可移植性小鼠白血病(L615)的实验研究——Ⅰ.L615白血病的建立及其生物学特性

L615小鼠白血病实验模型,是用我们分离的津638病毒诱发的615小鼠白血病脾细胞悬液,在同系成年小鼠进行细胞移植而建立。目前已保种8年,传代462代。通过一般生物学观察证明:本白血病株具有接种简便、多种途经接种均可致病并不受接种鼠龄的影响、成功率100％、无自发缓介、发病时间一致、存活时间短而规则(6.5±0.04天)等特点,为我国白血病及肿瘤的实验研究提供了一个有价值的工具。 本实验中,成年615小鼠一次口服大量L615白血病脾细胞悬液也可引起白血病,并在短期内(10—12天)致死。致病原因可能是活的白血细胞直接侵入。在部分口服白血病脾细胞悬液后未发病的动物中,个别动物获得了对L615白血病细胞再接种的免疫力,因而提供了口服白血病活细胞获得免疫的可能性。     

可移植性小鼠白血病(L615)的实验研究——Ⅱ.L615白血病病理形态学的观察

L615白血细胞于局部接种后迅速增殖,同时侵入局部血管进入血行,向全身播散。其播散的速度非常迅速,局部接种后3小时已有白血细胞停留于脾脏。各脏器白血细胞浸润的形式也都具有以血管为中心的特点。 615系小鼠在接种L615白血细胞后,最初胸腺皮质淋巴细胞增生活跃,随后萎缩变薄,晚期当白血细胞大量侵入胸腺时,整个皮质淋巴细胞出现广泛破坏现象。 L615白血病小鼠的死亡原因主要是肺血管内广泛出现的由白血细胞、核碎片及纤维素组成的瘤栓形成。     

依赖于DNA的RNA聚合酶的研究 Ⅲ.615小鼠和白血病615小鼠(L615)肝细胞RNA聚合酶B的比较研究

研究了正常的615小鼠和白血病615小鼠(L615)肝细胞的RNA聚合酶B,发现两种肝细胞的RNA聚合酶B都可能存在着结合状态和游离状态的形式。在电泳图中L615 RNA聚合酶B有两条电泳区带是615 RNA聚合酶B所没有的。两种B酶的最适铵离子浓度都是90mM;最适锰离子浓度为2mM;镁离子的激活作用在10mM以下时,酶活性随镁离子浓度增高而增强。两种RNA聚合酶B对α-鹅膏蕈碱的抑制作用都非常敏感,而L615 B酶更敏感一些。两种RNA聚合酶B都适于利用变性的单链DNA作转录模板。     

L615小鼠中期染色体的银染研究

对人和动物细胞的中期染色体的核仁形成 区（NOR,）用硝酸银试剂进行特异性染色（下 称银染技术）,已由Denton^[4]和Goodpasture^[5]等 人证明,被银染的物质是一种酸性蛋白质成分。 银染能够显示核糖体基因18S和28S在染色体 上的位置以及在细胞周期中的活动^[7]。染色体 银染技术的出现,为细胞学研究提供了新的手 段,其应用范围已经扩及到人和动物的体细胞、 生殖细胞以及培养细胞等各个方面。     

L615小鼠中期染色体的银染研究

对人和动物细胞的中期染色体的核仁形成区(NOR_s)用硝酸银试剂进行特异性染色(下称银染技术),已由Dencon和Goodpasture等人证明,被银染的物质是一种酸性蛋白质成分。银染能够显示核糖体基因18S和28S在染色体上的位置以及在细胞周期中的活动。染色体银染技术的出现,为细胞学研究提供了新的手段,其应用范围已经扩及到人和动物的体细胞、生殖细胞以及培养细胞等各个方面。     

依赖于DNA的RNA聚合酶的研究——Ⅳ.615小鼠和白血病615小鼠(L615)肝细胞RNA聚合酶B的结构分析

真核细胞转录是一个极为复杂的过程,有很多迄今尚未研究清楚的因子参加。依赖于DNA的RNA聚合酶(E.C.2.7.7.6)直接或间接地和转录的调节过程有关。真核细胞有三种结构不同的KNA聚合酶,它们有不同的转录功能。因此,研究真核细胞RNA聚合酶的结构对弄清酶对转录和调节显得十分重要。     

带有L6565小鼠白血病病毒的细胞系的建立

用L6565小鼠的胸腺、脾脏、肝脏和肾脏组织,以及外周血的无细胞提取液,分别感染NIH3T3细胞,经逆转录酶活性测定,挑选出两株感染了L6565白血病病毒的细胞,并证实L6565白血病病毒感染小鼠后主要分布于血液和淋巴系统。电镜下可观察到细胞内含有A型和C型病毒颗粒,细胞的倍增时间分别为18和16小时。细胞的XC合胞试验为阳性,在光镜下未观察到细胞的形态发生转化。收集细胞内和释放到细胞培养液中的病毒并注入新生小鼠皮下,两个月左右做血象和组织病理检查,存活小鼠全部发生了淋巴细胞型白血病。     

可移植性小鼠白血病(L615)的实验研究——Ⅳ.L615白血细胞增殖动力学

采用体内~3H-TdR标记法测定L615白血细胞的增殖时(Tc)为13.8小时、合成前期(G_1)2.8小时、合成期(S)8.6小时、合成后期(G_2)1.8小时、分裂期(M)为0.65小时。~3H-TdR单次脉冲标记率(LI)为53％,连续标记24小时后标记率>99％,其增殖比例近于1。 用稀释法接种不同浓度L615白血细胞所得的结果表明:接种细胞数与小鼠存活时间呈直线的对数关系。“单个”L615白血细胞接种至小鼠死亡需时13.2天。 由于L615白血细胞的增殖时短而合成期较长,因而使用烷化剂及抑制合成期的抗癌药物可取得较好的疗效。     

L6565小鼠白血病病毒诱发小鼠白血病

为探讨病毒与白血病发生的关系,我们用L6565小鼠白血病病毒(L6565MLV)悬液感染乳鼠,每周观察小鼠的发病情况及病理变化,并用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测小鼠体内病毒核酸的分布.结果发现小鼠感染病毒后3～5周,其脾脏和淋巴结呈早期白血病的病理改变.至第10～12周小鼠发生淋巴细胞白血病,表现出耸毛、活动减少、腹膨胀等症状.病毒核酸于感染后第2周首先在小鼠胸腺、脾脏检测到,随时间延长,病毒核酸广泛分布在外周血、胸腺、脾脏、淋巴结等多种脏器组织中.本实验表明L6565小鼠白血病病毒可诱发小鼠白血病,其机制可能与病毒促使淋巴细胞向白血病细胞转化有关.     

我国可移植性小鼠白血病(L615)标记染色体的发现

应用染色体分带方法,发现L615小鼠白血病细胞存在着标记染色体——Bj染色体。Bj染色体的特征为:在第19对染色体中,一条染色体长臂末端有一独特的异染色质区域。Bj染色体的出现频率:接种白血病细胞后第五天约为44％,而第三天仅为8％。它表明L615小鼠在白血病癌变过程中确实发生了遗传物质的改变。这个发现对于肿瘤细胞遗传学的研究和筛选抗癌药物等方面都有一定的价值。     

L6565小鼠白血病病毒诱发小鼠白血病

为探讨病毒与白血病发生的关系,我们用L6565小鼠白血病病毒（L6565MLV）悬液感染乳鼠,每周观察小鼠的发病情况及病理变化,并用逆转录一聚合酶链反应（RT－PCR）动态检测小鼠体内病毒核酸的分布,结果发现：小鼠感染病毒后3－5周,其脾脏和淋巴结呈早期白血病的病理改变,至第10－12周小鼠发生淋巴细胞白血病,表现出耸毛、活动减少、腹膨胀等症状。病毒核酸于感染后第2周首先在小鼠胸腺、脾脏检测到,随时间延长,病毒核酸广泛分布在外周血、胸腺、脾脏、淋巴结等多种脏器组织中。本实验表明L6565小鼠白血病病毒可诱发小鼠白血病,其机制可能与病毒促使淋巴细胞向白血病细胞转化有关。     

L615白血病鼠胸腺和脾脏淋巴细胞脱氢酶同工酶的研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对比研究了纯系６１５鼠和Ｌ６１５可移植性淋巴细胞型白血病鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的葡萄糖－６－磷酸脱氢酶同工酶（ＥＣｌ．１．１．４９,Ｄ－葡萄糖－６－磷酸：ＮＡＤＰ氧化还原酶,Ｇ６ＰＤ）和乳酸脱氢酶同工酶（ＥＣｌ．１．１．２７,Ｌ－乳酸：ＮＡＤ氧化还原酶,ＬＤＨ）。并应用定量细胞化学法对ＬＤＨ和６ＰＤ全酶活性进行了测定。结果：在Ｌ６１５白血病鼠胸腺淋巴细胞中（白血病细胞占４０％）,Ｇ６ＰＤ同工酶谱显示异常,全酶活性明显增高、ＬＤＨ同工酶谱及全酶活性未发生明显变化。Ｌ６１５白血病鼠脾脏淋巴细胞中（白血病细胞占８４％）,Ｇ６ＰＤ和ＬＤＨ同工酶谱均显示异常,同时全酶活性也明显增强。提示：Ｇ６ＰＤ对白血病细胞的恶性增殖和浸润似乎更为敏感。     

可移植性小鼠白血病(L615)的实验研究——Ⅴ.L615在筛选抗癌药物中的应用

L615小鼠白血病对各类抗肿瘤药物都有不同程度的敏感性,尤其对抗代谢类及烷化剂类药物更为敏感。对L1210自血病没有明显作用的马利兰,也有一定的疗效。因此,L615白血病模型为探索新的抗癌药物提供了一个有用的实验工具。 用L615筛选抗癌药物,除生存时间可作治疗指标外,脾脏大小、末梢血液中白细胞分类及白细胞总数也能作为疗效作用的指标。     

可移植性小鼠白血病(L615)的实验研究——Ⅲ.细胞化学及电子显微镜观察

L615白血病细胞经细胞形态学、细胞化学及电子显微镜观察,表明L615白血病细胞是一种分化程度较差、增殖较旺盛的网织细胞。因此,本白血病株属于网织细胞型白血病。 在电子显微镜下,L615白血病细胞内可见病毒样颗粒出现,此种病毒样颗粒符合致瘤性RNA病毒分类中“池内A颗粒”(Intracisternal A Particles)的特点。实验证明此种病毒样颗粒并无生物学活性。它们在L615白血病细胞内大量出现的原因以及与“津638”C病毒颗粒的关系值得进一步研究阐明。     

正常615小鼠中期染色体核仁组织者银染观察

用银染方法(或称Ag-AS技术)对中期染色体的核仁组织者(NOR)进行特异性染色,能够显示18S和28S核糖体基因(rDNA)的活动。肿瘤细胞的rRNA具有较高速率的蛋白质合成能力。而被银染的酸性蛋白质在核仁的大小和组成上可能起重要作用。癌患者的核仁比正常成年人的核仁大。某些白血病患者的核仁有明显的变化。我们用改     

615小鼠ES细胞集落的分离及初步鉴定

目的　分离和培养 6 15小鼠的ES细胞集落 ,为建系打下基础。方法　以PMEF为饲养层分离 6 15小鼠的ES细胞集落 ,进行无饲养层培养 ,并对其进行初步鉴定。结果　ES细胞集落的出现率和传代成功率为 2 2 6 %和 0 94 % ,其ALP染色阳性 ,具有稳定的二倍体核型 ,可自发分化为多种类型的细胞。结论　成功分离和培养了6 15小鼠的ES细胞集落     

依赖于DNA的RNA聚合酶的研究——Ⅵ.白血病615和正常615小鼠肝细胞的RNA聚合酶B免疫学特性比较研究

本文比较了白血病615(L615)和正常615小鼠肝细胞RNA聚合酶B的免疫学特性。在免疫扩散实验中,抗615B酶抗血清和抗L615B酶抗血清分别对615 B酶和L615 B酶的离体转录活性有明显抑制作用,但两种抗血清分别对与其对应的酶抑制作用强。用抗615 B酶抗血清的IgG分别与两种B酶进行免疫沉淀反应,它们的沉淀物凝胶电泳图谱显示能发生特异性结合反应。IgG与615 B酶的沉淀物电泳图中存在着一条明显的条带,而这一条带在IgG与L615B酶的沉淀物电泳图中却消失了。     

615小鼠血红蛋白珠蛋白α链的分离纯化及氨基酸组成

用CM－cellulose-23柱层析分离纯化了615小鼠珠蛋白α链,测定其N－末端氨基酸为缬氨酸。615小鼠珠蛋白α链含有141个氨基酸残基,其中含19个亮氨酸残基,10个组氨酸残基,9个缬氨酸残基,上述三种氨基酸残基的数目与文献中新本不同。     

615小鼠染色体组型与G带带型分析

目的建立615小鼠标准染色体组型与G带染色体核型,提供可靠的细胞遗传学背景资料。方法成年615小鼠8只,雌雄各半,提取骨髓细胞,制片,镜检。确立615小鼠体细胞染色体数目。选择10个典型细胞测量染色体基本数据。G带染色。结果615小鼠的染色体数目为40条,XX为雌性,XY为雄性。所有染色体均为中部着丝点。X染色体相对长度仅次于第1对染色体,Y染色体的相对长度在第4对染色体和第5对染色体之间。G显带条数与小鼠有很大差异,接近于大鼠。结论615小鼠的核型为2n=40=2×19m＋（x）m＋（y）m,G显带共262条。     

L615白血病小鼠肝、脾中cAMP依赖的蛋白激酶活力变化

cAMP不仅参与细胞的多种代谢调节过程,而且还和细胞的增殖、分化有关.cAMP要发挥其生理效应,需通过cAMP依赖的蛋白激酶才能实现.有报道认为肿瘤细胞的恶性行为可能和其细胞内cAMP水平下降有关.另有人认为肿瘤细胞内cAMP下降不是主要原