CD3AK对晚期肝癌疗效初步观察

目的观察晚期肝细胞癌（ＨＣＣ）患者采用抗ＣＤ３抗体激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）治疗的效果。方法５８例晚期ＨＣＣ患者分为三组，Ａ组［ＣＤ３ＡＫ＋肝动脉化学栓塞（ＴＡＣＥ）］２２例，Ｂ组（ＣＤ３ＡＫ）１５例，Ｃ组（ＴＡＣＥ）２１例。结果部分缓解率（ＰＲ）Ａ，Ｂ，Ｃ组分别为４５．５％、１３．３％（Ｐ＜０．０５）和１４．３％（Ｐ＜０．０５），中位生存期分别为１１．３月、４．９月（Ｐ＜０．０１）和４．１月（Ｐ＜０．０１），半年和１年生存率分别依次为６８．２％，３３．３％（Ｐ＜０．０５）和２３．８％以及４０．９％、６．６％（Ｐ＜０．０５）和９．５％（Ｐ＜０．０５）。结论本组结果表明ＣＤ３ＡＫ＋ＴＡＣＥ治疗晚期ＨＣＣ疗效最佳     

酪氨酸磷酸酶PRL-3单抗的制备及特性鉴定

 目的 制备并鉴定抗肝再生磷酸酶-3（Phosphatase of Regenerating Liver-3,PRL-3）单克隆抗体,为临床检测和以 PRL-3为靶点的肿瘤治疗提供可能。方法 运用杂交瘤融合技术制 备PRL-3单克隆抗体,通过Western blot检测和免疫沉淀鉴定其与 原核及真核PRL-3蛋白的反应性; 重组并诱导表达PRL-3的6个截短 体,Western blot分析单抗结合的大致抗原表位。结果 共得到9 株单抗,3株与PRL-1、PRL-2和PRL-3均反应,6株(9D8、9E2、9F4 、11B2、4D3和4D10)只与PRL-3反应,其中4株特异性单抗可以与哺 乳动物细胞表达的PRL-3反应;单抗9D8、9E2、9F4和11B2 可以和 PRL-3羧基末端（162-173位氨基酸）的短肽结合;4D3和4D10与中 间部（69~95位氨基酸）的短肽结合。结论 抗体9D8、9E2、9F4、 11B2、4D3和4D10特异性强、亲和力高,为临床检测提供了可靠工 具,并为进一步的功能研究奠定了基础。     

卵巢肿瘤中CD44变异型的免疫组织化学分析

细胞粘附因子ＣＤ４４的变异型（ＣＤ４４ｖ）出现在多种肿瘤的恶性转化过程中并与这些肿瘤的转移能力密切相关。然而，ＣＤ４４基因在良恶性卵巢肿瘤中的表达类型尚无定论。为此，本研究使用特异性识别ＣＤ４４分子不同抗原决定簇的单克隆抗体，对正常卵巢组织以及良性和恶性肿瘤的ＣＤ４４表达类型进行免疫组织化学分析。结果显示，ＣＤ４４ｖ在正常卵巢内呈阴性；２５例良性肿瘤中，２１例阴性，４例有灶局性变异型外显子ｖ８－ｖ１０的表达；相反，２６例卵巢癌手术切除标本和２株卵巢癌细胞系Ｃａｏｖ３和Ｏｖｃａ３有多种形式的ＣＤ４４ｖ存在；其中，ｖ７的表达明显上调。２例交界性肿瘤的表达形式与卵巢癌相似，但呈灶局阳性。本结果因而提示，ＣＤ４４ｖ尤其是ｖ７出现在卵巢癌恶性转化的过程中；它（们）可能成为该类肿瘤新的生物标志物并在癌细胞转移中起促进作用。     

抗TAG—72抗原不同免疫决定簇单克隆抗体的制备和鉴定

Ｂ７２．３单克隆抗体的对应抗原为肿瘤相关糖蛋白抗原７２（ＴＡＧ－７２）。该抗原除有较好的肿瘤特异性外，并在多数上皮性恶性肿瘤细胞呈阳性表达。目前Ｂ７２．３单克隆抗体已由美国ｃｅｎｔｅｒｏｎ公司开发成商品试剂盒，用于临床的组织学、细胞学、血清学的诊断和鉴别诊断，以及体内的定位诊断和导向治疗。为进一步提高临床应用效果，作者研制出了抗ＴＡＧ－７２抗原不同免疫决定簇的单克隆抗体７２－４５和７２－１４２。分     

CD3AK细胞与LAK细胞的比较

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的ＣＤ３ＡＫ与用等量ｒＩＬ－２诱生扩增的ＬＡＫ间有明显差异：１）扩增倍数和细胞毒活性强度及其动态学不同：在诱生初期，ＣＤ３ＡＫ细胞数下降，细胞扩增倍数低于ＬＡＫ；对Ｋ５６２的细胞毒不知 性低于ＬＡＫ，诱生８天后ＣＤ３ＡＫ的扩增倍数和     

抗表皮生长因子受体与抗CD_3双功能抗体的制备及细胞毒的研究

制备抗ＥＧＦ┐Ｒ与抗ＣＤ３双功能单克隆抗体及其细胞毒的研究方法通过杂交－杂交瘤技术制备双功能单克隆抗体细胞株Ｅｔ２２，并了解其与ＩＬ┐２联合体外激活ＰＢＬｓ细胞对Ａ４３１癌细胞的杀伤活性。结果ＩＬ┐２激活的ＰＢＬｓ和未经ＩＬ┐２刺激培养的ＰＢＬｓ对靶细胞Ａ４３１的杀伤活性，效靶比为２０∶１的条件下，杀伤率分别为４９％，１７％。Ｅｔ２２双功能抗体介导ＩＬ┐２激活的效应细胞杀伤靶细胞（Ａ４３１）为７５％。结论双功能单克隆抗体（ＥＱ７５×ＯＫＴ３）介导ＩＬ┐２激活的效应细胞杀伤靶细胞（Ａ４３１）活性高于两种亲本单抗（ＣＤ３或ＥＱ７５     

抗CD3/抗CD20偶联物的制备及其介导激活T细胞杀伤活性研究

目的：研究抗CD3/抗CD20抗体偶联物介导的激活T细胞杀伤活性。方法：通过SPDP偶联，经分子筛层析法纯化得到抗CD3/抗CD20抗体偶联物，并用FACS和玫瑰花环试验鉴定纯化产物；采用^51Cr释放试验测定该抗体偶联物介导的体外靶向杀伤活性。结果：纯化的抗CD3/抗CD20抗体偶联物具有与jurkat(CD3^ )和Daudi细胞（CD20^ )的结合活性，且能同时将Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环；在体外能介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞。结论：抗CD3/抗CD20抗体偶联物体外能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞，为B细胞恶性肿瘤临床治疗提供实验依据。     

抗胃癌单抗3H11的单链抗体表达载体的构建和表达

目的构建抗胃癌鼠单抗３Ｈ１１的单链抗体（ＳｃＦｖ）,以利于临床应用。方法采用噬菌体抗体库技术和ＰＣＲ介导的定位点突变技术,构建和改造抗胃癌ＳｃＦｖ基因。结果从３Ｈ１１杂交瘤制备抗体库,以胃癌细胞系（ＭＧＣ８０３）进行筛选,未获阳性克隆。再对３Ｈ１１可变区基因以ＰＣＲ错配技术进行随机突变,构建次级突变抗体库,仍未筛出阳性克隆。最后用ＰＣＲ定点突变技术,将ＳｃＦｖ可变区基因氨基端序列恢复成３Ｈ１１的原始序列,终于得到可与胃癌细胞结合的ＳｃＦｖ克隆。结论说明ＰＣＲ引物引入的可变区氨基端序列的改变有时可对ＳｃＦｖ的活性有很大影响     

CD4^＋IL-9^＋细胞在大肠癌免疫微环境中的分布及临床意义

目的：检测CD4^＋IL-9^＋（Th9）细胞在大肠癌免疫微环境中的表型和分布特征,分析其与临床病理的相关性。方法：选取2013-06-05-2013-10-10广西医科大学第一附属医院初次行手术治疗的45例大肠癌患者的肿瘤组织、相对应癌旁组织以及外周血（术前和术后）,同时抽取15例健康志愿者外周血,用流式细胞仪检测各标本中Th9、Th1和Th2在CD4＋细胞中的比例,记录患者的临床病理资料（性别、年龄、民族、Ducks分期、肿瘤大小、淋巴结转移、CEA和AFP水平）;另选取5例同期肠癌患者的肿瘤组织对Th9细胞表型特征（CD45RO／CD45RA）进行流式细胞仪测定。结果：肠癌组织中的Th9细胞比例为（1．12_＋0．33）％,明显高于癌旁组织（0．85±0．29）％和术前外周血（0．65±0．27）％,P值均〈0．05;肠癌组织中Th9细胞表面高表达CD45RO蛋白为（85．23±5．91）％,低表达CD45RA蛋白为（18．23±6．78）％;术前外周血Th9细胞比例为（0．65±0．27）％,明显高于术后外周血（0．47±0．24）％,P=0．0012;Th9细胞与肠癌临床病理相关性分析表明,其与Ducks分期有关,P〈0．05,与其他因素无关;肠癌组织中Th9细胞比例与Th1细胞无明显相关,r=0．140,P=0．360,与Th2细胞比例呈负相关,r=-0．65,P〈0．001。结论：Th9淋巴细胞在大肠肿瘤微坏境存在聚集现象,其与肿瘤的进展有关,可能参与了大肠癌免疫微环境的调节进而影响了肿瘤的发生和发展。     

尼妥珠单抗联合同期放化疗治疗局部晚期宫颈癌的近期疗效观察

目的：探讨尼妥珠单抗联合放化疗治疗局部晚期宫颈癌的疗效及不良反应。方法收集经组织病理确诊的Ⅲ期宫颈癌初诊患者60例,采用随机数字表法将患者随机分为两组,对照组（n ＝30）采用调强放疗和腔内后装治疗及周期化疗,观察组（n ＝30）除调强放疗和腔内后装治疗及周期化疗外,每周放疗前进行尼妥珠单抗200 mg 治疗,共6～7次。结果全部病例放疗结束3个月后评价疗效。观察组：CR 20例、PR 5例、SD 4例,PD 1例,总有效率（CR ＋PR）为83．4％。对照组：CR 18例、PR 3例、SD 6例,PD 3例,总有效率为70．0％,两组差异有统计学意义（χ2＝8．356,P ＜0．05）。观察组与对照组主要不良反应为轻度的放射性直肠炎（16．7％∶13．3％）、放射性膀胱炎（10．0％∶10．0％）、恶心呕吐（50．0％∶46．7％）和白细胞降低（40．0％∶43．3％）,两组差异均无统计学意义（χ2＝3．357,P ＝0．719;χ2＝2．717,P ＝0．925;χ2＝5．882,P ＝0．623;χ2＝4．728,P ＝0．687）,无皮疹及过敏反应发生。结论尼妥珠单抗可提高局部晚期宫颈癌对放疗的敏感性,提高有效率,且不增加明显不良反应。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅱ CD3AK的免疫生物学特征

本实验采用倒置显微镜、光学显微镜、电子显微镜和荧光激活的细胞分类器(FACS)分析了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征。经抗CD3单抗和rIL-2共刺激后细胞形态学发生明显的变化，细胞异型性明显，有些体积增大，呈圆形或不规则形，往往形成集落：有些细胞体积变小。     

广西肝细胞癌与丙型肝炎病毒的相关性

目的研究广西肝癌高、中、低危区的癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的表达,探讨ＨＣＶ在广西肝细胞癌（ＨＣＣ）病因中的地位。方法用ＨＣＶ的Ｃ区、ＮＳ３和ＮＳ４区３种单克隆抗体及抗ＨＢｓＡｇ抗体进行检测。免疫组化染色用ＳＰ法。结果ＨＣＣ高、中、低危区肝癌中ＨＣＶ阳性率依次为３８．１％（２４／６３）、３７．１％（２３／６２）和３９．０％（３０／７７）;ＨＢｓＡｇ阳性率依次为８４．１％、８３．８％和８４．４％。ＨＣＣ中ＨＣＶ感染的总数为７７／２０２（３８．１％）,乙型肝炎病毒感染总数为１７０／２０２（８４．２％）。结论ＨＣＣ经常伴随乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染,但ＨＣＶ可见于１／３的ＨＣＣ。在广西肝癌高、中、低发地区,ＨＢＶ与ＨＣＶ感染情况无明显差别。     

阿特珠单抗治疗三阴性乳腺癌的研究进展

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)预后差,治疗方法选择有限。然而,已知TNBC与其他乳腺癌亚型相比具有更强的免疫原性,其中肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TILs)起着重要的预后和预测作用。此外,TNBC具有较高水平的程序性死亡配体1(PD-L1)表达。因此,使用阿特珠单抗阻断PD-L1治疗有望激活并增强肿瘤特异性 T 细胞应答,从而改善抗肿瘤活性。阿特珠单抗是一种靶向PD-L1的新型免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors,ICPi）,更是转移性TNBC的一种有效且耐受性良好的治疗选择,还有可能大幅增加TNBC的治疗效果。这将改善免疫治疗策略,提高乳腺癌患者的结局。     

CD3AK细胞的体外诱导及免疫生物学特征的实验研究

目的：研究ＣＤ３ＡＫ细胞的体外诱导方法及其免疫生物学特征。方法：采用抗单克隆抗体（ａｎｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ）和基因重组人白细胞介素２（ｒＩＬ－２）、植物血凝素（ＰＨＡ０共同诱导人外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）制备ＣＤ３ＡＫ细胞,应用ＡＰＡＡＰ法、吉姆萨染色法分析ＣＤ３ＡＫ细胞的表型、核型等免疫生物学特征。结果：微量的ａｎ－ｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ（终浓度３０～５０００ｎｇ／ｍｌ）辅以少量的ｒＩＬ－２（１     

CD3AK细胞介导的MHC非限制性溶瘤作用机制的初步研究

本研究表明体外激活扩增的CD_3AK细胞可以MHC非限制性方式杀伤MHC I类抗原阴性NK敏感的K562细胞和MHC I类抗原阴性NK不敏感的Daudi细胞,杀瘤机制与诱导靶细胞坏死和/或凋亡有关。     

CD8~ 细胞免疫亲合柱的研制及条件探讨

本文建立的免疫亲合柱纯化细胞的方法,其基本原理是利用亲合素交联的凝胶捕获生物素化单抗阳性细胞,去除非目的细胞、利用该柱进行了CD8~ 细胞的纯化实验,证明此方法获得的细胞纯度高,回收率好,且操作简便易行.将抗CD8单克隆抗体经DEAE离子交换色谱纯化,在碳二亚胺盐酸盐作用下,与生物素化N-羟基琥珀酰亚氨酯交联,制备生物素化抗CD8单克隆抗体.将Avidin与Bio-Gel利用化学法交联并装于4ml软塑料柱内,用PBS充分冲洗后,以5%BSA平衡柱子.用常规方法制备外周血单个核细胞(PBMNC).将PBMNC调整细胞浓度为5×10~7～2×10~8/ml,加入约1/10体积的生物素化抗CD8单克隆抗体,4℃温育30min.用含1%BSA的PBS洗细胞1次,并将细胞悬于2ml5%BSA中,加细胞于柱子上,使细胞缓缓流入凝胶内,静置约3～5min.先以5%BSA洗去未吸附的细胞,再以PBS洗去BSA,用手轻轻挤压柱子,CD8~ 细胞即与凝胶脱离,随PBS流出柱子,收集CD8~ 细胞进行检测.     

非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞检测及临床意义

[目的]探讨非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）表达及临床意义。[方法]流式细胞术检测30例非小细胞肺癌组患者及12例健康志愿者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg百分比。[结果]肺癌组外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比（6.24%±2.01%）高于健康对照组（4.83%±0.85%）（P〈0.05）,外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比在肺癌患者不同性别、年龄、病理、KPS及肿瘤标志物正常与否之间比较无差异（P〉0.05）,Ⅳ期患者表达高于Ⅰ～Ⅲ期患者（P〈0.05）,带瘤患者表达高于无瘤患者（P〈0.05）,有气虚证、血瘀证患者高于无气虚证、血瘀证患者（P〈0.05）。[结论]检测肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg表达在了解患者肿瘤进展情况和机体免疫功能状态方面有一定价值,其表达升高与患者出现气虚证和血瘀证有关。     

抗KDR3单克隆抗体的制备和生物活性的鉴定

目的：制备抗KDR3单克隆抗体，研究其阻断VEGF受体的作用。方法：将抗KDR3单克隆抗体腹水，采用ELISA酶免疫分析方法．测定其效价，提取ECV304细胞膜蛋白用Western blot方法进行识别抗原的鉴定，并测定抗KDR3单克隆抗体的活性。结果：获得一株稳定分泌抗KDR3的杂交瘤细胞株，所产生抗体可阻断VEGF对人脐静脉内皮细胞系ECV304的刺激增生作用。结论：抗KDR中和抗体IMC-ICI和抗KDR3单克隆抗体同样对ECV304细胞都表现出对外源性VEGF有明显抑制作用，而且对内源性VEGF也有明显抑制作用．抗KDR3单克隆抗体在肿瘤治疗的过程中将起一定的作用。     

T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3在肿瘤免疫中的研究进展北大核心CSCD

恶性肿瘤发病率逐年升高,对人类健康造成严重影响,目前非手术治疗手段主要有放疗、化疗和分子靶向治疗。在机体抗肿瘤效应中,T淋巴细胞介导的细胞免疫起到了关键作用。在免疫应答过程中,需要协同刺激信号的参与才能激活T淋巴细胞,而这些信号需要经过"免疫检查点"进行调控。T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白基因家族TIM-3作为一种负性调节分子选择性地在活化的Thl细胞表面表达,并在多种肿瘤的发生发展中起到重要调节作用。本文将从TIM-3结构、TIM-3配体、TIM-3在肿瘤的表达及其免疫调节机制和TIM-3的免疫治疗方面,对TIM-3在肿瘤免疫研究领域的最新进展进行综述。     

卵巢癌可溶性抗原和抗CD3单抗体外共同诱导产生细胞毒T细胞

目的 为提高肿瘤生物治疗效果提供其实验基础。方法 用卵巢癌细胞提取可溶性成分作为肿瘤可溶性抗原(TSA),和抗CD_3,单抗(CD_3—McAb)体外共同诱导正常人外周血单个核细胞(PBMC),在含IL—2的培养基中培养,产生杀瘤性效应细胞。结果 经细胞表型分析,CD_8 T细胞为94.62％。这种细胞毒T细胞(CTL)对TSA来源的卵巢癌细胞具有选择性杀伤作用:对其它卵巢癌细胞的杀伤无选择性。结论 CTL对TSA来源的肿瘤细胞具有选择性杀伤作用,对其它细胞的杀伤无选择性。