脂多糖对人牙周膜细胞COX-2蛋白表达的影响

目的：观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响,探讨牙周病发生发展过程中脂多糖（LPS）与COX-2的关系。方法：使用不同浓度LPS刺激体外培养人牙周膜成纤维细胞,免疫组织化学法检测细胞COX-2蛋白表达,灰度分析并进行统计学处理。结果：LPS组COX-2蛋白表达明显高于对照组,并且LPS浓度越高,COX-2表达越强。结论：LPS能够诱导人牙周膜成纤维细胞COX-2表达上调,随着LPS刺激浓度增高,COX-2表达逐渐增强,这一机制很可能在牙周炎发生发展过程中扮演重要角色。     

微丝对牵张应变诱导的人牙周膜成纤维细胞中环氧合酶-2表达的影响

目的 探讨微丝的聚合在人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）正畸力信号传导中的作用。方法 将培养的hPDLFs接种于膜式细胞牵张应变施加装置上,随机分为对照组、单纯加力组、加力+细胞松弛素组。对照组牵张应变量为0;单纯加力组和加力+细胞松弛素组设定细胞静态牵张应变量为18%,加载时间分别为8 h、16 h和24 h。加力+细胞松弛素组在施加牵张应变量前加入5 μg/mL的细胞松弛素B来破坏微丝的聚集作用。用免疫组织化学法检测细胞中环氧合酶-2（COX-2）的表达,测定灰度值并进行统计学处理。结果 单纯加力组在18%牵张应变量作用下,COX-2表达随着加载时间的增加而增强;加力+细胞松弛素组在18%牵张应变量作用下,COX-2的表达明显降低,且各加载时间组间表达无差别。结论 微丝的聚合介导了hPDLFs中正畸力信号传导,破坏微丝的聚合作用将阻碍力学信号的传导,从而降低COX-2的表达。     

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况。方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘。经3～4代传代培养后,对细胞加载1%～20%的牵张应变,加载时间分别为30min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V-FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定。结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢。人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30min组低于对照组,但两者间无统计学差异。在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P<0.05)。在12h时所有组的细胞凋亡均减少。结论:人牙周膜成纤维细胞的使用最好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好。牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡。     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：观察模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达的影响。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞，应用可控压力细胞加载装置模拟咬合压力，分别施加30、60、90kPa的间歇性压力，每次15min，每天3次，在3、5d后提取细胞总RNA，定量后点于尼龙膜上，同时利用引物扩增COX-2基因的一段特异性片段作为cDNA探针，将探针同位素标记后与膜杂交，以观察COX-2在mRNA水平表达的变化。结果：加载模拟咬合压力的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达水平明显高于对照组，而且在一定范围内表达水平与加压力值成剂量依赖关系；各加压组加压3d与5d之间细胞COX-2mRNA表达无明显差异。结论：加载模拟咬合压力条件下培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2基因表达增高。     

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的：研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在机械拉伸应变作用下，细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况，探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法：采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上，通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况，并进行统计分析。结果：在8％、12％、16％力值组，细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增，肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗，排列更有规律；而在20％力值组，其结果则反之。结论：静态拉伸应变可影响牙周膜成纤维细胞的骨架。     

加载牵张应力对人牙周膜成纤维细胞生长和增殖的影响

目的：探讨不同力值和不同频率的牵张应力对HPDLF增殖的影响。方法：通过细胞牵张应力加载系统,施加频率为0.1Hz,大小为6%、12%、18%形变率的牵张应力;大小为12%形变率的频率为0.1Hz、0.2Hz及持续性的牵张应力,利用四唑盐（MTT）比色试验观察牵张应力对HPDLF增殖的影响。结果：频率为0.1Hz时,6%、12%的牵张应力对HPDLF有促增殖作用,12%的牵张力作用最强,18%的牵张应力对HPDLF的增殖有抑制作用;大小为12%时,0.2Hz的牵张应力对HPDLF的促增殖作用最强,持续性牵张应力促增殖作用最小。结论：不同力值和频率的牵张应力对HPDLF的促增殖作用影响不同,12%形变率、频率为0.2Hz的牵张应力有最佳的促增殖效果。     

静态机械拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞前列腺素E2分泌量的影响

目的：研究静态机械拉伸应变对体外培养的人牙周膜成纤维细胞前列腺素E2(PGE2)分泌量的影响。方法：实验的拉伸应变量设为0％、8％、12％、16％、20％5种，加力时间为24、48、72h3种，总共分为15组，每组设3个样本。加力完毕后，用RIA ELISA法分析每个样本培养基中PGE2的含量并进行统计分析。结果：在0％力值组，PGE2的每天分泌量与加力时间无关；在8％、12％、16％力值组，PGE2的每天分泌量随着加力时间和力值的增加而递增，但每天递增量随着加力时间的增加而减少；在20％力值组，PGE2的每天分泌量与加力时间成反比；在各个时间组，PGE2的每天分泌量均在16％力值处达到最高值。结论：在细胞的生理应变承受范围(0％、8％、12％、16％)内，静态机械拉伸应变促进人牙周膜成纤维细胞PGE2的分泌，但刺激效应随着加力时间的增加而减少；当拉伸应变量超过了细胞的生理应变承受范围(20％)．则PGE2的分泌量会随着加力时间的增加而减少。     

羧甲基壳聚糖对LPS干预人牙周膜成纤维细胞表达PGE2的影响

目的:观察脂多糖(LPS)干预下,不同浓度羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)表达前列腺素E2(PGE2)的影响. 方法:取冻存的人牙周膜成纤维细胞进行复苏培养,以浓度为10 mg/L的LPS进行诱导,用不同浓度的CMC进行干预,采用免疫组织化学方法检测PGE2在HPDLFs中的表达变化.结果:不同浓度CMC能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的PGE2,随CMC浓度的增加PGE2的表达量呈逐渐减弱趋势(P<0.05). 结论:CMC可能对LPS诱导的HPDLFs炎症损伤过程中表达PGE2有重要的抑制作用.     

机械牵张应变对人牙周膜细胞内游离钙离子浓度的影响

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内游离Ca2 浓度的变化。方法:体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置,对1%、10%和20%应变组的细胞分别进行30、60和120min的动态牵张加载,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2 浓度的变化,并应用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:当HPDLCs加载30min时,各组检测到的胞内游离Ca2 浓度与对照组无显著差异(P>0.05);60min时,各个应变组的胞内Ca2 浓度明显升高,与对照组相比均有非常显著的差异(P<0.01);加载时间延长到120min时,各组Ca2 浓度又降至对照组水平(P>0.05)。结论:机械牵张应变可通过钙离子信号系统影响HPDLCs的生物学活性。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响

目的：探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）蛋白表达的关系。方法：本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果：加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论：人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。     

Effect of tension-force on plasminogen activator activity from human periodontal ligament cells

The plasminogen activator (PA)-plasmin proteolytic system has recently received considerable attention because of its participation in a wide variety of biological activities and in pathological conditions involving tissue destruction. Excessive mechanical stress such as occlusal trauma is associated with alveolar bone loss in severe periodontitis. Therefore, mechanical stress may involve degradation of the extracellular matrix by occlusal trauma through activation of the PA-plasmin proteolytic system. We examined the effects of mechanical stress on PA activity, gene expressions of tissue type (t) PA, urokinase type (u) PA and PA inhibitor-1 (PAI-1) in human PDL cells. Human PDL cells were cultured on flexible-bottomed culture plates and placed on a Flexercell Strain Unit. The cells were flexed at 6 cycles (5 s strain, 5 s relaxation) at 9% and 18% elongation for 5 d. Application of tension-force induced significantly higher PA activity in stressed PDL cells than in non-stressed controls, and did so in a time- and magnitude-dependent manner (p<0.001, ANOVA). Western-blot analysis revealed that the high level of activity was due to tPA and not uPA. Gene expression of tPA mRNA in stressed PDL cells, as examined by RT-PCR, increased on d 5. These findings suggest that tPA may be involved in periodontal metabolism in response to mechanical stress.     

两种生长因子对人牙周膜成纤维细胞在钛金属表面附着和生长的影响

目的：研究两种生长因子对牙周膜成纤维细胞在然金属表面附着和生长的影响。方法：将纯钛、钛75试件入在12孔培养板内，取生长良好的第五代人牙周膜成纤维细胞（PDLF）接种在试件表面，分别在接种后4h、12h、24h、72h进行贴壁细胞地数。结果：接种后4h、12h、24h、72h、bFGF组纯钛、钛75表面细胞附着数与空白对照组的差异均有显著性（P＜0．05），rhBMP－2组纯钛、然75表面细胞附着数在初期（24h）与空白对组无显著性差异（P＞0．05）。72h时与空白对照组差异有显著性（P＜0．05），表明bFGF促进细胞附着和生长作用显著，而rhBMP－2促进细胞生长作用较促附着作用明显。结果：PDLF在钛金属表面的附着和生长可被生长因子所增强，但不同的生长因子对细胞附着和生长的生物学效应不尽相同。     

人牙周膜成纤维细胞体外培养的研究进展

人牙周膜成纤维细胞是牙周细胞生物学、药理学、毒理学和牙周组织工程学研究的基础,对口腔各个领域意义重大。由于受到牙周组织的解剖结构和取材数量的限制,牙周膜成纤维细胞的体外培养较为困难,因此本文就人牙周膜成纤维细胞的体外培养方法和应用等研究进展作一综述。     

牛血小板衍化生长因子对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

目的：对经牛血小板衍化生长因子作用的人牙周膜成纤维细胞超微结构进行观察。方法：透射电镜观察。结果：发现细胞超微结构发生了明显的变化，包括粗面内质网扩张和增多，发达的线粒体与大量的多聚核糖体形成，胞核增大，核内常染色质增多等。结论：牛血小板衍化生长因子可促进人牙周膜成纤维细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质合成旺盛，代谢、增殖活跃。提示这些变化可能与细胞在该因子作用下生物学功能增强有密切关系。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

硝苯地平和机械力对人牙周膜成纤维细胞基质金属蛋白酶的表达影响

目的研究机械静态拉伸作用下,硝苯地平对人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）基质金属蛋白酶（MMP）-10和MMP-13的表达影响。方法按弹力形变不同将细胞随机分为4组,分别为0%、8%、12%、16%形变组,每组再按照硝苯地平浓度不同分为4个亚组,分别为0、10、30、50 μm亚组。硝苯地平孵育1 h后,给予细胞12 h静态拉伸,免疫组化染色检测细胞胞浆中MMP-10和MMP-13的表达。结果弹性形变为0%时,各亚组中MMP-10和MMP-13的表达无明显变化,与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。当硝苯地平浓度为0 μm时,8%、12%、16%形变组胞浆内MMP-10和MMP-13均呈高表达,且随形变的增大,表达呈上升趋势（P<0.001）;当加入硝苯地平后,随硝苯地平浓度的增加,MMP-10和MMP-13表达均呈下降趋势（P<0.001）。结论硝苯地平对机械力诱导的MMP-10和MMP-13表达有抑制作用,提示钙离子通道参与机械力对HPDLF中MMP-10和MMP-13的诱导表达。     

柚皮苷对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响

目的探讨柚皮苷(naringin,NRG)对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响。方法以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(100μg/mL)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)损伤,采用MTT法检测NRG对LPS诱导HPDLF损伤的保护作用,利用ELISA法和Western blotting法检测NRG对LPS诱导的HPDLF中白介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-1β等炎症因子蛋白表达的影响,同时利用Real-time PCR方法检测NRG对LPS诱导的HPDLF组IL-6、IL-8、IL-1β等炎症因子基因表达的影响。结果经LPS(100μg/mL)刺激后,HPDLF增殖受到抑制,与CON组比较,LPS组细胞存活率显著降低,细胞周期进程受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NRG(40,20,10μg/mL)可显著抑制LPS诱导的HPDLF损伤,并可降低细胞内炎症因子表达;与LSP组比较,LPS+NRG 40μg/mL组、LPS+NRG 20μg/mL组、LPS+NRG 10μg/mL组HPDLF存活率显著提升,细胞周期进程加快,抑制IL-6、IL-8、IL-1β蛋白及基因表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论NRG对LPS诱导的HPDLF损伤具有保护作用,并可通过抑制LPS诱导的HPDLF中IL-6、IL-8、IL-1β的蛋白及基因表达水平,促进HPDLF增殖。     

雌激素与机械张应力对碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的研究雌激素与机械张应力共同作用对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)增殖分化相关因子碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达水平的影响。方法体外培养HPDLF,分为两组。实验组使用10-7mol/L雌激素干预后,使用4点弯曲加力装置对HP-DLF进行张应力加载;对照组不使用雌激素干预,只进行机械张应力加载。采用实时多聚酶链反应、琼脂糖凝胶电泳和紫外线分析检测HPDLF加力时3、6、12 h时bFGF基因的表达。结果加力0、3、6、12 h时,对照组bF-GFmRNA表达量光密度值分别为1.000,3.245±0.261,4.498±0.431,7.969±0.597,实验组bFGFmRNA表达量光密度值分别为16.736±1.003,22.542±1.768,27.923±1.914,31.556±2.142。雌激素干预与张应力加载共同作用与单纯受到机械张应力作用相比,bFGF的mRNA表达量明显上调(P<0.05)。结论雌激素对机械张应力状态下的牙周膜成纤维细胞增殖分化相关因子bFGF有较强调控作用,表现为bFGF的mRNA表达量显著上升。