丁基苯酞对缺血脑组织中及低糖低氧刺激后培养的神经细胞中胆碱乙酰化酶活性的影响

 目的:观察丁基苯酞(dl-NBP),d-NBP和l-NBP对脑缺血后皮层和纹状体中以及低糖低氧和NMDA刺激后培养的胎鼠皮层神经元中胆碱乙酰化酶活性变化的影响?方法:大脑中动脉堵塞起始处造成大鼠局灶性脑缺血;胎鼠皮层神经元以低糖低氧培养基培养造成低糖低氧模型;胆碱乙酰化酶活性以分光度法进行测定?结果:脑缺血后缺血区皮层和纹状体中胆碱乙酰化酶活性分别下降了61.3%和58.4%?dl-NBP,d-NBP和l-NBP(10和20mg·kg^-1,ip)于脑缺血后5和60min给药2次皆可显著提高脑组织中胆碱乙酰化酶活性?dl-NBP,d-NBP和l-NBP(0.1～10μmol·L^-1)对低糖低氧及NMDA刺激后神经细胞中胆碱乙酰化酶活性也有明显的提高作用?结论:dl-NMP改善局灶性脑缺血后动物的学习记忆功能可能与其对胆碱能神经功能的改善有关?     

马桑内酯对大鼠大脑皮层突触体和脑片谷氨酸摄取、释放功能的影响

 目的:研究致痫剂马桑内酯对谷氨酸摄取和释放功能的影响，以探讨马桑内酯致痫的可能机制。万法:放射性同位素分析技术。结果:在0.35～350μmol·L^-1浓度范围内，马桑内酯使高钾(50 mmo·L^-1)去极化引起的脑片谷氨酸释放增加，增加率为11.2%～33.296，剂量效应关系明显，35 μmol ·L^-1和350μemol ·L^-1组与对照组相比谷氨酸释放显著增加(P<0.01)，各浓度马桑内酯对静息态谷氨酸基拙释放均无明显作用。在350μmol·L^-1马朵内酯作用下，突触体谷氨酸摄取降低，降低率为7. 94%，与对照组差异显著(P<0.05)，其它浓度马桑内酯作用不明显。结论:马桑内酯使谷氨酸释放增加，摄取减少，突触间隙谷氨酸聚积。     

原花青素舒张家兔主动脉和降低动脉血压的研究

目的：研究葡萄籽提取物原花青素(procyanidins，PC)舒张家兔离体主动脉和降低其动脉血压的作用及机制。方法：采用家兔离体胸主动脉环灌流模型，将标本分6组：去内皮、内皮完整、吲哚美辛(1×10^-1 mol·L^-1)、普萘洛尔(1×10^-5 mol·L^-1)、左旋硝基精氨酸N^ω-nitro-L-arginine(L-NNA 1×10^-4 mol·L^-1)或甲烯蓝(MB 1×10^-5 mol·L^-1)，分别累积加入1.25，2.5，5.0 mg·L^-1 PC观察血管张力变化；并观察40 mg·L^-1 PC对去甲肾上腺素（NA）(1×10^-8～1×10^-5 mol·L^-1)、KCl(6.3～100 mmol·L^-1)和CaCl₂ (1×10^-5～1×10^-2 mol·L^-1)诱导血管环收缩曲线的影响。另用家兔颈总动脉插管法，经静脉累积注射4.0，8.0，16，32，64，84 mg·kg^-1 PC后观察血压变化。结果：PC能舒张主动脉血管，并有量效依赖性(r=0.63，P<0.001)，去内皮、L-NNA或MB可减弱PC的舒张作用。PC能抑制NA，KCl和CaCl₂的量效收缩反应。PC能降低家兔正常动脉血压并有量效依赖性(r=0.92，P<0.001)。结论：PC舒张血管的作用是通过抑制细胞内Ca²⁺释放和电压依赖性Ca²⁺通道而减少Ca²⁺内流；也与内皮释放的NO有关；PC可降低家兔正常的动脉血压。     

葛根素对氧糖剥夺大鼠海马神经细胞Ca2+和NO的影响

 目的研究葛根素(puerarin,Pur)对缺氧缺糖状态下海马神经细胞内Ca²⁺和NO水平的影响。方法选用新生大鼠体外培养8 d的海马神经细胞,进行3 h的氧糖剥夺(oxygen/glucose deprivation,OGD)或30 min的L-谷氨酸(0.5mmol·L^-1)处理后再正常培养24 h,Pur处理组在OGD或谷氨酸处理的同时和以后24 h给予不同剂量(40,100μmol·L^-1)Pur,Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡率和坏死率;以Fluo-3或DAF-2为荧光标记,用激光共聚焦显微镜观测30 min的OGD过程中海马神经细胞Ca²⁺和NO的动态变化以及Pur的影响。结果OGD诱导海马神经细胞Ca²⁺和NO水平快速升高,其最高值分别达正常对照组的2.9和1.9倍;Pur明显减缓OGD期间神经细胞Ca²⁺内流和NO合成,与OGD组相比,40和100μmol·L^-1的Pur分别使细胞Ca²⁺峰值降低29.2%和37.1%(P<0.05和P<0.01),NO峰值降低23%和33%(P<0.05和P<0.01),显著抑制细胞内Ca²⁺和NO水平的升高;同时Pur可有效抑制OGD和谷氨酸引起的神经细胞死亡。结论Pur可通过抑制神经细胞谷氨酸/Ca²⁺/NO通路的活动而有效保护缺氧缺糖对神经细胞的损伤作用。     

苦豆子总碱舒张家兔离体主动脉的研究

目的：研究苦豆子总碱(total alkali Sophora alopecuroids L,TASa)舒张家兔离体主动脉血管的作用机制。方法：采用离体恒温灌流浴槽,以去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)预收缩后,给予TASa(5,10,20,40 mg·L^-1)观察其舒张血管的量效关系;将标本分为对照组、TASa组、TASa+吲哚美辛(1×10^-5 mol·L^-1)、TASa+普萘洛尔(1×10^-5 mol·L^-1)、TASa+左旋硝基精氨酸(1×10^-4 mol·L^-1)和TASa+去内皮细胞6组探讨TASa舒张血管的机制;用TASa(40 mg·L^-1)温育标本后,观察TASa对NA(1×10^-8～1×10^-5 mol·L^-1),KCl(6.3～100 mmol·L^-1)和CaCl₂(1×10^-5～1×10^-2 mol·L^-1)量效收缩曲线的影响。结果：TASa能舒张主动脉血管,有量效依赖性(r=0.94,P<0.01);去内皮、左旋硝基精氨酸、吲哚美辛和普萘洛尔对TASa舒张血管的作用无明显影响;TASa能压低NA,KCl和CaCl₂的量效收缩曲线。结论：TASa可能是抑制内质网Ca²⁺释放和拮抗Ca²⁺通道,降低胞浆Ca²⁺而使血管舒张。     

远志皂苷对β淀粉样蛋白1-40诱导的体外培养皮层神经细胞损伤的保护作用

目的：研究远志皂苷(TEN)对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_1-40)诱导的原代培养神经细胞损伤的保护作用。方法：以原代培养大鼠皮层神经细胞,用25 μmol·L^-1聚集状的Aβ_1-40建立神经细胞损伤模型。将培养的神经细胞分为Aβ_1-40模型组和Aβ_1-40＋远志皂苷(50,100,200 μmol·L^-1)处理的低、中、高剂量组,同时设立正常组。在倒置显微镜下观察远志皂苷给药前后神经细胞的形态学变化,用MTT比色法检测神经细胞活性,采用LDH比色法检测神经细胞膜的损伤程度。结果：与正常组相比,25 μmol·L^-1Aβ_1-40处理24 ｈ,可使神经细胞的形态发生改变和活力显著下降,在显微镜下可见神经元失去贴壁能力或易脱落,突起变短。远志皂苷中、高剂量组均能显著降低神经细胞的坏死百分率,减少LDH的释放,明显提高神经细胞的存活率。结论：凝聚态Aβ1-40对培养的皮层神经细胞有一定的毒性效应,而远志皂苷对Aβ_1-40引起的神经细胞毒性有明显的保护作用。     

芦丁对离体大鼠主动脉环的舒张作用及相关机制

 目的研究芦丁对离体大鼠胸主动脉环收缩张力的作用及其可能作用途径。方法采用累积加药法,检测芦丁对去氧肾上腺素(PE)预收缩的胸主动脉环收缩张力的影响,研究芦丁对血管张力的影响及其机制。结果芦丁(10～160μmol·L^-1)对内皮完整的离体大鼠胸主动脉环具有浓度依赖性舒张作用。芦丁对内皮完整的胸主动脉环的最大舒张反应(R_max)为(44.28±7.48)%。用一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,0.1 mmol·L^-1)、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(10μmol·L^-1)和环氧合酶抑制剂吲哚美辛(10 mmol·L^-1)预处理后,均可明显减弱芦丁诱导的舒张血管作用;用β受体阻断剂普萘洛尔(10μmol·L^-1)预处理后,芦丁的血管舒张作用不能被阻断。结论芦丁可能是通过NO-鸟苷酸环化酶途径和前列腺素介导机制产生内皮依赖性的血管舒张作用。     

脱氢表雄酮对原代培养大鼠大脑皮质神经元谷氨酸释放的影响

 目的观察脱氢表雄酮对大鼠大脑皮质神经元谷氨酸释放的影响。方法原代培养的SD大鼠大脑皮质神经元经不同浓度(1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol·L^-1)和不同作用时间(0.5,1,1.5,2,5,24,36,48,72h)的脱氢表雄酮处理后,采用OPA-巯基乙醇柱前衍生,荧光检测-高效液相色谱法测定细胞培养液中谷氨酸的含量。结果与对照组相比,不同浓度的脱氢表雄酮处理后,细胞培养液中谷氨酸的水平均下降(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,脱氢表雄酮处理组1,1.5,2,5,24,36,48,72h细胞培养液中谷氨酸的水平均下降(P<0.05或P<0.01)。结论脱氢表雄酮可抑制神经元谷氨酸的释放,这可能介导了其对抗谷氨酸兴奋性毒性的作用。     

电刺激诱发兔隐动脉双相血管收缩反应的药理学分析

 目的建立兔离体隐动脉环双相血管收缩反应模型,利用哌唑嗪和α,β-亚甲基ATP(α,β-meATP)对双相收缩成分的特性进行药理学分析。方法兔离体隐动脉血管环张力记录法及电场刺激诱发血管收缩法。结果本实验条件下的电场刺激(电压15V、波宽1 ms、刺激频率2～16 Hz、连续刺激时程32 s)可诱发兔离体隐动脉产生双相收缩反应,且具有频率(2～16 Hz)依赖性。电刺激隐动脉收缩反应的第1相不被α₁受体阻断剂哌唑嗪(0.1～10μmol·L^-1)所阻断,P2X₁受体激动剂α,β-meATP脱敏P2X₁受体后完全抑制该相反应。0.1～10μmol·L^-1哌唑嗪显著抑制8,16 Hz的第2相反应,P2X₁受体脱敏剂α,β-meATP不影响8,16 Hz的第2相反应。联合应用α,β-meATP(3μmol·L^-1)和哌唑嗪(1μmol·L^-1)则完全阻断电刺激诱发的血管收缩反应。哌唑嗪10μmol·L^-1显著抑制去甲肾上腺素(NA,0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应,而哌唑嗪1μmol·L^-1对α,β- meATP诱发的血管收缩反应无显著性作用。α,β-meATP3μmol·L^-1对NA(0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应无显著性影响。结论建立电场刺激诱发兔离体隐动脉环双相收缩反应模型,该双相反应的第一相仅与交感神经嘌呤能递质ATP的突触后效应有关,第2相反应由肾上腺素能成分和少量嘌呤能成分组成。     

氟哌啶醇季铵盐衍生物对冠状动脉作用的研究

 目的：研究氟哌啶醇季铵盐衍生物(F₂)对动物冠状动脉的作用。方法：小鼠ip氟哌啶醇(10mg·kg^-1和20mg·kg^-1)造成锥体外系不良反应模型。Ip F₂(10mg·kg^-1,20mg·kg^-1和40mg·kg^-1)，观察行为变化?采用猪冠脉条生物检定，观察10^-6mol·L^-1，10^-5mol·L^-1和10^-4mol·L^-1F₂对KCl(10mmol·L^-1～40mmol·L^-1)致猪冠脉条收缩量效曲线的影响，并观察10^-4mol·L^-1F₂对KCl(20mmol·L^-1)致冠脉条收缩后的阻断作用?采用Langendorf灌流法，观察10^-6mol·L^-1，5×10^-6mol·L^-1和10^-5mol·L^-1F₂对脑垂体后叶素所致离体豚鼠心脏冠脉流量减少的作用。结果：氟哌啶醇可致小鼠肌张力增高，肌震颤、头颈部扭曲和尾过伸等，有量效依赖性。F₂3个浓度组无一出现上述表现。F₂可使KCI致猪冠脉条收缩曲线压低，呈量效依赖性。F₂量效依赖地拮抗脑垂体后叶素致冠脉流量的减少。结论：ipF₂不引起锥体外系不良反应，但有扩冠作用。     

三七总皂苷对原代培养大鼠皮层神经细胞的保护作用

 目的：研究三七总皂苷(PNS)对神经细胞的保护作用。方法：采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞,观察谷氨酸(500μmol·L^-1,8min),缺氧5h再给氧不同时间(0,3,24h)对细胞的影响以及PNS的作用。结果：PNS25,50mg·L^-1明显减少缺氧/再给氧损伤时细胞内酶的释放,减轻细胞形态学的改变,提高细胞的存活率。对谷氨酸介导的兴奋性毒性,PNS也有一定的拮抗作用。结论：PNS的脑保护作用机制可能与其抗兴奋性毒性和缺氧性损伤的作用有关。     

蝙蝠葛苏林碱抑制NMDA引起的细胞游离钙升高而减少神经毒性

 目的:研究蝙蝠葛苏林碱(daurisoline,DAU)拮抗N-甲基-D-精氨酸(N-methyl-D-aspratate,NMDA)引起的神经毒性作用,并对其作用机制进行了分析?方法:NMDA损伤原代培养的海马神经细胞;培养细胞内游离钙浓度的测定;大鼠动脉条内⁸⁶Rb⁺外流率的测定?结果:DAU能对NMDA损伤的原代培养的海马神经细胞有明显的保护作用,能剂量依赖性的抑制损伤后培养细胞中LDH的释放;DAU还能剂量依赖性的抑制KCl,Bay,K8644,NMDA,去甲肾上腺素(NE)以及咖啡因(caffeine)刺激的细胞内游离钙浓度的上升,但并不影响静息的或由钾通道开放剂吡哪地尔(pinacidil,PIN)刺激的大鼠动脉条内⁸⁶Rb⁺的外流率?结论:DAU通过阻断NMDA引起的细胞钙升高而拮抗神经毒性?     

3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的Ca2+/cAMP不依赖性保护作用

 目的观察3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-Isobutyl-1-methylxanthine, IBMX）对5 mmol·L^-1KCl诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用并探讨其与[cAMP]i 和Ca²⁺的关系。方法建立KCl 5 mmol·L^-1诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型,用荧光二酯素法分析神经元存活,Hoechest 33258核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析凋亡,放射免疫法测定cAMP浓度。结果IBMX呈浓度依赖性拮抗5mmol·L^-1KCl诱导的神经元死亡,并明显减少核形态异常的神经元,使DNA电泳梯带变浅或完全消失;IBMX（1.0 mmol·L^-1）可持续升高神经元[cAMP]i,福司可林2.0μmol·L^-1升高[cAMP]i作用 与IBMX类似,但不能模拟IBMX的作用;此外,IBMX的拮抗作用不被cAMP 竞争性抑制剂Rp-cAMP和PKA的特异阻断药H-89阻断;单用或联用钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ的特异抑制剂KN-93和磷酯酰肌醇3位羟基激酶的特异性抑制剂LY294002也不能阻断。结论IBMX抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡作用不依赖cAMP和Ca²⁺。     

黄芩苷对小鼠脑片和大鼠皮质神经元缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

 目的在离体水平,探讨黄芩苷对缺氧缺糖/再灌注(OGD/RP)诱导的脑片及神经元损伤的保护作用及机制。方法小鼠离体脑片OGD/RP模型中,以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物白评价脑片活性;原代培养大鼠皮层神经元OGD/RP模型中,以噻唑蓝(MTT)还原和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定神经元活性变化,用2,7-二氯荧光素二乙酸盐(DCF-DA)测定细胞内自由基水平。观察不同时间给予黄芩苷对损伤的保护作用。结果在脑片,全程给药和OGD时给予黄芩苷0.01～1μmol·L^-1,再灌注时给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1,可显著减轻损伤。在神经元,全程给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1可减轻神经元损伤,并降低神经元内自由基水平升高。结论黄芩苷对OGD/RP损伤有浓度依赖性保护作用,再灌注时给药亦有效,其作用至少部分与抗自由基有关。     

HPLC测定还原型谷胱甘肽的血浆浓度

 目的建立测定人血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的HPLC方法。方法采集血样,立即注入预加衍生化试剂DTNB 的真空采血管中,25min内分离血浆。以青霉胺为内标,10%高氯酸沉淀蛋白,上清液进样20μL。色谱柱为SUPELCOSIL^TM LC-18(150mm×4.6mm,5μm) 流动相为0.05mol·L^-1醋酸钠缓冲液(pH5.6)-甲醇(100:8),流速1 mL·min^-1 检测波长320nm 结果在2～200μmol·l^-1内,标准曲线线性良好,r=0.9997(n=6)。检测限为1μmol·L^-1。日内误差和日间误差均在10%以内低、中、高3个浓度的质控样品回收率均在95%～105%之间。结论该方法准确、快速、精密,可用于GSH的人体药动学研究。     

HPLC测定犬血浆中盐酸伪麻黄碱浓度及西嗪伪麻缓释片的初步体内药动学研究

 目的建立血浆中盐酸伪麻黄碱(PSE)的HPLC测定法,并用于在犬体内的初步药动学的研究。方法以盐酸苯丙醇胺(Phen)为内标,血浆样品经简单的乙醚萃取后用HPLC直接进样检测。结果以甲醇-水(11:29)为流动相,采用Lichrospher C₁₈能使PSE,Phen及血浆中的杂质达到基线分离;实测了犬口服西嗪伪麻缓释片剂(受试制剂,T片)和PSE普通片剂(参比制剂,C片)后不同时间点下血浆中PSE的浓度,并获得主要药动学参数分别为:t_1/2(T)(4.66±1.43)h,t_1/2(C)(3.78±1.91)h,t_max(T)(4.0±1.4)h,t_max(C)(2.3±0.5)h,c_max(T)(5.47±2.41)μmol·L^-1,c_max(C)(12.31±3.57)μmol·L^-1。结论血浆中的西替利嗪及杂质不干扰样品的测定,PSE的浓度在0.1～10.0μmol·L^-1内线性良好,符合生物样品分析要求;犬单剂量口服T片剂后,PSE达峰时间明显滞后,t_1/2延长,达峰浓度明显降低,MRT明显增大,达到缓释的目的。     

红花黄色素抑制血小板激活因子介导的血小板活化作用的研究

 目的 观察血小板激活因子(PAF)对血小板聚集性、5-HT释放、胞浆内游离钙离子浓度的影响及红花总黄色素的抑制作用。方法 红花水煎液经硅胶吸附法除杂质得到红花总黄色素,以比浊法及邻苯二甲醛(OPT)荧光分光光度法观察其对PAF诱导家兔洗涤血小板(WRP)聚集及5-HT释放的影响。以Fura-2荧光分光光度法测定血小板内游离钙离子浓度。结果 红花总黄色素抑制PAF诱发的WRP聚集、5-HT释放作用呈明显的量效关系。PAF 2.0×10^-9 mol·L^-1时,0.21,0.42,0.85,1.69 g·L^-1红花总黄色素血小板聚集抑制率依次为28.0%,32.9%,60.0%,79.4%;5-HT释放抑制率分别为4.70%,12.9%,32.9%,58.4%;同时4.1,6.5,10.3,16.7,26.7 mg·ml^-1红花总黄色素剂量依赖地抑制8×10^-10 mol·L^-1 PAF引起的血小板内游离钙增高。结论 红花总黄色素可抑制PAF诱导的血小板聚集、5-HT释放及血小板内游离钙增加。     

钙调素拮抗剂E6对缺血性损伤神经细胞的保护作用

 目的:观察具有较强钙调素拮抗活性的双苄基异喹啉类化合物E6对缺血性神经细胞损伤的保护作用?方法:采用NaCN加缺糖引起肾上腺髓质瘤细胞(PC12细胞株)损伤和谷氨酸(glutamate,Glu)引起乳大鼠脑皮质神经细胞损伤模型?结果:E6对NaCN加缺糖损伤的PC12细胞保护作用较弱,而对Glu损伤的原代皮质细胞有较强的保护作用,并降低培养液中一氧化氮(NO)的含量?NO合成前体L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)可减弱E6的保护作用?E6对硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)损伤的原代神经细胞无保护作用?结论:E6可能是作用于Glu引起神经元损伤途径中NO生成之前的环节,从而表现出对缺血样损伤神经细胞的保护作用?