铜绿假单胞菌及其生物膜与机体固有免疫相互作用研究进展

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）是一种机会性致病菌,在临床中可导致各种严重感染,这些感染往往伴有细菌生物膜的形成,其形成机制非常复杂,治疗也很棘手.研究表明,PA形成生物膜后其基因型和表型发生改变,菌体聚集并分泌胞外基质,从而包裹免疫系统原先可识别的细菌成分以及抗原,进而逃避人体免疫系统的识别.另外,生物膜PA可分泌各种毒力因子,阻碍固有免疫发挥效应.本文就PA生物膜所致慢性感染及其逃避机体固有免疫机制研究进展作一阐述.     

铜绿假单胞菌耐药性的基因学研究进展

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）又称绿脓杆菌,是引起急性或慢性感染的最常见的条件致病菌之一,由其引起的院内感染往往治疗难度极大,几乎具有目前已知的细菌主要耐药机制,已成为引起院内获得性肺炎多重耐药革兰阴性菌的代表[1-2]。PA感染是治疗的难题,归其原因,在于其广泛而多重的耐药性。因此,了解铜绿假单胞菌的耐药相关基因的情况,有助于临床研发更有效的治疗铜绿假单胞菌感染性疾病的抗菌药物。PA的耐药机制概括起来主要有以下几个方面：各种外排泵系统的过度表达、外膜通透性的降低、药物作用靶位的改变、氨基糖苷类修饰酶的产生、细菌生物被膜形成以及产生抗菌药物灭活酶等。由于这些机制可以共存,故PA往往具有多重耐药性。本文主要对上述几种耐药机制的相关耐药基因的进展作一综述。     

假单胞菌中聚羟基脂肪酸酯合成酶基因的克隆与分析

大多数二型聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoates,PHA)合成酶(PhaC)发现于假单胞菌中,其基因组成形式为两个PhaC基因中间有一个PHA降解酶PhaZ基因.根据已知的假单胞菌PHA合成酶基因区域的特殊结构,设计了采用PCR方法从假单胞菌中克隆PHA合成酶基因的克隆方案,并成功地对一株硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)和一株石竹伯克霍尔德氏菌(Burkholderiacaryophylli)中的PHA合成酶基因进行了克隆.将克隆得到的phaC1,phaZ和phaC23个基因所编码的氨基酸序列与其他6株已知PHA合成酶基因的假单胞菌的相应序列进行比较,发现这3个蛋白质在假单胞菌中的相似性很高,由phaC1,phaZ和phaC23个基因所组成的基因区域在假单胞菌中非常保守.从对PhaC1,PhaZ和PhaC2的系统进化树分析可以发现,这3个蛋白质与整个PHA合成酶基因区域的系统进化树有着一致的结构.这表明假单胞菌中的PHA合成酶基因区域可能起源于共同的祖先,而其形成可能经历了一次PHA合成酶基因加倍的过程.     

铜绿假单胞菌对胰腺癌细胞的抑癌效应及分子机制研究

目的 :主要探讨铜绿假单胞菌抗胰腺癌细胞的效果及其主要机制。方法:采用CCK8法检测胰腺癌细胞经铜绿假单胞菌作用后细胞增殖率变化,并应用透射电镜观察药物处理后细胞超微结构的改变。通过AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞经不同浓度铜绿假单胞菌处理后细胞凋亡的变化,分析胰腺癌细胞周期改变。Western印迹检测胰腺癌细胞表皮生长因子受体(EGFR)信号通路相关蛋白质的表达。结果:铜绿假单胞菌可明显抑制胰腺癌细胞增殖,并可观察到形态学的明显凋亡改变。铜绿假单胞菌处理后肿瘤细胞凋亡明显增加,并诱导肿瘤细胞的细胞周期阻滞,肿瘤细胞EGFR信号通路磷酸化蛋白表达量明显下降。结论:铜绿假单胞菌可诱导胰腺癌细胞凋亡,抑制肿瘤生长,阻滞细胞周期,EGFR通路抑制是铜绿假单胞菌诱导胰腺癌细胞凋亡的重要机制之一。     

铜绿假单胞菌感染大鼠皮肤创面愈合过程中TGF-β1及胶原蛋白含量的变化

目的 探讨大鼠慢性皮肤溃疡创面感染铜绿假单胞菌后,TGF-β1和胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白表达的变化.方法 24只8周龄雌性Wister大鼠随机分为单纯创面组(A组)和创面+铜绿假单胞菌接种组(B组).分别在术后第1、3、7、10天观察创面上皮化率、收缩率及中性粒细胞情况;并采用ELISA方法测定创面第1、3、7、10天TGF-β1和胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白的表达情况.结果 A组上皮化率在第7天高于B组,收缩率低于B组.随着时间的延长,A组中性粒细胞在第3天增加到最多,随后逐渐减少,而B组中性粒细胞第1天达到最多.2组TGF-β1表达在术后呈上升趋势,B组TGF-β1在第3天降低,随着时间延长回升,第7天2组比较差异有统计学意义(P＜0.05).胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白表达随着时间的延长呈下降趋势,B组胶原Ⅲ蛋白表达在第7、10天差异有统计学意义(P＜0.05).A组第1、3天胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白表达高于B组,在第7、10天则低于B组,且胶原Ⅲ蛋白在第3天显示A组高于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 皮肤溃疡创面感染铜绿假单胞菌后延迟了TGF-β1和胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白的表达,可能影响创面的正常愈合.

Abstract：

Objective To explore the different expression of TGF-β1 and collagen during the healing process of wound infected by pseudomonas aeruginosa(PAO1).Methods 24 female Wister rats were randomly divided into pure wound group(group A)and wound+PAO1 group(group B).The reepithelial rate,shrinkage rate and neutrophils number on the wounds were observed on the 1st,3rd,7th and 10th day after operation.The expression of TGF-β1 and collage Ⅰ,Ⅲ was also detected.Results On the 7th day,the re-epithelial rate in group A was higher than that in group B,while the shrinkage rate in group A was lower than that in group B.The neutrophils number increased to peak on the 1 st day in group B,but on the 3rd day in group A.The TGF-β1 expression increased after operation in both groups,but it decreased in group B on the 3rd day and re-increased after that.The TGF-β1 expression was significantly different between the two groups on the 7th day(P＜0.05).The expression of collagen Ⅰ and Ⅲ decreased during healing.The expression of collagen Ⅲ in group A was higher on the 3rd day and was lower on the 7th and 10th day than that in group B,showing a significant difference(P＜0.05).Conclusions PAO1 infection could delay the expression of TGF-β1 and collagen Ⅰ,Ⅲon wound,which may interfere the healing process of wound.     

连续式酶反应器中脂肪酶催化合成麦芽糖月桂酸酯的研究

利用连续式酶反应器(CSTR)、固定化脂肪酶催化合成麦芽糖月桂酸酯。确定了连续生产工艺的最佳条件:在丙酮介质中,起始反应器中麦芽糖的浓度为50 mmol/L,月桂酸浓度为200mmol/L,加酶量为10 g,每天添加4 g麦芽糖,200 mmol/L的月桂酸丙酮溶液以0.15 mL/min进入反应器。本反应器的麦芽糖酯产量可以达到12.32 g/(L.d),麦芽糖的转化率为58%,高于间歇式生产,而且在生产中不需要添加分子筛。研究了产物的分离纯化方法,利用正己烷对产物进行3次洗涤、离心处理,得到的产物麦芽糖月桂酸酯纯度达到94.16%。     

固定化黑曲霉增殖细胞生产低聚果糖的研究

黑曲霉孢子经海藻酸钙包埋３３ｈ后得到的固定化增殖细胞其酶活性达到最高，机械强度仍保持较高水平（为起始时８０％），最适ｐＨ为５．０，与游离酶相同，最适温度为５５℃，比游离酶高５℃；有害离子对其影响较小，其Ｋｍ（以蔗糖为底物）为８２ｍｍｏｌ．将固定化增殖细胞装入填充式反应柱，产品中低聚果糖含量在５０％～５５％，操作一个月活性保持不变。     

鼠李糖脂分批式发酵动力学模型

根据3.7 L瑞士Bioengineer KLF2000型发酵罐分批发酵的实验数据,利用GraphPad Prism软件对假单胞菌BS-03产鼠李糖脂生物表面活性剂的发酵动力学模型进行非线性拟合,说明Logistic模型和L-P模型能较好的描述假单胞菌BS-03发酵过程中的菌体生长、鼠李糖脂合成和限制性基质的消耗动力学。     

Accumulation of Pro-Cancer Cytokines in the Plasma Fraction of Stored Packed Red Cells

Introduction  

Perioperative blood transfusion has been linked to decreased survival in pancreatic cancer; however, the exact causal mechanism has not been elucidated. Allogeneic transfusions are known to expose patients to foreign cells and lipid mediators. We hypothesize that stored packed red cells (pRBCs) contain pro-cancer cytokines that augment tumor progression. We analyzed the plasma fraction of stored pRBCs for pro-cancer cytokines and evaluated the affect of both storage time and leukocyte reduction on these mediators.     

用固定化生长微生物细胞改善氨基酸调味液品质

利用固定化生长的酵母细胞和黑曲霉菌丝体 ,对酸法水解的氨基酸水解液进行发酵 ,除去水解液异臭味 ,使调味液的口味和风味得到明显改善 ,产品既有氨基酸调味液的特点 ,又具有酱油的风味     

假单胞菌JW12脂肪酶的补料分批发酵

研究了假单胞菌ＪＷ１２脂肪酶在２Ｌ和２５Ｌ容积发酵罐的补料分批发酵工艺．通过调整碳源补加速率，控制产酶期发酵液ＰＨ在８．２左右，能有效提高脂肪酶的酶活和表观生产率．在２５Ｌ标准发酵罐中，连续补加吐温－８０，最高脂肪酶酶活为１２９．２μｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍＬ），表观生产率为１５．９１     

Brevibacterium sp.DGCDC-82发酵罐中生产胆固醇氧化酶

用Brevibacterium sp.DGCDC-82在7L发酵罐中分批培养.分别对添加剂吐温-80、培养温度、培养基的pH、通风量和搅拌速度在胆固醇氧化酶的生产中的影响进行了研究.结果显示以上条件均对产酶有影响.在不同的发酵阶段改变发酵操作条件,发酵20 h最高酶活可达1203U/L,生产强度可达60 U/(L·h).既有效地提高了胆固醇氧化酶的产量,又防止了发酵过程中的泡沫外溢.     

假单胞菌脂肪酶非水相催化性质

以丁酸与丁醇的酯化为模型反应，研究了假单胞菌脂肪酶的非水相催化性质。有机相中酶的催化作用需要一定的水分，最适水含量因溶剂的不同而有所差异。通常，极性强的溶剂其最适水含量高；当以水活度衡量时，各溶剂间的差别消失，最适水活度均在０．５～０．６之间。有机溶剂中酶的热稳定性较水溶液中明显提高，在环己烷中８０℃保温６ｈ酶活力仍保留约８０％；连续使用５次，酶活损失不到１０％．在环己烷中酶的最适作用温度为５０℃，比水溶液中略高；最适作用ｐＨ为９．０，与水溶液中相近。     

Critical Role of NKT Cells in Posttransplant Alloantibody Production

We previously reported that posttransplant alloantibody production in CD8‐deficient hosts is IL‐4⁺CD4⁺ T cell–dependent and IgG1 isotype‐dominant. The current studies investigated the hypothesis that IL‐4‐producing natural killer T cells (NKT cells) contribute to maximal alloantibody production. To investigate this, alloantibody levels were examined in CD8‐deficient WT, CD1d KO and Jα18 KO transplant recipients. We found that the magnitude of IgG1 alloantibody production was critically dependent on the presence of type I NKT cells, which are activated by day 1 posttransplant. Unexpectedly, type I NKT cell contribution to enhanced IgG1 alloantibody levels was interferon‐γ‐dependent and IL‐4‐independent. Cognate interactions between type I NKT and B cells alone do not stimulate alloantibody production. Instead, NKT cells appear to enhance maturation of IL‐4⁺CD4⁺ T cells. To our knowledge, this is the first report to substantiate a critical role for type I NKT cells in enhancing in vivo antibody production in response to endogenous antigenic stimuli.