RNA结合蛋白Mbnl1调控小鼠胚胎造血干细胞发育功能的研究

目的:分析小鼠胚胎造血干细胞(HSC)发育全程的单细胞RNA结合蛋白(RBPs)动态分子表达特征,筛选获得功能研究靶标RNA剪接因子——Mbnl1,并阐明Mbnl1参与调控小鼠胚胎HSC发育的功能.方法:生物信息学深入分析小鼠胚胎HSC发育全程的单细胞转录组数据,获得HSC发育全程的单细胞RBP动态分子表达图谱.结合差...     

不同临床分期宫颈癌患者血清细胞间黏附因子-1、 人多梳蛋白2水平变化与其疾病转归的关联性分析

目的:研究不同临床分期宫颈癌患者血清细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、 人多梳蛋白2(HPC2)水平变化及与其疾病转归关联性.方法:选取2018年3月～2019年3月我院宫颈癌患者114例,均检测其血清ICAM-1、HPC2水平,比较治疗前宫颈癌不同临床分期与治疗后进展、 无进展患者血清ICAM-1、HPC2水平,分...     

小鼠骨髓间充质干细胞中RUNX1对WNT5A基因转录活性的调控

本研究旨在探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)中转录因子RUNX1对WNT5A转录活性的调控,探索骨髓造血微环境对造血干细胞调控的机制。体外分离、培养、鉴定小鼠骨髓MSC;利用RT-PCR方法检测小鼠骨髓MSC中RUNX1的表达;利用染色质免疫共沉淀研究RUNX1与WNT5A启动子之间的直接相互作用;利用逆转录病毒表达系统将RUNX1导入小鼠间充质干细胞中,用RT-PCR的方法检测基因的表达,研究RUNX1对WNT5A的转录调节作用。结果发现:体外分离培养得到的MSC经脂肪、成骨、软骨诱导后,分别用油红O、von Kossa、甲苯胺蓝染色呈阳性。RUNX1表达于小鼠骨髓来源MSC中,RUNX1能与WNT5A启动子直接结合,并对WNT5A具有转录激活作用。结论:小鼠骨髓MSC中表达RUNX1,WNT5A是RUNX1的一个下游靶基因,其转录活性受RUNX1调控。     

钙黏蛋白11和核心结合因子α1双基因修饰人骨髓间充质干细胞

背景:钙黏蛋白11对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,可促进细胞的黏附性能.利用核心结合因子α1对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,有望实现多能干细胞的成骨定向分化,并在诱导成骨分化的级联效应中发挥重要的信号作用.目的:拟采用腺病毒为载体,介导钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因修饰骨髓间充质干细胞,观察两基因的表达情况.设计、时间及地点;细胞-基因学实验,于2008-08在珠江医院中心实验室完成.材料:人骨髓间充质干细胞来源于1例胸椎骨折男性患者,由珠江医院提供,患者对实验知情同意.钙黏蛋白11全长cDNA质粒由日本神户理研Riken分子生物中心Takeichi教授惠赠,全长核心结合因子α1基因质粒由美国Baylor医学院Ducy博士提供,pAdeasy腺病毒系统由美国约翰霍普金斯遗传所Bert博士馈赠.方法:Percoll密度梯度离心+贴壁法分离培养人骨髓间充质干细胞.利用PCR技术获得钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因,分别构建到腺病毒穿梭载体上,然后分别通过同源重组获得重组腺病毒质粒,再将两病毒质粒包装获得重组病毒液,最后通过病毒将两基因导入骨髓间充质干细胞.主要观察指标:Western blot法检测钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因在入骨髓间充质干细胞中的表达.结果:获得携带钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因的病毒液,将其感染人骨髓间充质干细胞后,以Wastern blot检测两种基因同时获得高表达.结论:实验成功构建钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因腺病毒载体,通过病毒转染入骨髓间充质干细胞,二者获得高效表达.     

X盒结合蛋白1转染神经干细胞移植帕金森大鼠黑质中相关递质及核蛋白的表达

背景：既往研究发现,X盒结合蛋白1基因可以转染至神经干细胞中并稳定过表达X盒结合蛋白1,转染后的神经干细胞移植对脑梗死的治疗作用优于普通神经干细胞。目的：通过测定转染后神经干细胞移植对帕金森大鼠模型黑质内单胺类递质和α-突触核蛋白水平的影响,研究转染后的神经干细胞移植对帕金森病的治疗作用。方法：将27只帕金森病大鼠随机数字表法均分为3组。对照组侧脑室内移植PBS,神经干细胞组移植空白神经干细胞悬液,转染组移植X盒结合蛋白1基因修饰神经干细胞悬液。分别于移植后7,14,21,28d对各组大鼠进行诱导旋转实验观察神经功能：Westernblot检测α-突触核蛋白水平;黑质切片后免疫组化染色测酪氨酸羟化酶（＋）神经细胞。结果与结论：转染组大鼠黑质内α-突触核蛋白表达量降低,酪氨酸羟化酶（＋）神经细胞数高于神经干细胞组和对照组,且大鼠旋转实验中旋转行为改善。表明在帕金森病中,X盒结合蛋白1转染的神经干细胞分化为多巴胺能神经元的分化率高,转染后可降低α-突触核蛋白的聚集,从而改善帕金森症状起到治疗目的。     

浙江省义乌市一例输入性登革热的病毒分离及全基因组序列分析

目的调查浙江省义乌市2013年1例输入性登革热病例的分子流行病学特点。方法采集患者血清标本,采用酯酶联免疫吸附试验和实时荧光定量聚合酶链反应分别检测登革病毒IgM抗体和核酸。用C6/36细胞分离病毒和全基因组测序及分析。结果从来自安哥拉的1例登革热患者血清中检测到登革病毒IgM抗体和1型登革病毒核酸,并分离到1株病毒(Zj/yw01)。经序列测定,该病毒基因组全长10 141 bp(GenBank no.KF864667),进化树显示该病毒为登革1型病毒Ⅴ亚型,与安哥拉分离株(KF184957)同源性最高。结论分子生物学证实该病例为来自安哥拉的输入性病例。     

叉头转录因子-1在神经系统疾病的相关研究

叉头（FOx）转录因子是2000年命名的一个新的蛋白质家族,其中研究最深入的是。亚家族（FoxO）。FoxO是长寿基因DAF．16（DauerFormation-16）在哺乳动物中最相近的同源基因,而DAF．16最早发现于秀丽隐形线虫。FoxO蛋白因其特色的“又头框”DNA结合结构域而命名。     

人胰岛素生长样因子-1诱导和多聚蛋白聚糖酶-1沉默对人骨髓干细胞微丝结构的影响

目的探讨人胰岛素生长样因子-1(h IGF-1)诱导和多聚蛋白聚糖酶-1(aggrecanse-1)沉默对人骨髓干细胞微丝结构的影响。方法用基因重组技术构建携带h IGF-1过表达和沉默aggrecanase-1-si RNA的慢病毒载体,用其转染人骨髓干细胞,记为基因诱导组、基因沉默组、基因诱导沉默组,以不携带目的基因的慢病毒转染人骨髓干细胞和未处理的人骨髓干细胞分别记为对照组1、对照组2,转染7 d后PCR检测基因表达,同时激光共聚焦显微镜下观察各组细胞的微丝结构,并用Image J检测各组细胞的荧光强度。用SPSS软件进行统计学分析。结果基因诱导沉默组的荧光强度(0.119±0.008)高于基因诱导组(0.081±0.001)和基因沉默组(0.080±0.003),基因诱导组和基因沉默组的荧光强度高于对照组1(0.065±0.003)和对照组2(0.066±0.005),差异有统计学意义(P<0.01)。对照组1和对照组2的荧光强度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 h IGF-1的诱导和aggrecanse-1的沉默均促进骨髓干细胞微丝结构的生成,诱导沉默双向作用更显著。     

端粒结合蛋白TRF1和TANK1在急性白血病细胞中的表达及与端粒酶活性关系的研究

多种研究显示，白血病与端粒酶活性密切相关。在白血病细胞中发现有端粒长度不同程度的缩短伴有端粒酶活性增高。但是端粒酶活性增高的机制尚不清楚。已知端粒酶活性受多种途径调控，其中端粒结合蛋白是近年来发现的一个新的调控途径。TRF1（Telomere repeat binding factor 1）和TANK1（TRF1 interacting ankyrin-related ADP—ribose polymerase 1）是两个重要的端粒结合蛋白，它们是一对正向和负向的端粒酶活性调控因子。TRF1通过负反馈调控端粒酶活性而保持端粒长度。TANK1通过其多ADP核糖聚合酶（PARP）活性使TRF1聚ADP核糖化，减弱TRF1与端粒的结合，从而发挥正向调控作用。     

GATA结合蛋白1的造血调控功能及其突变导致的红系/巨核系相关遗传病

GATA结合蛋白1(GATA1)是1个重要的造血谱系转录因子,在转录水平上特异性调控红系和巨核系细胞的增殖和分化,以此维持这2个系细胞的正常发育成熟。GATA1的功能结构由1个N端转录激活域(N-TAD)和2个锌指结构(NF与CF)构成。GATA1的蛋白序列在不同物种中高度保守,其改变将导致红系和巨核系相关基因转录失调,从而产生程度不一的临床表型。本文从GATA1的分子结构、在红系和巨核系细胞中的造血调控功能以及突变导致的遗传性红系/巨核系造血调控紊乱等方面予以综述。     

MRI诊断异基因造血干细胞移植后神经系统并发症

目的 探讨异基因造血干细胞移植后中枢神经系统并发症的类型及其MRI表现。方法 回顾性分析22例异基因造血干细胞移植后中枢神经系统并发症患者的临床及影像学资料,分析其并发症类型及相应MRI表现。结果 颅内感染8例,包括真菌感染5例,颅内单发或多发结节状异常信号伴环形强化;病毒感染3例,为多发斑片状T2WI及FLAIR高信号。移植后淋巴细胞增殖性疾病1例,右侧额叶出血性占位伴不均匀强化。脑血管病6例,包括硬膜下出血2例,表现为单侧或双侧硬膜下新月状T1WI、T2WI混杂信号;脑梗死4例,表现为单发或多发片状T1WI低信号、T2WI高信号,DWI呈高信号。可逆性后部脑病综合征5例,MRI示双侧顶枕叶为主的皮层下FLAIR高信号。中枢神经系统白血病2例,其中软脑膜浸润1例,软脑膜呈FLAIR稍高信号,增强后明显强化;脑实质浸润1例,左侧小脑斑片状T1WI等信号、T2WI稍高信号,增强后明显强化。结论 异基因造血干细胞移植后中枢神经系统并发症类型多样;MRI对早期诊断、及时治疗及评估疗效有重要价值。     

自体造血干细胞移植治疗原发中枢神经系统淋巴瘤

原发中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)由于发生率较低,不少医生对整体治疗流程中自体造血干细胞移植(ASCT)的作用还不甚了解。大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)为基础的诱导治疗使得PCNSL的早期控制率明显提高,但不少患者缓解深度不够,国际上大型临床研究提示完全缓解(CR)率多低于50%;缓解维持时间短,多在1年内复发。ASCT作为巩固治疗措施应用于初治或复发难治PCNSL使得CR率明显提高,长期无病生存率(PFS)显著提高;初治PCNSL患者长期PFS可达70%,复发难治PCNSL患者长期PFS可达50%。目前的临床实践证实,PCNSL多见于老年人,器官功能状态良好的老年PCNSL患者仍然可以耐受ASCT,并明显获益于ASCT。PCNSL的ASCT预处理方案以含大剂量塞替派的方案为佳,年轻、身体转态较好、前期诱导治疗未获得CR的患者,以预处理强度更强的TBC方案为佳;年龄偏大的患者可以选择TT-BCNU或减量的TBC预处理方案。     

自体造血干细胞移植治疗原发中枢神经系统淋巴瘤2例并文献复习

目的探讨自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation,ASCT)治疗原发中枢神经系统淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma,PCNSL)疗效和预后。方法回顾性分析我中心2例PCNSL临床资料,病理类型均为弥漫大B细胞淋巴瘤。经含甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)的方案或大剂量MTX(3g/m2)化疗4~5周期,每周期化疗期间给予2次腰椎穿刺+鞘内注射,疾病状态达到完全缓解,后进行大剂量化疗联合自体造血干细胞移植(high-dose chemotherapy with autologous stem cell transplantation,HDC/ASCT)巩固治疗。患者1预处理方案为美罗华联合卡氮芥+依托泊苷+阿糖胞苷+注射用美法仑(马法兰)(BEAM),患者2预处理方案为马利兰+噻替哌(TB)。患者1移植后给予腰椎穿刺+鞘注维持治疗,患者2未接受维持治疗。结果患者1移植后无事件生存4年;患者2移植后2年出现疾病复发,再次给予大剂量MTX等治疗,疗效不佳,半年后死亡。结论PCNSL患者经大剂量MTX化疗达到完全缓解后,行自体造血干细胞移植巩固治疗,有机会获得长期无病生存;但PCNSL预后差,最好进行移植后维持治疗。     

脑脊液途径移植神经干细胞治疗中枢神经系统疾病的研究现状简

背景：目前报道的用于神经干细胞移植的途径主要有经局部病变部位途径、经血液循环途径及经脑脊液循环途径3种目的：综述经脑脊液途径移植神经干细胞或神经前体细胞的方式及其在治疗中枢神经系统疾病中的应用。 方法：检索Pubmed数据库和CHKD全文数据库2000至2009年相关文献,叙述脑脊液途径移植神经干细胞的方法、在动物实验和临床方面治疗中枢神经系统疾病的应用及治疗机制。结果与结论：脑脊液适宜神经干细胞的存活、增殖、分化,经脑脊液途径移植神经干细胞治疗中枢神经系统疾病是一种有效可行的方法。但因神经干细胞的来源问题及治疗的机制、最佳时间窗和数量、安全性等诸多问题,仍需更深更广的研究,从而为蛛网膜下腔注射神经干细胞治疗中枢神经系统疾病奠定坚实的基础。     

The stem cell system

The stem cell is defined as that cell in a tissue which, under normal circumstances, maintains its own population, undiminished in function and size, and furnishes daughters to provide new functional cells of that tissue. The daughters may, or may not, have to undergo further differentiation and/or maturation in order to achieve their functional stage. The fundamental characteristic of a stem cell, therefore, is self-renewal. Evidence is presented which implicates the microenvironment as a major component of the stem cell system, without which stem cells cannot be maintained. Furthermore, it is suggested that stem cell properties do not reside in one specific cell type in the population but, when necessary, cells other than those normally playing the stem cell role, can have stem cell function imposed upon them by the appropriate microenvironment. The stem cell "niche" hypothesis is presented to explain the dependence of stem cells upon their microenvironment. The postulate is offered that there are no cells which are intrinsically stem cells but that a range of cells in a tissue possess stem cell potential to a greater or lesser extent.     

Neural stem cells in the adult nervous system

The concept of the immutability of the nervous tissue has recently been replaced with the new idea that a continuous neurogenic turnover does occur in some limited areas of the central nervous system (CNS). At least two neurogenic regions of the adult mammalian CNS are involved in this process: the subventricular zone of the forebrain and the dentate gyrus of the hippocampus, which are considered to be a reservoir of new neural cells. Neural stem cells (NSCs) are multipotential progenitors that have self-renewal capability. While in vivo endogenous NSCs seem able to produce almost exclusively neurons, a single NSC in vitro is competent to generate neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. NSCs lack a specific morphology and unambiguous surface markers that could allow their identification. For this reason, one of the major difficulties in identifying stem cells is that they are defined in terms of their functional capabilities, the determination of which might alter the cells' nature. The purpose of this review is to describe the characteristics of the NSCs of the adult mammalian CNS, their potentiality in terms of proliferation and differentiation capabilities, as well as their stability in long-term culture, all attributes that make them a good tool for tissue replacement therapies.     

Predominance of delta-opioid-binding sites in the porcine enteric nervous system

The antidiarrheal and constipating actions of opioids are mediated in part by enteric neurons, which lie within the wall of the small intestine and colon, but the differential expression of specific, high-affinity opioid-binding sites in ganglionated plexuses within functionally distinct intestinal segments has not been examined. We determined the saturation binding characteristics under Na+-free conditions of the nonselective opioid receptor (OPR) ligand [3H][(5alpha,7alpha)-17-(cyclopropylmethyl)-4,5-epoxy-18,19-dihydro-3-hydroxy-6-methoxy-alpha, alpha-dimethyl-6,14-ethenomorphinan-7-methanol] (diprenorphine) and the respective delta-, kappa-, and mu-OPR ligands [3H]naltrindole, D-(5alpha,7alpha,8beta)-(-)-N-methyl-N-[7-(1-pyrrolidinyl)-1-oxoaspiro-(4,5)dec-8-yl]benzeneacetamide ([3H]U-69,593), and [3H][D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin (DAMGO) in neuronal membranes isolated from myenteric and submucosal plexuses of porcine small intestine and colon. Naloxone-displaceable [3H]diprenorphine-binding sites (KD values ranging from 0.2-0.5 nM and Bmax = 50-95 fmol/mg of protein) were found in both subregions from all gut segments examined. High-affinity [3H]naltrindole sites (KD = 60-140 pmol) were at highest densities (approximately 60 fmol/mg of protein) in submucosal plexus of the ileum and distal colon myenteric plexus and were at lowest densities (8-9 fmol/mg of protein) in the submucosal plexuses of cecum and distal colon. [3H]U-69,593 sites (KD = 0.3-4 nM) were present only in the myenteric plexuses of all segments examined, with highest densities in cecum and proximal colon (44-47 fmol/mg of protein). [3H]DAMGO-binding sites were expressed at relatively low densities in the enteric plexuses of all gut regions. These results indicate that delta-OPRs predominate in the porcine enteric nervous system with a more circumscribed expression of kappa- and mu-OPRs.     

神经干细胞在神经系统疾病中的应用

背景:神经干细胞的临床应用与基因治疗的有机结合可用于治疗多种神经系统遗传性和获得性疾病,但神经系统疾病多种多样,不同疾病神经组织内环境也不同,它们均影响神经干细胞的治疗效果.神经干细胞基因治疗中,如能同时转入多种外源性基因,让其相互作用及调节,就能更有效地促进神经组织不断再生.目的:文章就神经干细胞在神经系统疾病方面的应用进行综述.方法:应用计算机检索Medline数据库(2000-01/2009-08),以"Neural stem cells,Gene,Nervous system diseases"为检索词;应用计算机检索清华同方数据库(2000-01/2009-08),以"神经干细胞、基因、神经系统疾病"为检索词.结果与结论:计算机初检得到88篇英文文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关的20篇,内容重复性的研究28篇,共保留40篇文献进行综述.神经干细胞作为一种新型的治疗手段,已用作供体细胞或转基因载体,对脑血管病、脑损伤性疾病、脊髓损伤、神经变性病、脑肿瘤、遗传代谢性疾病等治疗均取得了一定效果,但神经干细胞增殖、分化、迁移调控机制的基础性研究还有许多关键问题没有解决,不同疾病神经组织内的微环境亦影响着神经干细胞的治疗.     

Nitric oxide is a regulator of hematopoietic stem cell activity.

Hematopoietic stem cells give rise to various multipotent progenitor populations, which expand in response to cytokines and which ultimately generate all of the elements of the blood. Here we show that it is possible to increase the number of stem and progenitor cells in the bone marrow (BM) by suppressing the activity of NO synthases (NOS). Exposure of mice to NOS inhibitors, either directly or after irradiation and BM transplantation, increases the number of stem cells in the BM. In the transplantation model, this increase is followed by a transient increase in the number of neutrophils in the peripheral blood. Thus, our results indicate that NO is important for the control of hematopoietic stem cells in the BM. They further suggest that suppression of NO synthase activity may allow expansion of the number of hematopoietic stem and progenitor cells or neutrophils for therapeutic purposes.     

神经系统疾病的干细胞治疗

背景：干细胞具有自我更新和多向分化的生物学特性,在生理或病理情况下能维持组织器官内环境的稳定,近年被广泛用于再生医学的研究。目的：对神经系统疾病的干细胞治疗进展进行综述。方法：通过Pubmed数据库检索有关干细胞治疗神经系统疾病的相关文献。检索词为＂stemcells、Nervous system diseases、therapy＂。初检得到298篇文献,最终保留54篇符合标准的文献进行分析。结果与结论：经过近些年的研究,干细胞被认为是神经损伤和变性疾病的一个很有前景的治疗手段。通过干细胞的移植,取代受损的神经细胞,促进受损神经网络的恢复从而重建神经功能。