大鼠肾移植急性排斥反应调节性T细胞及其基因表达的机制研究

目的观察肾移植大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞及其表面标志物Foxp3、ABCC4、e IF6基因表达,结合白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-γ(INF-γ)水平及肝、肾功能变化进行相关分析,探讨其在移植免疫排斥机制中的作用及意义。方法监测急排组与非急排组大鼠肝、肾功能;ELISA方法检测血浆中IL-2和INF-γ的表达水平;流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+CD25+Treg细胞亚群;荧光PCR检测CD4+CD25+Treg细胞Foxp3、ABCC4及e IF6 m RNA表达。结果与术前相比,急排组术后第7天血清肌酐、尿素氮均明显升高(P<0.05);急排组术后第7天IL-2及IFN-γ均升高,差异有统计学意义(P<0.05);急排组术后CD3+、CD4+、CD8+水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与非急排组相比,急排组术后CD4+CD25+Treg细胞表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与非急排组相比,急排组术后Foxp3+基因表达量明显降低,ABCC4、e IF6基因表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞在肾移植排斥反应中起到重要作用,CD4+CD25+Treg细胞Foxp3、ABCC4及e IF6 m RNA参与急性排斥反应的发生,检测其变化可辅助诊断急性排斥反应的发生。     

单剂量巴利昔单抗对肾移植受者外周血Foxp3mRNA、CD4+CD25+调节性T细胞、白细胞介素2及其受体的影响

目的观察单剂量巴利昔单抗对肾移植受者外周血Foxp3mRNA、CD4+CD25+调节性T细胞、白细胞介素2及可溶性白细胞介素2受体的影响,分析其预防移植肾急性排斥反应的作用途径.方法选择2005-10,2006-12在上海解放军第四五五医院行同种异体肾移植的患者66例,移植前均行维持性血液透析治疗.按随机数字表法分为2组,常规组接受常规免疫抑制剂治疗,巴利昔单抗组在常规免疫抑制剂治疗的基础上加用巴利昔单抗(商品名舒莱,诺华制药公司,批号S20040059,20 mg/瓶),每组33例.另外选择年龄性别相配的健康体检者30例作为对照组.以上所有观察对象均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.两组肾移植患者分别于移植前(手术当天)和移植后1,2,4,8周清晨采静脉血肝素抗凝,以流式细胞仪检测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量,应用荧光定量PCR检测Foxp3mRNA的表达,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血浆中自细胞介素2及其受体,采用生化仪检测血肌酐及尿素氮水平,必要时行移植肾多普勒超声检查和病理活检,观察其急性排斥反应发生情况.结果66患者全部进入结果分析,无脱落.①常规组患者急性排斥反应的发生率21.12%(7/33)显著高于巴利昔单抗组6.1%(2/33)(p＜0.05).②移植后第1,2,4和8周巴利昔单抗组Foxp3、CD4+CD25+调节性T细胞和白细胞介素2水平均高于常规组(P＜0.05～0.01),可溶性白细胞介素2受体水平均低于常规组[(306.31±98.43,327.60±109.74,316.71±104.54,388.33±13242;410.14+112.04,442.82±118.94,450.80±123.63,445.61±115.24)U/mL(p＜0.05～0.01)].③两组肾移植患者无论移植前还是移植后,其血浆CD4+CD25+调节性T细胞百分率与Foxp3mRNA表达水平均呈明显正相关(r=0.892～0.932,P＜0.01).结论单剂量巴利昔单抗可以有效地减少移植肾急性排斥反应的发生率,作用途径可能与其增加外周血中Foxp3mRNA、CD4+CD25+调节性T细胞和白细胞介素2表达,减少血浆可溶性白细胞介素2受体水平有关.     

肾移植患者急性排斥反应中T淋巴细胞亚群的作用研究

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群变化在同种异体肾移植术后急性排斥反应中的意义。方法选取2009年至2010年在我院行肾移植的患者27例,术后按照是否发生急性排斥反应分为急性排斥反应组(n=11)和稳定组(n=16),分别于移植术前1 d及术后第7天收集患者外周血,采用流式细胞术分选CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD3~+CD4~+及CD3~+CD8~+T细胞等,同时观察两组肾功指标及肾组织病理改变。结果与术前相比,急性排斥反应组及稳定组CD3~+CD4~+T淋巴细胞明显升高(P<0.05),而在急性排斥反应组和稳定组间无统计学差异(P>0.05)。结论监测患者外周血T淋巴细胞亚群的变化,对早期判别急性排斥反应及个体化免疫抑制剂治疗具有一定指导意义。     

原因不明复发性流产病理妊娠患者外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA的表达

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)病理妊娠患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达。方法采用流式细胞术测外周血CD4+CD25+Treg,半定量、实时荧光定量PCR分析外周血单个核细胞Foxp3转录水平;检测70例原因不明复发性流产史妇女(URSA未孕组)、20例病理妊娠妇女(URSA病理妊娠组)、22例正常妊娠妇女组(正常妊娠组)、20例正常非孕妇女组(对照组)外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA的表达情况。采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-10(IL-10)水平。结果 URSA未孕组外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10比例明显低于正常非孕妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.61、4.18、2.71,P均<0.05);URSA病理妊娠组外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10低于正常妊娠妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.79、12.56、4.42,P均<0.05)。结论外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA和IL-10表达水平降低可能与URSA病理妊娠患者的发病有关。     

外周血CD4+CD25high调节性T细胞比例变化在肾移植受者移植后免疫监测中的应用术

背景:相关实验表明调节性T细胞在移植物免疫耐受中起重要作用.目的:观察外周血CD4+CD25high调节性T细胞比例变化与肾移植受者移植后免疫变化的相关性.设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2007-09/2008-07在广东省第二人民医院器官移植中心及其实验室完成.参试者:52例病情稳定的维持性血液透析患者行同种异体肾移植治疗.方法:肾移植后患者均服用三联免疫抑制剂.所有患者移植后发生急性移植肾排斥反应以及感染均按照相应指南诊断及治疗.分别于移植前和移植后1,2,4,8,12周以及发生排斥反应和感染时抽血检测外周血CD4+CD25high调节性T细胞.按其免疫力恢复情况分为正常组26例,排斥反应组17例,感染组9例.主要观察指标:用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例,所得结果进行相关分析.结果:与正常组比较:排斥反应组CD4+CD25highFoxP3/CD4+的比值降低(P<0.05),而感染组显著增高(P<0.01).与感染组比较:排斥反应组CD4+CD25highFoxP3/CD4+的比值显著降低(P<0.01).结论:肾移植后受者外周血CD4+CD25high调节性T细胞比例与受者免疫状态密切相关.CD4+CD25high调节性T细胞比例的变化可以反应机体的免疫状态的变化,其升高或降低可以作为预测肾移植受者移植后发生感染或排斥反应的指标之一.     

桥本甲状腺炎患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞及IL-10的检测及临床意义

目的评价检测桥本甲状腺炎(HT)患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及白细胞介素-10(IL-10)的临床意义。方法选择30例临床确诊初次发病HT患者作为观察组,另选择30例同时期年龄、性别匹配的健康体检者作为对照组,均抽取空腹静脉血,采用流式细胞术测定外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比以及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比,采用酶联免疫吸附实验检测IL-10水平。结果两组的外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比差异无统计学意义(P0.05);观察组的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比均明显低于对照组(P0.05);观察组的IL-10水平显著低于对照组(P0.05)。结论桥本甲状腺炎患者的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例、IL-10水平低于健康人群;推测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg、IL-10可能参与了桥本甲状腺炎的发病。     

风湿性心脏病患者外周血调节性T细胞与IL-10、TGF-β1的关系及意义

目的探讨风湿性心脏病(RHD)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞变化及与IL-10、TGF-β1血清浓度变化之间的关系。方法选取24例RHD患者作为实验组,24例年龄相当的健康人作为对照组。清晨空腹采集经肝素抗凝的外周静脉血标本,流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例,用ELISA方法检测血清中IL-10、TGF-β1的浓度,分析研究Treg细胞、IL-10、TGF-β1血清浓度变化与临床意义。结果流式细胞术检测显示RHD患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的比例为(1.454±0.606)%,低于对照组的(2.858±0.318)%(P<0.01);RHD患者血清中IL-10、TGF-β1的浓度低于正常对照组(P<0.01)。CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞与IL-10、TGF-β1的变化呈明显正相关。结论外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量变化及血清IL-10、TGF-β1的浓度变化参与了RHD患者免疫异常的病理过程,检测外周血IL-10、TGF-β1浓度变化与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的变化对RHD诊治具有重要意义。     

单剂量巴利昔单抗对肾移植受者外周血Foxp3mRNA、CD4^＋ CD25^＋ 调节性T细胞、白细胞介素2及其受体的影响

目的:观察单剂量巴利昔单抗对肾移植受者外周血Foxp3mRNA、CD4 CD25 调节性T细胞、白细胞介素2及可溶性白细胞介素2受体的影响,分析其预防移植肾急性排斥反应的作用途径。方法:选择2005-10/2006-12在上海解放军第四五五医院行同种异体肾移植的患者66例,移植前均行维持性血液透析治疗。按随机数字表法分为2组,常规组接受常规免疫抑制剂治疗,巴利昔单抗组在常规免疫抑制剂治疗的基础上加用巴利昔单抗(商品名:舒莱,诺华制药公司,批号:S20040059,20mg/瓶),每组33例。另外选择年龄性别相配的健康体检者30例作为对照组。以上所有观察对象均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准。两组肾移植患者分别于移植前(手术当天)和移植后1,2,4,8周清晨采静脉血肝素抗凝,以流式细胞仪检测外周血中CD4 CD25 调节性T细胞含量,应用荧光定量PCR检测Foxp3mRNA的表达,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血浆中白细胞介素2及其受体,采用生化仪检测血肌酐及尿素氮水平,必要时行移植肾多普勒超声检查和病理活检,观察其急性排斥反应发生情况。结果:66患者全部进入结果分析,无脱落。①常规组患者急性排斥反应的发生率21.2%(7/33)显著高于巴利昔单抗组6.1%(2/33)(P<0.05)。②移植后第1,2,4和8周巴利昔单抗组Foxp3、CD4 CD25 调节性T细胞和白细胞介素2水平均高于常规组(P<0.05～0.01),可溶性白细胞介素2受体水平均低于常规组[(306.31±98.43,327.60±109.74,316.71±104.54,388.33±132.42;410.14±112.04,442.82±118.94,450.80±123.63,445.61±115.24)U/mL(P<0.05～0.01)]。③两组肾移植患者无论移植前还是移植后,其血浆CD4 CD25 调节性T细胞百分率与Foxp3mRNA表达水平均呈明显正相关(r=0.892～0.932,P<0.01)。结论:单剂量巴利昔单抗可以有效地减少移植肾急性排斥反应的发生率,作用途径可能与其增加外周血中Foxp3mRNA、CD4 CD25 调节性T细胞和白细胞介素2表达,减少血浆可溶性白细胞介素2受体水平有关。     

甲状腺乳头状癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞及T-钙粘蛋白的检测及临床意义

目的研究CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)与T-钙黏蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)外周血中的水平及临床意义。方法采用回顾性研究方法,选取PTC患者40例(观察组)以及甲状腺腺瘤患者40例(对照组)。对比两组患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平;对比不同病理特征下CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平有无差异。结果 PTC组患者CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平均明显高于对照组(P0.05),TNMⅢ、Ⅳ期与存在颈部淋巴结转移的PTC患者CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞与T-钙黏蛋白水平均明显升高(P0.05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞与T-钙黏蛋白可以作为PTC的标志物,同时与患者临床分期以及淋巴结转移有密切的相关性。     

肾移植急性排斥反应时B7-2/CD28信号通路的表达

背景:以往动物研究表明,在器官移植急性排斥反应时共刺激分子的表达与急性排斥反应密切相关.目的:观察急性排斥反应时患者移植肾脏组织和外周血中B7-2/CD28信号通路的表达.方法:对53例同种异体肾移植患者于移植前1 d、移植后1,3,7,14,21,28 d分别取外周血以及在临床诊断急性排斥反应当天和抗排斥治疗1周后额外采血,用流式细胞仪检测共刺激分子B7-2/CD28在外周血淋巴细胞中的表达;同时,行经皮肾穿刺活检供肾修整结束时、移植后7 d、1个月、6个月、1年或以上获取活检肾脏组织,用免疫组织化学方法检测活检组织中B7-2/CD28的表达情况.结果与结论:移植后1,3 d内所有患者外周血中CD28+,CD4+/CD28+,CD8+/CD28+细胞比率均有显著下降(P < 0.05),一二周后恢复到术前水平;移植后7 d未发生急性排斥反应的患者肾脏组织B7-2阳性表达率显著上升(P < 0.05),1个月后下降至移植前水平(P > 0.05).移植后发生急性排斥反应的患者外周血CD28+,CD4+/CD28+,CD8+/CD28+细胞比率及肾脏组织B7-2阳性表达率明显上升(P < 0.05),经抗排斥治疗1周后均好转.结果证实,在肾移植后出现急性排斥反应时,肾脏组织以及外周血中共刺激分子B7-2/CD28的表达上调与急性排斥反应的发生密切相关.     

Rejection-associated upregulation of the alpha/beta-T cell receptor expression on T cells of renal allograft recipients

Peripheral T lymphocytes of renal allograft recipients were phenotyped for their expression of the CD3-T cell receptor (TCR) complex. The majority of T cells from patients with stable graft function had normal CD3 but diminished TCR alpha/beta heterodimer expression, while TCR gamma/delta + T cells were increased in some cases. Acute rejection was associated with an increase in TCR alpha/beta + T cells to normal levels.     

供者凋亡细胞静脉输注在异种肝移植中所产生体液免疫机理

目的以贵州香猪为供者、中国猕猴为受体的异种肝移植模型,采用静脉输注异种异基因骨髓及凋亡细胞的方法预处理受体,研究凋亡细胞对异种肝脏移植免疫排斥反应的影响,探讨异种肝脏移植免疫耐受的机制。方法受者猕猴随机分为A、B、C组,A组为阴性对照组,n=6;B组为实验对照组,n=28,在接受RIC之后,再接受供者贵州香猪的异种异基因骨髓(BM)静脉输注;C组为实验组,n=36,在接受RIC之后,再接受供者贵州香猪的BM和凋亡细胞同时静脉输注。观察各组受体的生存期,检测受体术后外周血中ALT、TB含量、Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,检测受体术后第14天移植肝的病理变化和术后第14天受体脾脏CTL杀伤活性。结果C组肝移植术后经历短暂排斥反应,最终可获免疫耐受并长期存活,其外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞表达比例在术后第14天渐恢复正常,受体外周血中CD3+CD4+T细胞上GITR表达降低,CD3+CD8+T细胞上GITR表达增加,提高CTL的杀伤活性;B组受体在术后第17~2 1天死亡,与A、C组相比,外周血血清中ALT、TB含量明显升高,而Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞比例明显降低。结论供者凋亡细胞静脉输注在异种肝移植中所产生体液免疫耐受的机理,可能是通过诱导受体外周血中CD3+CD4+T细胞上GITR表达降低,CD3+CD8+T细胞上GITR表达增加,提高CTL的杀伤活性来实现的。     

Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植排斥反应中的作用

背景:有实验表明CXCR3拮抗剂Genistein可减轻胰腺移植大鼠的急性排斥反应。目的:观察Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植抗排斥反应中的作用。方法:以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立胰腺移植模型,随机分成5组:对照组(未进行药物治疗)、大剂量他克莫司组、小剂量他克莫司组、Genistein组、Genistein+小剂量他克莫司组。术后第7天行病理学,肝肾功能,血清中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、干扰素γ、白细胞介素2浓度检测。结果与结论:与对照组、小剂量他克莫司组、Genistein组比较,Genistein+小剂量他克莫司组移植胰腺组织损伤减轻,淋巴细胞浸润减少,急性排斥反应减轻,血清CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞明显减少,干扰素γ、白细胞介素2水平降低(P<0.05);并且避免了大剂量他克莫司对肝肾功能的损害。说明Genistein联合小剂量他克莫司能有效减轻胰腺移植急性排斥反应而不增加肝肾毒性。     

外周血调节性T细胞检测在再生障碍性贫血诊断中的价值

目的分析外周血调节性T细胞检测在再生障碍性贫血(再障)诊断中的价值。方法选择2018年4月至2020年3月于我院就诊的31再障患儿为研究对象,根据再障类型将其分成非重型再障组(21例)和重型再障组(10例);另选20例健康儿童为对照组。比较三组的外周血调节性T细胞水平、Foxp3 mRNA表达水平及TGF-β1水平,并分析再障患儿CD4+CD25+CD127low占CD4+T细胞百分比同Foxp3 mRNA、TGF-β1的相关性。结果非重型障组、重型再障组的CD4+CD25+占CD4+T细胞百分比、CD4+T细胞水平及CD4+CD25+CD127low占CD4+T细胞百分比均低于对照组,且重型再障组的低于非重型再障组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组、非重型再障组的Foxp3 mRNA表达水平高于重型再障组,差异具有统计学意义(P<0.05)。非重型再障组、重型再障组的TGF-β1水平均低于对照组,且重型再障组的低于非重型再障组,差异具有统计学意义(P<0.05)。重型再障患儿的CD4+CD25+CD127low占CD4+T细胞百分比同Foxp3 mRNA呈正相关(P<0.05)。结论外周血调节性T细胞和Foxp3 mRNA水平下降同再障发生存在一定的关系,可为再障的病情变化提供理论依据。     

探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞在HCV早期感染的作用

目的研究HCV抗原阳性抗体阴性的早期感染者体内的CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞水平及其与疾病进展相关性,观察CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞在HCV早期感染的作用。方法20例HCV抗原阳性抗体阴性的早期感染的病例,22例抗原阴性与抗体阳性HCV感染病例及25例抗原阳性与抗体阳性慢性HCV感染病例和21例健康人作对照组。应用流式细胞技术检测比较各组外周血中的有核细胞中的CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞;并同时检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST),分析与其的相关性。结果HCV感染病例的外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞表达率(百分率)较健康对照组高(t值分别为2.231,3.764;P均<0.05);抗原阳性抗体阴性组与抗原阳性抗体阳性组比较差异有统计学意义(t=2.180,P=0.035);抗原阴性抗体阳性组与健康对照组比较差异无统计学意义(t=0.437,P=0.665);抗原阳性抗体阴性组CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞表达率与肝脏炎症指标的ALT和AST有相关性(rALT=0.571,rAST=0.521,P<0.05)。结论CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞水平及其与疾病进展有重要相关性,可能是早期感染HCV并加速其慢性化的其中重要影响因素之一。     

溶解性CD30水平检测在肾移植中的应用

背景:体外实验数据表明了在同种异体移植免疫反应中存在CD30阳性的T细胞.目的:通过对肾移植手术前后患者血清溶解性CD30分子的检测,结合临床排斥反应的发生情况,分析其对于评估受者术后免疫状态、监测急性排斥反应发生以及预后判断中的价值.设计、时间及地点:临床病例分析,于2004-04/2007-03在江苏省人民医院完成.对象:肾移植患者153例,男103例,女50例,平均年龄37岁.方法:分别采集移植前 (未使用免疫抑制剂)和移植后第0,1,3,5,7,14,21,28天移植受者外周血3 mL,分离血清-20 °C保存,使用由BenderMedSystems提供的溶解性CD30 细胞因子ELISA 检测试剂盒,检测各样本溶解性CD30水平.主要观察指标:移植前后溶解性CD30与排斥反应的相关性.结果:对17例发生急性排斥患者与136例未发生排斥患者的术前溶解性CD30水平进行比较,排斥组平均113.2 U/mL,未排斥组83.2 U/mL,两组间差异有显著性意义(P < 0.01);术后5 d内两组间无明显差异(P > 0.05);而从术后5 d开始,排斥组与未排斥组具有明显差异(P < 0.01).急性排斥反应发生和排斥缓解的时间与溶解性CD30水平之间无相关性(P > 0.05).ROC曲线分析结果表明,术后5 d溶解性CD30水平可以很好的诊断急性排斥反应,曲线下面积为0.850,理想的临界值为100 U/mL,其特异性为85.0%,敏感性为83.6%.预后结果显示,术前溶解性CD30阳性患者移植肾存活率明显低于阴性患者(P < 0.01).结论:肾移植患者溶解性CD30水平对于预测急性排斥反应及对预后的判断均有一定的价值.     

中国HIV早期感染者CD+4CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞变化研究

目的 研究1年以内感染HIV的感染者(早期感染者,EHI)体内CD+4 CD+25 Foxp3+调节性T淋巴细胞水平及其与疾病进展相关性.方法 随机选取51例HIV感染者,依据感染时间及CD+4 T淋巴细胞水平分为3组:EHI组30例、HIV组15例、AIDS组6例,20名健康人作为对照组,各组对象的年龄、性别具有可比性.用EDTA抗凝管采集全血,应用FACSAria流式细胞仪及Foxp3染色试剂盒,检测外周血单个核细胞CD+4CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞表达水平,分析EHI者及全部HIV感染者CD+4 CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞表达水平与CD+4T淋巴细胞数量、病毒调定点、病毒载量及淋巴细胞活化水平间的相关性.结果 健康对照组、EHI组、HIV组及AIDS组CD+4C+25Foxp3+T淋巴细胞百分率逐级上升,其中EHI组CD+4CD+25Foxp3+T淋巴细胞百分率[3.79(2.11～5.43)%]低于AIDS组[8.09(4.90～8.90)%],差异有统计学意义(Z=-2.29,P=0.022);EHI组CD+4 CD+25Foxp3+T淋巴细胞百分率与病毒调定点正相关(r=0.479,P=0.038),与CD4T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.455,P=0.011),与CD+3 HLA+T淋巴细胞呈正相关(r=0.533,P=0.002).结论 中国EHI者CD+4 CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞百分率高与高病毒调定点及低CD+4 T淋巴细胞数量相关,提示CD+4 CD+25Fox3+调节性T淋巴细胞是加速HIV感染早期疾病进展的因素之一.     

胃癌CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞数量和分布及Foxp3基因表达与肿瘤分期的相关性

目的 研究胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3的表达变化与胃癌临床国际肿瘤淋巴转移分类(TNM)分期的关系.方法 用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析20名健康对照者及47例胃癌患者(临床TNM分期Ⅰ期11例、Ⅱ期18例、Ⅲ期10例、Ⅳ期8例)外周血、腹腔积液、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25highFoxp3+Treg的数量及分布情况.实时荧光定量PCR技术检测Treg Foxp3 mRNA表达水平.结果 胃癌患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比为(8.03±3.47)%,高于正常健康对照组(5.83±2.93)%,差异具有统计学意义(P＜0.05).胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润淋巴细胞、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01).胃癌组织局部TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度显著高于外周血和腹腔积液(P＜0.05).Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者Treg比例分别为(5.72±1.95)%、(6.45±2.23)%、(9.58±3.13)%、(11.70±2.30)%,这提示Treg与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.784,P＜0.01).胃癌患者外周血单个核细胞Foxp3基因mRNA表达水平明显高于健康对照组(P＜0.01).Foxp3基因表达水平与胃癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.623,P＜0.05).结论 胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关.胃癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3的表达强度均有所不同,提示肿瘤局部免疫抑制功能增强,这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25highFoxp3+Treg将来可作为胃癌患者病情进展的重要判断指标之一.     

Recruitment of Foxp3+ T regulatory cells mediating allograft tolerance depends on the CCR4 chemokine receptor

Although certain chemokines and their receptors guide homeostatic recirculation of T cells and others promote recruitment of activated T cells to inflammatory sites, little is known of the mechanisms underlying a third function, migration of Foxp3(+) regulatory T (T reg) cells to sites where they maintain unresponsiveness. We studied how T reg cells are recruited to cardiac allografts in recipients tolerized with CD154 monoclonal antibody (mAb) plus donor-specific transfusion (DST). Real-time polymerase chain reaction showed that intragraft Foxp3 levels in tolerized recipients were approximately 100-fold higher than rejecting allografts or allografts associated with other therapies inducing prolonged survival but not tolerance. Foxp3(+) cells were essential for tolerance because pretransplant thymectomy or peritransplant depletion of CD25(+) cells prevented long-term survival, as did CD25 mAb therapy in well-functioning allografts after CD154/DST therapy. Analysis of multiple chemokine pathways showed that tolerance was accompanied by intragraft up-regulation of CCR4 and one of its ligands, macrophage-derived chemokine (CCL22), and that tolerance induction could not be achieved in CCR4(-/-) recipients. We conclude that Foxp3 expression is specifically up-regulated within allografts of mice displaying donor-specific tolerance, that recruitment of Foxp3-expressing T reg cells to an allograft tissue is dependent on the chemokine receptor, CCR4, and that, in the absence of such recruitment, tolerizing strategies such as CD154 mAb therapy are ineffectual.