调心方对β淀粉样蛋白所致原代培养海马神经元细胞毒模型的影响

目的：建立β淀粉样蛋白（Aβ）所致的神经细胞毒模型，探讨调心方的药敏及作用机理。方法：原代培养大鼠海马神经元，用25μmol/L 集状态的Aβ1－42建立神经细胞毒模型。采用乳酸脱氢酶（LDH）释放量来检测神经元存活率，通过透射电镜、流式细胞仪检测判断神经元凋亡，应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因的表达蛋白（Bcl-2、Bax、 c-Jun）。结果：神经元经Aβ1－42处理后，LDH释放增加；电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张；流式细胞仪检测可见亚二倍体峰；Bcl-2减少，而Bax与c－Jun增加。调心方使LDH释放减少，电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少，流式细胞仪检测显示凋亡率下降，Bcl-2增加，Bax减少，而c-Jun变化不明显。四氢氨基吖啶（THA）组神经元存活率增加，但其他指标的变化不明显。结论：调心方对Aβ1－42神经细胞毒有保护作用，可提高细胞存活率，抑制凋亡，其抑制凋亡作用的机制可能是通过提高bcl-2、降低bax基因的蛋白表达而实现。THA对神经元存活率有提高作用，但抑制神经元凋亡的作用似不明显。调心方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于THA。     

补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响

目的:建市Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理。方法:原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型。采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达。结果:神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与C-Jun表达增加。补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显。Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显。结论:①补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。②其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现。③Tacrine对神经元存活率有提高作用,但抑制神经元凋亡的作用似不明显。补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine。     

调心、补肾方对β淀粉样蛋白神经毒模型神经元存活率及突触小泡蛋白表达的影响

目的：研究调心方和补肾方对Aβ1－42所致神经毒模型海马神经元存活率和突触小泡蛋白表达的影响。方法：原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1－42建立神经细胞毒模型。采用FDA与PI双染后细胞计数、LDH释放量来检测神经元存活率,应用免疫细胞化学法研究突触小泡蛋白的蛋白表达。结果：神经元经Aβ1－42处理后,活细胞数减少,LDH释放增加,突触小泡蛋白表达减少。调心方、补肾方使活细胞数提高,LDH释放减少,突触小泡蛋白表达回升。Tacrine使神经元存活率增加,但突触小泡蛋白表达的变化不明显。结论：调心方与补肾方对Aβ1－42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,使突触小泡蛋白表达回升,但两方作用无显差异。Tacrine对神经元存活率有提高作用,但提高突触小泡蛋白表达的作用不明显。     

调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用

目的 探讨调心方的药效及作用机制。方法 原代培养大鼠海马神经元,Aβ 1-42诱导神经细胞毒模型。采用FDA与PI双染检测神经元存活率,Hoechst 33258染色、TUNEL判断神经元凋亡,免疫细胞化学研究Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因(bcl-2、bax、c-jun、c-fos)表达。结果 神经元经Aβ 1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase3表达增加,bcl-2 mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。调心方可显著改善上述变化。结论 调心方对Aβ 1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。其机制可能通过提高bcl-2 mRAN水平,降低bax和c-jun mRAN水平,减少Caspase-3表达而实现。     

独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元的保护作用及机制研究

目的:研究独活香豆素对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及可能机制。方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ25-35、不同浓度独活香豆素和丹酚酸B共同孵育24 h,用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞存活率与LDH释放量,用Hoechst 33258染色检测Aβ25-35诱导的神经元凋亡,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达量。结果:独活香豆素(10、50、100、150μg/ml)能明显提高Aβ25-35(30μM)损伤神经元的存活率,降低LDH释放量,抑制神经元凋亡,以浓度为100μg/ml时作用最显著,作用强度与丹酚酸B相当;独活香豆素能提高神经元Bcl-2 mR-NA、降低Caspase-3 mRNA的表达量。结论:独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制促凋亡基因Caspase-3、促进抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达有关。     

苦参素通过p38/JNK信号途径对海马神经元凋亡的影响

探讨苦参素(oxymatrine,OMT)对海马神经元凋亡的影响及其机制。采用MTT法测定OMT对海马神经元存活率的影响;生物化学法测定OMT对LPS诱导的海马神经元乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率的影响;Hochest 33342染色观察海马神经元凋亡形态;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法检测海马神经元中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测海马神经元中p38,p-p38,JNK,p-JNK,Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结果发现,不同剂量的OMT(0.37~6.0 g·L~(-1))和海马神经元共培养24 h,海马神经元生长状态良好;LPS刺激后,海马神经元LDH释放率增加(P0.01),JNK和p38的磷酸化水平明显增加(P0.01),Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达上调(P0.01),海马神经元凋亡增加。OMT预处理后,能明显降低海马神经元经LPS刺激后的LDH释放(P0.05或P0.01),减少p38和JNK磷酸化水平,降低Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达(P0.01),海马神经元凋亡减少。综上,OMT能降低经LPS激活的p38和JNK磷酸化水平,下调Bax/Bcl-2的比例和Caspase-3的表达,从而抑制海马神经元凋亡。OMT通过p38/JNK信号途径抑制海马神经元的凋亡。     

女贞苷对Aβ42诱导神经细胞凋亡及相关蛋白NFκB、Bcl2变化的影响

目的：探讨女贞苷对Aβ42诱导神经细胞凋亡及相关蛋白NF-κB、Bcl-2变化的影响及其相关机制。方法：在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞上,女贞苷梯度（50 μM、100 μM）预保护12小时后,加入浓度为15 μM的Aβ42诱导损伤12小时。MTT法测定终点细胞存活率, Western blot法检测NF-ΚB,Bcl-2的表达变化。结果： 50 μM、100 μM女贞苷可减少Aβ42引起SH-SY5Y细胞的凋亡。Western blot法检测女贞苷组NF-ΚB的蛋白表达较模型组来说减少（P﹤0.01）,抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达相对于模型组明显增加（P﹤0.01）。 结论：表明女贞苷可提高Aβ42诱导损伤的SH-SY5Y的细胞存活率,其可能机制为女贞苷抑制NF-ΚB的激活和增加抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,从而达到对细胞的保护作用。     

人参皂苷对 β 淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤及凋亡的影响

 目的 研究人参皂苷(GRS)对神经元分化细胞株PC12损伤及凋亡的影响。方法 采用神经细胞培养和流式细胞仪技术,以β淀粉样蛋白(Aβ)诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,观察Aβ对PC12细胞的影响以及不同剂量GRS对PC12损伤的保护作用。结果 CRS 5,10 μg·ml^-1明显减少Aβ介导PC12损伤时细胞内酶的释放,提高细胞的存活率。对Aβ诱导的细胞凋亡,GRS也有一定的拮抗作用。结论 人参皂苷能拮抗Aβ诱导的神经细胞凋亡,对Aβ引起的神经细胞毒性有一定的保护作用。     

银杏叶聚戊烯醇抗Aβ_(25-35)介导dPC12细胞损伤的保护机制

目的:研究银杏叶聚戊烯醇(GP)抗Aβ_(25-35)诱导dPC12细胞损伤的保护机制。方法:以鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆细胞系(PC12细胞)为研究对象,通过LDH比色法检测GP对Aβ_(25-35)处理后dPC12细胞存活率的影响;流式细胞术检测不同浓度GP对dPC12细胞凋亡的影响;应用活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)试剂盒检测Aβ_(25-35)对dPC12细胞的氧化损伤,并研究GP的抗氧化作用及其机制;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3在mRNA水平的表达,并采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3及Cleaved Caspase-3等凋亡相关因子在蛋白水平的表达。结果:GP可显著降低LDH漏出率以及细胞内ROS水平和MDA含量,对dPC12细胞有显著的抗氧化作用,具有显著的量效关系;GP对Aβ_(25-35)引起的dPC12细胞凋亡有一定的抑制作用,以高剂量组作用显著;GP能显著下调Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax mRNA水平,并上调Bcl-2 mRNA水平,Bax/Bcl-2 mRNA比值降低,抑制细胞凋亡;GP能降低Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax/Bcl-2比值,抑制凋亡执行因子Caspase-3活化,从而抑制细胞凋亡。结论:GP可减少Aβ_(25-35)致损伤dPC12细胞的凋亡,其作用可能与其抗氧化作用和抑制细胞凋亡途径激活有关。     

开郁清热方改善胰岛β细胞凋亡的实验研究

目的:验证开郁清热方改善胰岛β细胞的作用。方法:离体实验采用INS-1胰岛细胞系进行培养,通过高糖的方法造成胰岛功能障碍的模型,分别给予正常鼠血清、小剂量开郁清热方、大剂量开郁清热方、罗格列酮进行干预,别设立空白组和模型组进行对照,用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化法检测凋亡相关指标Bax、Bcl-2、p53。结果:开郁清热方大剂量组能有效降低胰岛β细胞凋亡率,减少Bax、p53含量,增加Bcl-2含量(P<0.05),作用效果与罗格列酮组近似。结论:开郁清热方能有效改善胰岛β细胞凋亡。