扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8、3的表达

目的 研究扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)和Caspase-3的表达及意义.方法 采用免疫组化法和原位末端标记技术(TUNEL)检测20例扁平苔藓患者皮损和20例健康人皮肤组织中TNF-α、Caspase-8、Caspase-3的表达和细胞凋亡情况.采用SPSS 11.5统计软件,组间比较采用成组t检验,指标间相关性采用Pearson相关分析.结果 扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的积分光密度值分别为12580±2330、11690±3520和11450±2820,均明显高于健康对照组(分别为5120±1780、3870±3360、4760±1930),两组比较,t值分别为11.38、7.19、8.76,P值均＜0.01;扁平苔藓组角质形成细胞凋亡指数(71.35±7.93),明显高于健康对照组(33.62±8.75),两组比较,t=14.29,P＜ 0.01.扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8的表达强度与角质形成细胞凋亡指数间均呈正相关,r分别为0.72、0.75,P值均＜0.01;同时两者与Caspase-3的阳性表达也均呈正相关,r分别为0.68、0.73,P值均＜0.01.结论 TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的高表达可能参与了扁平苔藓中角质形成细胞的凋亡.     

Caspase家族与皮肤病

Caspase即半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶 ,是一组具有相似氨基酸序列、空间结构和底物特异性的酶。凋亡发生是一个复杂的、由Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程。大量研究表明 ,Caspase酶原的激活与多种疾病的发生发展有着密切的关系。介绍近年来Caspase在一些皮肤病中的研究进展     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8在某些皮肤病的研究进展

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8与死亡受体介导的凋亡密切相关.近年来,对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8参与凋亡机制的研究取得了一些进展,发现半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8除凋亡以外的其他生物学功能,如参与T细胞增殖和免疫应答、细胞黏附/迁移、血管内皮形成等.作为Fas凋亡途径关键的启动者,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8与皮肤损伤修复、瘢痕形成、扁平苔藓等密切相关,并在抗炎中发挥一定作用.     

扁平苔藓皮损中Caspase-9和Apaf-1的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨扁平苔藓皮损中Caspase-9、Apaf-1的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 采用DNA末端转移酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL法）和免疫组化的方法检测30例扁平苔藓皮损和30例正常人皮肤组织中细胞凋亡和Caspase-9、Apaf-1的表达情况,采用RT-PCR检测10例扁平苔藓皮损和8例正常人皮肤组织中Caspase-9 mRNA的表达情况。结果 扁平苔藓组表皮层角质形成细胞的凋亡指数（AI）为75.67 ± 9.4,正常人对照组为38.15 ± 9.6,两组比较,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）;Caspase-9和Apaf-1表达的阳性单位分别为14.45 ± 2.72和11.93 ± 3.14,明显高于正常人对照组（P ＜ 0.01）;而且Caspase-9 mRNA的表达量（2.304 ± 0.417）与正常人对照组（1.605 ± 0.381）比较,差异有统计学意义（P ＜ 0.01）。扁平苔藓皮损中Caspase-9、Apaf-1阳性表达强度均与其自身角质形成细胞的AI呈正相关（r = 0.96和0.94,P ＜ 0.01）。结论 扁平苔藓皮损中角质形成细胞凋亡亢进可能与扁平苔藓的发生有关,Caspase-9、Apaf-1与角质形成细胞的凋亡关系密切。     

MMPs在尖锐湿疣皮损中的表达

目的:检测基质金属蛋白酶家族(matrixmetalloproteinases,MMPs)在尖锐湿疣皮损中的表达.方法:采用PV-9000免疫组化法检测40例男性初发尖锐湿疣皮损和20例正常对照包皮中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达率.结果:尖锐湿疣皮损中MMP-2、MMP-7和MMP-9细胞阳性表达率分别为90%、97.5%和100%显著高于正常包皮组织(P<0.01).MMPs的阳性表达率与尖锐湿疣病程呈正相关.结论:MMPs可能参与了尖锐湿疣的发病过程.     

扁平苔藓皮损中钙激活蛋白酶Ⅰ和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨凋亡相关蛋白钙激活蛋白酶Ⅰ（Calpain Ⅰ）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）在扁平苔藓皮损中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 分别采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法和免疫组化法对20例扁平苔藓患者皮损组织和10例健康人皮肤组织中细胞凋亡和Calpain Ⅰ、Caspase-3表达进行检测。采用SPSS 13. 0软件,两组凋亡指数比较采用t检验,两组Calpain Ⅰ和Caspase-3表达量比较采用秩和检验,Calpain Ⅰ和Caspase-3表达量与凋亡指数相关性分析采用 Spearman 等级相关分析。结果 扁平苔藓组表皮层角质形成细胞的凋亡指数（67.59 ± 13.50）显著高于健康对照组（28.26 ± 7.56）,两组比较,差异有统计学意义（t = 8.52,P < 0.01）;Calpain Ⅰ和Caspase-3表达均高于健康对照组（T = 78.00 和77.00,P < 0.01）。扁平苔藓皮损中Calpain Ⅰ和Caspase-3阳性表达强度均与其自身角质形成细胞的凋亡指数呈正相关（r = 0.71和0.74,P < 0.01）。结论 扁平苔藓皮损中Calpain Ⅰ和Caspase-3表达上调,且与角质形成细胞凋亡亢进关系密切。     

扁平苔藓皮损中caspase-3和Bax蛋白的表达

目的：探讨凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和Bax在扁平苔藓皮损中的表达及其意义。方法：采用免疫组化SP法对29例扁平苔藓患者皮损组织和10例正常人皮肤组织中caspase-3和Bax的表达进行检测。结果：扁平苔藓皮损组织中caspase-3和Bax蛋白表达水平均明显高于正常皮肤组织，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。而且caspase-3蛋白表达与Bax的表达有显著相关性（P〈0．05）。结论：Caspase-3和Bax可能通过诱导扁平苔藓皮损处角质形成细胞的凋亡而参与扁平苔藓的发病。     

尖锐湿疣初发患者皮损中Livin和Caspase-3的表达

目的：检测尖锐湿疣（CA）初发患者皮损及正常包皮组织中Livin和Caspase-3的表达。方法：采用免疫组化法检测Livin和Caspase-3在30例CA初发患者皮损和20例正常包皮组织中的表达。结果：Livin和Caspase-3在CA组织的阳性表达率分别为76.67%和43.33%，在正常包皮组织表达率分别为25.00% 和70.00%。Livin 与 Caspase-3在CA组织中的表达强度之间无相关性（r=0.238，P＞0.05）。结论：在CA初发患者皮损中存在Livin高表达和Caspase-3低表达，二者可能共同参与了CA的发生与发展。     

Caspase家族与皮肤病

Caspase即半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶，是一组具有相似氨基酸序列、空间结构和底物特异性的酶。凋亡发生是一个复杂的、由Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程。大量研究表明，Caspase酶原的激活与多种疾病的发生发展有着密切的关系。介绍近年来Caspase在一些皮肤病中的研究进展。     

寻常性银屑病患者皮损中Caspase-3和bcl-xL的表达

目的 探讨Caspase-3和bcl-xL在银屑病皮损中的表达及意义。方法 采用免疫组化法对26例寻常性银屑病患者的皮损及其周边外观正常皮肤和10例正常人对照皮肤中Caspase-3和bcl-xL的表达进行了检测。结果 正常人对照皮肤、银屑病皮损及其周边外观正常皮肤的表皮均表达Caspase-3,其中皮损处的表达明显增强(P<0.0001);除皮损表皮中散在表达bcl-xL外,正常人对照皮肤、银屑病皮损周边外观正常皮肤的表皮中不表达bcl-xL。结论 Caspase-3和bcl-xL可能通过诱导银屑病皮损角质形成细胞的凋亡而参与了银屑病的发病。     

Toll样受体在尖锐湿疣皮损中的表达

目的 探讨尖锐湿疣皮损中Toll样受体（TLR）各亚型的表达。方法 将尖锐湿疣患者的病损组织标本冰冻切片经免疫组化染色检测10种TLR亚型的表达情况,以正常皮肤组织作对照,比较两者TLR表达谱的差异。结果 正常表皮角质层和颗粒层TLR6、9呈强阳性表达,TLR1、3、10呈中等强度表达,TLR2、4、5、7、8弱表达,棘层和基底层细胞不表达或弱表达TLR;尖锐湿疣皮损表皮中除基底层弱表达或不表达TLR外,其余细胞层TLR1、3、6、9强阳性表达,TLR4、8、10中等强度表达,TLR2、5、7弱表达。两组皮肤的真皮层均未见明显TLR阳性细胞。结论 尖锐湿疣皮损增生的角质形成细胞中TLR表达较正常皮肤明显增高,尤以TLR1、3、6、9亚型为著,可能与HPV感染启动机体抗病毒免疫有关。     

尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1的表达与细胞增殖和凋亡的相关性

目的 探讨陷窝蛋白1在尖锐湿疣角质形成细胞中的表达及其与角质形成细胞增殖和凋亡的相关性.方法 免疫组化En Vision法和TUNEL技术检测40例尖锐湿疣皮损组织和10例健康人包皮组织中角质形成细胞陷窝蛋白1、增殖细胞核抗原的表达和细胞凋亡,计算陷窝蛋白1平均吸光度、增殖指数和凋亡指数,比较两组之间的差异,并分析尖锐湿疣组中陷窝蛋白1表达与增殖指数、凋亡指数的相关性.针对陷窝蛋白1基因设计3条siRNA,用脂质体转染法将siRNA导人HaCaT细胞,用荧光定量PCR方法筛选出于扰效果最佳的siRNA,转染HaCaT细胞为实验组,转染非特异序列的细胞为阴性对照组,未转染的细胞为空白对照组.Western印迹和免疫荧光检测转染48 h后陷窝蛋白1的表达水平;MTS法分别测定干扰陷窝蛋白1基因24、48、72 h后HaCaT细胞增殖的变化;流式细胞仪(FCM)检测干扰陷窝蛋白1基因48 h后HaCaT细胞的凋亡情况.结果 尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1的表达(0.042±0.021)显著低于正常包皮组织(0.181±0.075),差异有统计学意义(t=5.843,P＜0.001).尖锐湿疣皮损中角质形成细胞的增殖指数(65.63％±19.86％)和凋亡指数(24.12％±10.86％)均显著高于正常包皮组织(23.51％±4.00％,3.13％±1.12％),两组差异有统计学意义(t=12.440、11.970,均P＜ 0.001).尖锐湿疣组陷窝蛋白1表达与增殖指数呈显著负相关(r=-0.798,P＜0.05),与凋亡指数呈显著正相关(r=0.825,P＜ 0.05).荧光定量PCR显示siRNA-2在浓度25 nmol/L下抑制效果最佳.Western印迹和免疫荧光显示,转染siRNA 48 h后,实验组陷窝蛋白1的表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05).MTS结果显示,实验组细胞24、48和72 h时的A值分别为0.563±0.013、0.628±0.006和0.811±0.018,高于空白对照组(0.541±0.009、0.575±0.012和0.722±0.004)和阴性对照组(0.536±0.006、0.571±0.015和0.719±0.002),差异有统计学意义(均P＜0.05),空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).实验组HaCaT细胞凋亡率为(8.90％±0.06％),低于空白对照组(20.59％±0.87％)和阴性对照组(20.64％±0.09％),差异有统计学意义(均P＜ 0.05),空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1表达下降,可能与角质形成细胞增殖加快、细胞凋亡减少有关.     

吲哚胺2,3-双加氧酶在尖锐湿疣皮损中表达的研究

目的 分析尖锐湿疣组织中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)水平,研究其局部代谢色氨酸的能力.方法 免疫组化法观察尖锐湿疣患者皮肤IDO蛋白表达情况,计数IDO阳性细胞的比例.免疫荧光观察IDO(+)细胞与树突细胞的关系.分离对照皮肤角质形成细胞和疣体上皮细胞,色氨酸体外孵育后检测上清液中色氨酸代谢产物犬尿氨酸的浓度以反映细胞代谢色氨酸的能力.结果IDO(+)细胞在正常皮肤中非常少,但在疣体表皮中却大量聚集.疣体内IDO(+)细胞/总体细胞48.3%±15.4%显著高于正常皮肤5.2%±2.4%,差异有统计学意义(P<0.05).IDO(+)细胞的荧光信号和皮肤朗格汉斯细胞并不重合,提示来源于疣体表皮细胞.从疣体组织分离的上皮细胞在体外代谢色氨酸的能力强于健康对照皮肤中分离的表皮细胞.结论 尖锐湿疣疣体中存在大量的IDO(+)细胞,这些细胞可能参与尖锐湿疣的发病.     

尖锐湿疣患者皮损中SOCS1和PIAS1的表达及意义

目的 探讨尖锐湿疣(CA)皮损角质形成细胞中细胞因子信号转导JAK/STAT通路负调控蛋白细胞因子信号抑制剂-1(SOCS1)和活化STAT的蛋白抑制剂-1(PIAS1)的表达。方法 采用SP免疫组化染色技术检测40例CA患者皮损、20例宫颈癌和20例正常人皮肤(包皮)中SOCS1和PIAS1的表达及分布。结果 ①CA患者皮损中SOCS1和PIAS1的表达阳性细胞分布主要位于棘细胞层,为棕黄着色,阳性反应定位胞质;宫颈鳞状细胞癌亦为胞质阳性表达,棕黄着色,呈弥漫性分布;而正常包皮少数阳性着色主要定位于基底层细胞的胞质,呈浅黄着色。②CA皮损中SOCS1和PIAS1的表达阳性率分别为85%和80%,高于在正常人上皮中的表达(阳性率分别为30%和35%),两组比较差异均有统计学意义(前者χ²=18.15,P<0.01;后者χ²=11.87,P<0.01);宫颈癌中SOCS1和PIAS1的表达阳性率分别为90%和85%,虽较CA有升高,但两者比较差异均无统计学意义(两者均P>0.05)。③CA中SOCS1与PIAS1的表达无显著相关性(r_s=0.14,P>0.05)。结论 CA皮损中可能通过细胞因子信号转导负调控蛋白SOCS1和PIAS1在角质形成细胞过度增殖或恶性转化过程中起调控作用。     

氨基酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣对病灶乳头瘤病毒复制的影响

【摘要】 目的 检测氨基酮戊酸光动力方法（ALA-PDT）治疗前后,尖锐湿疣患者病灶局部人乳头瘤病毒（HPV）6/11型DNA载量的变化。 方法 选择电离子去除疣体后HPV6/11阳性患者分为两组,光动力组32例采用ALA-PDT治疗,对照组29例不治疗。3个月后用荧光定量PCR检测病灶局部HPV6/11型DNA载量。结果 3个月后光动力组29例中有26例HPV DNA阴转（89.7%）,对照组19例中有13例HPV DNA阴转（68.4%）;光动力组HPV DNA载量为（1.70 × 105 ± 7.86 × 105）拷贝/ml,对照组HPVDNA载量为（1.27 × 106 ± 2.21 × 106）拷贝/ml,两组比较,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 ALA-PDT能降低尖锐湿疣患者病灶局部HPV病毒载量。     

尖锐湿疣患者皮损Toll样受体4、9和C型凝集素受体的表达

目的 探讨初发和复发尖锐湿疣（CA）患者皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及意义。方法 采用免疫组化SP法检测30例初发CA皮损、30例复发CA皮损和20例正常人皮肤（包皮）中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及分布。结果 初发CA皮损和复发CA皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达水平均显著高于正常包皮组织（P < 0.001）,且集中分布于基底层和棘层细胞。TLR4、TLR9和DC-SIGN三者在初发CA皮损和复发CA皮损中的表达差异均无统计学意义（三者均P > 0.05）。TLR4、TLR9与DC-SIGN的表达均呈正相关性关系。结论 TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达增强可能在CA的发病和复发过程中起到一定作用。     

尖锐湿疣复发的相关因素及防治策略

尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒引起,以发生在生殖器、肛周部位为主的良性增生性疾病,是一种常见的性传播疾病.临床上治疗尖锐湿疣的方法很多,但都不能避免其复发,而且复发率较高.导致尖锐湿疣复发的因素可能包括:人乳头瘤病毒的亚临床感染和潜伏感染、机体免疫力低下、不良的性行为、伴发其他性传播疾病、人乳头瘤病毒的载量、包皮过长等.因此,对尖锐湿疣复发的因素进行更深入的研究,采取相应措施,将有助于减少其复发.     

血管内皮生长因子、增殖细胞核抗原在尖锐湿疣中的表达

目的探讨尖锐湿疣(CA)组织中血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及相关性。方法采用免疫组化SP法检测32例CA组织和10例正常人皮肤组织中VEGF,PCNA的表达,并做相关性分析。结果 CA组织中VEGF,PCNA表达水平均明显高于正常人皮肤组织(P0.001)。CA组织中VEGF和PCNA的表达模式具有相同性:以基底层、棘层细胞表达最为显著,为二者共同的优势表达部位;二者的表达呈正相关关系。结论 CA组织中均存在VEGF和PCNA的过度表达,二者表达存在正相关性关系,表明表皮角质细胞过度增殖引起的局部缺氧是刺激VEGF过度表达的重要原因。     

皮肤镜在尖锐湿疣诊断中的价值评估

目的 探讨皮肤镜在男性生殖器部位尖锐湿疣诊断中的应用价值.方法 对66例男性生殖器部位临床疑似尖锐湿疣的122个疣体,由临床经验丰富的皮肤科医师根据皮损形态特征结合临床病史进行临床诊断,然后采用皮肤镜进行诊断,并与组织病理检查结果比较.结果 122个疑似疣体中,采用肉眼观察确诊100个为尖锐湿疣,皮肤镜检查确诊112个,病理检查确诊114个.以病理检查为金标准,皮肤镜检查的灵敏度是97.4％,特异度是87.5％;肉眼观察的灵敏度是87.7％,特异度是100％.在皮肤镜下男性生殖器部位尖锐湿疣颜色主要呈粉红色(98/114,86.0％),形态以乳头状多见(98/114,86.0％),有明显的血管特征(107/114,93.9％),其中多形血管(102/114,89.5％)和点状血管(98/114,86.0％)多见.结论 皮肤镜下尖锐湿疣疣体具有特征性结构,皮肤镜能够用于男性生殖器尖锐湿疣诊断.