吉西他滨在胰腺癌治疗中的应用进展

<正>胰腺癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤,具有起病隐匿、病程短、进展快、死亡率高的特点,严重危害人类健康,近年来其发病率有上升的趋势。目前国内胰腺癌占全部恶性肿瘤死因第7位,发病率2.62/10万,占全部恶性死亡总数1.93%。由于胰腺癌早期缺乏特异性的临床表现,发现时多为晚期,且手术根治率低。据统计[1],胰腺癌患者仅有约     

姜黄素增强胰腺癌细胞移植瘤对吉西他滨化疗敏感性的实验研究

目的：探讨姜黄素增强胰腺癌BXPC-3细胞移植瘤对吉西他滨的化疗敏感性的作用及其机制。方法建立耐药胰腺癌 BXPC-3细胞的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将荷瘤鼠随机区组的方法分为：生理盐水组（Con组）,吉西他滨组（Gem组,125 mg/kg）,姜黄素组（Cur组,50 mg/kg）,联合用药组（Gem＋Cur组,吉西他滨125 mg/kg,姜黄素40 mg/kg）四组,每组8只裸鼠。各组给药均采用腹腔注射的方法,每3 d一次,共9次。实验过程中测量肿瘤体积。采用逆转录PCR检测多药耐药基因MDR1 mRNA,多药耐药相关蛋白基因MRP1 mRNA、MRP5 mRNA的表达。Western blot法及免疫组织化学法检测各组组织中P-gp、MRP1、MRP5蛋白的表达。结果末次用药1周后Gem＋Cur组肿瘤体积和质量明显小于其他各组。RT-PCR结果显示Gem＋Cur和Cur组MDR1、MRP1、MRP5 mRNA的表达水平明显低于Con组和Gem组。免疫组织化学染色和Western blot结果显示Cur组和Gem＋Cur组的P-gp、MRP1、MRP5蛋白的表达量明显低于Con组和Gem组。结论姜黄素通过下调P-gp、MRP1、MRP5的表达量,增强胰腺癌BXPC-3细胞移植瘤对吉西他滨的化疗敏感性从而增强其抑瘤作用。     

吉西他滨联合卡培他滨在转移性胰腺癌一线化疗中的疗效及安全性分析

目的分析研究吉西他滨联合卡培他滨在转移性胰腺癌一线化疗中的疗效及安全性。方法 23例初治转移性胰腺癌一线化疗接受吉西他滨联合卡培他滨:吉西他滨1000 mg/m2,静脉滴注30 min,第1、8天;卡培他滨650 mg/m2,2次/天,口服,第1~14天;每3周1个疗程,评价它的总生存、无进展生存、客观缓解率、临床获益率、临床获益反应、糖类抗原19-9(CA19-9)缓解率和不良反应等。结果 23例转移性胰腺癌患者中,4例出现部分缓解,6例获得疾病稳定,13例出现按肿瘤进展,总客观缓解率为17.4%,平均缓解持续时间为6.8个月,临床获益为43.5%,临床获益反应率为52.2%,CA19-9缓解率为65.2%,中位无进展生存为6.1个月,1年无进展生存率14.2%;中位生存时间为7.3个月,1年生存率为25.1%。绝大部分治疗相关不良反应是1至2级,最常见的3/4毒性反应为中性粒细胞减少。结论研究证实吉西他滨与卡培他滨联合方案可成为转移性胰腺癌一线化疗方案之一;同时,临床获益反应在疗效相近的化疗方案的选择上有着重要的指导作用。     

吉西他滨联合化疗在晚期胰腺癌治疗中的作用探讨

目的探讨吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌的临床疗效。方法 50例局部晚期胰腺癌患者随机分为联合化疗组25例和对照组25例,对照组使用吉西他滨单药治疗,联合化疗组应用吉西他滨联合顺铂或奥沙利铂。观察2组患者客观疗效、临床受益反应及毒副反应发生情况。结果联合化疗组疾病控制率明显高于对照组,毒副反应发生率略高于对照组。结论吉西他滨联合方案与单药治疗晚期胰腺癌比较,临床疗效相似。     

吉西他滨联合奥沙利铂治疗进展期胰腺癌

目的:本研究观察了吉西他滨(健择)联合奥沙利铂(艾恒)组成GO方案治疗进展期胰腺癌的有效性及安全性。方法:自2004年1月~2006年1月,30例进展期胰腺癌患者接受GO方案治疗。GO方案:健择800mg/m2,静脉滴入第1,第8天,艾恒60 mg/m2第2第9天,28天为1个周期,共进行6周期,所有患者均接受了至少2个周期的治疗。结果:30例患者平均年龄62岁,所有患者共进行了99周期治疗,平均每个患者接受3.3周期治疗。30例患者中PR 6例,SD11例,PD13例,总有效率为20%,TCR为56.7%。中位进展时间4.37个月,中位生存时间7.14个月,一年生存率为20%。临床受益率显著,CBR达73.3%。具有较好的耐受性,主要毒副反应是血液学毒性。结论:健择联合艾恒治疗进展期胰腺癌疗效较好,毒副反应可以耐受。     

吉西他滨联合奥沙利铂对中晚期胰腺癌患者生存期的影响

目的研究吉西他滨联合奥沙利铂对中晚期胰腺癌患者生存期的影响。方法采用Log-rank单因素分析方法研究影响中晚期胰腺癌生存期的独立性相关因素,并对两组生存期进行分析。结果年龄、KPS、手术方式、是否联合用药为影响中晚期胰腺癌生存期的显著性相关因素(P=0.000),治疗组OS较对照组延长(P=0.000),且治疗组l,2,3年生存率优于对照组。结论吉西他滨联合奥沙利铂是影响中晚期胰腺癌的相关因素,可显著改善患者的生存率。     

高强度聚焦超声消融联合同步吉西他滨化疗治疗中晚期胰腺癌

目的分析比较高强度聚焦超声(HIFU)消融联合同步吉西他滨与单纯吉西他滨化疗治疗对中晚期胰腺癌的治疗效果。方法中晚期胰腺癌患者56例,随机分为联合组26例和化疗组30例,分别接受HIFU消融同步吉西他滨化疗及单纯吉西他滨化疗。观察近期疗效、临床收益率、吉西他滨化疗剂量及不良反应。结果治疗后1～3个月MRI复查评价疗效,联合组肿瘤瘤体坏死率明显高于化疗组(88.5%vs43.3%,P<0.01);治疗后1个月临床收益反应评价,联合组临床收益率明显高于化疗组(80.0%vs30.8%,P<0.05)。吉西他滨用量[(550±230)vs(658±100)mg/m2,P<0.01]及不良反应分级[(2.0±0.3)vs(2.2±0.6)级,P<0.05]联合组均明显低于化疗组。2组均未发生严重不良反应及并发症。结论胰腺癌HIFU消融联合同步吉西他滨化疗,具有较好的近期疗效,且毒性反应轻,不良反应可耐受,为中晚期胰腺癌提供了一种新的治疗方法。     

载吉西他滨磁性含铁纳米微球治疗胰腺癌细胞的体外研究

目的制备载吉西他滨磁纳米微球(Gem-CCMN),考察其协同恒定外磁场下对人胰腺癌细胞CAPAN-2的体外杀伤效应。方法采用化学共价耦联法制备Gem-CCMN,扫描电子纤维镜(SEM)观察纳米粒形态,紫外分光光度计法测定载药量及包封率,体外考察Gem-CCMN在拟溶菌酶存在的不同pH值下药物累积释放率,MTT法检测协同恒定外磁场下Gem-CCMN对CAPAN-2体外增殖的抑制效应,流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡。结果 Gem-CCMN呈球形,平均粒径约为50nm,载药量为15%,包封率为45%,pH=7时48h累积释放量仅25%,pH=2时药物累计释放率可达84%;Gem-CCMN协同外磁场时可增强对肿瘤细胞增殖的抑制作用,诱导细胞凋亡和坏死。结论 Gem-CCMN联合外磁场可有效抑制CAPAN-2细胞的生长。     

吉西他滨联合铂类与吉西他滨单药治疗晚期胰腺癌疗效的系统比较

目的系统比较吉西他滨联合铂类与吉西他滨单药治疗晚期胰腺癌的临床疗效。方法检索PubMed、Embase、Cochrane Library、CNKI和万方数据库查找相关文献。主要观察终点为总生存时间(OS),次要观察终点为无疾病进展生存期(PFS),客观缓解率(ORR)。结果 10篇临床试验纳入Meta分析。共纳入2 711例患者,其中吉西他滨联合铂类组1 401例,吉西他滨单一治疗组1 310例。吉西他滨联合治疗组较吉西他滨单一治疗组没有显著提高晚期胰腺癌患者的OS[HR=1.00,95%CI(0.98-1.01),P=0.610]与PFS[HR=1.00,95%CI(0.98-1.01),P=0.704]。但吉西他滨联合治疗组显著改善晚期胰腺癌患者的ORR[RR=1.52,95%CI(1.27-1.82),P0.001]。结论吉西他滨联合铂类药物显著改善晚期胰腺癌患者ORR,但并没有显著改善OS与PFS。     

内镜超声引导下瘤内注射rAd-p53联合吉西他滨治疗胰腺癌14例

目的:探讨超声内镜(EUS)引导下瘤内注射rAd-p53联合吉西他滨治疗胰腺癌的可行性、耐受性及有效性.方法:14例中晚期胰腺癌患者(局部进展性或合并小范围肝转移)接受EUS引导下瘤内注射rAd-p53(2×102),每周1次,连续4周.同时患者给予吉西他滨静脉化疗(静脉注射,1 000 mg/m2)每周1次,共3次,休息1周,整个疗程为4周.结果:14例患者完成了内镜下瘤内注射tad-p53联合吉西他滨治疗,其中9例患者获得部分缓解,2例患者病情稳定,注射后肿瘤进展的中住时间平均为6周,3例患者在6月后随访时病情稳定,11例患者仍存活,治疗总有效率达64.3%,未出现新鲜转移灶.3例患者在接受治疗4月后死亡.治疗后较治疗前相比Karnofsky评分明显提高,糖类抗原CA199下降(P<0.05),治疗后疼.结论:EUS引导下瘤内注射rAd-p53合并抗生素预防性应用治疗胰腺癌安全可行,具有较好的临床耐受性和有效性.     

The different regulatory effects of p53 status on multidrug resistance are determined by autophagy in ovarian cancer cells

Purpose

Multidrug resistance (MDR) has become an obstacle for chemotherapy of cancer. p53 is reported to participate in the regulation of MDR, but the association between p53 status and MDR are complicated and conditional. It has been verified that apoptosis is not the only mechanism for MDR regulation by p53, the roles of autophagy in MDR is less studied.

Patients and methods

Human ovarian carcinoma cell lines SKOV3 and multidrug resistant phenotype SKVCR cells were used and wild-type p53 (wt p53) and mutant 175H constructs were introduced into cells to establish cell models with different p53 status by gene engineering, the sensitivity to vincristine (VCR), cisplatin (DDP), pirarubicin (THP) and etoposide (VP-16) were detected by MTT assay, Western blot and quantitative real-time PCR were used to detect the expression of protein and mRNA, especially, monodansylcadaverine (MDC) staining was used for autophagy rate, Hoechst 33342/propidium iodide (PI) were used to assess apoptosis and necrosis.

Results

SKVCR cells induced by VCR shown overexpression of P-glycoprotein (P-gp) and MDR, and also displayed an enhanced autophagy compared with parental SKOV3. Wt p53 and 175H has no influence on drug sensitivity in SKOV3, while both sensitized SKVCR cells to VCR, THP and VP-16, especially 175H. The introduction of wt p53-induced apoptosis only, while 175H trigged autophagic cell death, necrosis and apoptosis so as to reverse the MDR.

Conclusion

The enhancement of autophagy in MDR cells allows to survive during chemotherapy stress, autophagy plays important role in wt p53 and mutant p53-immediated MDR. The different influence of p53 status on drug sensitivity hint the individual treatment strategies based on p53 status in patients.     

Advances in adenovirus-mediated p53 cancer gene therapy

Introduction: The tumor suppressor p53 gene regulates diverse cellular processes, such as cell-cycle arrest, senescence, apoptosis and autophagy, and it is frequently inactivated by genetic alterations in ～ 50% of all types of human cancers. To restore wild-type p53 function in p53-inactivated tumors, adenovirus-mediated p53 gene therapy has been developed as a promising antitumor strategy in preclinical experiments and clinical studies.

Areas covered: This review focuses on the clinical relevance of replication-deficient adenovirus vectors that carry the wild-type p53 gene (Ad-p53; Advexin, Gendicine and SCH-58500) in clinical studies of patients with various cancers and the future perspectives regarding conditionally replicating adenovirus vectors expressing the wild-type p53 gene (CRAd-p53; AdDelta24-p53, SG600-p53, OBP-702) in preclinical experiments. Moreover, the recent advances in our understanding of the molecular basis for the p53-mediated tumor suppression network induced by Ad-p53 and CRAd-p53 vectors and the combination therapies for promoting the therapeutic potential of adenovirus-mediated p53 gene therapy are discussed.

Expert opinion: Exploration of the molecular mechanism underlying the p53-mediated tumor suppression network and the effective strategy for enhancing the p53-mediated cell death signaling pathway would provide novel insights into the improvement of clinical outcome in p53-based cancer gene therapy.     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

目的了解中国人结直肠癌ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术用于研究结直肠癌中ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。结果３４％（１４／４１）的病例显示有ｐ５３基因突变，其中外显子５，６，７和８各有４，１，５和４例突变。２０例有Ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为４９％。结论导致Ｐ５３蛋白异常堆积的ｐ５３基因突变是结直肠癌的一种常见的分子结构改变，可能在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法     

p53基因单核苷酸多态性与肺癌易感性

目的 p53基因是与多种肿瘤发生、发展密切相关的抑癌基因，其单核苷酸多态性与肺癌的早期诊断和放射治疗疗效密切相关。检测p53基因多态性将对肺癌患者的放疗疗效及预后提供指导意义。本文简要综述p53基因单核苷酸多肽性与肺癌及与其组织学类型和种族的关系。     

miR-26b-3p靶向调控TRA2B表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖和转移

目的探讨miR-26b-3p在神经胶质瘤细胞中的表达,以及其对神经胶质瘤细胞增殖和转移的影响。方法采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测神经胶质瘤组织与癌旁组织中miR-26b-3p与TRA2B的表达水平;通过向神经胶质瘤细胞细胞系中转染miR-26b-3p mimic和inhibitor干扰内源miR-26b-3p的表达,同时检测其靶基因TRA2B蛋白的表达变化;采用CCK-8法检测各组神经胶质瘤细胞增殖能力的变化,以及划痕实验对癌细胞迁移能力进行评估。结果神经胶质瘤患者组织与癌旁组织比较,miR-26b-3p的表达水平显著上调,TRA2B的表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,在32例神经胶质瘤患者神经胶质瘤组织中,TRA2B的表达水平与miR-26b-3p表达呈显著负相关(r=-0.510;P<0.05);SHG-44细胞体外转染实验结果发现,降低细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著升高,细胞的增殖活性以及转移能力会被抑制;而上调细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著下降,细胞的增殖活性与转移能力会显著提高,相比于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-26b-3p在神经胶质瘤组织中高表达,其可能靶向调控TRA2B的表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖活性与转移能力,在神经胶质瘤的发生发展过程中起着重要的生理功能。     

重组人p53腺病毒提高胃癌细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的：研究重组人p53腺病毒增加胃癌细胞对顺铂敏感性的作用。方法：重组人p53腺病毒感染胃癌细胞BGC-823，Western blot法检测p53蛋白在胃癌细胞中高表达；MTT法测定重组人p53腺病毒单独及联合顺铂用药的不同浓度处理细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率。结果：重组人p53腺病毒感染BGC-823 48h，p53蛋白在BGC-823中高表达，并产生G2／M期阻滞和细胞凋亡。重组人p53腺病毒联合顺铂用药增加顺铂的敏感性，有剂量时间的依赖性。结论：腺病毒介导p53基因感染BGC-823细胞诱导凋亡并增加胃癌细胞对顺铂的敏感性，为p53基因治疗与胃癌化疗临床结合提供了可靠的实验依据。     

p53基因突变在肺癌早期诊断中的应用

目的 探讨p53基因突变在肺癌早期诊断中的应用价值。方法 应用聚合酶链式反应——单链构象多肽性分析(PCR—SSCP)方法，对107例疑诊肺癌患者的纤支镜标本进行p53基因分析，分析结果与病理对照或随访以证实阳性的可信度。结果 43例病理诊断肺癌的患者中，25例p53基因发生突变，占58．2％。在64例疑诊肺癌但病理学阴性的患者中发生p53基因突变18例，无p53基因突变的46例，经过28个月的随访，p53基因突变组有8例诊断为肺癌，占44．4％，而无p53基因突变组仅有2例诊断为肺癌，占4．7％，两组之间差异显著。结论 通过对患者纤支镜标本p53基因分析，能对高危人群及个体危险度进行较准确的估计，有助于肺癌的早期诊断。     

可疑肺癌患者纤支镜后痰液标本的p53基因突变检测

目的：探讨纤支镜后痰液标本的p53基因突变检测用于肺癌早期诊断的可行性。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）银染技术,对29例怀疑为肺癌患者的痰液标本行p53基因5－8号外显子突就检测。结果：8例患者有p53突变,突变率为27．6％,其中以6号外显子突变率最高（17．2％）。p53突变率明显高于相应细胞学阳性率（P＜0．05）。结论：纤支镜后痰标本p53突变检测对肺癌的早期诊断具有一定价值,可作为肺癌早期诊断的辅助方法之一。     

Ultrasound-mediated microbubble destruction enhances gene transfection in pancreatic cancer cells

INTRODUCTION: The purpose of this study was to determine whether ultrasound exposure combined with microbubble destruction could be used to enhance non-viral gene delivery in human pancreatic carcinoma cells (PANC-1). METHODS: The study was performed with four experimental groups: Group P, plasmid alone; Group P+M, plasmid and microbubbles; Group P+U, plasmid and ultrasound; Group P+U+M, plasmid with ultrasound and microbubbles. Plasmid DNA encoding enhanced green fluorescent protein (pEGFP) was gently mixed with commercially available ultrasound microbubble contrast agents (SonoVue(R); Bracco Diagnostics Inc, Milan, Italy) in Group P+M and Group P+U+M. The different combinations of DNA and DNA plus microbubbles were added to cultured PANC-1 cells under different conditions. Transfection efficiency and cell viability were assessed by FACS analysis (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA), confocal laser scanning microscopy, and trypan blue staining. RESULTS: The results demonstrated that microbubbles with ultrasound exposure could significantly enhance the reporter gene expression as compared with other groups (Group P+U+M, 21.4%+/-3.16%; Group P, 2.9%+/-0.45%; Group P+M, 3.1%+/-0.51%; Group P+U, 6.1%+/-1.27%; P<0.01). No statistically significant difference was observed in the PANC-1 cell viability between Group P+U+M and other groups (P>0.05). CONCLUSION: Our in-vitro findings suggest that ultrasound-mediated microbubble destruction has the potential to promote efficient gene transfer into PANC-1 cells without significant cell death. This non-invasive gene transfer method may be a useful tool for safe clinical gene therapy of pancreatic cancer in the future.     

PCR扩增肠癌组织p53基因失败的原因分析与解决

分析与解决PCR扩增肠癌组织p53基因时失败的问题,为如何解决PCR技术在科研应用中的问题提供一个实例.方法 经初步分析,将失败原因确定为DNA模板有问题、采用下列方法处理模板再进行PCR反应：用70%乙醇再清洗模板、用新标本重新提取模板、用PCR反应成功与失败的模板配成混合模板.比较PCR成功与失败所用模板的差异,寻找与证实失败的原因.结果 最终发现溶解DNA模板的TE缓冲液浓度过高,使PCR扩增失败,排除之后获得成功.结论 当PCR扩增失败时,不妨从最简单的反应体系的离子环境先找原因.