小鼠肝细胞胰岛素信号转导的动力学研究

目的从细胞整体水平观察细胞内信号蛋白在胰岛素刺激下发生的动力学变化,找出胰岛素相关信号蛋白的动力学改变及其对胰岛素信号转导最终生理效应的影响。方法采用双向电泳及放射性同位素标记技术,分析小鼠肝细胞在胰岛素（100nmol／L）持续刺激不同时间得到的胰岛素信号蛋白磷酸化水平发生的动力学变化。结果小鼠肝细胞胰岛素信号转导相关磷蛋白有数十种,其中磷蛋白Shc、MKP3等的时间动力学曲线均呈峰型。结论在细胞整体水平,胰岛素多条信号转导途径之间存在相互交流,这种相互交流对信号转导的最终效应产生了复杂的整合和调控,使细胞对持续高浓度的胰岛素刺激产生了自适应控制。     

高浓度EGF对小鼠肝细胞信号转导的动力学研究

目的:探讨高浓度表皮生长因子(EGF)对小鼠肝细胞信号转导的动力学改变。方法:从细胞整体水平的角度出发,采用双向电泳及放射性同位素标记技术,并结合相关数据库资源和双向电泳专用分析软件,分析小鼠肝细胞在高浓度的EGF信号持续刺激不同时间得到的EGF信号蛋白在EGF信号转导过程中其磷酸化水平发生的动力学变化。结果:在高浓度EGF持续刺激下,小鼠肝细胞内的某些结点信号蛋白如Eps15和ERK2的磷酸化动力学曲线表现为持续活化状态。结论:在高浓度的EGF持续刺激下,EGF信号网络系统中的某些信号蛋白将会发生一定的改变,这些改变可能与肿瘤的发生、发展有密切关系。     

肝细胞生长因子和表皮生长因子对体外肝细胞生长的影响

取成年小鼠肝细胞在RPMI1640培养液中加热60℃胎肝提取液(FE_(60)HSS),加热80℃胎肝提取液(FE_(80)HSS)及加热60℃成年雄性小鼠颌下腺提取液(M_(60)EGF),用I~(125)UdR掺入法测定其肝细胞DNA合成,结果显示FE_(60)HSS为8575±17cpm,FE_(80)HSS为4788±990cpm,M_(60)EGF为4592±1120cpm,和对照组1902±657cpm比较差异有非常显著意义(P值均<0.01)。FE_(60)HSS组对细胞DNA合成较FE_(80)HSS明显,说明HSS对加热80℃不很稳定。     

肝细胞生长因子和表皮生长因子对移植颗粒脂肪成活的影响

目的探讨表皮生长因子(EGF)和肝细胞生长因子(HGF)对移植颗粒脂肪的血运重建及脂肪成活的影响,为提高移植颗粒脂肪的成活率提供理论和实验依据。方法在颗粒脂肪移植的动物模型中,分别应用EGF、HGF、EGF+HGF。微刻度试管测量各组脂肪的存活体积,HE染色后观察移植体组织细胞形态学改变,免疫组化法检测各组移植组织的微血管密度值。结果同一时间段,各实验组组织中微血管密度值明显高于对照组。术后14d起,各实验组组织中脂肪存活体积明显高于对照组。结论 EGF和HGF均能促进移植颗粒脂肪的血管生成,并显著提高移植颗粒脂肪的成活率。HGF和EGF具有协同作用。     

表皮生长因子促新生小鼠生长发育的作用

研究了人表皮生长因子（ｈ－ＥＧＦ）对新生小鼠生长发育过程中体重、萌牙日龄和睁眼日龄的影响，结果表明ｈ－ＥＧＦ有明显作用。其萌牙日龄：ｈ－ＥＧＦ皮下注射组和口腔滴注组分别为４．７±１．０ｄ和７．５±１．５ｄ，生理盐水对照组分别为９．７±１．９ｄ和９．８±１．９ｄ；睁眼日龄：ｈ—ＥＧＦ皮下注射组和口腔滴注组分别为１０．３±１．０ｄ和１４．２±１．０ｄ，对照组均为１５．８±０．４ｄ。ｈ－ＥＧＦ处理组的萌芽和睁眼均显著早于对照组，其体重增长也快于对照组。而且，ｈ—ＥＧＦ经皮下注射给药比口腔滴注给药的作用更明显。     

放射性32P掺入小鼠肝细胞内的动力学研究

目的:寻求放射性同位素32P掺入到小鼠肝细胞内达到磷平衡的时间点.方法:采用32P掺入标记小鼠肝细胞磷蛋白不同时间点,SDS-PAGE对不同掺入标记时间的全细胞蛋白进行分离,放射自显影后进行半定量分析,获得32P掺入标记的时间动力学曲线.结果:32P掺入标记培养小鼠肝细胞磷蛋白是一动态过程,直到8小时后达到平衡.结论:放射性32P掺入到小鼠肝细胞内的磷平衡时间至少需8h,本实验为小鼠肝细胞放射性32P掺入标记实验提供了准确的掺入平衡时间点.     

表皮生长因子在小鼠耳蜗发育中的表达

运用免疫组织化学技术（LSAB法），对表皮生长因子（EGF）在昆明种小白鼠内耳发育中的表达进行研究。结果显示：EGF在小鼠胚胎第13d和14d的耳蜗上应及螺旋神经节的神经细胞中有阳性表达，但在前庭感觉器官的上皮中表达很弱。EGF在内耳间充质及内耳软骨包囊中无表达。结果表明：EGF在小鼠耳蜗上皮发育中的表达呈现明显的阶段性及组织特异性分布的特点，说明EGF参与小鼠耳蜗上皮的发育过程，其在小鼠耳蜗上皮发育的增殖期有阳性表达。     

肝细胞生长因子受体/表皮生长因子受体交互作用与肿瘤耐药

肝细胞生长因子受体(mesenchymal-epithelial transition factor, MET)通路在肿瘤发生过程中具有重要作用,包括促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞迁移及侵袭、转移等多个过程,涉及质膜、胞内共作用因子及下游效应蛋白的协同作用.体内、外实验证实,MET与表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor, EGFR)之间存在复杂的交互作用,两者共同参与细胞增殖、细胞运动及下游信号通路活化等多种细胞生物学事件,其中一些与肿瘤发生、进展密切相关.MET有可能通过"置换"EGFR活性而参与EGFR抑制剂的耐药发生.文中综述了肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)-MET和EGFR通路在肿瘤发生、发展过程中的重要作用,讨论了两者交互作用引起EGFR抑制剂耐药的可能机制,在此基础上提出联合使用EGFR和MET靶向抑制剂在克服EGFR抑制剂获得性耐药方面的应用前景.     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

Analysis of epidermal growth factor signaling in nasal mucosa epithelial cell proliferation involved in chronic rhinosinusitis

Background Aberrant epithelial repair has been observed in chronic rhinosinusitis （CRS） patients; however, the mechanism of epithelial cell repair regulation is unclear. Epidermal growth factor （EGF） plays an important role in regulating epithelial cell repair in lower airway and may be a critical factor in the remodeling processes of CRS. The objective of our research is to evaluate the differences between CRS and normal subjects and between chronic rhinosinusitis without nasal poiys （CRSsNP） and chronic rhinosinusitis with nasal polys （CRSwNP） in the regulation of EGF pathways and the regulating proliferative position of classic Ras/Raf/MEK/ERK pathways. Methods We evaluated the proliferation rates of ethmoidal mucosal cells before and after stimulation with EGF, epidermal growth factor receptor （EGFR） kinase inhibitor AG1478, and extracellular signal-regulated kinase 1/2 （ERKI/2）inhibitor PD98059 using MTT assays. We also analyzed the sinonasal epithelial cells collected from control subjects and patients with CRS subtypes CRSsNP and CRSwNP for the expression of ERK1/2, phosphorylated ERK1/2, P21, P15, and P27 using western blotting analyses. Results The proliferation rates of sinonasal epithelial cells before and after EGF stimulation were lower in CRS patients than in the controls. AG1478 or PD98059 inhibitor treatment of control epithelial cells did not result in a significant difference in proliferation. Although, AG1478 and PD98059,inhibited the proliferation of CRS cells, the degree of proliferation inhibition was markedly different in CRSsNP. AG1478 suppressed the proliferation of CRSwNP epithelial cells, whereas PD98059 had no effect. The ratio of ERK1/2 phosphorylation in CRS cells was lower than that of the control cells. Cyclin-dependent kinase inhibitors were highly expressed in CRS cells compared with that of control cells. ERK1/2 and P27 showed differential expression in CRSsNP and CRSwNP. Conclusions Differences existed in EGF pathways in CRS patients and normal subjects     

EGF/PI3K信号传导调控骨桥蛋白在肝癌HepG2细胞中的表达

目的检测生长因子受体激活后骨桥蛋白在肝癌细胞株HepG2中表达的变化规律,并探讨这一变化的信号传导途径。方法利用RNA酶保护性分析、蛋白质印迹技术检测HepG2在表皮生长因子(EGF)刺激前后骨桥蛋白的表达;并用Wortmannin特异性地阻断磷脂酰肌醇3激酶(PBK)信号通道,以观察骨桥蛋白表达的变化是否与P13K信号传导途径有关。结果在无血清培养条件下,骨桥蛋白在HepG2中少量表达,而。EGF能诱导其表达,且呈剂量依赖性及时间依赖性。先用Wortmannin预处理HepG2细胞再用EGF诱导,能阻断骨桥蛋白的表达。结论EGF通过P13K信号通道诱导转移相关基因一骨桥蛋白的表达,提示可通过干预该途径中的某些关键基因来阻断骨桥蛋白的产生,从而抑制肝癌的转移。     

小鼠生精周期表皮生长因子受体在睾丸曲细精管的分布

目的 观察生精周期不同阶段中表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）在小鼠曲有管的分布规律，在进一步理解ＥＧＦＲ在生精过程中的意义。方法 通过糖原及多糖显色反应克腚曲细精管的生精周期，采用逻霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶免疫组化技术观察ＥＧＦＲ在相应曲细精管上皮的分布。结果 曲细精管部分支持细胞和中细胞呈ＥＧＦＲ阳性反应。Ⅶ～Ⅸ早期部分精原细胞、细线期精母细胞的细胞核呈ＥＧＦＲ阳性反应。Ⅹ～Ⅺ期胸 粗线期精母细胞     

肝炎患者肝组织表皮生长因子及其受体表达的研究

目的　研究各型肝炎患者肝组织内表皮生长因子 (EGF)及其受体 (EGF R)表达的变化 ,以进一步探讨EGF用于治疗重型肝炎的可能性。方法　采用免疫组织化学技术 (ABC法 )观察 6 5例各型肝炎患者、4例健康成人、1例胎肝组织内EGF/EGF R的表达情况。结果　① 4例正常成人肝组织EGF R皆为阳性 ,且愈近中央静脉染色愈深 ;②肝炎患者肝组织EGF染色与正常成人肝组织相似 ,未发现显著改变。③患者肝组织中EGF R的表达与坏死程度有关 ,随着坏死程度的加重 ,坏死区内染色增强。结论　提示给予外源性EGF可能进一步促进肝组织的再生 ,有望用于重症肝炎的治疗     

表皮生长因子受体及其信号转导通路与中西药肿瘤靶向治疗

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)属于Ⅰ型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase,RTK),是原癌基因ErbB1(HER1)的表达产物.EGFR广泛分布于哺乳动物的上皮细胞膜上,其信号可介导细胞的生长、增殖、分化、黏附、移动等生命现象[1,2].研究表明,包括非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、头颈癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌等在内的多数肿瘤上皮可高表达EGFR,常与肿瘤进展、血管生成、转移扩散、凋亡受抑、放化疗抵抗密切相关.EGFR已成为肿瘤治疗的重要靶点[3].     

白及胶对宫颈炎大鼠EGF及EGFR的影响

目的：探讨白及胶治疗宫颈炎的疗效与机制。方法：用苯酚胶浆阴道注射建立大鼠宫颈炎模型,60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、双唑泰栓组、白及胶浆低中高剂量组。治疗12天以后,用免疫组织化学方法检测大鼠宫颈炎中表皮生长因子（EGF）及表皮生长因子受体（EGFR）,并进行病理组织学检查。结果：12天以后,白及胶浆低中高剂量组大鼠,宫颈炎组织中EGF及EGFR高于正常组,与模型对照组比较具有显著性差异;病理组织学检查结果也表明,白及胶浆中剂量组对宫颈炎治疗有一定的治疗作用,但高剂量效果最明显。结论：白及胶可以提高宫颈炎大鼠组织中EGF及EGFR表达,有利于组织愈合,从而对大鼠宫颈炎具有很好的治疗作用。     

表皮生长因子及其受体在胃癌中的表达

目的：观察表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）在胃癌中的表达，加深对胃癌发生分子基础的了解。方法：采用免疫组织化学方法（ＡＢＣ法），分析探讨两者在５２例原发性胃癌组织中的变化。结果：ＥＧＦ、ＥＧＦＲ在胃癌中的阳性表达率分别为４０４％（２１／５２）和４８１％（２５／５２），两者同时阳性表达率为３６５％（１９／５２）；ＥＧＦ在中、晚期胃癌，淋巴结转移胃癌，低分化胃癌中的免疫阳性反应率为４７６％（２０／４２）；５３１％（１７／３２）；５２３％（１８／３４），分别高于其在早期（１０％，１／１０）、淋巴结阴性（２０％，４／２０）、高分化胃癌（１６７％，３／８）中的表达，Ｐ＜００５；ＥＧＦＲ表达与临床进展无明显相关性，Ｐ＞００５，但其在淋巴结转移（５９４％，１９／３２）、低分化胃癌（６１８％，２１／３４）中的表达率分别高于其在淋巴结阴性（３０％，６／２０）、高分化胃癌（２２２％，３／１８）中的表达，Ｐ＜００５。结论：ＥＧＦ、ＥＧＦＲ在胃癌转移过程中起一定作用，并可能是胃癌恶性程度的影响因素。     

人表皮生长因子cDNA序列分析及其在大肠杆菌中的表达

应用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR法）从人脐静内皮细胞RNA中扩增了表皮生长因子（EGF）的cDNA，采用基因重组技术克隆到pGEM－3zf（＋）载体中，经全自动荧光测序仪测定了其序列。在PCR扩增引物上分别加有起始密码子（ATG）和终止密码子（TGA），以利于原核表达。经亚克隆，EGFcDNA克隆到表达载体pBV220的EcoRI、SmaⅠ位或上，在大肠杆菌DH5α中进行表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明其表过量约占菌体总蛋白的10％。