BAMBI在非小细胞肺癌细胞系中的分布及表达

目的 观察BAMBI在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中的表达分布情况,并探讨其表达与NSCLC病理分型及侵袭潜能之间的关系.方法 利用免疫荧光技术检测人肺腺癌细胞系A549以及人肺巨细胞癌具有不同侵袭潜能的亚系BE1、LH7中BAMBI的分布,采用逆转录聚合酶链反应及Western印迹法检测3种细胞中BAMBI的mRNA及蛋白表达.结果 BAMBI mRNA在A549细胞系中的表达(0.574±0.035)显著低于BE1细胞系(0.731±0.051)及LH7细胞系(0.734±0.049,P值均<0.001),后两者间的差异无统计学意义(P=0.216).A549细胞系中BAMBI蛋白相对含量(0.769±0.103)显著低于BE1细胞系(0.963±0.061)及LH7细胞系(0.957±0.048,P值均<0.001),后两者间的差异无统计学意义(P=0.096).BAMBI在A549细胞膜上的染色强度较弱,且呈现颗粒状不均一性;在BE1、LH7细胞膜上的染色较强,连续且均匀一致.结论 BAMBI在NSCLC中的表达定位于细胞膜上以及靠近细胞膜的细胞质中,其在肺巨细胞癌细胞中的表达高于肺腺癌细胞,且其表达高低可能与肺巨细胞癌细胞的侵袭潜能无关.     

凋亡抑制蛋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况

目的研究凋亡抑制蛋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况。方法以RT-PCR法检测人原发性肝癌细胞系HEPG-2中凋亡抑制蛋白Livin基因mRNA的表达。结果HEPG-2细胞只表达Livin基因的β亚型,即Livinβ。结论人原发性肝癌细胞系HEPG-2细胞阳性表达Livinβ基因。本实验研究结果为原发性肝癌的诊断和治疗提供了新思路、新方法。     

RASSF1A基因在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的:探讨RASSF1A基因在肝细胞肝癌(简称肝癌)组织中的表达情况并探讨其临床意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测48例肝癌组织及癌旁正常组织RASSF1A基因的转录水平。结果:48例肝癌组织中有32例RASSF1AmRNA表达缺失;但48例相应癌旁组织仅有16例RASSF1AmRNA表达缺失。Logistic逐步回归分析表明患者的年龄、性别、肝功能、血AFP、肝癌分化、肝癌大小、肝癌有无包膜与RASSF1AmRNA是否表达无显著相关性(P>0.05)。但在HBsAg(+)患者的肝癌组织及相应的癌旁组织中RASSF1AmRNA的表达率显著低于HBsAg(-)患者(P<0.01,P<0.05)。结论:RASSF1A表达缺失在肝癌的发生、发展中起重要的作用。     

Robo家族在肝癌细胞系的表达

目的研究不同肝癌细胞系中Robo1,Robo2、Robo3和Robo4的表达差异。方法用RT-PCR检测8个肝癌细胞系的mRNA表达。结果 Robo1和Robo4在这8个肝癌细胞系中均表达;Robo2只在PLC细胞系中微量表达;Robo3在Hep3B、Huh7表达较高,而97L和G2表达较低,其它细胞系均无表达。结论 Robo1、Robo2、Robo3和Robo4在不同的肝癌细胞系中表达水平不同,为研究Robo家族选择合适的细胞模型提供理论依据。     

甲胎蛋白mRNA在肝癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨甲胎蛋白 (AFP) m RNA在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法 :用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT- PCR)检测 19例肝细胞癌患者癌组织 AFP m RNA。结果 :16例 (88.9% )患者癌组织 AFP m RNA呈阳性表达 ,其外周血 AFP m RNA亦为阳性 ;而阴性表达的 3例其外周血 AFP m RNA和血清 AFP亦为阴性。癌组织 AFP m RNA阳性率在血清 HBs Ag阳性组 (93.8% )、合并肝硬化组 (10 0 % )和血清 AFP≥ 2 5 μg/ L 组 (10 0 % )高于 HBs Ag阴性组 (33.3% )、无合并肝硬化组 (5 7.1% )和 AFP<2 5 μg/ L 组 (5 7.1% ) (P <0 .0 5 )。相关分析显示外周血 AFP m RNA阳性率和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m RNA阳性表达呈正相关 (r =0 .6 413,P <0 .0 5 ;r=0 .6 0 2 4,P <0 .0 5 )。癌组织 AFP m RNA阳性表达和血清 HBs Ag阳性表达及合并有肝硬化呈正相关 (r =0 .6 5 0 3,P <0 .0 5 ;r =0 .5 90 8,P <0 .0 5 ) ,而与有无门静脉癌栓或肝外转移及癌灶大小无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :大多数肝细胞癌的 AFP基因处于活化状态。外周血 AFP m RNA阳性表达和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m RNA阳性表达有关     

生长阻滞特异基因1在胃癌细胞系和组织中的差异表达及其意义

目的 探讨Gas1在胃癌细胞系和组织中的差异表达及与胃癌发生、发展的关系。方法 应用RT-PCR检测Gas1在7个胃癌细胞系和23对胃癌配对组织标本中的表达情况，免疫组化检测Gas1在43例手术切除的胃癌标本和20例正常胃黏膜组织中的表达情况。结果 7个胃癌细胞系均不表达Gas1mRNA；23对胃癌配对组织标本中癌旁组织Gas1mRNA阳性表达率高于胃癌组织（P〈0．01）；20例正常胃黏膜组织中有19例表达Gas1蛋白（阳性表达率为95．0％），43例胃癌标本中有2例表达Gas1蛋白（阳性表达率为4.65％），两者相比差异具有显著性（P〈0．01）。结论 Gas1在胃癌细胞系中表达缺失，可能与胃癌细胞系的细胞学特征有关；Gaff在胃癌表达缺失，可能与胃癌的发生发展有关，Gaff可作为判断胃癌生物学行为的一个有用指标。     

抑癌基因PTEN在胃癌细胞中的表达及意义

目的探讨PTEN基因mRNA及蛋白在胃癌细胞中的表达规律及其生物学意义。方法分别采用RT-PCR技术和Western blot方法检测SGC-790l，BGC-823，MGC-803，HGC-27等4种胃癌细胞系的PTEN mRNA表达及蛋白表达水平。结果PTEN mRNA与蛋白质在4种胃癌细胞系中均有异常表达，且表达水平呈正相关（r=0．99，P〈0．01），表达顺序依次为：SGC-7901（中分化）表达最高（P〈0．01），BGC-823（低分化）、MGC-803（低分化）次之（两者差异无显著性，P〉0．05），HGC-27（未分化）表达水平最低（P〈0.01），其相关表达与细胞分化程度呈正比关系。结论PTEN基因的异常改变与胃癌的发生发展密切相关；PTEN基因mRNA及其蛋白表达可能是反映胃癌发生发展及预后的重要生物学指标之一。     

原发性肝癌患者庚型肝炎病毒感染的临床研究

目的：探讨原发性肝癌患者庚型肝炎病毒（HGV）感染的分布。方法：根据中国株HGV5’端非编码序列设计引物，采用逆转录套式聚合酶链反应方法。用此技术对107例原发性肝癌、45例慢性肝炎、43例肝硬化患者血清进行了检测分析。结果：107例原发性肝癌患者中有10例HGV－RNA阳性（9．3％）；45例慢性肝炎患者中有5例HGV－RNA阳性（11．1％）；43例肝硬化患者中有3例HGV－RNA阳性（7．0％）。结论：庚型肝炎病毒感染可能与原发性肝癌发生有一定关系，但不是引起肝癌的主要的因素。     

抑癌候选基因NDRG2在乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达分析

目的：分析抑癌候选基因NDRG2在人类乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达情况．方法：收集4种乳腺癌细胞系及21例乳腺肿瘤组织及其癌旁组织,提取总RNA,应用半定量RT-PCR及RNA斑点杂交的方法检测NDRG2 mRNA的表达水平．为进一步分析Ndrg2蛋白质的表达水平,分别提取21例组织及细胞系的总蛋白,应用蛋白印迹技术检测其Ndrg2的蛋白表达水平,同时运用免疫组化的方法检测4种乳腺癌细胞系中Ndrg2的表达情况．结果：RT-PCR结果显示,4种乳腺癌细胞系中,有3种NDRG2 mRNA水平明显降低．21例乳腺肿瘤组织中,有5例NDRG2的mRNA水平明显降低．蛋白印迹结果显示,筛选出的3种低表达NDRG2 mRNA乳腺癌细胞系中2种Ndrg2的蛋白表达明显降低,而有1种Narg2的蛋白表达没有变化．21例乳腺肿瘤组织中发现5例Narg2的蛋白水平明显下降,与RT-PCR检测结果一致．免疫组化结果显示,4种乳腺癌细胞系中,2种细胞系Narg2的表达水平明显降低,1种细胞系Ndrg2表达水平没有明显变化,与蛋白印迹结果一致．结论：Ndrg2在某些乳腺肿瘤组织和乳腺癌细胞系中呈低表达,提示其可能对乳腺肿瘤的发生或发展有重要作用,这不仅为研究乳腺癌的发病机制进一步提供了线索,而且对乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义．     

卵巢癌细胞系Smac基因的表达及意义

目的 探讨Smac基因在卵巢癌细胞系A2780、COC1及其顺铂(DDP)耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中的表达及其意义.方法 半定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法检测卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中Smac mRNA和蛋白的表达.结果 卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP四种细胞系中均有Smac mRNA和蛋白的表达;Smac在A2780、COC1中的表达高于其顺铂耐药株.结论 低表达Smac抑制凋亡,低表达Smac可能与耐药有关.     

RON及Claudin-4在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的研究RON(recepteur d’origine naetais)及Claudin-4在人膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell car-cinoma,TCCB)中的表达及临床意义,探讨两者在肿瘤中的作用。方法收集人正常膀胱移行上皮组织标本16例,膀胱移行细胞癌标本36例,按照病理分级、临床分期、性别、年龄、单发与多发、初发与复发进行分组,分别用Western blot和RT-PCR检测RON、Claudin-4蛋白和mRNA的表达,分析两者与TCCB的病理分级、临床分期、性别、年龄、单发与多发、初发与复发间的关系。结果①TCCB组中的RON表达水平明显高于正常膀胱移行上皮组织(P=0.000),TCCB组低级别与高级别、非肌层浸润(T1)与肌层浸润(T2～4)间表达差异有统计学意义(P=0.003,P=0.000),而在年龄、初发与复发、单发与多发组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。②TCCB组中的Claudin-4表达水平明显高于正常膀胱黏膜组织(P=0.003),TCCB组T1与T2～4间表达差异有统计学意义(P=0.018),而在低级别与高级别、年龄、初发与复发、单发与多发组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。③TCCB组RON与Claudin-4蛋白及基因表达水平均呈增高趋势,且两者呈正相关(r=0.560,P<0.05)。结论 TCCB组中RON与Claudin-4蛋白及基因表达上调提示两者在TCCB的发展和浸润中起促进作用,且RON与Claudin-4在TCCB中呈正相关。     

miRNA-205在食管鳞状细胞癌患者组织中的表达及临床意义

目的 探讨miRNA-205在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者组织中的表达情况.方法 收集56例经病理确诊的ESCC患者的手术切除组织(癌组织及其癌旁组织),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miRNA-205的表达,并分析miRNA-205在不同临床病理资料之间的差异.结果 ESCC患者组织中miRNA-205相对表达量为1.475(0.444～5.478),显著高于癌旁组织(Z=-3.067,P=0.002);miRNA-205在不同TNM分期ESCC患者组织中存在差异,TNM分期越高,miRNA-205表达量越高,差异具有统计学意义(F=36.335,P＜0.001);miRNA-205在淋巴结转移阴性/阳性组织中存在差异,淋巴结转移阳性组miRNA-205表达量显著高于淋巴结转移阴性组(Z=-3.353,P=0.001).结论 miRNA-205在ESCC患者癌组织中表达升高,并可能参与ESCC的发生与发展.     

Expression of Polt in tissues and cell lines of transitional cell carcinoma

Objective：To explore the expression of DNA polymerase iota in transitional cell carcinoma ceils and tissues; Methods： RT-PCR was applied to detect the expression of polymerase iota in BIU87 and T24 ceils, then the expression of polymerase iota was also detected in the same way in transitional cell car- cinoma which was derived from clinical bladder carcinoma and renal pelvic carcinoma. Results ： The expres- sion of Poh was low in bladder normal membrana mucosa but significantly elevated in transitional cell car- cinoma ceils. Compared with the expression of polymerase iota in bladder normal mucous membranes, the expression of polymerase iota was significantly increased in transitional cell carcinoma tissue （P〈0. 01 ） and associated with the grade of transitional cell carcinoma. Conclusion： The significantly increased ex- pression of polymerase iota may be associated with the generation and development of transitional cell carcinoma, even with its high heterogenicity.     

细胞死亡调节因子GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨细胞死亡调节因子（GRIM-19）蛋白在肾脏透明细胞癌组织和正常肾组织中的表达及意义,阐明GRIM-19在肾脏透明细胞癌发生发展中的抑癌作用。方法： 采用免疫组织化学染色方法检测21例肾脏透明细胞癌组织和7例正常肾组织GRIM-19蛋白的表达;RT-PCR方法检测4例正常肾组织和8例肾脏透明细胞癌组织中GRIM-19基因mRNA的表达。结果： 免疫组化检测GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为52.3%（11/21）,在正常肾脏组织的阳性表达率为100%（7/7）,两者比较差异有显著性（P<0.05）。病理分级Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的肾脏透明癌组织中的表达率分别为100%（6/6）、40%（4/10）和20%（1/5）,三种病理分级GRIM-19表达率比较差异有显著性（P<0.01）。RT-PCR检测GRIM-19基因在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为62.5%（5/8）,在正常肾脏组织的阳性表达率为100%（4/4）,两者比较差异有显著性（P<0.01）。结论：GRIM-19在肾脏透明细胞癌基因和蛋白水平表达明显下降,并与其病理分级存在明显的关联性,提示GRIM-19蛋白可能在肾脏透明细胞癌发生发展中发挥抑癌作用。     

SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株的表达

目的研究SATB1在不同侵袭潜能的人肝癌细胞株表达状况。方法分别用荧光定量PCR,RT-PCR,Western blotting及免
疫荧光方法,检测人永生化肝细胞株HL-7702及肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3 中SATB1
的表达。结果相对于HL-7702,SATB1 mRNA在其余5 种肝癌细胞株中都有较高程度的表达,其中高侵袭性HCCLM3、
MHCC97H 表达最高,MHCC97L 次之,SMMC-7721、HepG2 最低（P<0.001）;Western blotting 分析HepG2、SMMC-7721、
MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3肝癌细胞株的蛋白相对表达量分别为0.271±0.002;0.351±0.023;0.621±0.026;0.878±0.026;
1.236±0.006,高侵袭性HCCLM3相当于HepG2的4.6倍（P<0.001）;免疫荧光显示SATB1在5种肝癌细胞株的胞浆和胞核内均
有分布,高侵袭性细胞株HCCLM3、MHCC97H表现强阳性染色。结论SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株中的表达有差异,
与肝癌转移密切相关。     

实时荧光定量RT-PCR检测肝细胞肝癌中B-myb的表达及其临床意义

目的 建立B-myb mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)系统,检测肝细胞肝癌(HCC)中B-myb的表达并分析其临床意义.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中B-myb mRNA的表达情况.结果 B-myb mRNA在肝癌组织(0.0375±0.0168)及癌旁肝组织(0.0353±0.0128)中的表达水平明显高于在正常肝组织(0.0265±0.0099)中的表达水平(P＜0.05),而在肝癌组织及癌旁肝组织中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).B-myb在人肝癌组织中的表达与临床分期、肝外转移及术后复发明显有关,而与门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平及分化程度无明显关系.结论 该方法克服了传统PCR只能定性检测而不能定量检测的缺点,为研究B-myb在HCC中的表达提供了定量方法.B-myb可能与肝癌的发生、发展有关.     

p27kip1过表达对肝细胞癌细胞株细胞周期的影响

目的探讨肿瘤抑制基因p27^kip1编码的P27蛋白过表达与HCC细胞株细胞周期的关系。方法本研究从野生型p27^kip1基因真核表达质粒pEYFP-P27（WT）出发,采用定点诱变技术构建了突变型p27^kip1基因表达载体pEYFP-P27（S10A）、pEYFP-P27（T157A）和pEYFP-P27（T187A）,然后用脂质体法将上述质粒转染HCC细胞株HepG2和Hep3B,Western Blotting检测内源和转入的P27蛋白表达,流式细胞仪检测P27蛋白过表达对HCC细胞株细胞周期的影响。结果野生型和3种突变型的P27融合蛋白在HepG2和Hep3B中的过表达都能增强G0／G1期阻抑;同时,对HepG2细胞,核定位位点突变体P27（T157A）比野生型P27蛋白及其他两个突变体具有更强的细胞周期阻抑活性,而对Hep3B细胞,3个突变体和野生型p27蛋白对细胞周期的影响无明显差异。结论P27蛋白过表达能够显著增强HCC细胞株的G0／G1期阻抑。     

CYR61/CCN1在肝细胞肝癌中的原位表达及其临床意义

目的：观察Cyr61在肝细胞肝癌中表达的意义．方法：采用免疫组化法和RT—PCR共检测65例肝细胞肝癌中Cyr61蛋白和mRNA表达水平,分析其表达与肝癌的临床病理学特征的关系．结果：高分化HCC组织的Cyr61蛋白表达水平高于低分化HCC组织（P〈0．01）;镜下存在静脉浸润、多结节的HCC组织中Cyr61蛋白表达高于无静脉浸润、单结节的HCC组织（P〈0．05）．30例肝癌组织Cyr61mRNA表达均为阳性,86．67％（26／30）癌组织Cyr61mRNA表达低于相应癌旁组织（P〈0．05）．结论：Cyr61可能在肝癌的发生早期发挥重要作用,并与肝癌进程中的间质重建和侵袭转移有关．