miR-1297 通过下调TET3 促进乳腺癌MCF-7 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-1297 对乳腺癌细胞恶性生物学行为的调控作用及其潜在机制。方法：选用2016 年5 月至2018 年5月乐山市人民医院甲乳外科手术切除的20 例乳腺癌组织和癌旁组织标本以及乳腺癌细胞系MCF-7、SW626、HCC1937 和人乳腺上皮细胞MCF-10A,用qPCR检测乳腺癌组织和细胞系中miR-1297 的表达水平。实验分为对照组、miR-1297 inhibitor 组、TET甲基胞嘧啶双加氧酶3（TET3）过表达组及同时过表达TET3 和miR-1297 组,用CCK-8、Transwell 实验检测MCF-7 细胞的增殖、迁移和侵袭能力,用WB检测MCF-7 细胞中TET3 和EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin 和vimentin）的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证miR-1297 与TET3 的靶向关系。结果：miR-1297 在乳腺癌组织和细胞系中均高表达（P<0.01 或P<0.05）。敲降miR-1297 后,MCF-7 细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT均明显受到抑制（P<0.05 或P<0.01）。转染pcDNA3.1-TET3 后,MCF-7 细胞TET3的表达水平显著上调（P<0.05）;同时过表达TET3 和miR-1297 能够逆转MCF-7 细胞中TET3 的表达水平及TET3 对MCF-7 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-1297 靶向结合TET3 的3'' UTR,miR-1297 靶向下调TET3 从而促进MCF-7 细胞的恶性生物学行为。结论：miR-1297 在乳腺癌组织和细胞中高表达,其通过靶向下调TET3 的表达水平促进MCF-7 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT等恶性生物学行为。     

环加氧酶-2 通过调控EMT促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭

[摘要] 目的：探讨环加氧酶-2（COX-2）在乳腺癌转移中的作用及其可能的机制。方法：收集从2015 年10 月至2018 年4 月在云南省肿瘤医院接受乳腺切除术的患者中获得的原发乳腺癌组织和脑转移乳腺癌组织临床病理样本共45 例,其中原发30 例、脑转移15 例。采用qPCR检测COX-2 在原位乳腺癌和脑转移乳腺癌组织中的表达。将COX-2 过表达重组病毒（LV6-COX2）或敲减COX-2 重组病毒（LV3-COX2 shRNA1、LV3-COX2 shRNA2）感染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞并获得稳转细胞株后,CCK-8法检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell 法检测对MDA-MB-231 细胞迁移和侵袭的影响。qPCR和WB实验分析各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白的表达水平,qPCR检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞内EMT相关基因表达的影响。结果：COX-2 表达水平在脑转移乳腺癌患者组织中显著高于原位乳腺癌组织（P<0.01）;并且与乳腺癌患者肿瘤TMN分期有关。成功构建稳定过表达/敲减COX-2 的MDA-MB-231 细胞株。过表达COX-2 促进MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭（均P<0.01）,同时显著提高MMP2、MMP1、N-cadherin 和vimentin 的表达（均P<0.01）,但对细胞增殖无明显影响;而沉默COX-2 则有相反的作用,且可促进细胞增殖（P<0.05）。结论：COX-2 在脑转移乳腺癌组织中高表达,其可能通过调控EMT过程促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭。     

TET1-CD对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖和迁移的影响及其作用机制

[摘要] 目的：探讨TET1 催化结构域（TET1-CD）基因高表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖、迁移的影响及其可能的作用机制。方法：慢病毒感染建立高表达TET1-CD的MDA-MB-231 细胞系,用qPCR检测细胞中TET1-CD mRNA的表达,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,MTT 法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,WB实验检测MDA-MB-231 细胞上皮间质转化（EMT）途径相关蛋白E-cadherin、Vimentin、MMP2 以及Wnt、Hedgehog(HH)通路相关蛋白的表达水平。结果：过表达TET1-CD提高乳腺癌MDA-MB-231 细胞TET1-CD的表达水平（P<0.01）,明显抑制MDA-MB-231 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.01）。过表达TET1-CD 可使乳腺癌MDA-MB-231 细胞E-cadherin 表达上升,Vimentin、MMP2 表达下调（均P<0.05）;可使β-catenin、C-myc、CyclinD1、Gli1 蛋白表达水平降低（均P<0.05）。结论：过表达TET1-CD可能通过Wnt、HH信号通路抑制EMT途径进而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖和迁移。     

Galectin-3 在人乳腺癌组织中的表达及对MCF-7 细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨半乳凝集素-3（galectin-3）蛋白在人乳腺癌组织中的表达规律及沉默galectin-3 基因后对乳腺癌MCF-7 细胞迁移、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年2 月至2018 年2 月邢台市人民医院手术切除的15 例乳腺癌患者癌组织及其癌旁组织,另外采集该医院和河北医科大学附属第四医院组织石蜡切片100 份,利用Western blotting 检测15 例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织中galectin-3 蛋白相对表达水平,用免疫组织化学法检测galectin-3 蛋白在100 例乳腺癌石蜡标本切片中的表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征的关系。将galectin-3 siRNA 转染至MCF-7 细胞中,用qPCR 法和Western blotting 分别检测galectin-3 mRNA和蛋白的表达水平;用Transwell 小室法和流式细胞术分别检测galectin-3 基因沉默后对MCF-7 细胞迁移、侵袭和凋亡的影响。结果：在乳腺癌组织中galectin-3 蛋白表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）;乳腺癌组织中galectin-3 蛋白阳性表达率为67.00%,其表达水平在淋巴结转移、激素受体（ER、PR）阴性组中显著升高（均P<0.05）,且随TNM分期和组织学分级的升高而升高（均P<0.05）。转染galectin-3 siRNA 后,能显著降低MCF-7 细胞galectin-3 mRNA和蛋白的表达水平、迁移和侵袭能力（均P<0.05）,提高细胞的凋亡率（P<0.05）。结论：Galectin-3 在乳腺癌组织中高表达,沉默galectin-3 表达后抑制MCF-7 细胞的迁移和侵袭、诱导细胞凋亡,可作为乳腺癌生物治疗的一个新靶点。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

慢病毒介导高表达OTUD7B对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为影响

目的 去泛素化酶OTUD7B与肿瘤的发生、发展密切相关.为了明确OTUD7B在乳腺癌中所发挥的作用,实验利用慢病毒构建高表达OTUD7B载体感染MCF-7乳腺癌细胞后对其生物学行为的影响.方法 构建带有绿色荧光蛋白标签的人OTUD7B表达质粒的慢病毒(pEGFP-hOTUD7B)及对照(pEGFP-CI)感染MCF-7乳腺癌细胞;于荧光倒置显微镜下观察病毒转染效果及应用蛋白质印迹法及免疫组化法检测OTUD7B的表达水平;MTS法检测实验组(pEGFP-hOTUD7B)、阴性对照组(pEGFP-CI)和正常对照组对MCF-7乳腺癌细胞增殖能力的影响;应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 感染病毒后于荧光倒置显微镜下观察病毒感染效率,可见病毒感染成功.应用蛋白质印迹法检测病毒感染率并找出最适病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI),当MOI=30时,实验组、阴性对照组和正常对照组灰度值分别为3.81±0.08、2.12±0.078和2.05±0.15,差异有统计学意义,F=402.03,P<0.001.应用免疫组化法可见感染OTUD7B表达水平.MTS法结果显示,实验组、阴性对照组和正常对照组细胞24 h A值分别为0.36±0.08、0.56±0.25和0.69±0.17,F=11.819,P<0.001;48 h A值分别为0.65±0.17、1.45±0.48和1.82±0.63,F=23.752,P<0.001;在72 h A值分别为0.73±0.21、1.58±0.63和1.99±0.27,F=35.563,P<0.001.细胞划痕试验显示,24 h后实验组组迁移率为(7.7±0.91)%,阴性对照组和正常对照组迁移率分别为(13.4±1.52)%和(12.1±1.32)%,F=49.36,P<0.001,48 h后实验组迁移率为(12.4±1.29)%,阴性对照组及正常对照组迁移率分别为(32.9±1.71)%和(31.8±1.59)%,F=504.50,P<0.001.流式细胞仪检测细胞凋亡结果提示,实验组与阴性对照组及正常对照组相比明显使细胞阻滞在G0/G1期,促进其凋亡,FG0/G1期=425.102,FS期=135.063,均P<0.001.结论 成功构建了能够高表达OTUD7B的慢病毒载体,明显抑制了MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移,并促进了其凋亡.     

Iressa对ER表达状态不同的乳腺癌细胞增殖的影响

目的:观察Iressa对雌激素受体表达状态不同的人乳腺癌细胞:ER(+)的MCF-7和ER(-)的MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用.方法:设置Iressa不同浓度组、时间组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Iressa对细胞生长的影响,并分析量效关系、时效关系.结果:Iressa以0.01-1μmol/L浓度作用24h之后对2种细胞均有抑制增殖的作用,其中MDA-MB-231的抑制率于48h达到高峰;浓度为10 μmol/L时抑制率高峰,MCF-7出现在48h,而MDA-MB-231在72h;且同浓度的Iressa作用相同时间后,对MDA- MB-231的抑制率更高.结论:一定浓度的Iressa作用一定时间后对雌激素受体表达状态不同的人乳腺癌细胞有抑制细胞增殖的作用,且对ER(-)的MDA-MB-231细胞作用更显著.     

circRNA_001569通过miR-145/HBXIP轴影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨 circRNA_001569 通过 miR-145/HBXIP 轴在乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移中发挥的作用。方法:收集2016年1月至2019年1月期间衡水市人民医院收治的30例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织。qPCR检测circRNA_001569在乳腺癌组织、癌旁组织以及细胞系中的表达。生物信息学工具预测miR-145的靶基因,RNA免疫沉淀（RNA immunoprecipitation,RIP）和双荧光素酶报告基因实验检测 miR-145 或靶基因之间的相互作用 ;向乳 腺 癌 MDA-MB-231 和 MCF-7细胞中转染si-circRNA_001569、miR-145 mimics或miR-145 inhibitor,建立基因过表达或沉默的细胞模型,qPCR和Western blotting分别检测转染对相关基因和蛋白表达的影响,CCK-8法、Transwell实验检测转染对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中,circRNA_001569 和 HBXIP 均呈高表达、miR-145 呈低表达。RIP 分析和双荧光素酶实验证实了 miR-145 与circRNA_001569和HBXIP之间的靶向关系;circRNA_001569或HBXIP过表达促进MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移（均 P<0.01）,而 miR-145 过表达起相反的作用（均 P<0.01）。结论:circRNA_001569 可能通过下调 miR-145 的表达、上调HBXIP的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

TMEM158在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的分析跨膜蛋白158（Transmembrane protein 158, TMEM158）在乳腺癌组织中的表达,探讨其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法分析TCGA数据库中下载的1094例乳腺癌组织和120例癌旁组织的mRNA表达谱数据;Western 印迹验证乳腺癌患者癌组织及其对应癌旁组织中TMEM158蛋白表达差异;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞系中TMEM158表达水平。通过小干扰RNA技术转染乳腺癌SUM1315细胞,Transwell及细胞划痕实验观察沉默TMEM158后对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响,同时Western 印迹和qRT-PCR实验分析干扰TMEM158对EMT（epithelial-mesenchymal transition）相关标志物E-Cadherin、Vimentin、Snail、N-Cadherin表达量的影响。结果分析TCGA数据库中下载的1094例乳腺癌组织和120例癌旁组织的mRNA表达谱数据显示,TMEM158在乳腺癌组织中的表达水平（6.65 ± 1.76）高于癌旁组织（5.81 ± 1.22）,差异有统计学意义（P<0.05）;分析120对乳腺癌及其对应的癌旁组织,结果表明,TMEM158在乳腺癌组织中表达（6.50 ± 1.76）高于对应的癌旁组织（5.81 ± 1.22）,差异有统计学意义（P<0.05）。Western 印迹检测4对人乳腺癌及对应的癌旁组织标本中TMEM158蛋白的表达差异显示,与癌旁乳腺组织比较,乳腺癌组织TMEM158表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。qRT-PCR分析乳腺癌细胞水平TMEM158表达差异显示,相对于正常乳腺导管细胞（MCF-10A）,乳腺癌细胞中TMEM158表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）,qRT-PCR结果显示,与正常乳腺导管细胞（MCF-10A）相比,人乳腺癌细胞株TMEM158表达量升高,差异有统计学意义（均P< 0.05）。Transwell实验结果表明,与对照组细胞（SUM1315-SiNC）相比,干扰TMEM158（SUM1315-SiTMEM158）细胞的迁移和侵袭能力降低[（346 ± 59）比(196 ± 33), P< 0.05;（202 ± 68）比（99 ± 21）, P< 0.05）]。细胞划痕实验结果显示,沉默TMEM158后细胞迁移能力降低[（54.68 ± 10.85）比（25.54 ± 7.64）, P< 0.05]。Western 印迹和qRT-PCR结果证明,沉默TMEM158后E-Cadherin表达量增加,而Vimentin、Snail、N-Cadherin表达量下降,差异有统计学意义。结论TMEM158在乳腺癌组织与细胞系中高表达,可通过调控EMT相关蛋白的表达干扰TMEM158,从而抑制乳腺癌细胞迁移侵袭。     

转凝蛋白在结直肠癌组织中的表达及其对SW480细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨转凝蛋白(transgelin,TAGLN)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达及其对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法:选取郑州大学附属肿瘤医院2015年5月至2016年8月收治的97例CRC患者的癌及配对的癌旁组织标本,以及人CRC细胞系SW620、SW480、HC...     

大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:用不同质量浓度的大荨麻提取物(0、1、2、4、8、16、32、64 mg/ml)处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-23124 h,MTT法检测细胞增殖活力,选择中位抑制浓度附近的浓度(5和10 mg/ml)作为给药浓度...     

lncRNA RP3-340N1.2 在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7 细胞增殖和迁移的影响

目的:观察长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）RP3-340N1.2 在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7 细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：收集湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心2017 年1 月至2017 年9月13 例行乳腺癌根治术切除的癌组织及相应的癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测13 例乳腺癌组织及癌旁组织、乳腺癌细胞株和正常乳腺上皮细胞中RP3-340N1.2 的表达差异。使用Lipofectamine 3000 转染试剂分别将RP3-340N1.2 质粒（实验组）和阴性对照质粒（对照组）转染至乳腺癌MCF-7 细胞,CCK-8 法和Transwell 迁移实验检测RP3-340N1.2 过表达对MCF-7 细胞增殖、迁移能力的影响。qRT-PCR检测RP3-340N1.2 过表达对miR-134-5p 和OPCML mRNA表达的影响,Western blotting 检测OPCML相关蛋白的表达水平。结果：RP3-340N1.2 在乳腺癌组织中表达明显低于癌旁组织（P<0.01）,其在乳腺癌细胞株中表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞（P<0.01）。上调RP3-340N1.2 的表达抑制MCF-7 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.05）。过表达RP3-340N1.2 后MCF-7 细胞中miR-134-5p 表达水平明显降低（P<0.01）、OPCML mRNA 和蛋白的表达水平升高（P<0.01）,而周期调控蛋白CDK4、Cyclin D2 的表达水平下调,细胞迁移调控蛋白Vimentin 和N-cadherin 蛋白表达下调（均P<0.01）。结论：RP3-340N1.2 在乳腺癌组织和细胞株中低表达,上调RP3-340N1.2 的表达可引起miR-134-5p 的表达降低、OPCML mRNA表达升高,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。     

miR-200c 通过靶向细胞能量代谢和多种信号通路调控三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为

目的：考察miR-200c对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）细胞MDA-MB-231的增殖、凋亡和迁移的影响及其代谢相关的分子机制。方法：以过表达miR-200c的MDA-MB-231（miR-200c-231）细胞、无过表达miR-200c的阴性对照细胞miR-NC-231及其移植瘤裸鼠模型为研究对象,qPCR检测细胞和移植瘤组织中miR-200c及其他相关基因的表达水平,免疫组化技术分析瘤组织中Ki67阳性细胞数量,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blotting检测细胞及组织中增殖、迁移和代谢相关信号通路多种蛋白的表达,Seahorse能量代谢检测仪检测细胞的基础耗氧率（oxygen comsumpition rate,OCR）、细胞外酸度（extracellular acidification rate,ECAR）和代谢表型变化,液相质谱联用技术检测细胞中代谢产物的变化。结果：miR-200c-231细胞及其移植瘤组织中 miR-200c 表达较 miR-NC-231细胞显著增加（P<0.05或P<0.01）,miR-200c-231移植瘤质量和体积均显著下降、瘤组织中Ki67阳性细胞数明显减少（P<0.01）,miR-200c-231细胞的迁移能力下降、细胞凋亡率提高（均P<0.01）。同时伴随着ZEB1/2、Vimentin、cyclinD1的表达下调及cleaved PARP表达的提高（P<0.05或P<0.01）,STAT1/3和NF-κB的磷酸化水平降低（均P<0.05）而cAMP通路蛋白的磷酸化水平提高（P<0.05）。miR-200c-231细胞的OCR提高和ECAR降低、色氨酸2,3-加二氧酶（tryptophan-2,3-dioxygenase 2,TDO2）表达下降（P<0.05或P<0.01）,细胞内10种抗肿瘤代谢物质含量提高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-200c靶向TDO2调控TNBC细胞MDA-MB-231胞内抗肿瘤代谢产物水平、促使细胞代谢类型由依赖糖酵解为主向有氧呼吸类型转化,并失活STAT3和NF-κB通路而激活cAMP通路,从而影响MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为。