高糖诱导下肝星形细胞活化与p38MAPK信号通路的关系

目的 探讨高糖诱导下肝星形细胞(HSC)活化与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的相互关系.方法 体外培养人HSC并进行形态学鉴定,选取60份样本,分为对照组、高糖组和阻断组各20份;对照组常规培养,高糖组在常规培养基础上加入葡萄糖(终浓度25 mol/L),阻断组在高糖组基础上加入p38MAPK阻断剂SB203580(终浓度40 mol/L)进行培养,培养120 h后用链霉亲和素-生物素复合物法(SABC)及Western印迹法检测各样本的α-肌动蛋白(α-SMA)和p-p38MAPK蛋白表达情况.结果 经鉴定,培养后的HSC呈扁平状,胞体大,具有发育良好的应力纤维,胞浆内缺乏脂肪滴.SABC法原位检验结果显示:高糖组的α-SMA阳性信号强于对照组,而阻断组的α-SMA阳性信号则近似于对照组.3组HSC的α-SMA和p-p38MAPK蛋白的相对表达量差异均有统计学意义(F=31.36,78.49,P均＜0.01).其中,高糖组的α-SMA表达相对量为(34.61±4.07)％,高于对照组和阻断组的(23.90±6.02)％和(26.48±4.41)％,差异均有统计学意义(t=-7.20和-5.37,P均＜0.01);高糖组表达相对量高糖组为(22.79±3.80)％,对照组和阻断组分别为(8.13±4.95)％和(10.66±4.15)％,差异均有统计学意义(t=-11.01和-10.41,P均＜0.01).结论 活化程度较高的HSC具有较高的p38MAPK信号强度,而阻断p38MAPK信号通路能够降低HSC的活化程度.     

JNK信号通路在二甲基肿酸所致人胚肺成纤维细胞DNA损伤与凋亡中的作用

[目的]探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在二甲基胂酸（DMA）所致人胚肺成纤维（HELF）细胞DNA损伤与凋亡中的作用。[方法]以0、2．5、5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，检测HELF细胞生长、DNA损伤、细胞凋亡、JNK磷酸化水平；并用20μmol／LJNK抑制剂SP600125预处理30min后，再用DMA处理HELF细胞48h，观察上述指标变化情况。[结果]10和20μmol／LDMA对HELF细胞生长产生明显抑制作用（P〈0．05）；2．5、5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞γ-H2AX表达水平明显增强（P〈0．05），并具有一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=-0．982，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞断裂，caspase3表达水平明显增强（P〈0．05），呈一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．945，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，JNK磷酸化的表达水平明显增加（P〈0．05），呈现一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．988，P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125能明显降低10、20μmol／LDMA的生长抑制作用（P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125可明显阻滞DMA所致HELF细胞对DNA损伤和诱导的凋亡作用（P〈0．05）。[结论]DMA可引起HELF细胞DNA损伤和凋亡；在此过程中JNK信号通路激活起到正调控作用。     

JNK1/2信号通路在砷致细胞凋亡中双向效应的Meta分析

目的 通过Meta分析探讨在砷在诱导细胞凋亡过程中JNK1/2信号通路发挥的作用及机制。 方法 在CNKI、维普、万方、SinoMed、PubMed、Web of Science、Cochrane、Spinger等数据库中检索文献。采用STAIR清单对文献质量进行评价,应用Stata 12.0和RevMan 5.3软件提取数据及分析;以标准化均数差(SMD)来描述其组间差别。 结果 本研究共纳入33篇文献。砷干预组Bax:SMD=9.41,95%CI(1.92,16.90),凋亡细胞:SMD=10.46,95%CI(6.87,14.05),Caspase-3:SMD=8.82,95%CI(0.79,16.85),Cytochrome C:SMD=90.24,95%CI(34.45,146.03),c-jun:SMD=81.66,95%CI(14.38,148.94)和P-JNK:SMD=139.06,95%CI(29.14,248.98)水平均高于对照组。Bcl-2:SMD=-3.78,95%CI(-7.17,-0.39)和PARP:SMD=-6.48,95%CI(-12.89,-0.07)的水平均低于对照组。亚组分析表明正常细胞中高剂量(＞5μmol)且长时间(≥24h)砷暴露可抑制JNK1和JNK2的蛋白表达,在癌细胞中低剂量(≤5μmol)且短时间(＜24h)砷暴露则会诱导JNK1和JNK2的表达。 结论 砷通过介导JNK1/2信号通路诱导细胞凋亡,且作用效果与细胞类型、作用时间和剂量有关。     

骨形成蛋白-2通过JNK信号通路促进肝癌HepG2细胞凋亡

目的 观察骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及其信号通路机制. 方法用流式细胞分析和细胞凋亡ELISA法检测HepG2细胞凋亡,用Western blot法检测丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)和磷脂酰肌醇3-激酶(P13K)下游效应因子Akt的激活,采用信号通路阻断剂预处理HepG2细胞观察BMP-2影响细胞凋亡的机制. 结果 BMP-2诱导HepG2细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性;BMP-2激活HepG2细胞JNK激酶,但不能激活ERK1/2、p38及Akt;采用JNK信号通路抑制剂SP600125可阻断BMP-2对HepG-2细胞JNK的激活,并消除BMP-2对HepG-2细胞凋亡的作用. 结论 BMP-2通过JNK信号通路途径诱导HepG2肝癌细胞凋亡.     

胰高糖素肽-1(GLP-1)通过Akt信号通路促进3T3-L1

<正>脂肪细胞体积与脂质代谢及胰岛素抵抗密切相关。研究发现,胰高糖素肽-1(GLP-1)能有效改善脂肪细胞的病理性增大,但其是否参与前脂肪细胞的分化尚缺乏足够证据。本研究探讨了GLP-1对3T3-L1前脂肪细胞分化过程的影响及作用机制。与对照组相比,GLP-1呈剂量依赖性地促进aP2、PPAR-γ蛋白表达,同时在转录     

mTOR信号通路在细胞自噬和凋亡调节中的作用

自噬及凋亡广泛存在于细胞中,是细胞内生物大分子的降解再循环过程,在细胞生长代谢中发挥着重要作用.两者相互作用,共同推动和影响细胞的程序性死亡,维持机体自身稳态及外界环境刺激下的应激反应.mTOR信号通路是一条经典的调控自噬凋亡信号通路,在细胞代谢中发挥重要作用.结合mTOR信号通路探讨自噬及凋亡在细胞代谢及生物体生长发...     

镉激活JNK/c-Jun信号通路诱导小鼠GC-2 spd精母细胞凋亡

目的 探讨氯化镉对小鼠GC-2 spd精母细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 氯化镉(0、5、10μM)处理GC-2 spd细胞,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)的水平;Western blot检测JNK/c-Jun信号通路调节蛋白和促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl-2的表达水平.结果 与对照组相比,随着...     

抗氧化剂对大鼠肝星形细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的　了解膳食维生素E和硒对大鼠肝纤维化恢复期肝星形细胞 (HSC)增殖和凋亡的影响。方法　采用腹腔内注射 5 0 %CCl4 制备大鼠肝纤维化模型 ,在饲料中添加适量维生素E(2 5 0mg kg饲料 )和Se(0 . 2mg kg饲料 )进行营养干预 ,在最后一次注射后 3、7、14、2 8天 (恢复期 )各处死 3只大鼠取其肝组织 ,用HE和Siriusred染色结合图象分析检测肝纤维化指标 ,用α SMA免疫组化方法检测激活的HSC细胞 ,用原位凋亡 (TUNEL)技术和α SMA免疫组化双标染色检测HSC凋亡。结果　在恢复期各时间点 ,病理对照组和抗氧化干预组激活的HSC数量呈逐步下降趋势 ,同时 ,从恢复期第 7d开始 ,HSC凋亡细胞数以及肝组织内的胶原量亦同步下降 ;在同一时间点 ,干预组激活的HSC数量低于病理对照组 ,而HSC凋亡数和凋亡率均高于病理对照组。结论　饲料中添加适量维生素E和硒能减轻肝纤维化的程度 ,并可能使恢复期HSC凋亡增加 ,激活HSC数量减少。     

JNK通路在MPP~+诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的研究1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞的毒性作用及其机制。方法 PC12细胞体外培养,以100、300、500μmol/L MPP+进行染毒。Western blot法检测JNK1/2磷酸化水平;使用JNK通路阻断剂SP60012预处理细胞,TUNEL法观察其对MPP+诱导的细胞凋亡的影响。结果 MPP+染毒可以引起细胞JNK1/2的磷酸化水平增高,使用JNK通路阻断剂SP600125可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡。结论激活JNK通路可能是MPP+诱导PC12细胞凋亡、产生多巴胺能神经毒性的重要分子机制。     

卡培他滨通过STAT3信号通路对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的机制研究

目的探讨卡培他滨通过STAT3信号通路对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的影响及机制,为更合理的应用于乳腺癌的临床治疗提供参考。方法选择不同浓度卡培他滨(0. 1875、0. 375、0. 75、1. 5、3μg/ml)处理乳腺癌MCF-7细胞48h,通过MTT法检测细胞活力; 3μg/ml卡培他滨处理细胞48h,流式细胞术及Transwell小室分别检测细胞凋亡率及侵袭能力; Western bloting检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、信号转导与转录因子3 (STAT3)、p-STAT3蛋白表达。结果不同浓度的卡培他滨均可抑制细胞活力,且随剂量增加细胞活力降低,差异有统计学意义(P0. 05)。卡培他滨组细胞凋亡率显著高于对照组,细胞侵袭能力显著低于对照组,Caspase3蛋白表达显著高于对照组,MMP-2、MMP-9、p-STAT3蛋白表达显著低于对照组,差异均有统计学意义(P0. 05);两组间STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P0. 05)。结论卡培他滨通过抑制STAT3信号通路降低乳腺癌细胞活力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡。     

JNK信号通路在NaAsO2诱导L-02肝细胞 凋亡过程中的作用

摘要:目的　研究JNK在NaAsO2诱导L-02肝细胞凋亡中的作用。方法　用不同浓度NaAsO2染毒L-02肝细胞,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率;Western-blot检测L-02肝细胞中Jnk、p-Jnk、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果　0、50、100 和 150 μmol/L组细胞凋亡率分别为3.33%±0.30%、7.49%±0.23%、9.48%±0.49%和 14.87%±2.17%,染毒组的细胞凋亡率随NaAsO2浓度的增加而升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;染毒组细胞内Jnk、p-Jnk、Caspase-3蛋白相对表达量均增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　NaAsO2能诱导L-02肝细胞凋亡的发生,这可能与激活JNK,增加JNK磷酸化水平,继而激活凋亡调控基因Caspase-3有关。     

c-jun氨基末端激酶通路在一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡中的作用

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125,研究JNK通路对NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测软骨细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)法测定核因子(NF-κB)p65和p53蛋白的表达水平.结果 SNP作用于软骨细胞后,随着其浓度的增大,细胞早期凋亡率与对照组比较呈浓度依赖性增加,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-κB p65和p53的表达分别出现上调,差异有统计学意义(P＜0.05);加入JNK抑制剂SP600125能抑制这种增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JNK信号转导通路在NO诱导的软骨细胞凋亡起着非常重要的作用,JNK的特异性抑制剂SP600125能以浓度依赖方式减少兔关节软骨细胞中NO诱导的凋亡和NF-κBp65及p53蛋白的表达活性.     

姜黄素通过Notch途径抑制人宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖

目的:探讨姜黄素对人宫颈癌细胞株HeLa细胞体外增殖抑制及凋亡诱导作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度姜黄素对HeLa细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测HeLa细胞Notch1、Notch2、Jagged1、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果:姜黄素对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。随着姜黄素剂量的增加,Notch1、Notch2、Bcl-2mRNA的表达逐渐下降,Bax mRNA的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax亦逐渐减小,Jagged1mRNA无明显变化。结论:姜黄素可能通过Notch信号途径改变凋亡蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖。     

小鼠肝星状细胞分离与鉴定

目的 探讨小鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离效率.方法 取体重约30 g的雄性ICR小鼠,用Ⅳ型胶原酶、Dnase Ⅰ进行体内门静脉灌注消化小鼠肝脏细胞,经过Percoll不连续密度梯度离心法分离小鼠肝星状细胞.台盼蓝拒染方法鉴定细胞存活率,紫外激发下观察自发荧光,油红O染色和结蛋白细胞免疫荧光染色鉴定细胞.结果 小鼠肝星状细胞得率为6.5×105/只,存活率在91％以上,纯度大于92％.结论 该实验建立了简便而有效的小鼠肝星状细胞分离与鉴定方法.     

石蒜碱通过Mek/Erk信号通路诱导自噬抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨石蒜碱对肝癌细胞增殖及自噬的影响,并分析其机制。方法 采用CCK-8法分析石蒜碱对肝癌细胞增殖的抑制作用,MDC 染色法检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬的影响,Western blot检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3 II、Mek/Erk信号通路关键因子Mek、Erk蛋白的影响,运用自噬抑制剂（3-MA）研究自噬对细胞增殖的影响。数据通过用SPSS 19.0进行统计分析。结果 CCK-8结果提示石蒜碱对肝癌HepG-2细胞的增长具有抑制作用（F=87.362,P<0.001）;MDC 染色法显示石蒜碱促进自噬小泡的形成。Western blot结果显示石蒜碱上调Beclin-1、LC3 II水平抑制自噬,下调Mek、Erk2磷酸化水平（p-Mek、p-Erk2）抑制HepG-2细胞增殖,差异均有统计学意义（F=25.571, P<0.001;F=315.002,P<0.001;F=35.481,P<0.001;F=150.103,P<0.001）;与100μmol/L石蒜碱组相比,3-MA+石蒜碱组LC3II蛋白水平明显下调,p-Mek、p-Erk2蛋白水平明显上调（t=5.988,P=0.004;t=2.883,P=0.045;t=4.157,P=0.014）。结论 一定浓度的石蒜碱能抑制肝癌HepG-2细胞增殖,可能与调控Mek/Erk信号通路诱发自噬有关。