MGBA负载脐带血DC诱导特异性CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的：观察乳腺珠蛋白（mammaglobin A, MGBA）负载脐带血来源树突状细胞（dendritic cell, DC）诱导产生的细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）对乳腺癌细胞的体外杀伤效果。方法：采集健康剖宫产女性志愿者的脐带血,分离脐带血单个核细胞并诱导DC生成,用MGBA致敏DC与自体淋巴细胞共培养诱导CTL。采用流式细胞术测定DC的表型(CD83、CD86、HLADR)变化,ELISA法测定IL-10、IL-12分泌水平,CCK-8法测定CTL对乳腺癌细胞的杀伤活性。结果：成功培养出形态典型、功能成熟的DC,MGBA负载DC诱导的MGBA特异性CTL对乳腺癌细胞MDA-MB-415 产生显著的杀伤效果（P<0.05）;加入HLA-I 抗体可显著减弱杀伤效果,加入HLA-II 抗体细胞毒活性无显著变化,加入HLA-I 抗体或HLA-II 抗体对正常乳腺细胞的杀伤性均无影响。结论：MGBA 能明显加强脐带血DC 诱导的CTL 对乳腺癌细胞的杀伤活性,该杀伤活性具有MHC限制性。     

不同方式负载AFP抗原的DC诱导抗肝癌HepG2细胞免疫效应的比较

目的：比较AFP抗原以不同方式负载DCs对后者生物学功能的影响及体外刺激CTL对肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法：分离健康供者外周血单个核细胞培养DC,分别用（A）人工合成AFP抗原肽、（B）HepG2细胞裂解物、（C）HepG2细胞分泌的外泌体（tumor exosome, T-exo）、（D）AFP抗原的重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus expressing α-fetoprotein antigen, rAAV/AFP）致敏DC前体细胞及（E）未负载抗原的DC作为对照,经GM-CSF、IL-4及LPS联合诱导DCs分化成熟。流式细胞术检测rAAV/AFP病毒感染效率、各组DCs表型及其剌激初始T细胞的增殖效应,7-ADD/CFSE双染法流式细胞术检测各组DCs诱导CTL对AFP阳性HepG2细胞的杀伤作用。结果：几种抗原负载方式均可诱导DCs成熟、促进CTL增殖及特异性识别并杀伤HepG2细胞,但rAAV/AFP感染DCs后,其CD83、CD86、ICAM-1、CD58、CD40分子表达水平明显高于对照组（P<0.05）,rAAV/AFP+DC组和HepG2-Texo+DC组对HepG2细胞的杀伤作用均分别显著优于其他抗原负载（AFP/peptide+DC、HepG2 lysate+DC）组\[（44.92±4.12）% vs（28.42±3.29）%、（24.28±1.79)%;（41.40±2.87）% vs （28.42±3.29）%、（24.28±1.79）%;均P<0.05）\]。结论：rAAV/AFP高效感染DCs后能有效刺激初始T细胞增殖,并增强CTL对AFP阳性靶细胞的杀伤活性,而负载Texo的DCs也能诱导显著的抗肝癌效应,上述结果为基于DCs的肝癌疫苗的研发提供新的思路。     

CB6F1小鼠树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞的杀伤作用

[目的]探讨CB6F1小鼠脾树突状细胞(DC)的培养及其诱导针对小鼠路易斯肺癌(LLC)的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肿瘤的杀伤效应.[方法]应用CB6F1小鼠脾细胞在GM-CSF、IL-4等细胞因子作用下培养出DC,反复冻融法制备LLC抗原致敏DC,与淋巴细胞及IL-2混合培养诱导出肿瘤特异性CTL,利用乳酸脱氢酶法检测CTL的杀伤活性.[结果]用GM-CSF、IL4联合培养小鼠脾细胞第4d,可见细胞形态发生改变,培养第8d,可见典型的刺突样DC,通过流式细胞术检测了DC表型高表达CD80占76.5％,CD86占60.0％,MHCⅡ占67.4％,CD11C占80.6％.[结论]应用GM-CSF、IL-4、LPS等细胞因子培养CB6F1小鼠脾细胞经过肿瘤抗原冲击,可以培养出成熟DC,并且DC可以诱导出具有杀伤活性的肿瘤特异性CTL.     

致敏树突细胞治疗膀胱肿瘤血液细胞毒性T淋巴细胞的变化

目的观察致敏的树突细胞（DC）治疗膀胱肿瘤（BT）后血液细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的变化并探讨其机制。方法选取F344大鼠44只，称重后随机分为4组；均采用膀胱灌注N-甲基亚硝基脲（MNU）制成BT；第11周4组分别经皮下注射磷酸缓冲液（PBS）、未致敏DC、肿瘤抗原及致敏DC，每周1次，共4次；实验第15周，经显微镜和流式细胞仪（FCM）检测。结果致敏DC组膀胱重量比其他三组轻（P〈0．05）。致敏DC组BT病理分期低于PBS组和未致敏DC组（P〈0．05）；CD3^＋ T细胞在致敏DC组低于其余三组（P〈0．05）；CTL在致敏DC组高于其余三组（P〈0．001）。结论应用致敏DC经皮下注射治疗大鼠BT可降低肿瘤的病理分期，未致敏DC皮下注射对膀胱肿瘤治疗无效，肿瘤抗原皮下注射对膀胱肿瘤治疗效果欠佳。致敏DC可通过呈递抗原来激活CTL增生而发挥其免疫杀伤作用。     

穿膜肽介导的NY-ESO-1155-163诱导CTL对黑素瘤A-375细胞的杀伤活性

目的：探讨穿膜肽（cell penetrating peptide, CPP）Tat49-57携带NY-ESO-1155-163抗原肽致敏DC后诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte, CTL),并体外检测其对黑素瘤细胞株A-375的杀伤效果。 方法：采集健康志愿者外周血50 ml,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,经细胞因子诱导,获得DC和T淋巴细胞。实验组用Tat49-57-NY-ESO-1155-163致敏DC,待DC成熟后与T淋巴细胞混合诱导产生CTL,并设PBS组和NY-ESO-1155-163组作为对照。流式细胞术检测致敏前后DC的表型,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测抗原肽疫苗致敏DC后诱导的CTL对黑素瘤细胞株A-375的体外杀伤活性,同时与对人肺癌A549细胞株、人白血病K562细胞的杀伤作用进行比较。结果：Tat显著提升NY-ESO-1155-163进入DC的穿膜能力。与NY-ESO-1155-163致敏的DC相比,Tat49-57-NY-ESO-1155-163致敏后DC的CD80/CD86\[(54.9 ±3.3 )% vs (43.8±5.7)%,P<0.05\]和CD40\[(42.1±1.9)% vs (23.7±2.8)%,P<0.05\]的表达率显著升高。Tat49-57-NY-ESO-1155-163刺激DC后诱导培养的T细胞亚群主要以MHC-Ⅰ类分子介导的CD3+CD8+细胞为主。Tat49-57-NY-ESO-1155-163组CTL对A-375细胞的杀伤能力显著高于NY-ESO-1155-163组,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增强（P<0.05）。A-375细胞高表达NY-ESO-1,Tat49-57-NY-ESO-1155-163组CTL对A-375细胞具有特异性杀伤作用,杀伤作用显著强于A549和K562细胞（均P<0.05）。结论：Tat49-57可以增强NY-ESO-1155-163抗原多肽的免疫原性,Tat49-57-NY-ESO-1155-163多肽致敏DC能有效诱导CTL抗黑素瘤细胞A-375的特异性免疫应答。     

抗原负载树突状细胞介导肝癌患者肿瘤杀伤细胞功能状态研究

目的:探讨肝癌细胞抗原负载树突状细胞激活肝癌患者外周血细胞毒性T细胞(CTL)、肿瘤浸润淋巴细胞(TI1)的抗肿瘤作用.方法:以细胞计数、间接荧光表型测定分析肝癌患者DC功能状态;MTT法测定肝癌细胞抗原负载DC介导肝癌患者外周血CTL、TIL对肝癌细胞的杀伤活性.结果:肝癌患者DC表达CD1a、CD80、CD83和HLA-DR等分子水平,DC介导的CTL、TIL对肝癌细胞的杀伤活性明显低于健康对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论:肝癌患者存在DC功能缺陷,致使其介导的CTL、TIL对肝癌细胞的杀伤作用明显降低.     

DCs诱导特异性CTL抗非霍奇金淋巴瘤作用的研究

目的：探讨树突状细胞（dendritic cells,DCs）及经DCs诱导的肿瘤特异性CTL（cytotoxic T lympho-cyte,CTL）对杀伤非霍奇金淋巴瘤（NHL）细胞的作用。方法：分选DCs,NHL细胞株（Raji）冲击DCs,诱导产生CTL,加入荧光标记的抗体100μl（分别为抗CD11a、CD86、CD83的单抗）,FACScan检测其表型,MTT检测其刺激淋巴细胞的能力。LDH释放实验检测DC诱导的CTL的杀伤作用。结果：DC可刺激T细胞增殖;CTL对Raji细胞有杀伤作用,CTL与Raji细胞比例为100：1、10：1时,对Raji细胞的杀伤率为（57.1±3.7）%、（35.8±6.2）%,两者有显著差异（P〈0.05）。结论：DC及CTL对NHL能产生高效的杀伤作用。     

树突细胞联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌治疗的实验研究

背景与目的：树突细胞（Dendritic cells，DC）是目前发现的功能最强大的肿瘤抗原专职免疫递呈细胞，DC疫苗是目前最具临床应用潜能的治疗性疫苗。肿瘤细胞凋亡小体被DC的MHC—1分子提呈并诱导的特异性CTL免疫反应抗癌作用显著。本研究探讨了DC负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌治疗作用。方法：制备C57BL／6小鼠骨髓源性DC并鉴定，负载肿瘤抗原后制备成疫苗。分别观察DC诱导的CTL和β-榄香烯对胰腺癌细胞的杀伤作用。体内观察DC疫苗联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌的抑制作用。结果1经电镜及流式细胞鉴定可获得典型的具有抗原加工及递呈作用的DC，利用TNF-α可使成熟的树突状细胞比例增加，MHC-Ⅱ、CD83、CD86等表面分子的表达较单纯DC组显著增强。负载凋亡抗原后DC诱导的特异性CTL体外对胰腺癌细胞有显著杀伤作用，效靶比30：1时，诱导的CTL对胰腺癌细胞抑制率达93％。β-榄香烯对癌细胞增殖抑制明显，DC疫苗与β-榄香烯联合治疗可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，使其生存期延长，联合治疗组生存期为49．4天，与单纯β-榄香烯组（24．8天）、DC疫苗（38．5天）、DC组（20．7天）及对照组（17．5天）相比有显著差异（P〈0．05）。结论：经凋亡肿瘤细胞致敏的DC回输荷瘤小鼠可激发宿主针对特异肿瘤的Th1及CTL免疫应答，以DC、介导的免疫反应联合中药的治疗方法可成为抗肿瘤的崭新且有效手段。     

TLR1/2信号促CD8+T细胞功能及其机制

目的：探讨Toll 受体1/2(Toll like receptor 1/2, TLR1/2)信号对荷瘤小鼠来源的CD8+T细胞功能的影响及其可能机制。方法：利用小鼠Lewis肺癌细胞株3LL建立小鼠肺癌荷瘤模型,MACS分选小鼠脾CD8+T细胞;体外经PBS或TLR1/2激动剂BLP刺激后,Real-time PCR和流式细胞术分别从基因和蛋白水平检测CD8+T细胞的TLR分子表达;用ELISA和流式细胞术检测经PBS或BLP刺激后的CD8+T细胞分泌细胞因子和增殖的能力,并用关键信号分子抑制剂分析可能的分子机制。结果：与PBS对照组相比,TLR1/2激动剂BLP不但有效上调荷瘤机体CD8+T细胞TLR1和TLR2分子的基因水平\[TLR1：（0.353±0.015） vs （0101±0.017）,P<0.01;TLR2：（0.232±0.031） vs （0.080±0.004）,P<0.05\]及蛋白水平（P<0.05）,而且显著促进CD8+T细胞分泌功能性细胞因子\[IFN-γ：（2 375±305） vs （850±50）,P<0.05;IL-2：（1 600±200） vs （350±50）,P<0.05\]和增殖的能力（P<0.05）,这一效应依赖于NF-κB和P38通路。结论： TLR1/2信号直接作用于荷瘤小鼠的CD8+T细胞并促进其功能,该研究既丰富了TLR的作用范围,也为基于TLR激动剂的肿瘤生物治疗提供了实验依据。     

基因腺病毒感染树突状细胞诱导CTL对胶质瘤细胞的杀伤作用

目的:研究EPHA2基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lympho-cyte,CTL)对U251胶质瘤细胞的杀伤效应,为胶质瘤的免疫治疗提供新的方法。方法:将重组EPHA2腺病毒rAd-EPHA2感染HLA-A2阳性的人外周血来源的DC,制备EPHA2基因修饰的DC疫苗,Western blotting和FACS方法检测感染后DC的EPHA表达。以DC疫苗体外刺激HLA-A2阳性的单个核细胞,酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)和标准51Cr释放实验分别检测DC疫苗所诱导的CTL活性和对HLA-A2阳性的U251细胞的杀伤作用(另设rAd-Lac Z感染的DC组和PBS组作为对照)。结果:成功制备了EPHA2基因修饰的DC疫苗,其可有效表达EPHA2蛋白。与感染rAd-LacZ的DC和PBS组相比,感染rAd-EPHA2的DC疫苗能有效激发CTL活性[(187±21)vs(12±4)、(18±5)个,P<0.01];所诱导的CTL对胶质瘤U251细胞有明显的杀伤效应[(45.7±6.8)%vs(7,1±4.5)%,P<0.01],对自身淋巴细胞没有杀伤效应。结论:EPHA2基因修饰的DC疫苗能有效激发CTL活性,并对胶质瘤U251细胞有明显的杀伤活性。     

TLR4与肿瘤细胞凋亡相关性的研究进展

Toll样受体4（TLR4）作为一种模式识别受体,是近年来肿瘤免疫学的研究热点之一,其在抑制肿瘤细胞凋亡调控上扮演着重要角色。TLR4主要通过两个信号通路对肿瘤细胞凋亡进行调节,其一为TLR4通过MyD88蛋白调节核转录因子kappa B（NF-κB）产生,促进肿瘤细胞增殖;其二为TLR4通过PI3K／Akt信号通路来抑制肿瘤细胞凋亡。现就近年来TLR4与肿瘤细胞凋亡相关性的研究进行综述。     

铁死亡在结直肠癌再生细胞放疗抵抗中的作用及其可能的机制

目的：探讨铁死亡在结直肠肿瘤再生细胞放疗抵抗中的功能和机制。方法：采用二维常规条件培养结肠癌HCT116细胞（Control细胞），同时通过机械力方法在三维纤维蛋白软胶中培养并筛选出具有高致瘤能力的肿瘤再生细胞（TRC）；用不同剂量（2、4、6、8 Gy）的 X-射线照射 Control 细胞和 TRC，并通过 MTS、细胞克隆实验分别检测各组细胞的存活率和增殖能力；Control细胞和TRC在采用铁死亡诱导剂（Erastin）和X-射线分别处理后，用C11-BODIPY试剂进行染色，通过共聚焦显微镜和流式细胞术观察并测定细胞的脂质过氧化水平。用qPCR法检测X-射线照射、Erastin处理对Control细胞和TRC中铁死亡相关基因谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和酰基辅酶a合成酶长链家族成员4（ACSL4）表达的影响，用WB法检测对细胞中铁死亡相关蛋白GPX4、ACSL4表达的影响。结果：从纤维蛋白软胶中培养并筛选出高干性的TRC；用不同剂量（2、4、6、8 Gy）的X-射线照射后，Control细胞存活率较TRC显著降低（P<0.05），且Control细胞的克隆大小和数量较TRC显著降低（均P<0.05）；Control细胞采用不同剂量X-射线（4、8 Gy）照射及用Erastin处理后，X-射线处理组细胞脂质过氧化水平较未处理组细胞显著升高（P<0.05），Erastin处理组细胞脂质过氧化水平较DMSO处理组细胞显著升高（P<0.05），而TRC各处理组间无显著差异（均P>0.05）。机制研究发现，TRC中GPX4和ACSL4在铁死亡诱导条件（X-射线照射或Erastin处理）下较Control细胞呈现出有助于抵抗的表达模式，即GPX4持续上调、ACSL4持续下调，且表现为Erastin剂量依赖性。结论：结直肠TRC可能通过高表达GPX4、低表达ACSL4来抵抗铁死亡，从而抵抗放疗。     

Honokiol induces ferroptosis in colon cancer cells by regulating GPX4 activity

Colon cancer (CC) is a prevalent malignancy worldwide. Approaches to specifically induce tumor cell death have historically been a popular research topic. Honokiol (HNK), which exhibits highly efficient and specific anticancer effects, is a biphenolic compound found in Magnolia grandiflora. In the present study, we aim to study the effect of HNK on CC cells and elucidate the potential underlying mechanisms. Seven CC cell lines (RKO, HCT116, SW48, HT29, LS174T, HCT8, and SW480) were used. Cells were exposed to HNK and subjected to a series of assays to evaluate characteristics such as cellular activity, reactive oxygen species (ROS) levels and ferroptosis-related protein expression levels. Lentiviral transduction was also used to verify molecular mechanisms in vivo and in vitro. We here observed that HNK reduced the viability of CC cell lines by increasing ROS and Fe²⁺ levels. Transmission electron microscopy revealed HNK-induced changes in mitochondrial morphology. HNK decreased the activity of Glutathione Peroxidase 4 (GPX4) but did not affect system Xc-. Thus, our datas indicated that HNK can induce ferroptosis in CC cells by reducing the activity of GPX4. As a potential therapeutic drug, HNK showed good anticancer effects through diverse signal transduction mechanisms and multiple pathways.     

Toll样受体-4表达对树突状细胞表型及功能的影响

目的:探讨Toll样受体-4(TLR-4)表达对树突状细胞(DC)表型及功能的影响及其机制.方法:以构建的含有TLR-4全基因序列的pcDNA3.1质粒载体为模板,通过mMESSAGE mMACHINE T7 Kit体外转录获得TLR-4 mRNA,并采用脂质体法将其转染健康人外周血PBMC来源的DC,用流式细胞术检测鉴定转染后DC表面功能性分子的表达及DC体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌细胞因子的能力.结果:成功构建人TLR-4-pcDNA3.1质粒载体;体外扩增成功人TLR-4和EGFP mRNA片段.TLR-4 mRNA转染后的DC表面趋化因子CCR7及功能性分子HLA-DR的表达显著高于control mRNA转染DC、转染前成熟DC[CCR-7:(42.4±4.93)％ vs (20.1±3.09)％、(17.1±4.33)％,P＜0.05;HLA-DR:(62.1±7.23)％ vs(17.7±6.01)％、(25.8±4.16)％,P＜0.05],同时转染后的DC体外诱导CTL分泌IFN-γ细胞因子的能力强于control mRNA-DC、空载转染DC诱导的CTL及加入DC前CTL[(66.5±3.58)％ vs (41.1±4.27)％、(37.9±2.96)％、(3.2±2.03)％,P＜0.05].结论:TLR-4 mRNA转染DC可显著增强DC的功能,提高了DC抗原提呈及诱导CTL的能力,为增强DC疫苗抗肿瘤效应提供实验依据.     

与羊膜上皮细胞共培养对羊膜间充质干细胞生物学特性的影响

[摘要] 目的：研究与羊膜上皮细胞（amniotic epithelial cells,AEC）共培养对羊膜间充质干细胞（amniotic mesenchymal stem cells,AMSC）生物学特性的影响,并探讨基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1, SDF-1）/CXCR4 轴在AMSC 归巢、迁移过程中的作用。方法：从人羊膜中分别分离、培养AMSC和AEC,进行扩增及鉴定。实验设AMSC与AEC共培养组、无血清AMSC培养组以及血清AMSC培养组,培养24、48、72 h 后,通过CCK-8 及锥虫蓝实验检测AMSC细胞增殖活性,免疫荧光流式细胞术和Real-time PCR检测CXCR4 mRNA的表达水平,细胞迁移实验检测AMSC细胞体外迁移能力。结果：48、72 h 共培养组及血清培养组细胞增殖活性及增殖率均高于无血清培养组(P<0.05);共培养组与无血清培养组AMSC细胞的CXCR4 mRNA和蛋白表达明显高于血清培养组(P<0.05),两组AMSC细胞依赖迁移能力明显高于血清培养组(P<0.05)。结论：与AEC共培养的AMSC细胞仍具备间充质干细胞的基本生物学特性,且能保持良好的增殖活性,共培养能上调AMSC表面CXCR4,并在体外增强其迁移能力。     

Immune Responses of Dendritic Cells Loaded with Antigens from Apoptotic Cholangiocarcinoma Cells Caused by γ-Irradation

Objective:To investigate the induction cytotoxic T cells(CTLs) with antitumor activity and therapeutic efficacy after dendritic cells(DCs) acquired antigen from apoptotic cholangiocarcinoma cells caused by γ-irradiation. Methods:DCs from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) that maintain the antigen capturing and processing capacity charateristic of immature cells have been established in vitro, using granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and interleukin-4 (IL-4). Then, in cholangiocarcinoma cells apoptosis was induced by γ-irradiation. The experimental groups were as follows:(1)coculture of DCs and apoptotic cancer cells and T cells;(2)coculture of DCs and necrotic cancer cells and T cells;(3)coculture of DCs, cultured cancer cell and T cells. They are cocultured for 7 days.DCs and T cells were riched, isolated and their antitumor response was tested. Results:The cells had typical dendritic morphology, expressed high levels of CDla and B7, acquired antigen from apoptotic cells caused by γ-irradiation and induced an increased T cell stimulatory capacity in mixed lymphocyte reactions (MLR). Conclusion:DCs obtained from PBMCs using GM-CSF and IL-4 can efficiently present antigen derived from apoptotic cells caused by γ-irradiation and efficiently induce T cells.This strategy, therefore, may present an effective approach to transduce DCs with antigen.     

甲基转移酶样因子3 通过调控GLUT4-mTORC1 轴影响食管鳞状细胞 癌细胞的糖酵解及增殖

目的：探讨甲基转移酶样因子3（METTL3）在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织和细胞中的表达水平及其对ESCC 细胞糖 酵解和增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法：基于TCGA 数据库分析METTL3 在ESCC 细胞中的表达及可能的富集通路。 收集2021 年1 月至2021 年6 月间在北川医学院附属医院外科手术切除的34 例ESCC 组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法验证 ESCC 组织中METTL3 的表达。采用CCK-8 法和平板克隆形成实验检测干扰METTL3 后ESCC 细胞增殖能力的变化,利用比色 法检测干扰METTL3 后ESCC 细胞总RNA 中m6A 的表达水平,采用甲基化RNA 免疫沉淀定量PCR（MeRIP-qPCR）检测METTL3 对葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）基因mRNA 的m6A 修饰水平的影响,采用WB 和qPCR 等技术探索METTL3 参与ESCC 细胞糖酵解 的生物学机制。结果：METTL3 在ESCC 组织以及细胞中均呈高表达（均P<0.001）。干扰METTL3 表达后,ESCC 细胞的增殖能 力明显减弱、细胞内总RNA 的m6A 修饰水平显著降低（均P<0.001）。此外,干扰METTL3 可显著抑制KYSE150 和TE-1 细胞中 GLUT4 基因mRNA 的m6A 修饰水平（均P<0.01）,并通过下调GLUT4 的表达抑制葡萄糖的摄取以及乳酸的释放（均P<0.01）,最 终下调mTORC1 通路活性并抑制ESCC 细胞的增殖;在干扰METTL3 的ESCC 细胞同时联合运用mTORC1 通路抑制剂显示有协 同的抗癌作用。结论：METTL3 介导的m6A 修饰通过调控GLUT4-mTORC1 信号轴影响ESCC 细胞的糖酵解及增殖。     

过表达人血管生成素样蛋白4对食管癌EC9706细胞生长的影响(英文)

Objective:The aim of the study was to construct the eukaryotic expression vector of human angiopoietin-like protein 4(ANGPTL4) and observe the effect of ANGPTL4 overexpression on the growth of esophageal carcinoma EC9706 cells.Methods:Total RNA was extracted from normal hepatic tissue,and ANGPTL4 cDNA was amplified by RT-PCR.The PCR product was doubly digested by XbaI and SalI,and then recombined into eukaryotic expression vector.Then,pIRES-GFP-ANGPTL4 was obtained by G418 selection,then pIRES-GFP-ANGPTL4 a...     

VEGF-C/VEGFR3通路对肿瘤患者外周血来源DC的影响

目的:通过体外培养肿瘤患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)来源的DC,探讨VEGF-C/VEGFR3信号通路对DC功能的影响.方法:采用GM-CSF和IL-4共同诱导的方法培养DC,分别采用VEGF-C(VEGF-C-DC),LPS(LPS-DC)或LPS+ VEGF-C(LPS+ VEGF-C-DC)诱导,同时设未处理组即未成熟DC细胞(imDC);流式细胞术检测DC表面CD80、CD83、VEGFR3和TLR4的表达情况,同时采用免疫荧光法检测VEGFR3在DC的表达;ELISA方法检测不同处理组的DC上清中IL-6、TNF-α、IL-12的分泌情况.结果:LPS-DC高表达VEGFR3;LPS-DC和LPS+ VEGF-C-DC高表达CD80和CD83,明显高于imDC(18.56％ vs 8.52％,P＜0.05),显示出成熟DC的表型特征;与LPS-DC相比,LPS+VEGF-C-DC表面TLR4的表达下调,LPS+ VEGF-C-DC上清液中细胞因子IL-6、TNF-α和IL-12的分泌减少.结论:VEGF-C/VEGFR3通路通过降低DC表面TLR4的表达减少其细胞因子的分泌,对DC起负向免疫调控作用.     

A method to generate mature dendritic cells from cryopreserved PBMC

To established methods for cryopresserving peripheral blood mononuclear cells(PBMCs)and producing DCs from cryopresserved PBMCs.Methods:Mature DCs were generated from cryopreserved PBMCs by using IL-4,GM-CSF,TNFα,IL-1β,IL-6,pgE2 and LPS.The phenotype of the resultant DCs was investigated by flow cytometry.The functions of the resultant DCs were verified by Elispot assay.Results:The resultant DCs expressed high levels of HLA ABC,HLA DR,costimulatory molecules and the DC maturation marker CD83.The mature DCs we generated from frozen PBMCs were able to prime CD8 T cells into long term IFN-γ producing peptide specific CTL.Conclusion:The DCs we developed from cryopreserved PBMC were fully mature and had the capability to stimulate immune reaction.Thus,we developed a method to generate functional mature DC from cryopreserved PBMC.