱导肾、肾上腺表达HSP70 ,44℃、46℃可诱导大脑、垂体表达HSP70 ,但均以 46℃组阳性免疫反应面积最大 (P <0 0 1) ;2 HSP70的合成高峰在大脑和垂体为热休克恢复期 4～ 8h(P <0 0 1) ,肾和肾上腺为 8～ 12h(P <0 0 1) ;3 HSP70阳性免疫反应定位于大脑神经膜和郎飞结 ,垂体神经膜 ,肾小管、肾上腺网状带和束状带细胞质 ,肾中HSP70阳性免疫反应肾小管较肾小球强 ,肾髓质较肾皮质强。　结论　热休克反应中不同组织器官HSP70的表达存在明显差异性 ;HSP70合成迅速且降解缓慢 ;大脑和垂体有较强的耐热能力     

VP-16诱导细胞凋亡及其细胞核基质中热休克蛋白表达的研究

目的　研究VP 16诱导HL 6 0细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白 (HSP)表达的变化。　方法　琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂 ;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化 ;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异。　结果　VP 16作用HL 6 0细胞 0 5h出现早期凋亡特征。作用 4h可见明显的DNA梯状条带。与未凋亡的细胞比较 ,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调 ;VP 16作用 2、3及 4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加 ;诱导 2 2h比诱导 4h时去除VP 16后孵至 2 2h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了 3 4倍。　结论　 1 HL 6 0细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前。 2 凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加 ,经 2、3及 4h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著。这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上。 3 VP 16作用细胞时间增长至2 2h ,HSP的保护作用可能消失     

胎儿端脑突触素表达和突触发育的研究

为了探讨突触素(SYN)在不同周龄阶段胎儿端脑额叶中的表达与胎儿额叶皮质突触发育的关系,本研究采用免疫组织化学方法观察突触素在不同周龄阶段胎儿额叶的表达水平,利用计算机图像分析技术测量不同周龄阶段胎儿额叶突触素表达的平均光密度;同时取材、常规电镜技术处理、透射电镜观察额叶突触发育的超微结构变化。结果显示:(1)光镜下各组均可见SYN免疫阳性产物主要表达于胎儿的额叶皮层,其表达量随周龄的增加而增强,各组间呈现显著性差异(P<0.05),其中16～24周胎儿额叶的阳性产物位于神经元的胞浆内,呈均匀的浅黄色,神经元突起内未见阳性产物;25～29周额叶的阳性产物呈黄色,在胞浆和突起内均可见,但阳性产物的量却下降;而30～39周额叶的SYN阳性产物呈棕黄色的点状或颗粒状,主要位于神经元的突起内,神经元胞浆内未见阳性产物,阳性产物的量显著增加;(2)透射电镜下19～36周胎儿大脑额叶均可见到突触样结构,随着周龄的增加,突触的数量逐渐增多,结构逐渐清晰和完整。上述结果提示SYN的表达可以反映胎儿神经系统发育的程度,SYN的表达与突触的发育是一致的;SYN在胎儿大脑额叶的表达部位经历由神经元胞浆内表达为主到神经元终末表达为主的这一过程,可能是由于SYN先是在神经元胞浆内合成,再随着神经元的发育而逐步转移到神经元突起的末梢部位。     

精子蛋白sp32/OY-TES-1mRNA及其蛋白在正常组织表达的探讨

目的 了解正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的表达量是否存在差异以及该蛋白的表达情况,为sp32/OY-TES-1表达谱增加更多信息.方法 提取40例(19种)正常组织总RNA,逆转录-聚合酶合成cDNA,普通PCR检测cDNA质量;构建目的 基因sp32/OY-FES-1及看家基因HPRT质粒,制备标准品,绘制标准曲线,建立实时定量PCR(TaqMan)方法和优化反应体系,检测组织中sp32/OY-TES-1和HPRT的表达,sp32/OY-TES-1mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示.通过制备的OY-TES-1多克隆抗体,结合免疫组织化学检测sp32/OY-TES-1蛋白在多种正常组织中的表达.结果 正常组织中sp32/OY-TES-1mRNA阳性率为72.50%(29/40);2.非睾丸正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量值(目的 基因/看家基因)为0.000 1～0.495 0,呈对数正态分布;3.睾丸组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量为44.9,是其他正常组织的91～1 000倍;4.免疫组织化学(IHC)显示在所检测的多种正常组织和细胞中(10例睾丸组织、8例结肠、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶状体、4例精子、3例外周血白细胞和1例肾),除4例精子和1例肾组织中的肾小管外,其余均未见OY-TES-1蛋白阳性反应.结论 sp32/OY-TES-1 mRNA广泛地表达在各种正常组织,表达量因组织不同而异;睾丸组织是所检测的正常组织中其mRNA表达量最高的组织.而sp32/OY-TES-1蛋白比其mRNA更具有限制性表达的特点.     

热休克诱导小鼠肝细胞表达热休克蛋白70的研究

目的：研究热休克恢复期小鼠肝细胞热休克蛋白（ＨＳＰ７０）的表达。方法：小鼠分别为４０、４２、４４、４６℃热休克处理３０ｍｉｎ,恢复８ｈ;４６℃热休克处理３０ｍｉｎ,然后分别于热休克后２－７２ｈ取肝,以免疫组化方法观察ＨＳＰ７０的表达,并用体视学方法对阳性肝细胞体密度进行定量分析。结果：４２、４４、４６℃均能诱导肝细胞表达ＨＳＰ７０,以４６℃组小鼠阳性肝细胞密度最大;４６℃热休克后８－１２ｈ为ＨＳＰ     

人胚胎海马发育的形态学研究──Ⅰ．一般结构观察

利用Ｎｉｓｓｌ染色及体视学方法，对６０例６周至足月人胚胎海马进行了研究。根据海马形态变化及锥体细胞分化特征，将海马发育分为三个阶段．第一期以海马外形及内部结构建立为主；第二期以锥体细胞的形成和海马外形、内部结构进一步完善为特征；第三期锥体细胞日趋成熟．在胚胎早期，锥体层和颗粒层由大量未分化细胞构成，细胞为球状，体积小，胞质少，染色深，以后逐步分化为锥体细胞及颗粒细胞．体视学资料表明，颗粒细胞、锥体细胞的数密度及细胞核体密度随胎龄增长而降低，而细胞算术平均体积则逐步增加。上述参数变化因其部位不同而有所差异，说明锥体细胞分化、发育是不均匀的。ＣＡ２区分化快，发育好，颗粒细胞分化最迟缓。     

人胚胎期耳蜗管及柯替氏器的发育

用人胎儿颞骨64个,胎龄为2～9个月,制成火棉胶切片与耳蜗铺片,对照观察其中柯替氏器的发育。在胚胎2个月时,柯替氏器才开始发育;第3～5个月是主要的发育分化阶段;第6个月时,发育分化完成,基本结构趋于稳定;第7～9个月时,除细胞的分化程度进一步成熟外,基本结构不再有显著变化。柯替氏器长度发展最迅速的时期,是在第2～3月之间。胎儿5个月时,柯替氏器中隧道内侧于形成内螺旋沟以前,有一些高柱状上皮,大部分上皮退变解体,少数上皮细胞变成大型游走细胞。关于这种游走细胞的性质、功能与可能的转归,与中枢神经系统发育中的游走细胞,作了比较与探讨。     

黏蛋白MUC-1在人胚胎胃黏膜发育中的阶段表达

目的 阐明MUC-1在胎儿胃黏膜的表达特点,探讨MUC-1与胃上皮分化的关系。方法 应用HE染色和SP免疫组织化学方法,检测22例9～30周胎儿胃黏膜的发育以及MUC-1在不同时期的表达。结果 胎儿胃黏膜的分化可分为3个不同时期：1．在未分化期MUC-1呈极性分布于早期胃上皮的游离面。2．在分化期MUC-1呈极性和弥漫性分布于中期胃黏膜上皮和腺上皮。3．生长期MUC-1分布于胃底腺上皮。结论 MUC-1的表达与胃上皮的分化密切相关。