熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤影响的研究

[目的] 探讨熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤的影响.[方法] 应用氯化锂-匹罗卡品复制难治性癫痫大鼠模型.观察实验大鼠的反复自发性发作(SRS)情况、海马形态学改变和苔藓纤维出芽(MFS).[结果] 1)治疗组癫痫大鼠SRS的发作次数均明显低于模型组(P < 0.01).2)光、电镜结果显示：各治疗组中联合治疗组海马结构损伤最轻.3)Timm染色结果显示：联合治疗组对海马CA3区及齿状回MFS有较强的干预作用,优于单药治疗组.这种干预作用的强弱与熄风胶囊的剂量呈现一定正相关关系.[结论] 熄风胶囊单药及与卡马西平(CBZ)联合用药能够有效的控制氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,降低海马神经元损伤的程度,抑制苔藓纤维异常出芽.     

匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型

目的：研究匹罗卡品致痫后大鼠行为、EEG及大脑组织学变化特征。方法：SD大鼠匹罗卡品腹腔注射，诱发急性癫痫持续状态（SE）后，观察慢性期自发性发作；描记EEG；Neo-Timm染色观察海马苔藓出芽，Nissl染色观察海马神经元损伤。结果：注射匹罗卡品后，87％的动物呈现SE，持续6－24h后这一部分大鼠均出现慢性自发发作，组织学检查发现海马有显著的神经元损伤，齿状回内分子层苔藓纤维出芽。结论：匹罗卡品模型基本复制了人类颞叶癫痫的临床病理特征；SE所致的海马结构性损伤及苔藓纤维重构是自发性发作形成的基础。     

氯化锂-重复低剂量匹罗卡品致大鼠癫痫模型制作

目的:建市氯化锂一重复低剂量匹罗卡品致痫大鼠模型.方法:雄性成年sD大鼠173只.随机分为对照组、非药物干预组和药物干预组.氯化锂3mEq/kg腹腔注射(IP),19h后给予低剂量匹罗卡品10mg/kg,每隔30min 1次,重复2-4次.观察大鼠行为、脑电、模型成功率、死亡率、自发性癫痫发作及其潜伏期和发作的严重程度.结果:氯化锂-重复低剂量匹罗卡品大鼠癫痫模型在匹罗卡品1～4剂后发生癫痫持续状态,痫性发作距离注射时间平均为16min,成功率73%,匹罗卡品用量平均25.9mg/kg,持续90min被终止者死亡率低于10%.自发性癫痫发作平均每天2.4～5.7次,潜伏期平均40天.发作程度均达到Ⅲ级以上的痫性发作,绝大多数为Ⅳ/Ⅴ级,脑电类似人类颞叶癫痫.对照组大鼠均为0级发作.结论:氯化锂-重复低剂量匹罗卡品诱导的大鼠癫痫模型具有制作方便、致痫成功率高和动物死亡率低特点,同人类癫痫持续状态和颞叶癫痫有相似的行为和脑电图改变.     

氯化锂-匹罗卡品癫痫模型中海马神经元钾通道Kv1.1的表达变化

目的:研究A型钾通道亚型Kv1.1在癫痫大鼠海马神经元中的蛋白表达和电生理功能变化,初步探讨Kv1.1在癫痫发生中的作用和意义.方法:2019年1-12月选取24只成年雄性SD大鼠,根据随机数字表法分为对照组和模型组,每组12只.模型组通过向腹腔注射氯化锂-匹罗卡品制备癫痫模型,对照组采用0.9％ 氯化钠溶液代替处理....     

匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型

目的 :研究匹罗卡品致痫后大鼠行为、EEG及大脑组织学变化特征。方法 :SD大鼠匹罗卡品腹腔注射 ,诱发急性癫痫持续状态 (SE)后 ,观察慢性期自发性发作 ;描记EEG ;Neo Timm染色观察海马苔藓出芽 ,Nissl染色观察海马神经元损伤。结果 :注射匹罗卡品后 ,87%的动物呈现SE ,持续 6～ 2 4h后这一部分大鼠均出现慢性自发发作 ,组织学检查发现海马有显著的神经元损伤 ,齿状回内分子层苔藓纤维出芽。结论 :匹罗卡品模型基本复制了人类颞叶癫痫的临床病理特征 ;SE所致的海马结构性损伤及苔藓纤维重构是自发性发作形成的基础     

降低氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型死亡率的实验研究

[目的]探讨有效控制氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态,提高癫痫大鼠存活率的最佳条件。[方法]选用SD大鼠30只,腹腔注射氯化锂和匹罗卡品后,诱发大鼠癫痫持续状态1 h后,随机分为A组:只给东莨菪碱;B组:东莨菪碱+安定;C组:东莨菪碱+水合氯醛。比较3组大鼠间癫痫发作的持续状态、癫痫大鼠的死亡率、死亡发生的时间。[结果]A组大鼠癫痫发作的持续状态为16~20 h,死亡率为87.5%;B组大鼠在用药后15 min内可控制癫痫发作的持续状态,死亡率为62.5%;C组大鼠在用药后3~10 min可完全控制大鼠的癫痫发作持续状态,大鼠全部存活。[结论]水合氯醛可有效控制氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠的癫痫持续状态,提高癫痫大鼠的存活率。     

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠苔藓纤维发芽的不同时点研究

目的探讨匹罗卡品致痫大鼠海马结构齿状回苔藓纤维发芽(MFS)各时间点的变化。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制成大鼠癫痫持续状态(SE)及颞叶癫痫模型,利用Timm组化染色法进行MFS观察研究。结果Timm染色可见到实验组大鼠SE24h时齿状回内分子层及CA3区下锥体层即有MFS现象;实验组不同时点与对照组大鼠CA3区和齿状回内分子层MSF评分间差异均有统计学意义(P<0·05)。结论匹罗卡品模型基本复制了人类颞叶癫痫的临床病理特征;诱导的SE可造成大鼠海马结构易损区的MFS增加,从SE后24h即开始出现MFS现象,且随时间的延长其程度加重。     

Purα对匹罗卡品致痫大鼠海马DNA损伤的保护作用

目的 探讨Purα蛋白对匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马所致DNA损伤的保护作用,以及Purα蛋白在DNA损伤修复中的作用.方法 将Purα蛋白过表达的慢病毒和Purα siRNA慢病毒在立体定位仪指导下注入大鼠海马组织.注入后14 d通过荧光切片和免疫印迹证实病毒已经在海马组织表达,然后用匹罗卡品腹腔注射诱导癫痫发作.癫痫发作1h后处死动物,分别取样进行免疫组织化学和免疫印迹检测与DNA损伤和修复.结果 免疫组织化学结果表明,DNA损伤标志性蛋白γH2AX在大鼠CA1区的表达,各组选20张相同背景色的海马CA1区通过图像分析软件iPP6.0测定阳性细胞的平均光密度值;与空载组(0.40 ±0.11)和对照组(0.42±0.05)相比,Purα过表达组(0.15±0.10)免疫着色阳性细胞数目明显减少(P＜0.01);而在Purα沉默组(0.68±0.06)明显增高(P＜0.01).免疫印迹结果表明,在DNA损伤修复相关蛋白Parp-1的表达上:与空载组(0.93±0.11)和对照组(1.00±0.00)相比,Purα过表达组(0.17±0.09)的表达明显降低(P ＜0.01);Purα沉默组的表达明显增高(P＜0.01).结论 癫痫发作早期可引起明显的DNA损伤,Purα蛋白对癫痫引起的DNA损伤有明显的保护作用.     

氯化锂联合匹罗卡品小剂量多次注射诱发癫痫持续状态模型的研究

目的 研究减少匹罗卡品癫痫持续状态模型病死率的方法 .方法 建立3种匹罗卡品癫痫持续状态模型：大剂量匹罗卡品注射、氯化锂联合匹罗卡品单次注射、氯化锂联合匹罗卡品小剂量多次注射,比较3种方法 癫痫状态发生率、病死率及自发发作率的差异.结果 3种方法 癫痫状态发生率分别为70.0%、76.7%、80.0%,差异无统计学意义;癫痫自发发作率分别为77.8%、83.3%、85.7%,差异无统计学意义;病死率分别为57.1%、47.8%、12.5%,氯化锂-小剂量多次匹罗卡品组明显降低.结论 氯化锂联合匹罗卡品小剂量多次反复注射,癫痫病死率明显降低,慢性期癫痫自发发作率高,是一种理想的癫痫持续状态模型.     

丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺JNK信号通路的影响

目的：观察丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺c—Jun氨基末端激酶（c—Jun N-terminal kinase,JNK）信号通路的影响,探讨其治疗糖尿病的可能机制。方法：雄性Wistar大鼠78只,用小剂量链脲佐菌素联合高脂饲料的方法建立糖尿病大鼠模型,并将造模成功的60只大鼠分为模型组、运动组、丹蛭降糖胶囊组及运动联合丹蛭降糖胶囊组;另取12只大鼠作为正常对照。治疗8周后,用免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测大鼠胰腺组织中磷酸化JNK（phospho-JNK,p-JNK）、胰腺十二指肠同源异型盒基因1（pancreatic and duodenal homeobox-1,PDX-1）及胰岛素的表达水平。结果：模型组胰腺组织中的P—JNK表达水平明显高于正常对照组（P〈0．01）,而PDX-1和胰岛素含量则明显低于正常对照组（P〈0．01）;给予中药、运动干预能明显抑制JNK的活性,提高PDX-1和胰岛素的表达水平（P〈0．05,P〈0．01）。结论：运动及丹蛭降糖胶囊联用可能是通过抑制糖尿病大鼠JNK信号通路,对糖尿病胰岛β细胞起保护作用。     

多药耐药相关蛋白1在梗阻性黄疸大鼠肝组织中的表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1, Mrp1)在梗阻性黄疸大鼠胆红素代谢中的作用.方法将80只Wistar大鼠完全随机分为假手术组(sham operation, SHAM)、胆总管结扎组(common bile duct ligation, CBDL)、胆流复通组(bile reflow, REF),测定各时相点血清前白蛋白(prealbumin, PA)、总胆红素(DBIL)以及尿样直接胆红素(DBIL),采用RT-PCR和间接法免疫荧光染色分别在基因转录、蛋白表达及细胞膜定位上检测mrp1在大鼠肝组织中的表达情况.结果 CBDL术后PA迅速下降(P<0.01);TBIL在CBDL术后急剧升高(P<0.01),峰值出现在术后7 d,然后水平有所回落,尿中DBIL在梗阻期间一直上升(P<0.05);复通术后上述指标逐步好转,至术后7 d接近或已达到正常水平;mrp1 mRNA水平随着梗阻时间的延长明显升高,在梗阻解除后仍处于较高水平,免疫荧光结果显示Mrp1定位表达于肝细胞膜上,变化规律与mRNA一致(P<0.05).结论在梗阻性黄疸以及梗阻解除早期,Mrp1介导了胆红素的排泄.     

消癖丸干预二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的效应及其机制

目的：探讨消癖丸干预二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）诱导的大鼠肝纤维化的作用。方法：采用0．5％的DMN溶液2mL／kg体质量腹腔注射,每周连续注射3d,每日1次,共4周,制备大鼠肝纤维化模型。第3周开始模型大鼠随机分为模型对照组和消癖丸组,消癖丸组给予消癖丸煎剂灌胃,模型对照组给予等量的生理盐水。治疗2周后,观察大鼠肝功能、肝组织病理学改变及肝纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白（alpha—smooth muscle actin,α-SMA）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF—β1）、组织金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）和血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO-1）表达的变化。结果：（1）与正常大鼠比较,造模2和4周时模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性逐渐升高（P〈0．01或P〈0．05）,4周时血清总胆红素（total bilirubin,TBil）含量显著增加（P〈0．05）;与4周模型组比较,消癖丸组血清AIT、AST、ALP、TBil水平均显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。（2）模型大鼠肝组织炎症反应及胶原沉积逐渐加重,4周时部分大鼠肝组织已形成完整包绕的假小叶结构,肝组织羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量显著增加（P〈0．01）;与4周模型组比较,消癖丸组肝组织炎症、胶原沉积明显减轻,肝组织Hyp含量显著降低（P〈0．05）。（3）模型大鼠肝组织α-SMA蛋白表达逐渐增加,4周时显著高于2周模型组（P〈0．01）;聚合酶链式反应分析显示,肝组织α—SMA、TGF—β1、TIMP-1和HO-1mRNA的表达随着模型的进展逐渐升高（P〈0．01）;与4周模型组比较,消癖丸组肝组织α-SMA蛋白的表达及α—SMA、TGF-β1、TIMP-1、HO-1mRNA的表达均显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。结论：消癣丸能够显著抑制DMN诱导大鼠肝纤维化的进展,且这一作用机制可能与抑制肝星状细胞活化有关。     

益气化瘀方对腰神经压迫模型大鼠背根节神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的：观察益气化瘀方对腰神经根压迫损伤大鼠背根节神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的影响。方法：雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、弥可保组和益气化瘀方组,每组10只。造模各组用自制胶块压迫于大鼠右侧L;神经根背根节处,假手术组仅切开皮肤和椎旁肌。造模后假手术组和模型组大鼠给予生理盐水灌胃,益气化瘀方组大鼠给予益气化瘀方煎剂灌胃,弥可保组大鼠肌肉注射弥可保。于造模10d后取右侧受压神经根,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测神经细胞的凋亡情况;分光光度法结合考马斯亮蓝法检测受压迫神经根caspase-3活性;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测神经根组织caspase-3mRNA表达变化。结果：腰神经根受压迫后背根节的神经细胞凋亡明显增加,模型组大鼠神经细胞的凋亡指数高于假手术组（P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可减少背根节神经细胞的凋亡,两组大鼠神经细胞的凋亡指数低于模型组（P〈0．05）。模型组大鼠神经根组织caspase-3活性和mRNA表达明显增高,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可降低造模后大鼠神经根组织caspase-3活性及其mRNA表达,二者与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：腰神经根压迫可导致受压神经根组织caspsae-3的过表达和神经细胞凋亡的增加。益气化瘀方可抑制神经根组织caspase-3的过表达,减轻背根节神经细胞的凋亡。     

平肝潜阳方药对自发性高血压大鼠血管组织蛋白质表达谱的影响

目的：观察平肝潜阳方药对自发性高血压大鼠血管组织中蛋白质表达的影响,为深入研究平肝潜阳方药治疗高血压的作用机制奠定基础。方法：选择WKY大鼠10只作为正常对照,自发性高血压大鼠20只随机分为模型组和平肝潜阳方治疗组。治疗时间为4周,治疗期间每周监测大鼠血压和心率,并观察大鼠行为学指标;治疗结束后,采用双向凝胶电泳（two-di mensional gel electrophoresis,2-DE）结合质谱技术分离鉴定血管组织相关蛋白。结果：平肝潜阳方药不仅能够明显降低自发性高血压大鼠的血压,而且能够改善大鼠的心率、易激惹程度和旋转耐受时间。本实验建立了自发性高血压大鼠血管组织的2-DE图谱。与正常组比较,模型组蛋白质点表达上升2倍及以上的有12个,下降2倍及以上的有15个。治疗组与模型组比较发现,表达下调的15个蛋白质中有10个表达增强,而表达上调的12个蛋白质中有8个表达降低。共得到16个肽质量指纹图谱,3个无质谱结果,搜索到13个具有统计学意义的蛋白质。结论：平肝潜阳方药能够降低血压和改善大鼠的行为学指标,其机制可能与调节血管组织的蛋白质表达谱有关。     

首参颗粒对动脉粥样硬化大鼠血管细胞与外周血白细胞端粒和端粒酶的影响

目的：观察补肾中药复方首参颗粒对动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）模型大鼠血管细胞与外周血白细胞端粒、端粒酶以及动脉壁病变、血脂的影响,探讨其作用机制。 方法：40只Sprague-Dawley大鼠,随机分为正常组、模型组、中药组和西药组;采用一次性腹腔注射维生素D3及连续饲喂高脂饮食的方法建立AS模型。模型组大鼠用双蒸水灌胃,中药组以首参颗粒灌胃,西药组以普伐他汀灌胃。12周后,苏木精和伊红染色观察腹主动脉髂动脉病理变化,生物化学比色法检测血清总胆固醇（total cholesterol, TC）、三酰甘油（triacylglycerol, TAG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C）水平,荧光定量聚合酶链反应法检测外周血白细胞及血管细胞的端粒长度及端粒酶活性。 结果：与模型组比较,中药组大鼠动脉壁的粥样硬化病变明显改善,血清TC、LDL-C水平及TC/HDL-C比值显著降低（P〈0.01）,血管细胞与外周血白细胞的端粒酶活性明显提高（P〈0.05或P〈0.01）,血管细胞与外周血白细胞的端粒长度延长,与正常组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。 结论：补肾中药复方首参颗粒具有改善大鼠AS的作用,其机制可能与调控血管细胞端粒长度及端粒酶活性,改善血管细胞老化相关。     

金芪降糖片对糖尿病大鼠血清基质金属蛋白酶9水平和外周血单核细胞基质金属蛋白酶9表达的影响

目的：观察中药金芪降糖片对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血清基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）水平和外周血单核细胞MMP-9表达的影响。方法：30只Wistar大鼠随机分为3组：对照组、模型组及金芪降糖片组,每组10只。模型组与金芪降糖片组大鼠腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型后,金芪降糖片组予金芪降糖片溶液[0.8g/（kg.d）]灌胃6周,对照组和模型组以等体积生理盐水灌胃。灌胃6周后,下腔静脉取血分离血清,酶联免疫吸附测定法检测血清MMP-9水平;分离大鼠外周血单核细胞,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot方法分别检测MMP-9mRNA及蛋白的表达。结果：治疗后,金芪降糖片组大鼠空腹血糖含量与模型组比较明显下降（P〈0.05）;建模成功后与对照组比较,模型组及金芪降糖片组大鼠血清MMP-9水平升高（P〈0.01）;灌胃6周后,与模型组比较,金芪降糖片组大鼠血清MMP-9水平降低（P〈0.05）;与对照组比较,模型组大鼠外周血单核细胞MMP-9表达增加（P〈0.05）;金芪降糖片组大鼠外周血单核细胞MMP-9表达较模型组降低（P〈0.05）。结论：金芪降糖片可以降低糖尿病大鼠血清MMP-9水平,下调外周血单核细胞中MMP-9的表达。     

参芎玉精颗粒对糖尿病合并脑缺血大鼠海马神经再生的影响

目的：建立气阴两虚、瘀血阻络型糖尿病合并局灶性脑缺血大鼠模型,观察具有益气养阴活血功效的参芎玉精颗粒对模型大鼠海马齿状回区神经细胞的增殖、分化和存活的影响。方法：将大鼠分为假手术组、糖尿病合并脑缺血（气阴两虚、瘀血阻络证）模型对照组、参芎玉精组和参芎组,每组20只,采用5-溴-2′-脱氧尿嘧啶掺入法、免疫组织化学法观察参芎玉精颗粒对糖尿病合并脑缺血大鼠神经细胞增殖、分化和存活的影响。结果：糖尿病合并脑缺血可使大鼠海马齿状回颗粒下层的新生细胞增多,参芎玉精颗粒作用7d时不能促进糖尿病合并脑缺血大鼠颗粒下层新生细胞的增殖（P〉0.05）,但治疗21d后,可以明显提高新生细胞的存活率,促进新生细胞向神经元分化（P〈0.01）,并优于参芎颗粒（P〈0.01）。结论：以益气养阴活血法组方的参芎玉精颗粒可促进气阴两虚、瘀血阻络型糖尿病合并脑缺血大鼠新生神经细胞的存活,并促进其向神经元分化,效果优于益气活血法。     

食管、贲门癌组织中P-糖蛋白与多药耐药相关蛋白的表达

目的:检测食管癌、贲门癌组织中P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达.方法:应用免疫组化方法检测50例食管癌、50例贲门癌及各自相应癌旁正常组织中P-gp和MRP的表达.结果:食管癌与相应癌旁正常组织中P-gp的阳性表达率分别为2%,2%,而MRP为76%和42%;贲门癌与相应癌旁正常组织中P-gp的阳性表达率为54%,30%,而MRP为42%与20%.食管癌组织中MRP的表达、贲门癌组织中P-gp和MRP的表达均高于相应癌旁组织(P＜0.05).MRP与食管癌的分化程度有关,P-gp与MRP与贲门癌的分化程度有关(P均＜0.05).2者与食管癌或贲门癌的浸润深度、淋巴结转移均无关(P＞0.05).食管贲门癌组织中MRP与P-gp的表达无相关性(rs=0.173,P＞0.05).结论:食管癌的多药耐药与MRP有关;而贲门癌的多药耐药则为P-gp和MRP共同参与.P-gp和MRP可反映食管贲门癌的分化程度,但不能反映其浸润和转移等生物学特征.     

脑栓通对脑缺血再灌注大鼠神经血管单元的保护作用

目的：观察中药脑栓通对脑缺血再灌注大鼠神经血管单元主要成分神经元、星形胶质细胞以及脑血管内皮细胞的保护作用。方法：30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和1g/（kg·d）脑栓通组。采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血损伤模型,1.5h后拔出线栓实施再灌注。再灌注24h时后进行大鼠神经功能缺损评分,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷原位末端标记法结合神经元核抗原、胶质纤维酸性蛋白及CD31免疫荧光双染检测缺血再灌注24h时缺血灶周边的神经元、星形胶质细胞以及脑血管内皮细胞的凋亡情况。结果：脑栓通能显著改善脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损,减少缺血灶周边星形胶质细胞、脑血管内皮细胞和神经元的凋亡。结论：脑栓通通过保护脑缺血再灌注后大鼠的神经血管单元促进神经功能的改善。