合成肽库及其应用

合成肽库由含特定长度的肽片段所组成，它包含了该长度短肽的各种可能序列或绝大部分序列。合成肽库家族包括随机合成肽库、合成肽组合文库（ＳＰＣＬ）、多用途肽库（ＭＵＰＬ）、位置扫描合成肽组合文库（ＰＳ－ＳＰＣＬ）、寡核苷酸编码的合成肽库等。肽库技术除可用于蛋白质研究及分子识别，也开始应用于免疫学领域，如抗原表位分析、药物设计及疫苗研制等方面。     

肽库在抗原表位研究中的应用

肽库分化化学合成肽库和噬菌体显示肽库,在生物学诸多方面有广泛应用。在免疫学领域已用于研究抗原－抗体反应,确定各类抗原表位序列,推测自身免疫病抗原性质,预测抗原表位三维结构等方面。本文就肽库在抗原表位序列及构象研究中的应用作一综述。     

肽库在抗原表位研究中的应用

肽库分为化学合成肽库和噬菌体显示肽库,在生物学诸多方面有广泛应用。在免疫学领域已用于研究抗原抗体反应,确定各类抗原表位序列,推测自身免疫病抗原性质,预测抗原表位三维结构等方面。本文就肽库在抗原表位序列及构象研究中的应用作一综述     

噬菌体肽库的免疫学应用研究

噬菌体展示肽库技术是一种用于筛选蛋白、多肽的强有力的生物技术,将外源蛋白与噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性.本文总结了这一技术及其相关展示系统在蛋白质相互作用的研究、抗体及疫苗的制备、多肽药物的研制等方面的应用潜力和独特的优点.     

噬菌体肽库应用的研究进展

噬菌体随机肽库 (ｐｅｐｔｉｄｅｒａｎｄｏｍｌｉｂｒａｒｙ)是近年来新兴的一门技术 ,是把一个随机结合的ＤＮＡ片段偶连到噬菌体Ｍ13表面蛋白ｇⅢ的Ｎ端 ,成为融合蛋白 ,而ｇⅢ蛋白并不影响随机肽的结构或活性。其主要特点是将所需蛋白质的基因型和编码这个蛋白的基因型紧密联系起来 ,在此基因分子克隆基础上针对某一目标进行筛选。这样能够非常有效地筛选出与目标蛋白特异结合的氨基酸序列或结构。它是探索受体与配体之间相互作用结合位点、寻求高亲和力生物活性的配体分子、探测未知蛋白空间结构表位的有利工具 ,在蛋白分子相互识别的…     

应用噬菌体随机肽库研究蛋白质原表位的进展

蛋白质抗原表位分析在抗原的结构与功能、抗原抗体反应、以及疫苗等新型生物制剂的研究中具有重要意义。近年来 ,随着噬菌体随机肽库研究技术的发展 ,人们逐渐将该技术应用于蛋白质抗原表位研究中。结果表明 :噬菌体随机肽库技术比传统的蛋白质抗原表位分析技术有着较明显的优点。这种新的蛋白质抗原表位分析技术弥补了传统分析技术的不足 ,在蛋白质抗原表位分析中具有广阔的应用前景。     

识别9E10单抗的噬菌体短肽的免疫学特性分析

为分析从单价表达短肽库中筛选到的两种克隆的免疫学特性，将单价噬菌体短肽表达载体中的ｇⅢ片段切除，大肠杆菌中表达可溶性短肽分子，ＥＬＩＳＡ竞争抑制实验证实，可溶性短肽分子可竞争抑制９Ｅ１０单抗与Ｃ－ｍｙｃ＋肽结合。进一步将哓菌体短肽的单价表达载体改建为多价表达载体，分别免疫兔和小鼠，制备免疫抗血清，ＥＬＩＳＡ实验和竞争抑制实验结果证实，两种克隆的免疫抗血清均可与９Ｅ１０单抗 所识别的抗原表位结合，表     

噬菌体递呈肽库在蛋白质抗原表位分析中的应用

本文介绍了线状噬菌体递呈系统的原理及应用特点。讨论了随机噬菌体肽库和靶基因表位递呈文库在蛋白质抗原表位分析中的应用。     

噬菌体随机肽库的应用

生物大分子间的相互作用是一切生命现象的基础。近年来,噬菌体随机肽库已成为探索受体与配体之间相互作用结合位点,寻求高亲和力生物活性的配体分子,探测未知蛋白空间结构表位的有利工具,在蛋白分子相互识别的研究、新型疫苗的研制,以及药物的开发等领域具有广泛应用前景。本综述旨在介绍它在几个方面的重要应用。     

从噬菌体随机肽库中筛选IL-6抗体的识别表位

目的：从噬菌体随机６肽文库中筛选ＩＬ－６抗体的识别表位。方法：利用具有ＩＬ－６中和活性的单抗Ｃ２２０筛选呈现于丝状噬菌体表面Ｐ３蛋白的随机６肽文库。结果：从噬菌体随机６肽文库中选出３６株可与单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列ＳＥＬＲ,该序列与ＩＬ－６的育列具有一定同源性。竞争结合实验的Ｗｅｓｔｅｍ印迹分析,带有ＳＷＦＮＬＲ和ＨＳＷＬＲＹ小肽的２株噬菌体克隆可与ＩＬ－６竞争结合单抗Ｃ     

噬菌体表位文库在免疫学中的应用

噬菌体肽库是以噬菌体为载体，某一特定长度短肽的集合体，包括表位文库及抗体库。其中表位文库在确定抗原表位、细胞因子及其受体的研究、蛋白质配基、拮抗剂和激动剂以及疫苗研制等方面正日益显示其重要作用。     

从噬菌体15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽

目的 用抗JEVE蛋白的mAb2H4筛选噬菌体15肽库,以研究JEVE蛋白模拟肽。方法 用生物素标记的mAb2H4,对噬菌体随机15肽库进行3轮筛选,经ELISA鉴定后,随机挑战取10个阳性噬菌体克隆测序,并与JEVE蛋白进行同源性比较,结果 筛选到的噬菌体能与mAb2H4特异地结合,并且这种结合可被天然JEV抗原所抑制,10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同,均为RQD-PQWPYANSTIAR,同源分析表明,在JEVE蛋白不同区域有两个同源性较高的序列：STXAR和WXXAXST,阳性噬菌体展示肽了能与抗天然JEV抗原的鼠血清产生特异性反应。结论 筛选的该噬菌体克隆展示肽可模拟JEVE蛋白的部分抗原性。     

从噬菌体环肽库中筛选TNF-α表位模拟肽的研究

目的：用具有中和活性的抗TNF—α单抗(mAb)J1D9筛选噬菌体环七肽库，从中获得可模拟TNF—α表位的短肽。方法：筛选TNF—α表位模拟肽，并用夹心ELISA法鉴定阳性克隆。结果：对环七肽库进行3轮筛选后，随机挑选20个噬菌体克隆，经ELISA鉴定出9个阳性克隆。DNA序列分析后，推导的氨基酸序列共3种：c—RRPAQSG—c、c—NKHNRKI—c和c—RGMSRKI—c。结论：筛选的环七肽克隆展示肽具有TNF—α的抗原性，为TNF—α表位模拟肽。     

用噬菌体展示肽库技术筛选甲肝病毒抗原模拟表位

目的 用噬菌体展示肽库技术筛选甲型肝炎(甲肝)病毒抗原模拟表位,为病毒抗原决定簇定位探索可行方法.方法 用纯化的抗甲肝病毒单克隆抗体,对噬菌体展示12肽库进行3轮“吸附-洗脱-扩增”筛选,随机挑取10个克隆,用酶联免疫吸附法(ELISA)对噬菌体克隆进行抗原性鉴定、竞争抑制鉴定及DNA序列测定分析,推导出展示肽氨基酸序列并与甲肝病毒(HAV)代表株结构蛋白氨基酸序列比较.结果 10个噬菌体克隆ELISA检测全为阳性,9个具有一致序列,与HAVHM175株结构蛋白中和活性表位之一:VP1 157-171区具有类似序列,另一株噬菌体克隆在HAVHM175中未发现类似序列,结果表明这些展示肽可能是HAV抗原模拟表位.结论 用噬菌体展示肽库技术筛选得到了HAV模拟表位,为开展病毒模拟表位研究打下了基础.     

用抗HCV多抗从随机15肽库中筛选抗原表位

目的:分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法: 制备Protein A亲和层析柱,从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体;并以此为筛选配基,对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选。结果:三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3,假阳性率逐轮降低至0.2％,提示具有良好的富集效果。对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验,发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应。测序表明,8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS。用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清,有程度不等的阳性反应。结论:用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中,筛选到有一定功能的模拟表位。     

从噬菌体12肽库筛选旋毛虫抗原模拟表位

为研究和开发新的旋毛虫病诊断抗原和疫苗 ,以纯化旋毛虫病患者血清免疫球蛋白 (Ts Ig)对噬菌体1 2肽库进行 5轮筛选获得旋毛虫抗原模拟表位 ,随机挑选 2 4个克隆 ,通过ELISA选取吸光度 (A)较高的 6个克隆 (T1～T6 )并检测其灵敏性和特异性。结果显示 :T1～T6灵敏性与旋毛虫幼虫抗原 (TsA)相同 (阳性反应率 :1 0 0 % ,P >0 0 5 ) ,特异性与TsA无明显差异 (阳性反应率 :0～ 4 0 % ,P >0 0 5 ) ,其中T3,T6与肺吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性高于TsA(P <0 0 5 ) ,T6与日本血吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性亦高于TsA(P<0 0 5 ) ,证实利用噬菌体 1 2肽库可以成功地筛选到旋毛虫抗原模拟表位 ,为旋毛虫病诊断抗原和疫苗的研究和开发提供了新的研究途径     

用噬菌体肽库筛选IBDV单克隆抗体的模拟表位

目的:筛选法氏囊病毒(IBDV)单克隆抗体所针对的模拟抗原表位。方法:以纯化的3株IBDV单克隆抗体为靶分子用噬菌体12肽库筛选相应抗原模拟表位;应用间接和竞争ELISA鉴定所筛选的阳性样品;最后对与抗体高亲和结合的噬菌体进行测序分析。结果:经过四轮淘洗,随机挑取30个克隆经间接ELISA鉴定,发现其中22个克隆结合活性较高。进一步应用竞争ELISA,获得14个噬菌体克隆,其抑制率高达50%以上。对这些噬菌体进行DNA测序,并分析比对了IBDV相应序列,确定了3个抗原模拟表位。结论:通过噬菌体随机肽库成功筛选出3个IBDV模拟表位,为进一步研究IBDV抗原性质奠定了基础。     

从随机9肽库中筛选HCV抗原表位

目的 :用患者血清中抗HCV抗体从随机 9肽库中筛选HCV抗原表位。方法 :将病人血清用硫酸铵粗提后 ,用ProteinA亲和层析柱纯化和制备抗HCV多克隆抗体 ;以此为筛选配基 ,对噬菌体表面展示的随机 9肽库进行亲和筛选。结果 :三轮筛选的投入产出比逐轮升高至 5 0× 10 - 3 、假阳性率逐轮降低至 0 2 % ,提示具有良好的富集效果。从第三轮挑选出的 15个克隆进行结合试验 ,发现 7个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清反应 ;测序表明 6个克隆的外源肽含有核心序列SPVAXVLXT。用阳性噬菌体克隆检测 2 0例病人血清 ,有程度不等的阳性反应。结论 :用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中筛选得到了有一定功能的模拟表位。     

用噬菌体表面显示肽库技术筛选乙酰胆碱酯酶有效抗原表位的研究

目的：筛选和鉴定乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位。方法：收集乙酰胆碱受体抗体阴性而乙酰胆碱酯酶抗体阳性的重症肌无力病人血清，采用溴化氰活化的琼脂糖柱（CNBr-actived sepharose^TM4B）纯化抗乙酰胆碱酯酶的多克隆抗体并定量；用纯化的抗乙酰胆碱酯酶的抗体对随机的12肽噬菌体表面显示肽库进行5轮免疫学筛选，随机挑取克隆；采用Western blot免疫识别，识别为阳性的克隆进行核苷酸序列的测定，并与乙酰胆碱酯酶的氨基酸序列进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠，采用Western blot筛选能刺激小鼠产生抗乙酰胆碱酯酶抗体的阳性克隆，进行生物学活性的鉴定。结果：经5轮免疫学筛选后挑取的49个克隆中，经Westem blot识别15个克隆能被抗乙酰胆碱酯酶抗体识别。核苷酸序列分析发现共有7种不同的表位，其中1种表位与乙酰胆碱酯酶有较高的同源性，其余6种表位与其无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选，共有5个免疫原性较强的阳性克隆，其免疫的鼠血清均可识别人乙酰胆碱酯酶。结论：获得了5种乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位，1种可能为结构表位，4种为模拟表位。     

应用噬菌体随机肽库技术筛选SARS-CoV S蛋白模拟表位

目的筛选SARS病毒(Severe acutere spiratorysyndromeas sociated coronavirus,SARSCoV)结构蛋白S(Spike)特异性的模拟表位,为抗SARS疫苗研究提供基础。方法以抗SARS病毒S蛋白的单克隆抗体为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮“吸附洗脱扩增”的筛选,随机挑选30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附(ELISA)法和交叉反应实验鉴定阳性克隆,再进行DNA序列分析和竞争抑制结合实验,以确定SARS病毒S蛋白的模拟表位。结果经噬菌体富集后,从随机挑选的30个克隆中得到了29个编码8种12肽的阳性克隆,8条肽与S蛋白的320～350氨基酸序列有较高同源性,确定YF、W、E和K氨基酸残基为模拟表位的骨架结构。结论用噬菌体12肽库成功筛选到了SARS病毒S蛋白的模拟表位,为基于S蛋白的肽疫苗研制提供了基础。