骨髓间充质干细胞移植大鼠脊髓损伤区脑源性神经营养因子的表达

目的：观察脊髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子表达的影响。 方法：实验于2002-06／2003-06在中国医科大学实验动物中心完成。选取3月龄Wistar大鼠64只，随机选4只大鼠取股骨骨髓作骨髓间充质细胞的分离与培养，经过培养、鉴定及传代。其余60只大鼠分成3组制作脊髓横断损伤模型。细胞移植24只，磷酸盐缓冲液组24只，空白对照12只。脊髓损伤后第7天，在无菌条件下，细胞移植组以微量注射器缓慢注入含骨髓间充质干细胞（106／mL）的培养液5μL，磷酸盐缓冲液组注射注入等量磷酸盐缓冲液5μL，对照组未制作脊髓损伤。分别于术后7d、14d、28d麻醉下行心脏灌流固定取T10节段脊髓，细胞移植组与磷酸盐缓冲液组取出损伤节段的脊髓（8只／时点），空白对照组于同一节段取出相应脊髓（4只／时点）。应用免疫组化法观察间充质干细胞移植后，大鼠脊髓损伤区脑源性神经营养因子的表达变化。 结果：所有实验动物均全部进入结果分析，术后感染5只，均予补足。①原代问充质干细胞培养：细胞接种24h后贴壁生长，72h细胞增殖，有细胞团形成，在传代过程中，4代以前的细胞倍增时间为4-6d，至10代以后细胞增殖能力有所减弱，胞体变得扁平，若加入碱性成纤维细胞生长因子．则可维持其增殖能力和形态。②脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达，移植术后第7天，第14天及第28天，细胞移植组脑源性神经营养因子均高水平表达，与磷酸缓冲液组相比较差别明显。 结论：骨髓间充质干细胞移植后可能通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进脊髓损伤区神经元轴突的再生。     

骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠脑源性神经营养因子表达的影响

背景:近年来关于骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤修复方面的研究较多,但目前相关机制尚不清楚.目的:观察间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2003-04/07在中国医科大学神经解剖学实验室完成.材料:选取鼠龄3个月的SD大鼠64只,雌雄不拘,体质量250～300 g,随机抽取4只大鼠用于骨髓间充质干细胞的分离与培养,其余60只用于制备脊髓横断损伤模型.方法:60只大鼠随机抽签法分为3组,细胞移植组(n=24):脊髓损伤后第7天,无菌条件下以微量注射缓慢注入含骨髓间充质干细胞(1×109L-1)的培养液5μL至脊髓损伤区;PBS组(n=24):注入等量(5μL)磷酸盐缓冲液体;空白对照组(n=12):注入生理盐水5μL.主要观察指标:分别于造模后7,14,28 d取材,观察骨髓间充质干细胞的形态变化;免疫组织化学法检测间充质干细胞移植后大鼠脊髓损伤区脑源性神经营养因子的表达.结果:60只SD大鼠均进入结果分析.10代以后细胞增殖能力有所减弱,胞体变得扁平,若加入碱性成纤维细胞生长因子,则可维持其增殖能力和形态.大鼠脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达,细胞移植后第7,14,28天,细胞移植组脑源性神经营养因子表达均高于PBS组和空白对照组(P＜0.05);空白对照组与PBS组脑源性神经营养因子表达无明显差异(P＞0.05).结论:骨髓间充质干细胞在移植后通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进轴突的再生,可能是治疗脊髓损伤的重要机制.     

大鼠脊髓半横断损伤后神经生长因子、脑源性神经营养因子及神经营养因子3的表达变化

目的：观察脊髓半横断损伤后早期不同时间神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3的表达变化。方法：实验于2005-07／12在解放军总医院神经外科实验室完成。取成年清洁级雄性SD大鼠，体质量（250&;#177;20）g。将24只SD大鼠按双盲法随机分为2组，对照组6只，仅进行至椎板切除，即行切口关闭，不损伤脊髓。损伤组18只，3％戊巴比妥钠腹腔麻醉后，T10处椎板切开后，在T9～T10间用虹膜刀片横断半侧脊髓。同侧后肢呈现软瘫，刺激无反应后，关闭切口。分别于伤后3，7，21d不同时间点取材，每个时间点6只。取损伤位点尾侧段T10节段制作冰冻切片，运用神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3兔抗血清以免疫组化ABC法染色。观察并计数脊髓半横断损伤后尾侧端腹角神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3的阳性神经元数。组间比较均采用q检验。结果：①神经生长因子、脑源性神经营养因子主要分布于正常大鼠脊髓腹角神经元细胞浆，神经营养因子3分布于脊髓腹角神经元细胞核、胞浆。②损伤后3，7，21d腹角脑源性神经营养因子和神经营养因子3阳性神经元数均较对照组明显增加[（15．48&;#177;3．20）。（12．59&;#177;2．03），（11．33&;#177;1．92），（7．31&;#177;1．54）；（16．73&;#177;3．30），（11．15&;#177;2．85）。（13．20&;#177;3．39）。（6．00&;#177;1．50），（P〈0．01）1，术后3d时达高峰，随伤后时间的延长进行性减少。⑧损伤后3，7，21d神经生长因子阳性神经元数较对照组明显增加[（10．63&;#177;2．90），（14．07&;#177;2．37），（9．35&;#177;3．50），（4．00&;#177;0．63）。（P〈0．01）]，术后7d时达高峰，3d与21d比较差异无显著性意义。结论：脊髓半横断损伤后神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3表达明显增加，提示它们可能在脊髓半横断损伤早期修复中发挥作用。     

脑源性神经生长因子抗体对小鼠坐骨神经损伤后脊髓与背根节内Synaptophysin表达的影响

目的 探查小鼠坐骨神经压榨损伤后内源性脑源性神经营养因子(brain derived neuroliophic factor,BDNF)对Synaptophysin(SYN)在相应脊髓前角运动细胞与背根节神经元内表达的影响。方法 在小鼠一侧坐骨神经压榨损伤后腹腔注射BDNF抗体，中和内源性BDNF，然后用免疫组织化学方法观察SYN在与坐骨神经相连的脊髓前角运动细胞与背根节神经元的表达。结果 实验组SYN免疫反应阳性神经元的数目较对照组明显减少，阳性细胞的平均光密度也显著下降（P＜0.01)。结论 小鼠坐骨神经压榨损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角运动细胞与背根节神经元内SYN的表达。     

大鼠脊髓半横断损伤后神经生长因子、脑源性神经营养因子及神经营养因子3的表达变化

目的:观察脊髓半横断损伤后早期不同时间神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3的表达变化。方法:实验于2005-07/12在解放军总医院神经外科实验室完成。取成年清洁级雄性SD大鼠,体质量(250±20)g。将24只SD大鼠按双盲法随机分为2组,对照组6只,仅进行至椎板切除,即行切口关闭,不损伤脊髓。损伤组18只,3%戊巴比妥钠腹腔麻醉后,T10处椎板切开后,在T9～T10间用虹膜刀片横断半侧脊髓。同侧后肢呈现软瘫,刺激无反应后,关闭切口。分别于伤后3,7,21d不同时间点取材,每个时间点6只。取损伤位点尾侧段T10节段制作冰冻切片,运用神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3兔抗血清以免疫组化ABC法染色。观察并计数脊髓半横断损伤后尾侧端腹角神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3的阳性神经元数。组间比较均采用q检验。结果:①神经生长因子、脑源性神经营养因子主要分布于正常大鼠脊髓腹角神经元细胞浆,神经营养因子3分布于脊髓腹角神经元细胞核、胞浆。②损伤后3,7,21d腹角脑源性神经营养因子和神经营养因子3阳性神经元数均较对照组明显增加[(15.48±3.20),(12.59±2.03),(11.33±1.92),(7.31±1.54);(16.73±3.30),(11.15±2.85),(13.20±3.39),(6.00±1.50),(P<0.01)],术后3d时达高峰,随伤后时间的延长进行性减少。③损伤后3,7,21d神经生长因子阳性神经元数较对照组明显增加[(10.63±2.90),(14.07±2.37),(9.35±3.50),(4.00±0.63),(P<0.01)],术后7d时达高峰,3d与21d比较差异无显著性意义。结论:脊髓半横断损伤后神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3表达明显增加,提示它们可能在脊髓半横断损伤早期修复中发挥作用。     

电针刺激干预脊髓损伤大鼠c-fos基因和脑源性神经营养因子mRNA的表达

目的：通过对参与脊髓损伤过程的c-fos基因及脑源件神经营养因子不同时间点mRNA阳性细胞数的结果观察，探讨电针对脊髓损伤的影响，并以地塞米松做标准对照。方法：实验于2003-12／2004-06在哈尔滨医科大学实验中心完成。以72只Wistar大鼠为观察对象，将其分为4组，模型对照组（12只）、电针组（24只）、地塞米松组（24只）及假手术组（12只）。假手术组仅切除椎板，不损伤脊髓。其余3组用改良的Allen’s撞击法致大鼠T10脊髓损伤。电针组将大鼠置于特制治疗台上，建立四肢固定状态下的大鼠电针模型。在距损伤处上下端两个椎体的棘突间隙距中线旁开3．0～4．0mm处取穴，用30号1寸毫针垂直刺入4．0～5.0mm，使针尖触及椎板，正、负极导线分别夹在头、尾两侧的毫针针柄上（正极在上，负极在下）。电针组于造模成功后30min进行夹脊电针连续脉冲电流，频率1Hz，电压0．5V，输出强度是以背部肌肉出现轻微抽动为度。6h后进行第2次治疗，以后1次/d，20min／次。地塞米松组于造模成功后5min开始皮下给予地塞米松5mg／kg治疗。模型对照组不给予治疗。应用原位杂交方法及Motic Imnages Advanced 3．0图像定最分析法观察脊髓损伤后1，3，7，14d时各组c-fos基因mRNA和脑源性神经营养因子mRNA的表达变化。结果：72只Wistar大鼠均进入结果分析。①c-fos基因mRNA的表达：在脊髓损伤后1d时地塞米松组和电针组均明显低于模型对照组（57．8&;#177;6．4，65．4&;#177;59，81．6&;#177;4．2，P〈0．05）；14d时地塞米松组和电针组均明显高于模型对照组（68.2&;#177;4．5，73.3&;#177;7．0，61．4&;#177;5．4，P〈0．05），而电针组的表达又明显高于地塞米松组（P〈0．05）。②脑源性神经营养冈子mRNA的表达：有逐渐增高趋势，电针组、地塞米松组明显高于模型对照组（P〈0．05），且在7d和14d时电针组表达明显高于地塞米松组（141.1&;#177;10．3，107．4&;#177;8．3；103．0&;#177;9．3，782&;#177;7．9，P〈0．05）。结论：大鼠脊髓损伤后早期c-fos基因mRNA表达增强，后期表达减弱。腑源性神经营养因子mRNA的表达不断增加。说明电针组干预早期能抑制c-fos基因mRNA表达，后期町升高其表达，减少脊髓的继发性损伤，并能上调腩源性神经营养因子mRNA表达，促进脊髓神经的再生及修复，电针组丁预后1周和2周时表现出的效果优于地塞米松组。     

骨髓间充质干细胞尾静脉移植脊髓损伤大鼠脑源性神经营养因子及神经生长因子的表达

背景：骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤有治疗作用,但其机制尚不完全清楚。目的：应用免疫组织化学方法观察骨髓间充质干细胞静脉移植损伤脊髓局部脑源性神经营养因子及神经生长因子的表达,分析骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的作用途径。方法：运用改良Allen法制备T10脊髓外伤性截瘫大鼠模型,假手术组6只,脊髓损伤组24只随机分为对照组和骨髓间充质干细胞移植组。骨髓间充质干细胞移植组、假手术组接受骨髓间充质干细胞单细胞悬液1mL（1×10^6cells）自大鼠尾静脉缓慢注射移植,对照组静脉注射PBS1mL。结果与结论：脊髓损伤后损伤局部的脑源性神经营养因子、神经生长因子表达增加,骨髓间充质干细胞静脉注射移植后能促进脊髓损伤局部脑源性神经营养因子、神经生长因子更进一步的表达,这可能是促进神经结构及神经功能恢复的因素之一。     

骨髓间充质干细胞尾静脉移植脊髓损伤大鼠脑源性神经营养因子及神经生长因子的表达

背景:骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤有治疗作用,但其机制尚不完全清楚。目的:应用免疫组织化学方法观察骨髓间充质干细胞静脉移植损伤脊髓局部脑源性神经营养因子及神经生长因子的表达,分析骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的作用途径。方法:运用改良Allen法制备T10脊髓外伤性截瘫大鼠模型,假手术组6只,脊髓损伤组24只随机分为对照组和骨髓间充质干细胞移植组。骨髓间充质干细胞移植组、假手术组接受骨髓间充质干细胞单细胞悬液1mL(1×106cells)自大鼠尾静脉缓慢注射移植,对照组静脉注射PBS1mL。结果与结论:脊髓损伤后损伤局部的脑源性神经营养因子、神经生长因子表达增加,骨髓间充质干细胞静脉注射移植后能促进脊髓损伤局部脑源性神经营养因子、神经生长因子更进一步的表达,这可能是促进神经结构及神经功能恢复的因素之一。     

嗅鞘细胞移植对脊髓慢性压迫形态和脑源性神经营养因子表达的影响

背景：嗅鞘细胞是介于星形胶质细胞和许旺细胞之间的一类特殊的胶质细胞，具有切实有效的促进神经再生修复的作用，但其相关机制还没确定。目的：观察嗅球成鞘细胞移植对脊髓慢性压迫损伤后脊髓功能形态和脑源性神经营养因子的影响，以及嗅鞘细胞移植后脊髓慢性压迫损伤动物脊髓功能的修复。设计、时间及地点：对照动物实验，细胞学观察，于2005—11／2007—03在上海中医药大学脊柱病研究所完成。材料：新生SD雄性大鼠采用酶消化法培养原代大鼠嗅鞘细胞，并将其制成细胞悬液。雄性3月龄SD大鼠以螺钉持续性压迫大鼠C4脊髓建立脊髓慢性压迫动物模型。方法：造模后大鼠分为模型组、嗅鞘细胞组、DMEM/Ham’s F-12培养液组、正常组，每组12只。嗅鞘细胞组在距离脊髓压迫区域上下0．5mm处选4点注射，按1μL／点脊髓内注射10^9L^-1嗅鞘细胞，注入速度为1μL/min。主要观察指标：应用光学显微镜、电子显微镜观察脊髓形态的变化，采用免疫组织化学、PT—PCR的方法检测脊髓组织脑源性神经营养因子的分泌，以改良的Gale联合行为评分法对脊髓功能进行评定，结果：免疫组织化学检测显示，嗅鞘细胞移植能部分改善大鼠脊髓灰质神经细胞的凋亡程度，延缓白质神经纤维的减少，促进髓鞘的修复与再生。与模型组、DMEM／Ham’s F-12培养液组比较，嗅鞘细胞移植治疗后脊髓组织中脑源性神经营养因子表达明显增加（p〈0．01）。与模型组、DMEM／Ham’s F-12培养液组比较，嗅鞘细胞移植能较大程度的改善大鼠脊髓功能（P〈0．05）。结论：嗅鞘移植能够部分改善脊髓损伤后脊髓组织的病理形态，促进脊髓组织中脑源性神经营养因子的表达，减轻脊髓慢性压迫后的功能损害。     

脑源性神经生长因子抗体对小鼠坐骨神经损伤后脊髓与背根节内Synaptophysin表达的影响

目的探查小鼠坐骨神经压榨损伤后内源性脑源性神经营养因子(brainderivedneuroliophicfactor,BDNF)对Synaptophysin(SYN)在相应脊髓前角运动细胞与背根节神经元内表达的影响。方法在小鼠一侧坐骨神经压榨损伤后腹腔注射BDNF抗体,中和内源性BDNF,然后用免疫组织化学方法观察SYN在与坐骨神经相连的脊髓前角运动细胞与背根节神经元的表达。结果实验组SYN免疫反应阳性神经元的数目较对照组明显减少,阳性细胞的平均光密度也显著下降(P<0.01)。结论小鼠坐骨神经压榨损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角运动细胞与背根节神经元内SYN的表达。     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间充质干细胞治疗坐骨神经损伤

背景:对周围神经损伤的治疗,目前希望能提高损伤局部的脑源性神经营养因子浓度来促进神经的修复再生.目的:观察坐骨神经损伤大鼠体内植入脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞后神经纤维的再通及运动功能的恢复情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-05/2008-05在福建省神经病学研究所完成.材料:无菌条件下取2月龄F344雄性大鼠股骨、胫骨制备骨髓间充质干细胞.利用构建好的慢病毒载体PNL-BDNF-IRES2-EGFP制备脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞.方法:将60只成年SD大鼠经钳夹制作成右坐骨神经损伤模型,随机分为磷酸盐缓冲液组,骨髓间质干细胞组,脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组.在损伤处分别注射磷酸盐缓冲液2 μ L,骨髓间质干细胞混悬液2 μ L和脑源性神绛营养因子基因修饰骨髓间质干细胞混悬液2 μL.主要观察指标:在术后2,4周,通过辣根过氧化物酶示踪观察损伤侧L4,5脊髓前角存活的神经细胞数目,通过测量坐骨神经功能指数值观察大鼠损伤侧肢体运动功能恢复情况,同时应用荧光激发及免疫组化技术检测骨髓间质干细胞存活和脑源性神经营养因子表达情况.结果:脑源性神终营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组损伤侧L4,5脊髓前角细胞的存活数目多于磷酸盐缓冲液组和骨髓间质干细胞组,并且神经功能恢复也比其他两组好.骨髓间质干细胞组和脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组可观察到神经损伤处有较多的骨髓间质干细胞存活,并且脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组脑源性神经营养因子表达明显比骨髓间质干细胞组多.结论:脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞对周围神经损伤后神经纤维的再通及功能恢复有促进作用.     

电针对坐骨神经损伤大鼠背根节胶质源性神经营养因子表达的影响

目的:探讨电针对大鼠坐骨神经损伤后相应背根节神经胶质细胞源性神经营养因子(glialcelllinederivedneurotrophicfactor,GDNF)表达的影响,以探讨电针对周围神经损伤的保护作用。方法:Wistar大鼠45只,5只为正常组,余40只行左侧坐骨神经切断外膜缝合。电针组每天穴位电针20min,模型组不作任何处理。再分4个亚组,每组5例。分别于术后1,2,4和8周处死,取材L5节段损伤侧背根节,免疫组化染色观测GDNF表达,并观察4周时感觉神经电生理。结果:电针组同侧背根节神经元GDNF表达伤后2周达到高峰,积分光密度值为0.699±0.053,与模型组0.419±0.093比较有显著意义(P<0.05)。伤后8周恢复正常对照水平;模型组背根节细胞GDNF表达伤后2周达到高峰保持至8周。相应的感觉神经潜伏期检查8周时电针组(0.56±0.89)ms,明显短于模型组(0.78±0.12)ms,且传导速度明显增加,波幅增大。结论:电针促进神经功能的恢复可能是通过增强脊神经节GDNF的表达而实现。     

Upregulation and redistribution of ephrinB and EphB receptor in dorsal root ganglion and spinal dorsal horn neurons after peripheral nerve injury and dorsal rhizotomy

EphrinB–EphB receptor signaling plays diverse roles during development, but recently has been implicated in synaptic plasticity in the matured nervous system and in pain processes. The present study investigated the correlation between expression of ephrinB and EphB receptor proteins and chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve and dorsal rhizotomy (DR) in dorsal root ganglion (DRG) and spinal cord (SC); and interaction of CCI and DR on expression of these signals. Adult, male Sprague–Dawley rats were employed and thermal sensitivity was determined in the sham operated CCI and DR rats. Western blot and immunobiochemistry analysis and immunofluorescence staining techniques were used to detect the expression and location of the ephrinB–EphB receptor proteins in DRG and SC. The results showed that expression of ephrinB1 and EphB1 receptor proteins was significantly upregulated in DRG and SC in a time‐dependent manner corresponding to the development of thermal hyperalgesia after CCI. The increased expression is predominately located in the medium‐ and small‐sized DRG neurons, the superficial layers of spinal dorsal horn (DH) neurons, and the IB4 positive nociceptive terminals. DR increases ephrinB1 in DRG, not SC and EphB receptor in SC, not DRG. DR suppressed CCI‐induced upregulation of ephrinB1 in SC and EphB1 receptor in DRG and SC. These findings indicate that ephrinB–EphB receptor activation and redistribution in DRG and DH neurons after nerve injury could contribute to neuropathic pain. This study may also provide a new mechanism underlying DR‐induced analgesia in clinic.     

坐骨神经震荡伤后腰髓背根神经节病理改变及意义

目的　应用图像分析和免疫组织化学技术观察和分析兔坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰髓背根神经节病理改变及意义。方法　大耳白兔 2 5只 (包括正常对照 5只 ) ,致伤靶点为右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点 (0 38g钢珠 ,0 6 5g装药量 ) ,观察伤后 1、3、7、14d(n =5 )腰髓背根神经节病理改变及一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)表达变化 (免疫组化法 ) ,并进行神经元计数及神经元截面积图像分析。结果　腰髓背根神经节伤后发生出血、水肿、神经元皱缩、坏死等变化 ,伤后 3dNOS表达显著增强 ,伤后 7d神经元数显著减少 ,神经元平均截面积显著减少。结论　坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰髓背根神经节发生了较重的损伤。     

脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞的定向分化

背景：有研究表明脑源性神经营养因子可以维持神经元的存活、影响神经元的迁移,在体外可以促进神经干细胞的存活和分化。目的：探讨脑源性神经营养因子对低血糖幼鼠海马神经干细胞定向分化的作用。方法：取新生1d低血糖模型大鼠脑海马组织进行原代、传代及单细胞克隆培养。培养的细胞一部分进行神经干细胞鉴定,另一部分依据培养液中脑源性神经营养因子质量浓度的不同将单克隆细胞分为0,100,200μg/L组,取第4代细胞进行诱导分化,行神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色,计数阳性细胞比例。结果与结论：单克隆培养后3组细胞均呈巢蛋白阳性,诱导分化后细胞呈行神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性;100,200μg/L组神经干细胞生长较快,且分化为神经元特异性烯醇化酶阳性细胞比例较高（P〈0.05）,但两组神经干细胞之间差异无显著性意义（P〉0.05）。提示脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞向神经元定向分化。     

大鼠背根神经节持续受压后脊髓背角TRPV4蛋白表达及分布的变化

目的:探讨大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,CCD)后瞬时感受器电位离子通道香草素亚族受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在脊髓背角中的蛋白表达及分布规律。方法:选取清洁级雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分组:空白对照组5只,手术组25只(术后4天、7天、14天、28天各5只;免疫荧光组5只)。制备大鼠背根神经节持续受压模型,于术后4天,7天,14天及28天,测量机械刺激缩爪反应痛阈,观察机械痛阈的变化;利用western blot技术检测空白对照组及术后4天,7天,14天及28天,手术侧及对侧脊髓背角TRPV4蛋白表达的变化;利用免疫荧光技术检测术后4天,手术侧与对侧脊髓背角TRPV4阳性细胞分布。结果:大鼠背根神经节持续受压后4—14天,机械痛阈值明显下降(P0.001);术后4—7天,手术侧脊髓背角TRPV4表达升高(P0.01),对侧无明显变化;手术侧脊髓背角内TRPV4阳性细胞数目高于对侧(P=0.0008)。结论:大鼠背根神经节持续受压后,机械痛阈下降的同时,手术侧脊髓背角内TRPV4蛋白表达上调及阳性数目增多,TRPV4可能参与CCD后病理性神经痛的中枢敏化机制。     

大鼠坐骨神经损伤性疼痛的行为观察和背根神经节中生长相关蛋白表达的变化

目的：观测坐骨神经损伤对大鼠行为的改变，以及运用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经损伤对相应背根神经节中生长相关蛋白表达的影响，探讨生长相关蛋白与神经损伤所致的自发性疼痛的关系。 方法：实验于2004-04／2005-04在汕头大学医学院第二附属医院外科和病理实验室完成。250只Wistar大鼠随机分成3组：神经切断组120只、神经压榨组120只、正常对照组10只；神经切断组，神经压榨组按存活时间不同再各分为3，7，14，21，30，60d6个亚组，每个亚组20只。用自噬评分方法观察大鼠神经损伤后的行为改变；并处死取材L5节段损伤侧背根神经节用免疫组化方法研究生长相关蛋白表达的变化。 结果：250只大鼠全部进入结果分析。①自噬评分：神经损伤后，神经切断各亚组自噬发生率均比神经压榨各亚组高，程度也较重。神经切断60d组自噬平均分为2．1，而神经压榨60d组仅为0．7分。②生长相关蛋白表达：神经切断组背根神经节生长相关蛋白免疫阳性标志平均吸光度表达伤后7d达高峰（0．614&;#177;0．004），持续到伤后60d仍有高表达（0.515&;#177;0．004）；而神经压榨组伤后14d才达高峰（0．583&;#177;0．006），伤后21d即有所下降（0．563&;#177;0．008），伤后60d基本回复到正常水平（0．231&;#177;0．003）；正常对照组背根神经节仅有少量表达（0．225&;#177;0．005）。神经损伤后神经切断组、神经压榨组生长相关蛋白的表达与正常对照组比较差异有显著性意义（t=14．726，t=4．074，P≤0．05）；神经切断组、神经压榨组伤后的表达差异也存在显著性意义（t=3．357，P≤0．05）。 结论：不同的坐骨神经损伤方法所致的大鼠自噬程度和生长相关蛋白表达变化不同，提示神经源性疼痛的发生可能与神经的可塑性有关。     

大鼠坐骨神经损伤性疼痛的行为观察和背根神经节中生长相关蛋白表达的变化

目的:观测坐骨神经损伤对大鼠行为的改变,以及运用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经损伤对相应背根神经节中生长相关蛋白表达的影响,探讨生长相关蛋白与神经损伤所致的自发性疼痛的关系。方法:实验于2004-04/2005-04在汕头大学医学院第二附属医院外科和病理实验室完成。250只Wistar大鼠随机分成3组:神经切断组120只、神经压榨组120只、正常对照组10只;神经切断组,神经压榨组按存活时间不同再各分为3,7,14,21,30,60d6个亚组,每个亚组20只。用自噬评分方法观察大鼠神经损伤后的行为改变;并处死取材L5节段损伤侧背根神经节用免疫组化方法研究生长相关蛋白表达的变化。结果:250只大鼠全部进入结果分析。①自噬评分:神经损伤后,神经切断各亚组自噬发生率均比神经压榨各亚组高,程度也较重。神经切断60d组自噬平均分为2.1,而神经压榨60d组仅为0.7分。②生长相关蛋白表达:神经切断组背根神经节生长相关蛋白免疫阳性标志平均吸光度表达伤后7d达高峰(0.614±0.004),持续到伤后60d仍有高表达(0.515±0.004);而神经压榨组伤后14d才达高峰(0.583±0.006),伤后21d即有所下降(0.563±0.008),伤后60d基本回复到正常水平(0.231±0.003);正常对照组背根神经节仅有少量表达(0.225±0.005)。神经损伤后神经切断组、神经压榨组生长相关蛋白的表达与正常对照组比较差异有显著性意义(t=14.726,t=4.074,P≤0.05);神经切断组、神经压榨组伤后的表达差异也存在显著性意义(t=3.357,P≤0.05)。结论:不同的坐骨神经损伤方法所致的大鼠自噬程度和生长相关蛋白表达变化不同,提示神经源性疼痛的发生可能与神经的可塑性有关。     

鞘内注射右美托咪定对坐骨神经慢性缩窄性损伤大鼠脊髓背角肿瘤坏死因子α蛋白表达的影响

目的探讨鞘内注射右美托咪定（ DEX）对坐骨神经慢性缩窄性损伤（ CCI）大鼠脊髓背角肿瘤坏死因子α（ TNF-α）蛋白表达的影响。方法成年Sprague-Dawley雄性大鼠44只随机分为四组（ n＝11）：假手术组（ sham组）,坐骨神经慢性缩窄性损伤组（ CCI组）,生理盐水组（ CCI＋NS组）和右美托咪定组（ CCI＋DEX组）。采用von Frey纤毛分别测定了sham组和CCI组术前及术后1、3、5、7、14 d,以及CCI＋NS组和CCI＋DEX组术后第7天鞘内给药前和给药后1、2、3 h的机械刺激抬腿反应阈值（ PWT）。 sham组和CCI组在术后第7天,CCI＋NS组和CCI＋DEX组在术后第7天鞘内给药后1 h时间点分别余5只大鼠处死取脊髓背角,采用Werstern blot法测定TNF-α蛋白表达。结果与sham组相比,CCI组PWT自术后第3天开始出现下降,并持续至第14天（ P＜0.001）;与CCI＋NS组相比,CCI＋DEX组在给药后1 h即出现明显镇痛作用,且持续至给药后2 h（P＜0.01或P＜0.001）。 Werstern blot结果显示,和sham组比较,CCI组和CCI＋NS组大鼠脊髓背角TNF-α蛋白表达上调（ P＜0.05）;与CCI＋NS组比较,CCI＋DEX组TNF-α蛋白表达下调（ P＜0.05）。结论鞘内注射右美托咪定可通过抑制CCI大鼠脊髓背角TNF-α蛋白表达减轻神经病理性疼痛。