严重创伤早期大鼠下丘脑G蛋白偶联受体激酶的变化

目的研究G蛋白偶联受体激酶(GRK)在大鼠下丘脑的分布和严重创伤后时相变化及其与应激早期下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)分泌的关系。方法采用胸部撞击和单侧股骨中段骨折进行致伤。50只成年Wistar大鼠随机分为正常对照组和创伤组,通过免疫组化实验研究GRK在下丘脑的分布,Westernblot实验研究室旁核GRK的蛋白表达,RT-PCR技术研究室旁核CRH的转录活性。结果在下丘脑室旁核有GRK2/3的分布,但未发现GRK6的阳性染色;GRK2/3的总蛋白在创伤后30min显著下降(P<0.05),90min恢复近正常水平;CRHmRNA表达在伤后30min显著升高(P<0.05),60min、90min的升高非常显著(P<0.01)。结论在创伤应激过程早期GRK2/3的蛋白表达受到了抑制,推测下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素1型受体(CRHR1)的同源性脱敏受到了抑制,间接促进了下丘脑室旁核CRH的分泌。     

G蛋白偶联受体30在大鼠蛛网膜下腔出血后对神经炎症和血脑屏障破坏的影响

目的 探讨G蛋白偶联受体30（GPR30）在大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）早期脑损伤（EBI）过程中对神经炎症和血脑屏障（BBB）破坏的影响。方法 36只雄性大鼠随机分为6组（n = 6/组）：假手术（Sham）组,SAH（3 h、6 h、12 h、24 h、72 h）组。此外,72只大鼠随机分为4组（n = 18/组）：Sham组、SAH组、SAH联合过表达GPR30慢病毒阴性载体（SAH+Lv-NC）组、SAH联合过表达GPR30慢病毒载体（SAH+Lv-GPR30）组。通过血管内穿孔建立SAH模型,于SHA大鼠脑室内注射Lv-GPR30。通过神经学评分、脑组织含水量（BWC）检测、伊文思蓝（EBP）染色、苏木精和伊红（HE）染色来分析GPR30对EBI的影响;采用蛋白质印迹法（Western blotting）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析各种蛋白质和转录水平;通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）分别测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素10（IL-10）水平。结果 SAH大鼠脑内注射Lv-GPR30后脑组织中GPR30的表达增加,并改善了大鼠神经功能、神经炎症、BBB破坏和脑水肿程度。过表达GPR30抑制SAH大鼠脑组织中基质金属蛋白肽酶9（MMP-9）和基质金属蛋白肽酶2（MMP-2）的表达,以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平,同时提高IL-10的表达水平。结论 GPR30能减轻SAH大鼠的神经炎症和BBB破坏。 [国际神经病学神经外科学杂志, 2024, 51(2): 29-34]     

β-淀粉样蛋白致胚胎鼠大脑神经干细胞凋亡作用的研究

目的 探讨β-淀粉样蛋白（amyloid-β protein，Aβ）对胚胎鼠神经干细胞凋亡作用的影响。方法 体外培养7d的胚胎鼠神经干细胞．分为正常对照组和实验组，实验组根据Aβ1-40作用终浓度的不同，又分为0．1，1．0，5．0．10．0和20．0μmol／L等5个亚组，分别培养12h、24h、48h及72h。然后经四唑盐实验筛选Aβ1-40致神经干细胞发生凋亡的最佳浓度，再与神经干细胞共同培养。通过Annexin-V磷脂酰丝氨酸荧光标记染色法规察神经干细胞早期凋亡情况；用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行染色，观察神经干细胞中晚期凋亡情况。结果（1）经四唑盐筛选实验确定，以终浓度为5．0μmol／L的Aβ1-40。作为β-淀粉样蛋白致神经干细胞发生凋亡的最佳诱导剂量。（2）神经干细胞与Aβ1-40（5.0μmol／L）共同培养至6h时，神经下细胞发生早期凋亡，细胞内出现大量绿色荧光标记物，而对照组则未见绿色荧光标记物。（3）神经干细胞与Aβ1-40（5．0μmol／L）共同培养24h时，神经于细胞发生中晚期凋亡，细胞内可见绿色荧光标记物。结论β-淀粉样蛋白可导致胚胎鼠大脑神经干细胞发生凋亡。     

G蛋白偶联受体56对小鼠脑胼胝体轴突髓鞘化的影响

目的探讨G蛋白偶联受体56(GPR56)对小鼠脑胼胝体轴突髓鞘化的影响。方法筛选出GPR56基因杂合型(GPR56+/-)小鼠(GPR56+/-组)和敲除型(GPR56-/-)小鼠(GPR56-/-组)各38只。每组选在小鼠出生后7 d、14 d、21 d、28 d(P7d、P14d、P21d、P28d)进行研究。应用免疫组化染色和Western Blot方法监测髓鞘碱性蛋白(MBP)和2、3-环核苷酸3-磷酸二酯酶(CNPase)在P7d、P14d、P21d、P28d两组小鼠脑胼胝体白质中的表达;用电镜观察P28d小鼠胼胝体白质内轴突髓鞘化,比较轴突髓鞘的厚度。用荧光免疫组化染色观察P7d两组小鼠胼胝体内PDGF-aR阳性(PDGF-aR+)细胞的数量。用原位杂交检测P28d两组小鼠胼胝体内髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)阳性(PLP+)细胞数。结果与GPR56+/-小鼠比较,MBP在P14d、P21d、P28d GPR56-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达明显下降,CNPase在P7d、P14d、P21d、P28d GPR56-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达明显下降(均P0.01)。电镜见P28d GPR56-/-小鼠脑胼胝体白质内髓鞘化轴突的数量明显减少,轴突髓鞘的g-ratio值升高(P0.05),髓鞘的厚度变薄。荧光免疫组化和原位杂交结果显示P7d GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝体内PDGF-aR+细胞数量无差异,但P28d GPR56+/-小鼠胼胝体内PLP+细胞数明显多于P28d GPR56-/-小鼠(P0.01)。结论 GPR56蛋白分子可能通过影响少突胶质前体细胞分化成熟参与了脑白质轴突髓鞘化。     

神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨*☆

背景：前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。 目的：进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径。 方法：分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Western blot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达。 结果与结论：神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率。神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5 mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5 mRNA的表达上调作用。Western blot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组。提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

转染TRAIL的神经干细胞对神经胶质瘤凋亡的诱导作用

神经干细胞对颅内胶质瘤有很强的趋向作用，而对正常脑组织无此特性。TRAIL能选择性地促使肿瘤细胞凋亡而对正常组织无毒性。本文就神经干细胞、TRAIL及神经干细胞转染TRAIL后与胶质瘤的关系作一综述。     

N-Methyl-D-Aspartate受体拮抗剂对大鼠海马神经干细胞内源性激活的实验研究

目的研究N-Methyl-D-Aspartate(NMDA)受体拮抗剂MK-801对大鼠神经干细胞(NSC)内源性激活的作用.方法将不同年龄阶段(10 d、3月、10月)的SD大鼠分为实验组和对照组,实验组腹腔注射MK-801,对照组腹腔注射生理盐水,用免疫组织化学方法测定两组大鼠海马齿状回颗粒层(SGZ)的Brdu阳性细胞、Nestin阳性细胞表达数.结果2组的10 d幼鼠,Brdu阳性细胞、Nestin阳性细胞增殖均不明显,2组无显著差异(P＞0.05),而在3月成年鼠实验组Brdu阳性细胞7 d达高峰,Nestin阳性细胞11 d达高峰,较对照组增殖较明显(P＜0.05);实验组10月老龄鼠Brdu阳性细胞、Nestin阳性细胞表达更明显,并可持续到18 d,2组比较统计学有显著意义(P＜0.01).结论NMDA受体拮抗剂MK-801可明显促进3月成鼠、10月老年鼠脑中NSC的增殖、分化.     

大鼠脑出血后不同时期神经营养因子受体p75、神经生长因子前体、酪氨酸激酶A的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脑出血后血肿周围组织中神经营养因子受体p75(p75NTR)、神经生长因子前体(pro NGF)、酪氨酸激酶A(TrkA)的表达及细胞凋亡率,进一步探讨其在脑出血后的细胞凋亡中所发挥的作用。方法制作大鼠脑出血模型,于术后6 h、24 h、72 h、10 d处死各组大鼠获取所需脑组织标本,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化SP法检测p75 NTR、TrkA、pro NGF的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测p75 NTR、TrkA的基因表达水平。结果脑出血后p75 NTR、proNGF表达水平及p75 NTR/TrkA值与对照组比较显著升高(P 0. 01),且动态变化规律与脑细胞凋亡率相似;72 h后TrkA的动态变化规律与细胞凋亡率相反。结论脑出血后pro NGF与p75 NTR的结合可能参与介导脑细胞凋亡,p75 NTR/TrkA值增高时,pro NGF及p75 NTR以介导细胞凋亡为主; TrkA在脑出血后72 h内神经营养作用被抑制,72 h后可能发挥神经营养作用。     

新生大鼠海马神经干细胞表达趋化因子受体CX3CR1的体外研究

目的 探讨体外培养神经干细胞是否表达趋化因子受体CX3CR1.方法 采用无血清方法分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,细胞免疫荧光方法检测神经干细胞标志巢蛋白(nestin)表达及干细胞多向分化为神经元及胶质细胞的能力,后通过细胞免疫荧光及RT-PCR方法检测神经干细胞表达趋化因子受体CX3CR1的情况.结果 体外培养新生大鼠海马神经干细胞呈nestin阳性.可分化为神经丝蛋白200(NF200)阳性的神经元、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的星形胶质细胞及2',3'-环核苷酸-3'-磷酸二酯酶(CNP)阳性的少突胶质细胞,细胞免疫荧光及RT-PCR证实神经干细胞表达趋化因子受体CX3CR1.结论 新生大鼠海马神经干细胞表达趋化因子受体CX3CR1.为进一步研究其体内外迁移提供理论依据.     

N-Methyl-D-Aspartate受体拮抗剂对脑缺血后成年大鼠神经干细胞内源性激活的实验研究

目的　研究N - Methyl- D- Aspartate(NMDA)受体拮抗剂MK- 80 1对脑缺血后神经干细胞(NSC)激活的作用。方法　将4 0只SD大鼠分成对照组和实验组,两组大鼠均采用传统线栓法作成大脑中动脉缺血再灌注模型,实验组大鼠腹腔注射MK- 80 1,对照组腹腔注射生理盐水,通过免疫组织化学技术标记鼠脑海马齿状回颗粒细胞层(SGZ)、室管膜下层(SVZ)及梗死皮质周边区注射后第3、7、11、18天的Brdu、Nestin阳性细胞数。结果　对照组大鼠Brdu、Nestin阳性细胞7d在SGZ出现一小高峰,然后迅速下降,11d阳性细胞甚少,梗死皮质周边区更少;而实验组Brdu、Nestin阳性细胞3d在SVZ明显表达,7～11d在SGZ区达高峰,并可持续至18d,同样梗死皮质区Brdu、Nestin阳性细胞7～18d表达明显,两组比较,有统计学意义(P<0 .0 1)。结论　NMDA受体拮抗剂MK- 80 1在脑缺血后,能促进NSC的增殖、分化。     

A new cell surface relationship between neuroepithelial cells during rat neural tube development

Electron microscopic examination of the developing neural tube in 11th to 13th day rat fetuses revealed a new cell surface relationship between differentiating neuroepithelial cells. Cytoplasmic projections possessing terminal dilations were observed extending from neuroepithelial cells through cytoplasmic furrows into large coated pits at the surface of adjacent cells. This cell-to-cell relationship provides a mechanism for the internalization of surface molecules and possibly even cytoplasmic constituents. Communication between donor and recipient cells mediated in this way suggests a route for the sharing of macromolecules, including cytoplasmic fragments, which could function as regulators in embryonic development and differentiation.     

表观调控与神经干细胞分化(英文)

神经干细胞是当前神经科学领域的研究热点。最近的研究显示表观调控与神经干细胞的分化关系密切,而且为神经干细胞的移植治疗提供可能的细胞来源。表观调控是指在基因的DNA序列未改变的情况下,基因功能发生可遗传的变化而导致细胞表型发生改变,主要机制包括DNA甲基化、组蛋白修饰、基因印迹、染色体重组以及非编码小RNA等。本综述就表观调控对神经干细胞分化作用的最新进展作一回顾。     

表观调控与神经干细胞分化

神经干细胞是当前神经科学领域的研究热点。最近的研究显示表观调控与神经干细胞的分化关系密切,而且为神经干细胞的移植治疗提供可能的细胞来源。表观调控是指在基因的DNA序列未改变的情况下,基因功能发生可遗传的变化而导致细胞表型发生改变,主要机制包括DNA甲基化、组蛋白修饰、基因印迹、染色体重组以及非编码小RNA等。本综述就表观调控对神经干细胞分化作用的最新进展作一回顾。     

Adult neural stem cell plasticity

<正>Stem cells derived from adult tissues have long been considered multipotent, able to differentiate into a limited number of cell types found in their tissue of origin. Embryonic stem cells, in contrast,are pluripotent, which may differentiate into almost all cell types.With the ability to create induced pluripotent stem cells from somatic cells now available, the properties of multipotent stem cells are being re-evaluated. If adult cells may be reverted to pluripotent stem cells, can multipotent stem cells also be manipulated towards pluripotency? Advancements in biotechnology now allow for better methods to investigate stem cell plasticity, such as the relative     

脑组织移植和神经干细胞研究进展

综述了近年来广泛开展的神经组织和细胞移植的各种主要方法及其进展。着重对神经干细胞这一神经科学的前沿课题进行了详细的复习。并对神经干细胞的研究方法,神经营养因子和神经干细胞的关系,神经干细胞的分化诱导及共临床方面的应用前景作了阐述。     

Mesenchymal stem cells expressing neural antigens instruct a neurogenic cell fate on neural stem cells

The neurogenic response to injury in the postnatal brain is limited and insufficient for restoration of function. Recent evidence suggests that transplantation of mesenchymal stem cells (MSCs) into the injured brain is associated with improved functional recovery, mediated in part through amplification in the endogenous neurogenic response to injury. In the current study we investigate the interactions between bone marrow-derived MSCs and embryonic neural stem cells (NSCs) plus their differentiated progeny using an in vitro co-culture system. Two populations of MSCs were used, MSCs induced to express neural antigens (nestin+, Tuj-1+, GFAP+) and neural antigen negative MSCs. Following co-culture of induced MSCs with differentiating NSC/progenitor cells a significant increase in Tuj-1+ neurons was detected compared to co-cultures of non-induced MSCs in which an increase in astrocyte (GFAP+) differentiation was observed. The effect was mediated by soluble interactions between the two cell populations and was independent of any effect on cell death and proliferation. Induced and non-induced MSCs also promoted the survival of Tuj-1+ cell progeny in long-term cultures and both promoted axonal growth, an effect also seen in differentiating neuroblastoma cells. Therefore, MSCs provide instructive signals that are able to direct the differentiation of NSCs and promote axonal development in neuronal progeny. The data indicates that the nature of MSC derived signals is dependent not only on their microenvironment but on the developmental status of the MSCs. Pre-manipulation of MSCs prior to transplantation in vivo may be an effective means of enhancing the endogenous neurogenic response to injury.     

神经干细胞工程化的研究进展

神经干细胞具有自我更新能力和多分化潜能，随着神经干细胞分离培养技术日渐成熟和深入，许多研究者对神经干细胞进行人工改造，产生了工程化的神经干细胞，如可示踪的神经干细胞、有治疗基因的神经干细胞、把神经干细胞改造成永生化的神经干细胞。文章对神经干细胞的基本特性及近年来神经干细胞工程化的研究进展做一综述     

小鼠胚胎干细胞体外向神经干细胞的分化研究

目的观察无血清培养法诱导小鼠胚胎干细胞(Embryome stem cell,ESCs)ESCs体外分化为神经干细胞(Neural stem cell,NSCs)的诱导效率.方法采用无血清培养法诱导小鼠ESCs体外分化为NSCs,对诱导不同时间点的细胞行免疫荧光,RT-PCR检测nestin的表达.结果诱导48 h开始出现nestinmRNA的表达,诱导72 h出现nestin蛋白表达.诱导120 h nestin的表达达高峰,阳性细胞率为(70.3±8.02)%.Nestin阳性细胞呈球形生长,可不断增殖.结论本诱导方法可获得较高纯度的NSCs,所获得的神经干细胞与脑内来源的NSCs有相似的生物学特性.