中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的以不同剂量的中波紫外线(UVB)诱导体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡,探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否参与凋亡过程。方法取对数生长期的HaCaT细胞,分别用10 mJ/cm2,15 J/cm2,20 J/cm2,25 J/cm2,30 J/cm2的UVB照射,并于照射24 h后检测HaCaT细胞的增殖活性,分析HaCaT细胞的凋亡率,测定HaCaT细胞上清液中TNF-α的水平,观察细胞形态及凋亡细胞特征。结果在10~30 mJ/cm2的UVB照射下,随照射剂量的增大,细胞的增殖活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,当剂量达30 J/cm2时,细胞凋亡率最大,细胞的增殖活性和凋亡率呈直线负相关;随UVB照射剂量的增大,TNF-α的分泌量增加,细胞上清液中TNF-α的分泌量和凋亡率呈直线正相关;倒置显微镜及透射电镜进一步从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性;照射产生的TNF-α可能参与了其凋亡过程。     

紫外线辐射诱导角质形成细胞凋亡的机制

紫外线辐射诱导角质形成细胞凋亡,与多种皮肤病理过程关系密切,已引起人们关注。紫外线可通过诱导活性氧及细胞因子产生DNA损伤和基因表达改变等致角质形成细胞凋亡,此过程有多个信号转导途径参与,其中p53、CD95、Bcl-2、半胱天冬酶、丝裂原活化蛋白激酶介导的信号转导途径起重要作用。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡中TF-1细胞凋亡相关基因19的表达

目的：研究在中波紫外线(UVB）诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT）凋亡过程中，T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19）的表达时相及位置，方法：使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin—V）、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果：在凋亡过程中，TFAR 19逐渐向核周聚积，最后向核膜内移位，在核膜及其周围以及核内表达。结论：在UVB诱导HaCaT细胞凋亡的早期和晚期过程中TFAR 19均有表达。     

中波紫外线激活HaCaT细胞炎症信号通路的实验研究

目的 探讨中波紫外线(UVB)对角质形成细胞(KC)炎症信号通路的影响.方法 UVB(40 mJ/cm²)照射永生化人角质形成细胞株HaCaT细胞,分别于照射后0、10、30、60、120、240min收集细胞蛋白和核蛋白,蛋白质印迹法检测NF-κB信号传导通路中的重要分子-磷酸化IκB-α(P-IκB-α)、IκB-α和NF-κB p65蛋白的动态变化,以及MAPK家族的蛋白分子ERK1/2、p38、c-JNK等磷酸化激活的动态变化.结果 蛋白质印迹法检测结果显示,UVB照射后0.5h IκB-α开始发生磷酸化和降解,在第2、4小时时更加明显;细胞核蛋白p65的量在照射后0.5h开始升高,在随后的2h时达到高峰.UVB照射后10 min HaCaT细胞内的ERK1/2、p38、c-JNK蛋白的磷酸化就开始增加.结论 UVB照射KC可激活细胞内的NF-κB及MAPK信号传导通路.     

中波紫外线诱导表皮细胞凋亡机制研究进展

中波紫外线作为日光紫外线的组成部分,可在表皮细胞引起多种生物学效应,也是诱导细胞凋亡的一种有效刺激因子,其发生机制与多种因素有关,包括p53、bcl-2等基因表达的改变,p38丝裂原激活蛋白激酶、c-jun N-末端蛋白激酶、蛋白激酶C、白介素-1β转换酶等蛋白激酶的激活以及多种因子和抗氧化物的产生等.这种过程在角质形成细胞、黑素细胞、郎格汉斯细胞均可发生,在防止皮肤肿瘤发生中起着一定作用,与诱导皮肤局部免疫抑制也有着密切关系.     

窄谱中波紫外线对HaCaT细胞增殖及Gadd45α表达的影响北大核心CSCD

目的探讨窄谱中波紫外线（NB-UYB）对HaCaT细胞表达Gadd45α及对细胞增殖、周期的影响。方法分别以100、200、400mJ／cm^2NB-UVB照射HaCaT细胞后,于6、12、24h收集细胞,采用RT-PCR和Western印迹检测Gadd45amRNA和蛋白水平的变化;CCK8法检测照射后对HaCaT细胞增殖的影响;流式细胞术检测照射后对HaCaT细胞周期的影响。结果HaCaT细胞表达Gadd45α,分别经100、200、400mJ／cm^2NB-UVB照射后,Gadd45α mRNA及蛋白表达水平均在6h升高,12h升高明显,24h表达下降,与未照射组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。三个剂量组照射后12h,Gadd45α mRNA相对A值分别为1．4360±0．6551、1．8633±0．0979、1．9266±0．1724,均高于对照组（0．6000±0．1276）（P〈0．05）;Gadd45α蛋白A值分别为0．0773±0．0005、0．1936±0．0015、0．2373±0．0015,较对照组（0．0290±0．0010）增高（P〈0．05）。NB-UVB照射对HaCaT细胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及时效关系;三组照射后HaCaT细胞周期发生改变,G2期细胞比例依次为13．53±1．03、17．77±2．25、30．03±4．29,较对照组（9．24±0．97）显著增高（P〈0．05）,细胞周期被阻滞于G2期。结论NB-UVB照射后HaCaT细胞上调Gadd45α表达;Gadd45α可能参与了紫外线照射后HaCaT细胞增殖抑制、周期阻滞过程。     

硒代蛋氨酸对中波紫外线致HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究硒代蛋氨酸对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法 培养HaCaT细胞,分为4组：①正常对照组,不做任何处理;②硒代蛋氨酸组：分别加入1、10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L 硒代蛋氨酸预孵育24 h;③UVB组：30、60、90 mJ/cm2 UVB照射;④硒代蛋氨酸 + UVB组：不同浓度硒代蛋氨酸预孵育24 h后进行不同剂量UVB照射。采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）水平。采用析因设计方差分析、单因素方差分析对数据进行统计学分析,多重比较采用LSD法。 结果 析因设计方差分析结果显示,UVB照射对细胞增殖活性有抑制作用（F = 128.04,P < 0.05）,且随UVB强度增加,细胞增殖活性逐渐下降,组间差异有统计学意义（P < 0.05）;硒代蛋氨酸预孵育对细胞增殖活性也有影响（F = 5.95,P < 0.05）,其中10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + UVB组与UVB组比较,细胞增殖活性显著升高（P < 0.05）;UVB照射和硒代蛋氨酸对细胞增殖活性无明显交互作用（F = 1.65,P > 0.05）。30 mJ/cm2 UVB 照射后,UVB组凋亡率（31.9% ± 2.67%）较正常对照组（4.1% ± 0.67%）显著升高（P < 0.05）;而10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组凋亡率［依次为：（21.9 ± 3.72）%、（17.2 ± 1.67）%、（4.6 ± 0.85）%、（7.5 ± 1.86）%、（13.5 ± 1.95）%］均较30 mJ/cm2 UVB组凋亡率显著下降（P < 0.05）。30 mJ/cm2 UVB组与正常对照组相比,SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高（P < 0.05）;10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组与30 mJ/cm2 UVB组比较,SOD和GSH-Px活性增高,MDA含量下降（P < 0.05）。 结论 硒代蛋氨酸可以减轻UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制与增强抗氧化酶活性、减少氧自由基有关。     

Akt/mTOR活化抗UVB诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的 探讨Akt/mTOR信号通路活化抗中波紫外线（UVB）诱导的HaCaT细胞凋亡。方法 UVB照射角质形成细胞,Western印迹检测Akt/mTOR通路中相关信号分子的动态水平变化。免疫荧光 Hoechst 33342染色观察HaCaT细胞凋亡率。结果 UVB能活化Akt/mTOR信号通路,并在一定范围内（5 ～ 30 mJ/cm2）成剂量依赖性,在一定范围内（5 ～ 30 min）成时间依赖性。EGFR抑制剂PD 153035、PI3K抑制剂LY 294002和mTOR抑制剂雷帕霉素能显著抑制UVB对Akt/mTOR信号通路的活化作用。UVB照射前加入雷帕霉素、LY 294002预处理,HaCaT细胞凋亡率增加。结论 Akt/mTOR活化抗UVB诱导的HaCaT细胞凋亡。     

异丙嗪抑制中波紫外线辐射诱导HaCaT细胞产生白介素6

紫外线过量辐射是导致人类皮肤损伤的重要原因之一。角质形成细胞受到紫外线等外来因素刺激时,包括白介素6(IL-6)等多种细胞因子的分泌量增加^[1]。有研究证实组织胺可显著放大角质形成细胞对IL-6的基础分泌和紫外线辐射诱导的分泌^[2],而异丙嗪是一种H1受体阻滞剂,通过结合组织胺受体而发挥抗组织胺作用,故异丙嗪对紫外线诱导的角质形成细胞对IL-6的分泌可能有某种作用。本研究探讨异丙嗪对中波紫外线(UVB)辐射诱导HaCaT细胞产生IL-6的抑制作用。     

Astaxanthin Protects Ultraviolet B-Induced Oxidative Stress and Apoptosis in Human Keratinocytes via Intrinsic Apoptotic Pathway

BackgroundUltraviolet radiation causes skin damage due to increased production of reactive oxygen species (ROS) and inflammatory intermediates and direct attack of DNA of skin cells. Astaxanthin is a reddish pigment that belongs to a group of chemicals called carotenoids and has protective effects as an antioxidant.ObjectiveTo determine the beneficial effects of astaxanthin on damaged human skin after exposure to ultraviolet radiation.MethodsNormal human epidermal keratinocytes (NHEKs) were pre-treated with astaxanthin for 24 hours and exposed to ultraviolet B (UVB) irradiation. After 24 hours, the Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay measured cell viability, ROS assay and flow cytometry analysis assessed apoptosis, and western blotting was performed to determine expression of apoptosis-related proteins.ResultsAstaxanthin significantly inhibited UVB-induced NHEKs cytotoxicity. Pretreatment of NHEKs with astaxanthin reduced UVB-induced ROS production. Astaxanthin caused significant inhibition of UVB-induced apoptosis, as evidenced by flow cytometry analysis and western blotting.ConclusionThese results suggest that astaxanthine has a beneficial effect of reducing damage caused by UVB by effectively inhibiting cell death and reducing ROS production in keratinocytes.     

芦荟甙对中波紫外线辐射HaCaT细胞表达诱导型一氧化氮合酶及核因子κB的影响

目的 探讨芦荟甙对中波紫外线(UVB)辐射HaCaT细胞诱导核因子kB(NF-KB)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的抑制作用。方法 采用MTT法测定HaCaT细胞的增殖变化,生化比色法检测培养细胞上清液中NO含量,RT-PCR法检测HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达变化,免疫荧光细胞化学染色测定NF-kB P65的激活表达。结果 30 mJ/cm² UVB辐射HaCaT细胞,细胞的增殖明显下降,NO的合成分泌增加,iNOS mRNA表达显著增加,同时NF-kB被激活,从细胞浆易位到细胞核。芦荟甙对HaCaT细胞的增殖有显著促进作用。用不同浓度芦荟甙预处理HaCaT细胞,可以显著抑制UVB辐射诱导的NF-kB激活,下调iNOS mRNA表达及NO合成分泌。经统计学分析,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 芦荟甙通过抑制UVB辐射诱导的NF-kB P65激活,下调iNOS mRNA表达,减少NO合成分泌,发挥防护紫外线辐射损伤的作用,在炎症性皮肤病防治中可能发挥重要作用。     

HaCaT细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用

目的 探讨角质形成细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用.方法 将HaCaT细胞采用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2环境下,37 ℃孵育至80%融合时,弃去培养液,加入用无血清DMEM配制的菌丝段悬液共孵育(浓度0.1×105/mL～1.0×105/mL),并以菌丝段悬液作为阴性对照.分别于4 h、8 h、16 h和24 h制备共孵育后的菌丝段悬液,进行台盼蓝染色计数和菌落计数,对真菌生长状况进行评价并计算真菌生长抑制率.结果 在细胞和菌丝段共孵育4 h、8 h、16 h和24 h,台盼蓝染色法测得的菌生长抑制百分数分别为46.8%±8.0%、64.0%±5.5%、76.3%±7.7%和39.5%±4.9%;菌落计数法测得菌生长抑制百分数分别为39.7%±4.9%、58.0%±8.9%、68.3%±7.4%和39.9%±5.5%.结论 HaCaT细胞对体外培养的红色毛癣菌有一定的抑制作用.     

西罗莫司对UVB照射HaCaT细胞自噬的影响

目的 探讨西罗莫司能否增加中波紫外线(UVB)照射下HaCaT细胞的自噬水平.方法 0、25、50 mJ/cm2UVB照射HaCaT细胞,单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色法检测自噬.设置空白组、DMSO组、25 mJ/cm2UVB组、25 mJ/cm2 UVB+西罗莫司组、50 mJ/cm2UVB组、50 mJ/cm2 UVB+西罗莫司组共6组,MDC染色法检测自噬,并比较各组自噬水平.结果 结果UVB照射HaCaT细胞后出现了自噬,0、25、50 mJ/cm2照射组自噬体阳性细胞分别为1.07％±1.85％、9.37％±1.14％、16.29％±3.03％,3个剂量间差异有统计学意义;6组自噬体阳性细胞百分率分别为:0.56％±0.79％、1.61％±2.27％、10.00％±0.47％、21.18％±3.03％、15.82％±4.13％、29.45％±1.24％,各组两两比较差异均有统计学意义,且25 mJ/cm2UVB+西罗莫司组、50 mJ/cm2 UVB+西罗莫司组的自噬水平均高于相应UVB组.结论 UVB辐照HaCaT细胞后出现MDC染色自噬体阳性细胞,西罗莫司可能增加UVB照射下HaCaT细胞后的自噬水平.     

中波紫外线诱导的人角质形成细胞凋亡与SSA/Ro抗原表达

目的 为明确紫外线对光敏感型皮肤型红斑狼疮的作用机制,光照后人角质形成细胞表面SSA/Ro抗原的形成机理及其在皮损形成中的作用。方法 用M154培养基体外培养角质形成细胞,经UVB照射后先用相差显微镜观察细胞形态学改变,并用原位末端标记法测定凋亡细胞的断裂DNA片段,同时用间接免疫荧光法测定角质形成细胞表达SSA/Ro抗原情况;然后分别用DNase、RNase、DNase+RNase消化,碘化丙啶复染。用ELISA法测定细胞上清液SSA/Ro抗原;小剂量UVB照射后的角质形成细胞与亲和纯化的SSA/Ro特异血清及正常人血清孵育,台盼蓝染色观察细胞活性。结果 不同剂量UVB(52.8mJ/cm²、105.6mJ/cm²、158.4mJ/cm²、200mJ/cm²、211mJ/cm²)照射后KC凋亡,表面有凋亡小泡,细胞核有断裂DNA缺口并表达SSA/Ro抗原,随UVB剂量的递增,凋亡和表达SSA/Ro抗原的细胞数增多。这种抗原位于凋亡细胞的凋亡小体中,表达于细胞表面的SSA/Ro抗原可在原位诱导补体杀伤,而在细胞上清液中未测到SSA/Ro抗原。结论 UVB照射角质形成细胞通过诱导角质形成细胞凋亡表达自身抗原SSA/Ro,该抗原并不释放到上清液中,在补体和相应抗体存在的情况下可引起细胞损伤。     

紫外线对HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达的影响

目的 观察紫外线照射对人角质形成细胞系HaCaT细胞表达结合珠蛋白的影响。方法 用逆转录-聚合酶链反应法检测长波紫外线UVA、中波紫外线UVB照射后HaCaT细胞各时相结合珠蛋白mRNA表达水平。结果 UVA12J/cm²照射后HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达明显升高。照射后20min结合珠蛋白mRNA表达已开始升高,6h达第一高峰,48h出现第二高峰。照射后2h、4h、6h、24h、48h组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)UVB30mJ/cm²照射HaCaT细胞后结合珠蛋白mRNA表达也出现时相变化:4h达第一高峰,48h出现第二高峰。照射后20min、2h、4h、6h、12h、48h、72h组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 紫外线UVA、311nmUVB上调HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达,随照射时间,结合珠蛋白mRNA表达呈时相变化。     

鳄梨油和橄榄油对HaCaT细胞增殖和分化的影响

目的 探讨天然植物鳄梨油和橄榄油对HaCaT细胞系增殖及分化的影响。方法 将培养的HaCaT细胞分为鳄梨油组、橄榄油组及对照组。应用MTT实验确定鳄梨油和橄榄油对HaCaT细胞的适用剂量。以免疫细胞化学、免疫斑点印迹技术分别检测各组HaCaT细胞的c-myc原癌基因（c-myc）、有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）、NF-κB、丝聚蛋白、内披蛋白、角蛋白10的表达。结果 对照组c-myc、MAPK、NF-κB免疫化学反应的扫描灰度均值（GSM）分别为101.9 ± 8.9、91.4 ± 5.1、94.3 ± 7.0,鳄梨油组分别为131.4 ± 6.6、136.3 ± 4.5、134.3 ± 5.2,与对照组比较均显著增加（P < 0.05）;橄榄油组分别为121.1 ± 4.5、107.9 ± 7.3、106.4 ± 5.4,与对照组比较均亦显著增加（P < 0.05）;而鳄梨油组与橄榄油组相比,前者各项GSM均高于后者（P < 0.05）。鳄梨油组和橄榄油组丝聚蛋白、内披蛋白、角蛋白10免疫化学反应的GSM均高于对照组（P < 0.05）;而鳄梨油组与橄榄油组相比,后者均高于前者（P < 0.05）。此外,各组各项免疫斑点印迹的GSM与免疫细胞化学的GSM数据基本相符,在鳄梨油组两者呈显著正相关,r = 0.94,P < 0.01;在橄榄油组两者也呈现显著正相关,r = 0.97,P < 0.01。结论 一定浓度鳄梨油和橄榄油,尤其是鳄梨油对HaCaT细胞可呈现显著的促生长、增殖效应;橄榄油和鳄梨油,尤其橄榄油对HaCaT细胞可呈现显著的促分化效应。     

低剂量长波紫外线诱导培养的人皮肤黑素细胞适应性反应观察

目的 探讨低剂量长波紫外线(UVA)诱导培养人皮肤黑素细胞适应性反应的程度及特点。方法 以具有致死作用的86.4J/cm²UVA照射经7.2J/cm²低剂量UVA单次或多次预照射的培养人皮肤黑素细胞.光镜、电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的比例,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的程度。结果 单次或多次7.2J/cm²UVA预照射处理后的培养皮肤黑素细胞使随后86.4J/cm²UVA照射诱导的形态学上的毒性反应减轻,细胞凋亡的比例下降,DNA链断裂减少及修复加快,与未经预处理86.4J/cm²UVA照射的相应细胞比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);单次7.2J/cm²UVA预照射诱导培养皮肤黑素细胞的适应性反应在预照射12h后消失,而当低剂量UVA预照射的累积剂量达到28.8J/cm²以上时,预照射的培养细胞即使是14d后对86.4J/cm²UVA照射仍有明显的防护作用。结论 低剂量UVA照射可诱导培养的皮肤黑素细胞出现对随后高剂量UVA照射的适应性反应,其效应滞留期及强度与低剂量UVA的累积剂量有关。