赖氨大黄酸抑制HER2信号通路对肺癌H460细胞的凋亡诱导作用

目的: 研究赖氨大黄酸（RHL）对肺癌H460细胞增殖、凋亡的影响及人类表皮生长因子受体2（HER2）信号通路在其中的作用,为RHL抗肺癌的临床实验研究提供依据。方法: 选取HER2高表达并处于对数生长期的H460细胞,随机分为空白对照组和25、50、75、100、125、150 μmol•L^-1 RHL组,采用MTT法检测各组细胞增殖活性。H460细胞随机分为空白对照组及50、100、150 μmol•L^-1 RHL组,流式细胞术检测各组细胞48 h凋亡情况,Western blotting法检测各组细胞48 h后凋亡相关蛋白和HER2信号通路蛋白的表达。结果: 细胞培养48 h后,不同浓度RHL组H460细胞存活率显著低于空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05),RHL的增殖抑制作用和凋亡诱导作用呈剂量依赖性。不同浓度RHL组H460细胞Caspase-3、Caspase-7和聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶 (PARP)的切割片段蛋白表达明显高于空白对照组 (P<0.05), HER2、AKT蛋白磷酸化水平和NF-κB蛋白的表达水平明显低于空白对照组(P<0.05)。结论: RHL可能通过抑制HER2/AKT/NF-κB信号通路诱导H460细胞凋亡。     

赖氨大黄酸对氧化应激引起的小鼠动脉血管损伤的保护作用及其机制

目的:观察赖氨大黄酸(RHL)对氧化应激引起的小鼠动脉血管损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用腹腔注射百草枯方法建立活性氧引起血管损伤小鼠模型。将30只C57小鼠随机分为对照组(n=10)、百草枯模型组(n=10)和RHL干预组(n=10)。RHL干预组小鼠在造模前1周灌胃给予RHL,对照组和百草枯模型组灌胃给予等体积蒸馏水。百草枯模型组和RHL干预组腹腔注射百草枯,对照组腹腔注射等体积生理盐水,每周注射1次,持续2周。造模2周后检测血清丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;DCFH-DA染色观察血管活性氧水平;HE染色观察腹主动脉病理表现;Western blotting 法检测血管损伤相关基因的表达。结果:与对照组比较,百草枯模型组小鼠血管组织小鼠血清SOD和GSH-Px活性下降(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);与百草枯模型组比较,RHL干预组MDA水平下降(P<0.05),SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05);DCFH-DA和HE染色,百草枯模型组小鼠血管组织血管组织活性氧水平升高(P<0.05),血管结构破坏, RHL干预组血管活性氧水平下降(P<0.05),病理变化明显减轻。Western blotting法检测,与对照组比较,百草枯模型组小鼠血管组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和caspase-3表达水平降低(P<0.05),caspase-3裂解片段表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,RHL干预组小鼠血管组织 eNOS和caspase-3 表达水平升高 (P<0.05),caspase-3裂解片段表达水平降低(P<0.05)。结论:百草枯能够诱导体内活性氧水平升高引起血管细胞损伤,RHL通过清除活性氧,上调eNOS表达,下调caspase-3裂解片段表达来拮抗百草枯的作用。     

赖氨大黄酸对糖尿病大鼠肝脏的保护作用及其机制

目的: 探讨赖氨大黄酸（RHL）对糖尿病模型大鼠肝脏的保护作用,阐明RHL对肝脏的保护作用机制。方法：通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立大鼠糖尿病模型。将40只大鼠随机分为对照组、糖尿病模型组、25和50 mg•kg^-1 RHL治疗组,每组10只。采用硫代巴比妥酸法检测肝脏组织中丙二醛(MDA) 水平,联苯三酚自氧化法和NADPH 偶联法分别检测超氧化物歧化酶(SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;HE染色观察肝脏组织病理学变化;Nile red染色观察肝脏组织脂肪水平;Western blotting法检测脂肪合成相关蛋白表达水平。结果：与对照组比较,糖尿病模型组大鼠体质量减低,血糖、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平升高(P<0.05),肝脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),肝脏组织出现大量脂肪空泡和脂肪蓄积。糖尿病模型大鼠脂肪合成信号通路ERK1/2-SREBP-1c被激活;与模型组比较,25和50 mg•kg^-1 1 RHL治疗组大鼠脂肪合成信号通路被抑制。与模型组比较,RHL治疗组大鼠体质量无显著变化,但血糖、TG和TC水平显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,RHL治疗组大鼠肝脏组织中的脂肪空泡和脂肪蓄积明显减少。结论：RHL能抑制氧化应激、肝脏脂肪变性和脂肪蓄积从而发挥对糖尿病大鼠肝脏的保护作用。     

赖氨藤黄酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的: 研究赖氨藤黄酸(GAL)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制,为GAL 抗乳腺癌的临床研究和应用提供理论依据。方法: 选取处于对数生长期的MCF-7细胞,并随机分为空白对照组、不同剂量 (0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00 μmol·L^-1)GAL组和不同剂量(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00μmol·L^-1)藤黄酸组,采用MTT法检测各组MCF-7细胞48 h增殖活性。选取对数生长期的MCF-7细胞,2 μmol·L^-1 GAL作用MCF-7细胞不同时间(0、6、12、24、36、48和60 h),采用MTT法检测作用不同时间后各组MCF-7细胞增殖活性。流式细胞术和Hoechst 33258染色检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡情况,采用Western blotting 法检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果: 细胞培养24 h 后,不同剂量GAL组MCF-7细胞存活率低于空白对照组(P<0.05),随剂量增加和作用时间延长细胞存活率下降(P<0.05)。流式细胞术和Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,不同剂量GAL组MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。Western blotting检测,与空白对照组比较,不同剂量GAL组细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平明显降低 (P<0.05),而caspase-3切割片段蛋白的表达水平明显高于对照组 (P<0.05)。结论: GAL 通过抑制SIRT1蛋白表达水平和上调caspase-3切割片段蛋白的表达水平诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用及其分子机制

目的: 探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用,阐明RHL治疗大鼠胆汁淤积性肝纤维化的分子机制。方法:将35只大鼠分为对照组、模型组、35和70 mg·kg^-1RHL治疗组及赖氨酸组,每组7只大鼠。通过胆总管结扎(BDL)方法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型。使用全自动生化分析仪检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性以及总胆汁酸(TBA)和总胆红素(TBIL)水平;HE染色对肝脏组织行病理学检查;Masson三色染色观察肝组织纤维数量;使用试剂盒通过酶标仪测定肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)水平;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布;Western blotting法检测α-SMA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平升高(P<0.05);肝组织肝小叶结构被破坏,纤维异常增生,Hyp水平亦升高(P<0.05)。免疫组织化学染色,α-SMA着色于胞膜和胞浆且表达增多;Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠α-SMA表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,35和70 mg·kg^-1RHL治疗组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平明显降低(P<0.05)。肝脏病理组织学,与模型组比较,35和70 mg·kg^-1RHL治疗组大鼠肝脏组织中纤维成分数量减少,Hyp水平降低(P<0.05);免疫组织化学和Western blotting法,与模型组比较,35和70 mg·kg^-1 RHL治疗组大鼠肝脏组织中α-SMA表达减少(P<0.05)。结论:RHL能抑制肝星形细胞激活、肝脏纤维变性和蓄积以发挥对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏的保护作用,RHL有望成为治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。     

紫杉醇对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨紫杉醇对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：利用图像分析仪对Lewis肺癌细胞核形态、DNA含量及AgNORs计数进行测量，并有免疫组化SP法对bcl-2,fas蛋白表达进行检测。结果：用药后核面积、周长、平均直径、积分光密度、AgNORs计数显减小（P＜0．05），bcl-2蛋白的面积／HP、面密度、灰度值降低，而fas蛋白的面积／HP、面密度、灰度值增加（P＜0．05）。结论：紫杉醇能抑制Lewis肺癌细胞增殖，促进其凋亡。     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。     

赖氨大黄酸盐的合成工艺及活性研究

目的 制备水溶性大黄酸衍生物。方法 以大黄酸为起始原料，制备大黄酸的赖氨酸水溶液，在30 ℃反应24 h，然后加入一定量丙酮使其结晶析出，得到晶体物质。根据2005年药典方法检测其在水中溶解度，用MTT法检测新化合物对细胞增殖的影响。结果 目标化合物经HPLC、红外光谱和1H-NMR确证。赖氨大黄酸在水中溶解度为15 g·L^-1，其在抑制肿瘤细胞和内皮细胞增殖方面与大黄酸相当。结论 获得了水溶性好的大黄酸衍生物——赖氨大黄酸，并且其活性与大黄酸相当。     

赖氨大黄酸对D-半乳糖致衰老模型小鼠的肾脏保护作用及其作用机制

目的: 研究赖氨大黄酸(RHL)对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老和肾脏保护作用,阐明其作用机制,为RHL预防衰老的研究提供依据。方法: 通过腹腔注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型,将小鼠随机分为对照组、衰老模型组和低、高剂量RHL组。除对照组外,其余各组小鼠每天腹部皮下注射D-半乳糖100 mg·kg^-1,持续8周,对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水,低和高剂量RHL组小鼠分别每天1次灌胃25和50 mg·kg^-1的RHL。观察各组小鼠一般状况,计算肾脏指数;检测血清和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性;HE染色行肾脏组织病理学检查;Western blotting法检测肾脏衰老相关蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏指数降低 (P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),MDA含量升高 (P<0.05);与模型组比较,RHL组小鼠肾脏指数升高 (P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05)。肾脏病理组织学检查,与衰老模型组小鼠比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中肾小管上皮细胞水肿减轻,且存在剂量依赖性。Western blotting法检测,与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平降低(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平升高(P<0.05);与衰老模型组比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论: RHL通过抑制氧化应激、肾小管上皮细胞水肿和调控衰老相关基因的表达来发挥对衰老小鼠肾脏的保护作用。     

赖氨大黄酸对KK/HlJ糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用及其机制

目的：探讨赖氨大黄酸（RHL）对链脲佐菌素（STZ）诱导的KK/HlJ糖尿病（DM）小鼠胰岛素抵抗的改善作用,并阐明其作用机制。方法：腹腔注射STZ （50 mg·kg^-1）并给予DM专属饲料制备KK/HlJ小鼠DM模型。将48只小鼠分为正常对照组、模型组、低剂量RHL治疗组（25 mg·kg^-1）和高剂量RHL治疗组（50 mg·kg^-1）,每组12只,共治疗16周。采用葡萄糖氧化酶法检测各组小鼠空腹血糖（FBG）、总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平,HE染色观察小鼠胰腺组织形态表现,免疫组织化学法检测小鼠胰岛组织中胰岛素水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠血清胰岛素、C反应蛋白（CRP）和肝脏组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）水平,Western blotting法检测小鼠肝脏组织中糖原合成相关基因（PI3K、AKT和GSK-3β）的磷酸化表达水平。结果：与模型组比较,低和高剂量RHL治疗组小鼠FBG、TG和TC水平降低（P<0.05）,胰岛素水平无明显变化（P>0.05）。与模型组比较,低和高剂量RHL治疗组小鼠血清CRP水平和肝脏组织中TNF-α和IL-6水平降低（P<0.01）。HE染色,与模型组比较,低和高剂量RHL治疗组小鼠胰岛形态有一定恢复,偶见炎症浸润;免疫组织化学染色,与模型组比较,低剂量RHL治疗组小鼠棕色颗粒状物质明显减少,而高剂量RHL治疗组小鼠胰岛中未见棕色颗粒状物质。与模型组比较,低和高剂量RHL治疗组小鼠糖原合成相关基因PI3K、AKT和GST-3β磷酸化表达水平升高（P<0.01）。结论：RHL对STZ所致KK/HlJ DM小鼠胰岛素抵抗有改善作用,其机制可能与RHL促进糖原合成有关。     

c-erbB2反义寡脱氧核苷酸联合紫杉醇对乳腺癌细胞SK-Br-3的抑制作用

目的：探讨以c-erbB2mRNA为靶点的反义寡脱氧核苷酸（ASODN）联合紫杉醇对乳腺癌SK—Br-3细胞的抑制作用．方法：实验分为7组：ASODN组,紫杉醇组,赫赛汀组,表阿霉素组,ASODN＋紫杉醇组,赫赛汀＋紫杉醇组,表阿霉素＋紫杉醇组．分别处理乳腺癌SK．Br-3细胞72h,MTF法测定细胞抑制率,中效原理判定药物联合应用的效果,WesternBlot检测细胞c—erbB2,Bcl-2蛋白表达水平．结果：各组中SK．Br．3细胞的抑制率均随药物浓度的增加而增大;紫杉醇的中效浓度紫杉醇组为0．14mol／L;ASODN＋紫杉醇组为0．07μmol／L,其合用指数（CI）〈1,为协同作用．ASODN＋紫杉醇组c-．erbB2,Bcl-2蛋白表达明显低于紫杉醇组,两组相比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）．结论：ASODN可明显增强紫杉醇对乳腺癌SK．Br．3细胞的抑制效应,可明显降低紫杉醇的用药量．     

芒果苷对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的研究芒果苷对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,为深入研究芒果苷抗肿瘤机制提供试验基础。方法 0、50、100、150、200、250μmol.L-1芒果苷处理肺癌A549细胞24或48 h后,采用四甲基偶氮噻蓝法检测芒果苷对A549细胞增殖的影响;采用流式细胞仪AnnexinV-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测芒果苷作用后细胞凋亡情况;荧光显微镜观察芒果苷作用后细胞形态变化。结果随着芒果苷浓度的增加和作用时间的延长,对A549细胞的增殖抑制作用增加,呈现明显的时间-剂量效应关系;流式细胞检测细胞凋亡分析表明,随着芒果苷浓度的增高,A549细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均逐渐增加,与0μmol.L-1组比较差异有统计学意义(P<0.05);荧光电子显微镜观察芒果苷作用后的细胞中可见核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变。结论芒果苷在体外能有效抑制肺癌细胞生长,其机制与其诱导肺癌细胞凋亡有关。     

大黄酸对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的：探讨大黄酸对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并阐明其机制。方法：将NSCLC A549细胞分为对照组和低、中及高剂量大黄酸组,采用不含大黄酸的培养基和含有质量浓度为5、10和20 μmol·L^-1大黄酸的培养基分别培养细胞24、48和72 h。采用MTT法检测各组A549细胞增殖率,流式细胞术检测A549细胞凋亡率以及不同细胞周期A549细胞百分比,Western blotting法检测各组A549细胞中半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）、细胞色素C（Cyt-C）和凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达水平,划痕实验和Transwell实验检测各组A549细胞迁移和侵袭能力。结果：大黄酸处理24h后,与对照组比较,低、中和高剂量大黄酸组A549细胞增殖率明显降低（P<0.05）,细胞迁移距离明显减少,侵袭细胞数量明显减少;中和高剂量大黄酸组A549细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;高剂量大黄酸组G₁期细胞百分比明显降低（P<0.05）。大黄酸处理48 h后,与对照组比较,中和高剂量大黄酸组A549细胞中Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：大黄酸可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与上调Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达有关。     

槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响.方法采用MTT试验、流式细胞仪检测槲皮素对体外培养的人肺腺癌A549细胞的抑制作用和细胞周期的变化,电镜观察超微结构变化,免疫组化技术检测槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响.结果MTT结果显示槲皮素对体外培养的A549具有明显的增殖抑制作用,且具有一定的浓度和时间依赖性;流式细胞仪检测发现,30μg/ml槲皮素作用A549细胞48h后能将细胞阻滞于G0/G1期,且在细胞周期G1峰的左侧出现了凋亡峰;电镜观察发现有凋亡的特征性改变;免疫组化结果显示,槲皮素使Bcl-2表达下调,而上调p53蛋白的表达.结论槲皮素能抑制肺腺癌A549细胞的生长,阻止细胞由G0/G1期向S期和G2/M期移行并诱发细胞凋亡,其诱发A549细胞凋亡的机制可能与上调促凋亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达有关.