非霍奇金淋巴瘤基因重排研究

本文阐述在非霍奇金淋巴瘤中作为肿瘤克隆性标志的抗原受体基因重排和某些组织学亚型淋巴瘤中由染色体易位引起的特异性癌基因重排,并探讨这些分子标记在淋巴瘤病因学中的作用及其临床应用。     

免疫球蛋白基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

摘要：目的?探讨骨髓及外周血免疫球蛋白(Ig)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的临床意义。方法?采用多重聚合酶链反应(mPCR)技术并根据BIOMED-2引物系统对103例B-NHL患者及20例反应性淋巴组织增生患者骨髓及外周血标本基因组DNA进行扩增，对PCR产物进行IgH、IgK基因重排的克隆性分析。结果?103例B-NHL患者中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为41.7%和50.5%，IgH和IgK联合检出率为64.1%。59例慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小B细胞淋巴瘤(SLL)患者中共检出Ig基因单克隆重排49例(83.1%)；除CLL/SLL以外的其他44例B-NHL患者中有17例(38.6%)检出Ig基因单克隆重排，而在20例反应性淋巴组织增生患者中均未检出。70例B-NHL患者外周血标本Ig基因重排检出率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(45.7% vs 54.3%，χ2=1.03，P=0.31)；26例CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(69.2% vs 80.8%，χ2=0.92，P=0.34)；44例非CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异亦无统计学意义(31.8% vs 38.6%，χ2=0.45，P=0.50)。结论?Ig基因重排可用于B-NHL的临床诊断，外周血与骨髓Ig基因重排检测具有同等的诊断价值。     

中线T细胞淋巴瘤的TCR-γ基因重排研究

目的:对中线T细胞淋巴瘤的克隆性进行研究。方法:用一组针对T细胞受体γ链基因V区片段的家族特异性引物和PCR方法,对11例(22个标本)中线T细胞淋巴瘤病例进行了T细胞受体丁基因重排的检测。结果:22个标本中21个有T细胞受体γ链基因的克隆性重排(94.45％)。在9例原发灶的连续活检和1例原发灶及其转移灶的标本中均未发现增生的克隆家族的改变。结论:中线T细胞淋巴瘤的病变组织中存在T细胞的单克隆性增生,为该肿瘤的T细胞起源提供了分子生物学的证据。在中线T细胞淋巴瘤的疾病过程中(包括转移灶)增生T细胞的家族未发生变化,支持肿瘤的单克隆起源学说。     

非何杰金淋巴瘤的T细胞受体β链变异性研究

本文应用分子生物学技术，对１例未经治疗、白血期低度恶性的Ｂ细胞型非何杰金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）患者进行了外周血Ｔ淋巴瘤受体β链分子结构的研究。结果显示含Ｖβ８族的Ｔ细胞有克隆扩增。罗高频率的Ｖβ８族的重复存在，提示存在肿瘤怕介导Ｂ－ＮＨＬ体内Ｔ细胞的特异性反应。     

非霍奇金淋巴瘤抗原受体基因重排检测中双重重排现象的初步研究

目的　检测非霍奇金淋巴瘤 (NHL)抗原受体基因双重重排的发生率及初步探讨其病理意义和可能机制。方法　采用PCR方法 ,联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,检测 12 5例NHL患者IgH基因及TCR基因克隆性重排 ;检测B NHL和T NHL中抗原受体基因双重重排的发生率 ,并对其中的 117例NHL患者采用免疫组织化学EnVision两步法检测Ki6 7蛋白表达并计算增殖指数 ,分析NHL不同重排类型与增殖指数间的关系。结果　联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,96例B NHL患者中有 8例 (8% )检测到发生双重重排 ,2 9例T NHL患者中有 5例 (17% )检测到发生双重重排。B NHL中 6 5例检测到IgH基因克隆性重排 ,8例发生双重重排 ,15例为多克隆重排 ;T NHL中有 15例检测到TCR基因克隆性重排 ,5例发生双重重排 ,9例为多克隆重排。上述病例同时平行检测了Ki6 7,并计算增殖指数 ,经One way检验 ,在B NHL和T NHL中 ,克隆性重排、双重重排及多克隆重排的淋巴瘤增殖指数差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　淋巴瘤抗原受体基因的双重重排在成熟NHL中并非罕见 ;增殖指数与NHL基因双重重排无相关性     

多重PCR法检测初诊成人急性淋巴细胞白血病患者克隆性免疫球蛋白和T细胞受体基因重排

目的 应用多莺PCR方法检测初诊成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的克隆性免疫球蛋白(Ig)和T细胞受体(TCR)基因重排,为实时定量RT-PCR(RQ-PCR)法监测ALL患者体内的微量残留病(MRD)奠定基础.方法 参照BIOMED-2协作组制定的Ig和(或)TCR检测方法,设计96条不同的PCR引物,分成14个混合管,通过多重PCR,分别检测患者骨髓单个核细胞的IgH、IgK、TCRB、TCRG、TCRD克隆性基因重排.结果 在22例成人B系ALL患者中,Ig克隆性重排检出率为96%,其中IgH为86%,IgK为14%.在18例成人T系ALL患者中,TCR克隆性重排检出率为100%,其中TCRB为83%,TCRG为78%,TCRD为39%.两个及两个以上克隆性标志物的检出率在B和T系ALL中分别为91%(22例中20例)和89%(18例中16例).结论 BIOMED-2协作组设计的14管多重PCR引物和方法,几乎可检测到淋巴细胞白血病患者体内所有占优势的克隆性T、B细胞增殖群体,方法简便、可靠、覆盖面广,适用于成人ALL患者基因重排检测和MRD监测.     

非霍奇金淋巴瘤与基因重排

研究非霍奇金淋巴瘤与基因重排的关系,用PCR技术检测免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体γ基因(TCRγ)的克隆性重排。结果:①211例非霍奇金淋巴瘤患者中,IgH阳性108例,TCRγ阳性45例,双阳性12例,阴性46例;②系统观察10例患者,发现临床完全缓解时仍有5/10患者呈克隆性基因重排。结论提示,基因克隆性重排的PCR分析在非霍奇金淋巴瘤的早期诊断及评估治疗有效性方面是有用的。     

非霍奇金淋巴瘤基因重排研究

本文阐述了在非霍奇金淋巴瘤中作为肿瘤克隆性标志的抗原受体基因重排和某些组织学亚型淋巴瘤中由染色体易位引起的特异性癌基因重排，并探讨这些分子标记在淋巴瘤病因学中的作用及其临床应用。     

非霍奇金淋巴瘤患者骨髓单个核细胞BCL-2/IgH、IgH基因重排的检测

本研究检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者BCL-2/IgH基因主要断裂区重排、IgH基因重排,并探讨其对疾病的早期诊断、疗效评价等方面的意义。分别提取70例NHL(60例B-NHL、10例T-NHL)、7例淋巴结炎性肿大患者、20名正常人的骨髓单个核细胞DNA,通过PCR方法检测BCL-2/IgH、IgH基因重排,以凝胶电泳出现相应条带者为阳性,并与患者病理组织学检查进行比较,探讨此两种基因重排发生的相关因素,比较化疗后的动态变化。结果表明,①30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者(DLBCL)中,10例骨髓BCL-2/IgH重排阳性(33.3%),与30例其它B-NHL(除外滤泡淋巴瘤FL及DLBCL)阳性率(6.7%)、20名正常人阳性率(5%)比较均有显著性差异(p均<0.05)。所有T-NHL及7例淋巴结炎性肿大患者BCL-2/IgH重排均为阴性;②对8例BCL-2/IgH基因重排阳性患者进行动态监测,经2个疗程R-CHOP治疗后BCL-2/IgH基因重排明显减少,PCR半定量结果均值由初治0.59降至0.16(p<0.05),6个疗程R-CHOP治疗后PCR半定量均值为0,BCL-2/IgH基因重排完全转阴;③BCL-2/IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占81.8%,在重排阴性患者中占28.6%,两组间有统计学差异(p<0.05)。然而,BCL-2/IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性;④20例DLBCL(均为初治)骨髓单个核细胞DNA检测显示,9例IgH基因重排阳性(45%);30例其它B-NHL(均为初治或复发患者,DLBCL除外)中14例IgH基因重排阳性(46.7%),其两组间无统计学差异性(p>0.05),但对照组20名正常人、10例T细胞淋巴瘤患者及7例淋巴结炎性肿大患者均为阴性;⑤对7例IgH基因重排阳性患者进行动态监测表明,1个疗程的R-CHOP治疗就能显著减少IgH基因重排,PCR半定量结果均值由初治0.42降至0.13(p<0.05),2个疗程后PCR半定量均值为0,重排完全消除;⑥IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占90%,在重排阴性患者中占30%,两组间有统计学差异(p<0.05);IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性。结论:BCL-2/IgH、IgH基因重排均可作为B-NHL早期诊断及评价疗效的特异性指标,这两种重排均与LDH水平相关;BCL-2/IgH基因重排对DLBCL特异性较高。     

非霍奇金淋巴瘤患者血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排的检测及临床意义

目的 检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排并探讨其临床意义.方法 提取74例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法 检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)克隆性基因重排,并分别与外周血单个核细胞DNA、病理组织学检查进行比较.结果 74例患者中有58例(35例B-NHL和23例T-NHL)初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功,另16例临床缓解患者未提取出血浆游离DNA.35例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性31例(88.6%),无一例出现TCRγ基因单克隆重排,23例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性8例(34.8%),其中2例同时出现IgH基因单克隆重排.在50例同时获得病理活检标本基因重排结果 的病例中,30例B-NHL患者血浆DNA IgH基因重排阳性26例(86.7%),病理活检标本阳性24例(80.0%)(P＞0.05);20例T-NHL患者血浆DNA TCRγ基因重排阳性7例(35%),病理活检标本阳性6例(30%)(P＞0.05).结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便、相对无创,与病理活检标本的检测具有相同的临床意义.     

半巢式聚合酶链反应方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排

目的寻找一种敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）bcl-2／IgH基因重排，并通过测定产物的序列，以了解所建方法的可靠性、方法运用专业引物设计软件设计bcl-2／IgH基因重排半巢式PCR引物，对52例经临床病理确诊的DLBCL石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎患者的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR（touch down PCR）扩增，检测bcl-2／IgH基因重排，并对其产物进行克隆和序列分析。结果 通过一步法检测到bcl-2／IgH基因重排8例，其中DLBCL6例，新鲜扁桃体组织2例；进行第2次半巢式PCR时仅在DLBCL中发现5例阳性，新鲜扁桃体组织均阴性。将阳性产物在网上序列分析显示：一步法检测到的8例中有3例为假阳性，而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2／IgH基因重排片段。3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191，LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源。结论常用的检测bcl-2／IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性，其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列。为研究设计的引物与传统的引物结合，进行半巢式PCR可以排除这种假阳性扩增，提高诊断的准确性。     

淋巴系统恶性肿瘤患者血清游离DNA含量与重排基因检测及其临床意义

目的探讨血清游离DNA含量及其克隆性重排基因检测在淋巴系统恶性肿瘤诊断中的价值。方法常规方法提取与定量分析72例淋巴系统恶性肿瘤患者血清DNA;用聚合酶链反应分别对不同患者血清单个核细胞(PBMC)DNA的特异性免疫球蛋白重链CDRⅢ区、T淋巴细胞受体γV9区序列进行扩增、检测和对照分析。结果急性淋巴细胞白血病(ALL,含B-ALL组和T-ALL组)、B-淋巴瘤组、T-淋巴瘤组患者血清游离DNA含量[分别为(418±172)μg/ml、(426±192)μg/ml、(388±170)μg/ml、(400±110)μg/ml]均高于正常对照组[(77±47)μg/ml,P<0·05]。其中46例ALL患者血清及PBMC重排基因阳性率分别为76·1%和82·6%;26例淋巴瘤患者血清及PBMC重排基因阳性率分别为73·1%和65·4%;且两种方法检测结果有较好的一致性(P>0·05)。结论淋巴系统恶性肿瘤患者血清游离DNA含量明显增高,且易检测出特征性重排基因,血清游离DNA和重排基因对淋巴系统肿瘤诊断有重要价值。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体基因重排与急性髓细胞白血病的关系

目的:探讨急性髄细胞白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者的免疫球蛋白重链(IgH)、T细胞受体(TCR)基因重排对疾病预后的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR)方法检测IgH、TCR基因重排。结果:38例患者中12例发生IgH基因重排(31.6%),8例TCR基因重排(21.1%)。阳性病例完全缓解率低;缓解期长的病例阳性率低;初发或复发时阳性率高。结论:IgH、TCR基因重排提示AML患者预后不良,需密切随访。     

T淋巴母细胞淋巴瘤石蜡包埋组织中HOX11L2基因的表达及其临床意义

目的探讨在石蜡包埋T淋巴母细胞淋巴瘤（T-lymphoblastic lymphoma，T-LBL）组织中检测日的基因HOX11 L2表达的可行性及其意义。方法采用RT-PCR及实时荧光定量PCR（RQ-PCR）疗法，对54例T-LBL石蜡包埋标本进行HOX11 L2 mRNA检测结果54例中有7例（13．0％）检测到HOX11 L2 mRNA表达：被检出的7例均为儿童青少年，中位年龄9（5～15）岁，均有前纵隔占位病变，其中5例Ki67增值指数（PI）≥80％，2例病变累及中枢神经系统HOX11 L2表达组与未表达组在发病年龄、Ki67 PI及有无纵隔肿块的差异具有统计学意义（P值均〈0．05）；与未表达组相比，HOX 11 L2表达组的生存期较短（中位生存时问分别为1 L5和7．0个月），两组差异具有统计学意义（P〈0．05）；两组性别、初诊时临床分期、中枢神经系统以及骨髓受累与否差异无统计学意义。结论 应用RT-PCR或RQ-PCR方法在石蜡包埋组织中检测目的基因的表达是可行的。HOX 11 L2 mRNA表达高发于儿童，可能与部分儿童T-LBL的发生以及预后不良有关。     

CYR61和血管内皮生长因子在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及其意义

目的 研究血管诱导生成因子61（CYR61）和血管内皮生长因子（VEGF）在结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中的表达及其意义。方法 应用实时荧光定量PCR和免疫组化技术分别检测结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中CYR61 mRNA、VEGF mRNA及其蛋白水平表达。结果 ①经实时荧光定量PCR检测，20例中有19例（95．0％）CYR61 mRNA表达上调，15例（75．0％）VEGF mRNA表达上调。②经免疫组织化学染色，40例中有38例（95．0％）肿瘤细胞CYR61蛋白阳性，25例（62．5％）VEGF蛋白阳性，与对照组比较差异均无统计学意义；CYR61和VEGF在mRNA和蛋白水平表达的一致率分别为95．0％和65．0％；8例患者CYR61 mRNA、VEGF mRNA及其蛋白表达一致。③通过生存分析显示CYR61 mRNA和VEGF mRNA表达上调者预后较差，CYR61和VEGF表达水平与结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤的预后相关。结论 CYR61和VEGF在结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中的表达水平有变化，并与该肿瘤的预后可能有一定的关系。     

伴MYC、BCL2和（或）BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤在弥漫大B细胞淋巴瘤中的发生率

目的:探究伴MYC、BCL2和（或）BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的发生率。方法:回顾性收集2013年1月至2020年8月共922例DLBCL患者的临床资料,检测C-MYC及BCL2蛋白表达情况,并应用FISH技术检测MYC、BCL2和BCL6基因断裂及拷贝数变化等结构异常。结果:...     

B细胞非霍奇金淋巴瘤bcl—2／JH融合基因的检测及临床意义

目的：研究Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）ｂｃｌ－２／ＪＨ重排发生情况及其临床意义。方法：采用ＤＮＡ多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增２３例Ｂ－ＮＨＬ患者新鲜肿瘤组织、骨髓和外周血标本中ｂｃｌ－２重排的主要和次要断裂点（ＭＢＲ、ｍｃｒ）。结果：易位断裂点分别在１０例新鲜肿瘤组织（其中７例滤泡型中有５例，占７１．４％；１６例弥漫型中有５例，占３１．３％）、８例骨髓和７例外周血标本中被测到，绝大部分断裂点发生在ＭＢＲ，仅１例位于ｍｃｒ。同时还发现１８例骨髓形态学检查正常的患者中，有４例ＰＣＲ阳性，其中包括２例临床Ⅰ、Ⅱ期患者，提示其骨髓已有肿瘤细胞存在。从治疗后观察得知，治疗前骨髓ＰＣＲ阴性患者比阳性患者更易达到缓解。结论：ｂｃｌ－２／ＪＨ融合基因的检测对淋巴瘤的诊断与分期、治疗方案的选择、疗效观察及微量残留病的监测均有重要意义。     

实时定量PCR检测IgH基因重排在成人B系急性淋巴细胞白血病微量残留病监测中的意义

目的 应用实时定量PCR(RQ-PCR)方法 检测患者的免疫球蛋白重链(IgH)基因重排,探讨其在成人B系急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的微量残留病(MRD)动态监测中的意义.方法 15例B系ALL患者的初诊DNA标本经PCR扩增莺排的IgH基因,克隆产物经基因测序、序列比对后,根据每例患者的克隆特异性序列信息,利用软件设计15条等位基因特异性寡核苷酸(ASO)引物,作为RQ-PCR检测的上游引物,合成通用的JH下游引物和TaqMan探针,监测患者随访标本MRD靶分子.7例Ph+患者同时用RQ-PCR检测bcr-abl融合基因转录本.结果 使用ASO引物RQ-PCR法扩增15例患者IgH重排靶基因的敏感性为10-3～10-5,荧光背景信号未显示或较低.动态监测表明:高危组患者诱导完全缓解(CR)后体内MRD水平明显高于标危组患者,诱导CR后MRD>10-3的患者复发率(71.4%)高于MRD≤10-3的患者(12.5%),MRD>10-3的患者生存时间短.另外,Ph+患者bcr-abl融合基因转录本的对数级变化趋势与IgH重排靶基因水平的动态变化一致.结论 使用ASO引物RQ-PCR方法 检测IgH基因重排,具有敏感性高、特异性强、结果 可靠等优点,可对肿瘤克隆进行准确定量.B系ALL患者体内IgH基因重排水平与临床治疗反应和疾病预后密切相关,可用于患者病情的随访监测.