萝卜硫素对内皮素-1诱导大鼠平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究萝卜硫素(SFN)对内皮素-1(ET-1)诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其机制。方法 将组织贴块法原代培养的VSMC随机分为对照组(正常培养)、模型组(给予0.1μmol·L^-1 ET-1处理)和低、中、高剂量实验组(分别给予5、10、20μmol·L^-1 SFN+0.1μmol·L^-1 ET-1处理)。用噻唑蓝法检测细胞增殖活力,用实时荧光定量聚合酶链反应法测定增殖及凋亡相关基因mRNA表达水平,用荧光探针2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯法检测活性氧(ROS)相对荧光强度,用蛋白质印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及p53蛋白的表达水平。结果 对照组、模型组和低、中、高剂量实验组的细胞增殖活力分别为0.27±0.02、0.50±0.04、0.40±0.03、0.38±0.03和0.34±0.03,Bcl-2 mRNA表达水平分别为1...     

亚硝基乙酰青霉胺抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨亚硝基乙酰青霉胺对人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用。方法将不同浓度的亚硝基乙酰青霉胺300、500、800、1000μmol/L作用于体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC),采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在500、800、1000μmol/L的亚硝基乙酰青霉胺作用下,VSMC的3H-TdR掺入量cpm分别为1096.33±85.60、852.00±57.80、693.00±49.60,均与对照组的1270.00±96.50有显著性差异(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论亚硝基乙酰青霉胺能够抑制人VSMC的增殖,可能有防治经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的作用。     

Cl~-通道在内皮素-1引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的　研究Cl-通道在内皮素 1(endothelin 1,ET 1)引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法　通过细胞计数和3H TdR参入实验 ,并结合fura 2 /AM荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)等技术 ,观察了Cl-通道阻断剂对ET 1引起的 [Ca2 + ]i 变化及血管平滑肌细胞增殖的影响。结果　Cl-通道阻断剂DIDS可呈浓度依赖性地抑制 10nmol·L-1ET 1引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其它Cl-通道阻断剂如IAA 94、NPPB、SITS、DPC和速尿均无此作用 ,DIDS也能抑制 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高 ,而对ET 1引起的Ca2 + 释放无影响 ;预先将细胞与 1μmol·L-1nifedipine作用后 ,3μmol·L-1DIDS对 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高及血管平滑肌细胞增殖不再有效 ,将细胞与 10 μmol·L-1SK&F96 36 5预孵后 ,DIDS却能进一步抑制ET 1的上述作用 ;3μmol·L-1DIDS对 30mmol·L-1KCl引起的胞浆[Ca2 + ]i升高无影响。结论　DIDS可通过阻断Cl-通道来抑制ET 1因促发Cl-通道开放经电压依赖性钙通道的Ca2 +内流及细胞增殖 ,DIDS敏感的Cl-通道可能在ET 1促发的Ca2 + 内流及血管平滑肌细胞增殖的调控上都起着重要的作用     

miR-149-5p对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的研究

目的 探究miR-149-5p在氧化低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)中的功能及其分子机制.方法 用不同浓度的ox-LDL(0,25,50,100μg·mL-1)处理VSMCs 24h,或用100 mg·mL-1的ox-LDL分别处理VSMCs 0,6,12,24 h,以实时荧光定量逆...     

黄芪对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究黄芪在高糖诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移中的作用及其机制。方法 取VSMCs随机分为对照组（普通培养）、高糖组(25mmol·L^-1葡萄糖)、实验组(25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)、第1转染组(转染阴性对照寡核苷酸+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·ml^-1黄芪)、第2转染组(转染miR-18a-5p模拟物+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)。以细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞的存活率;以划痕实验检测细胞迁移情况;以实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测miR-18a-5p的表达;以蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2 （MFN2）蛋白的表达。结果 对照组、高糖组和实验组VSMCs存活率分别为（100.00±10.00）%,（188.24±18.17）%和（123.52±12.66）%;VSMCs迁移率分别为（15.16±1.64）%,（53...     

DDPH对血管平滑肌细胞增殖及PDGF-B、bFGFc-sis、c-myc的影响

目的：观察１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对血管平滑肌细胞增殖的作用及对生长因子ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃ表达的影响。方法：内皮素建立培养的ＶＳＭＣ增殖模型，氚—胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）参入法，流式细胞术，１９９７－０３－２３收稿，１９９７－０４－０４修回＊国家教委优秀年轻教师基金资助项目１同济医院心内科，武汉４３００３０作者简介：熊一力，女，４１岁，博士后钱家庆，男，６３岁，博士生导师，药理教研室主任，中国药理学会常务理事免疫细胞化学及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法测定。结果：ＤＤＰＨ能逆转内皮素所致的３Ｈ－ＴｄＲ参入量增多，阻止ＶＳＭＣ由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期），并能逆转内皮素引起的ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ抗原，ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达增强。结论：ＤＤＰＨ能抑制ＶＳＭＣ增殖，与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

类肝素对血管平滑肌细胞增殖的影响

以细胞培养法并用肝素等作对照,观察类肝素对兔主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增生的影响。结果表明,类肝素在1.6～0.05mg·ml^-1浓度下,对FCS,bFGF,IL-1刺激细胞增殖均有明显的抑制作用。将VSMCs在类肝素0.2～0.05mg·ml^-1中预孵24h后弃去药液,再在含FCS培养液中继续培养,也能明显抑制细胞增殖。类肝素对FCS及IL-1诱导VSMCs增殖的抑制作用比同浓度的肝素弱,但对bFGF诱导VSMCs增殖的抑制作用比肝素强。右旋糖酐对VSMCs增殖无抑制作用,提示抑制作用与分子中含硫酸基有关。     

高糖增强兔血管平滑肌细胞对内皮素—1的增殖反应性

目的;观察高糖对内皮素－１促兔主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：ＶＳＭＣ分别培养于含正常葡萄糖,高糖或高渗的培养基中,「＾３Ｈ」胸腺嘧啶掺入法检测ＤＮＡ合成速率,蛋白质印迹法检测磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的表达。结果：在１０＾－１２至１０＾－８ｍｏｌ．Ｌ＾－１浓度范围内,ＥＴ－１浓度依赖方式增加ＶＳＭＣ的「＾３Ｈ」胸腺嘧啶掺入及磷酸化ｐ４４／ｐ４２ＭＡＰＫ的表达。     

丹参酮影响血管平滑肌细胞增殖研究进展

1 平滑肌细胞增殖的机制 1.1 血管平滑肌细胞增殖的病理机制①在动脉粥样硬化中的病理作用:血管平滑肌细胞由血管中膜伸入到血管内膜后,成为粥样斑块和纤维斑块的细胞成分.血小板源性生长因子(PDGF)由该细胞成分大量分泌,从而刺激血管平滑肌细胞增殖,导致管腔变细[1].②PTCA术后再狭窄中的病理作用:研究表明,在PTCA术后数小时至数天里,可以产生血管损伤.根据血管损伤时期,可分为前期与后期.由冠脉血管痉挛所致血管狭窄称之为前期血管损伤[2].当血管内皮受损后,血管中膜平滑肌细胞则由静止-收缩的状态改变成为增殖-合成的情况.在血小板源性生长因子等相关的细胞因子作用下加速增殖.从而加快血管平滑肌细胞向血管内膜迁移,最终导致血管狭窄甚至闭塞.     

Losartan和CGRP对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的比较非肽类血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型阻断剂氯沙坦(Losartan)和血管活性肽降钙素基因相关肽(CGRP)对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖作用的影响,为探讨此两类物质的降压机制提供实验依据。方法采用MTT,3H-参入法和流式细胞仪分别测定血管紧张素Ⅱ刺激下,Losartan或CGRP干预下血管平滑肌细胞的增殖变化,W est-ern b loting法测定不同状态下血管平滑肌细胞内ERK1/2的活性变化。结果Losartan或CGRP能抑制血管紧张素Ⅱ刺激下血管平滑肌细胞的生存率、DNA合成、细胞周期增殖指数,以及细胞内ERK1/2的活性,并呈剂量依赖性。而且,CGRP抑制作用强于Losartan。结论Losartan或CGRP能抑制血管紧张素Ⅱ刺激下血管平滑肌细胞增殖,其细胞内的信号传导途径与ERK1/2有关。     

雷公藤甲素对兔血管平滑肌细胞增生和凋亡的影响

目的：研究雷公藤甲素（TP）是否具有抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖并诱导其发生凋亡的作用,为临床开发新型药物洗脱支架提供实验依据。方法：体外主动脉SMCs培养和流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳。结果：TP组与空白对照组及地塞米松组相比,凋亡率有显著提高;TP干预组凝胶电泳谱型呈凋亡特征性梯状条带。结论：TP可抑制指数生长期SMCs增殖并诱导其凋亡。     

多沙唑嗪抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨多沙唑嗪对人血管平滑肌细胞(VSMCS)增殖的抑制作用。方法将0.1、1、10、25μmol/L的多沙唑嗪(Doxazosin,Dox)作用于体外培养的VSMCS,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在1、10、25μmol/L的Dox作用下,VSMCS的3H-TdR的掺入量分别为(983±58.7)cpm、(730±54.9)cpm、(500±64.1)cpm,显著低于对照组的(1270±96.5)cpm(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论多沙唑嗪能够抑制人VSMCS的增殖,对经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄可能有防治作用。     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察半胱氨酸(Cys)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响.方法 采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡.RT-PCR法检测bax mRNA的表达.结果 体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和10001μmol/L Cys的培养液中孵育24h后的吸光度(A)值均高于对照组(P<0.05),表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时.VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡.结论 浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡.     

SB_(224289)对5-HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的研究 5 HT1B受体拮抗剂SB2 2 42 89对 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响 ,探讨肺血管构型重建的 5 HT1B受体机制。方法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,用MTT法和3 H TdR掺入法检测细胞增殖和DNA合成。结果SB2 2 42 89能剂量依赖地抑制 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖。SB2 2 42 89能剂量依赖地抑制 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞的DNA合成 ,SB2 2 42 89能阻断 5 HT对肺动脉平滑肌细胞的促有丝分裂作用。结论SB2 2 42 89能抑制 5 HT引起的肺动脉平滑肌细胞的增殖。5 HT1B受体在 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中有重要作用。     

丹皮酚对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究丹皮酚对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖的影响。方法高脂饮食法复制家兔动脉粥样硬化病理模型;HE染色并光镜观察主动脉病理学改变;MTT法分析体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖水平;全自动生化分析仪测定主动脉组织中脂质含量;酶法测定SOD、MDA含量;放射免疫分析法测定IL-1β、TNF-α的含量;免疫组织化学法检测主动脉组织中PCNA的蛋白表达。结果丹皮酚(75、150 mg.kg-1)治疗给药(ig,6 wk)能减轻模型动物主动脉内膜增厚及泡沫细胞数量;使主动脉组织中脂质、脂质过氧化反应以及炎性细胞因子含量等方面得到显著改善;并能显著抑制主动脉组织中PCNA蛋白的表达强度;丹皮酚(100~300 mg.L-1)可明显抑制体外培养的血管平滑肌细胞增殖反应。结论丹皮酚对血管平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,可能是其降脂、减轻脂质过氧化反应以及炎性细胞因子含量等协同作用结果,并可能通过抑制PCNA的表达而调控动脉粥样硬化病变中的血管平滑肌细胞增殖周期。     

膦甲酸钠干预高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的研究

目的　观察不同浓度的膦甲酸钠 (PFA)对高磷诱导的牛主动脉血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素 (OC)表达的影响。方法　用不同磷浓度 (正常磷Pi1.5mmol·L-1、高磷Pi2 0mmol·L-1)及含不同浓度膦甲酸钠的培养液 ,体外培养牛主动脉平滑肌细胞 ,观察血管平滑肌细胞钙沉积及骨钙素表达。用甲ο 酚酞络合酮方法测定钙含量 ,BCA法测定蛋白含量。培养上清液中骨钙素浓度用放射免疫法测定 ,用蛋白含量标化钙含量、骨钙素的浓度 ,RT PCR观察骨钙素mR NA的表达。结果　①高磷组较正常磷组平滑肌细胞钙沉积增加 :细胞培养 6d后 ,高磷组 (77 187± 11 6 92 )mg·g-1Pro ,正常磷组 (2 5 76 8± 1 75 0 )mg·g-1Pro ,P <0 0 1;②膦甲酸钠能有效地抑制钙沉积 :培养 6d ,高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组 (37 72 9± 5 899)mg·g-1Pro ,与高磷未干预组相比 ,P <0 0 1;③高磷组骨钙素表达明显增高。高磷组与正常磷组相比 ,培养上清液中骨钙素水平 :(1 5 0 3× 10 -2 ±2 6 0 1× 10 -3 )mg·g-1Pro对 (2 981× 10 -3 ± 8 382× 10 -4)mg·g-1Pro ,P <0 0 1;平滑肌细胞骨钙素mRNA表达 (OC/GAPDH) :1 886± 0 16 5对 0 75 2± 0 0 5 2 1,P <0 0 1;④膦甲酸钠能有效地抑制骨钙素的表达。高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组与高磷组?     

钩藤碱和异钩藤碱抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖及相关机制

目的探讨钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制效应及相关机制。方法建立血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和逆转录聚合酶链反应观察钩藤碱和异钩藤碱对其增殖活性、细胞周期、细胞膜AT1R蛋白表达、信号转导通路NF-κB和Stat3蛋白表达、原癌基因c-Myc和c-Fos蛋白表达与mRNA转录的影响。结果血管紧张素Ⅱ明显刺激血管平滑肌细胞增殖,钩藤碱和异钩藤碱呈剂量依赖性抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖;在钩藤碱和异钩藤碱干预下,血管平滑肌细胞处于G0/G1期的细胞数明显增多,S期的细胞数明显减少,c-Myc、c-Fos、AT1R、NF-κB、Stat3的蛋白表达以及c-MycmRNA和c-FosmRNA转录也明显降低。结论钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖有明显抑制效应,其机制与阻滞血管平滑肌细胞G0/G1期向S期转化以及下调AT1R、NF-κB、Stat3、c-Myc、c-Fos蛋白的表达以及c-MycmR-NA和c-FosmRNA转录有关。     

肝素十二糖对血管平滑肌细胞增殖作用的研究

目的:研究肝素十二糖(dp12)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖作用的影响,并分析其分子水平的作用机制。方法:通过以10%新生牛血清诱导牛胸主动脉血管平滑肌细胞增殖建立模型,然后考察实验室精制的不同浓度的肝素寡糖对血管平滑肌细胞增殖作用的影响;四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测dp12对VSMCs增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR法检测ERK1/2转录变化情况;Western Blotting法检测ERK1/2和p-ERK1/2的表达。结果:MTT结果显示不同浓度的dp12可以明显抑制由10%新生牛血清诱导的血管平滑肌细胞的增殖;细胞周期实验揭示dp12抑制血清诱导的VSMCs从G1期进入S期,影响细胞周期;dp12通过下调ERK基因的转录进而下调ERK1/2的表达,此外dp12抑制ERK1/2的磷酸化进而影响细胞增殖。结论:dp12使VSMCs在G1期/S期阻滞,通过抑制ERK基因的转录和ERK蛋白的磷酸化抑制VSMCs增殖,可能是dp12抗VSMCs增殖的机制之一。