肿瘤相关成纤维细胞通过分泌SDF-1α促进舌鳞癌细胞迁移及侵袭

目的：检测舌鳞癌组织中肿瘤相关成纤维细胞在舌癌迁移及侵袭过程中的作用。方法：体外原代培养舌鳞癌组织肿瘤相关成纤维细胞,收集其培养上清作用于舌鳞癌细胞系Tca8113,检测肿瘤细胞迁移及侵袭。利用实时定量PCR检测其的SDF—1αmRNA表达水平。利用SDF-1α受体CXCR4特异性阻断剂探SDF-1α在此过程的作用。结果：肿瘤相关成纤维细胞可明显促进Tca8113的迁移及侵袭。同时,利用实时定量PCR检测发现肿瘤相关成纤维细胞较正常人皮肤来源成纤维细胞SDF-1α表达水平明显升高。AMD3100,SDF-1α受体CXCR4特异性阻断剂,可显著抑制肿瘤相关成纤维细胞条件培养基对Tca8113迁移能力的促进作用。结论：舌鳞癌组织中的肿瘤成纤维细胞可通过分泌SDF-1α促进舌鳞癌细胞的迁移及侵袭,可能在肿瘤发展过程发挥重要作用。     

癌相关成纤维细胞对人舌鳞状细胞癌上皮-间质转化的影响

目的:探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)对舌鳞癌细胞侵袭、转移的作用及可能机制。方法:应用胶原酶消化法原代分离舌癌相关成纤维细胞及对应正常成纤维细胞(NFs),采用Western免疫印迹、ELISA、激光共聚焦和实时定量PCR分别检测vimentin、cytokeratin、α-SAM和SDF1蛋白质及mRNA水平表达差异。以舌鳞状细胞癌SCC9为研究对象,建立共培养体系,采用Western免疫印迹、激光共聚焦和实时定量PCR检测SCC9中上皮-间质转化标志蛋白E-cadherin、vimentin和fibronectin及其mRNA水平的变化,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:胶原酶消化法成功获取CAFs及对应NFs,CAFS和NFs均表达vimentin,不表达cytokeratin。其中,CAFs高表达α-SAM并分泌SDF1(P<0.01)。与SCC9共培养2周后,SCC9呈梭形改变,E-cadherin表达降低,vimentin和fibronectin升高(P<0.01),同时其迁移能力增强。结论:胶原酶消化法能成功获取原代CAFs。CAFs可通过诱导SCC9上皮-间质转化进而促进其侵袭、转移。     

Twist1调控上皮-间质转化促进舌鳞癌细胞顺铂耐药机制的研究

目的: 探讨Twist1调控上皮-间质转化（EMT）促进舌鳞状细胞癌细胞顺铂耐药的机制。方法: 在CAL27/CDDP中转染Twist1 siRNA,免疫印迹及免疫荧光检测E-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹检测Twist1、Slug的表达;Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭、迁移能力;MTT检测细胞对顺铂的半抑制率。采用SPSS17.0 软件包对结果进行单因素方差分析。结果: 转染Twist1 siRNA可逆转CAL27/CDDP的EMT表型, E-cadherin表达增强,Vimentin、Twist1及Slug表达降低,细胞的侵袭、迁移能力明显降低,IC₅₀下降41.75%±5.10%（P<0.01）。结论: Twist1可通过调控上皮-间质转化而促进舌鳞癌细胞的顺铂耐药。     

肿瘤相关成纤维细胞对口腔鳞癌细胞生长和迁移的影响

目的：研究肿瘤相关成纤维细胞（ cancer associated fibroblasts, CAFs）对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响,初步探讨CAFs在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法采用原代培养的方法,培养口腔鳞癌相关成纤维细胞,光学显微镜观察其形态,免疫组化和免疫印迹实验进行鉴定,CCK-8法检测细胞的增殖能力。 transwell迁移实验检测CAFs诱导口腔鳞癌细胞迁移的能力;萤火虫荧光素酶报告系统检测CAFs对肿瘤细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验评价 CAFs对肿瘤细胞克隆形成能力的影响。结果成功分离培养出口腔鳞癌来源的 CAFs。CAFs能促进口腔鳞细胞的迁移、增殖和克隆形成等生物学行为。结论 CAFs能显著影响口腔鳞癌的增殖和迁移,表明其在口腔鳞癌的发生发展中发挥着一定的作用。     

转化生长因子β1诱导人舌鳞状细胞癌细胞上皮-间质转化及其顺铂耐药性研究

目的 利用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞CAL27、顺铂耐药细胞CAL27-res发生上皮-间质转化(EMT),建立TSCC细胞发生EMT的实验研究模型.研究EMT对TSCC细胞顺铂耐药性及细胞增殖、凋亡的影响.方法 10 ng/ml的TGF-β1处理CAL27、CAL27-res细胞8 d,观察细胞形态学变化,Western blot 和细胞免疫荧光验证EMT相关上皮标记蛋白及间质标记蛋白表达的变化,划痕试验检测细胞迁移能力的变化,MTT法检测细胞半抑制率(It50),免疫荧光检测MDR、MRP、Topo Ⅱβ的表达,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡.结果 TGF-β1 可诱导CAL27、CAL27-res向间质细胞形态转化,并且下调上皮相关标记蛋白E-cadherin的表达,上调间质相关标记蛋白Vimentin的表达,细胞的迁移能力明显增强.IE50分别提高2.31倍(CAL27)和1.72倍(CAL27-res),MDR和MRP表达升高,Topo Ⅱβ表达降低.细胞增殖指数(PI)均明显降低(CAL27:χ2=16.799,P<0.001;CAL27-res:χ2=25.375,P<0.001),细胞凋亡指数(AI)均明显升高(CAL27:χ2=165.0797,P<0.001;CAL27-res:χ2=196.5640,P<0.001).结论 TGF-β1能够成功诱导CAL27、CAL27-res发生EMT并且明显增强细胞对顺铂的耐药性,同时抑制细胞增殖,促进凋亡.     

顺铂诱导舌鳞癌细胞发生上皮-间充质转化及获得肿瘤干细胞样特性的实验研究

目的: 建立舌鳞癌顺铂耐药株,观察其是否具有肿瘤干细胞样特性以及是否发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法: 使用顺铂梯度浓度递增法构建舌鳞癌顺铂耐药细胞株,通过MTS、流式细胞术和球囊培养对比舌癌顺铂耐药株和其亲本细胞株化疗耐药性及肿瘤干细胞特性的变化,通过qRT-PCR和Western 免疫印迹检测肿瘤干性因子SOX2、OCT4、BMI1和ABCG2的表达,以及舌癌顺铂耐药株和其亲本细胞株中EMT的指标E-cadherin和Vimentin的表达水平,通过Transwell侵袭迁移实验研究侵袭和迁移能力的变化。采用SPSS 17.0 软件包对数据进行统计学处理。结果: 成功构建了2株舌鳞癌顺铂耐药株CAL27-res和SCC9-res,2株细胞对顺铂具有更强的耐药性。与亲本的舌癌细胞CAL27和SCC9相比,CAL27-res和SCC9-res细胞呈现间充质表型, E-cadherin显著下调(P<0.001),Vimentin和N-cadherin显著上调(P<0.001),侵袭、迁移能力显著增强(P<0.001)。同时,CAL27-res和SCC9-res细胞球囊形成能力增强,肿瘤干性因子SOX2、OCT4、BMI1和ABCG2上调(P<0.001),CD44⁺/CD24^-细胞的比例增高(P<0.001)。结论: 顺铂诱导的舌鳞癌耐药细胞发生EMT且获得了肿瘤干细胞样特性。     

microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究

目的探讨微小RNA(miR)-639对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞上皮-间质转化(EMT)的调控作用。方法应用TGF-β1刺激上皮型SCC9、CAL27细胞,诱导形成相对应的间质型细胞SCC9 TGF-β1、CAL27 TGF-β1。通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot检测EMT的标记物,通过芯片检测得到一组差异性表达的miRNA,通过实时荧光定量PCR验证芯片检测结果。选取发生EMT的TSCC细胞中低表达的miR-639为研究对象,通过脂质体介导分别将miR-639的反义核苷酸(miR-639 ASO)和miR-639的拟似物(miR-639mimics)转染上皮型和相对应的间质型细胞,采用实时荧光定量PCR检测转染前后两株细胞中miR-639的表达变化,通过Transwell实验检测各组细胞侵袭、迁移能力差异。两组间均数的比较采用Student′s t检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果实验组miR-639的表达明显上调或下调,阴性对照组与空白对照组中miR-639的表达无明显变化。Transwell实验检测转染miR-639 ASO后上皮细胞的侵袭迁移能力显著升高(P<0.05),并且可以诱导细胞发生EMT;转染miR-639 mimics后诱导所形成的间质型TSCC细胞的侵袭迁移能力显著降低(P<0.05),同时可逆转EMT。结论miR-639 mimics对TGF-β1所诱导形成的的间质型TSCC细胞具有调控作用,转染miR-639 mimics可逆转EMT并能有效地抑制间质型细胞SCC9 TGF-β1的侵袭迁移能力。     

肿瘤微环境与上皮-间质转化的机制

上皮—间质转化是恶性肿瘤浸润和转移的重要机制,而此过程的诸多环节均受肿瘤微环境的影响。因此,研究肿瘤微环境和上皮—间质转化的机制,建立相应的阻断途径,不仅对肿瘤的临床诊断和治疗方案的选择以及预后评估具有重要的意义,而且有可能为其设计新的抗浸润和转移治疗奠定理论和实验基础。下面就上皮—间质转化和肿瘤微环境及其两者间的关系作一综述。     

低氧激活HIF-1α诱导舌鳞癌细胞上皮-间质转化

目的：探讨低氧微环境诱导人舌鳞癌细胞上皮-间质转化以及HIF-1α在该过程中的作用。方法 体外常氧（20% O₂）或低氧（1% O₂）状态下培养舌鳞癌SCC9、CAL27细胞48 h,Western免疫印迹和实时定量PCR检测上皮间质标记蛋白vimentin、fibronectin和E-cadherin的表达变化和HIF-1α的表达水平,Transwell小室检测细胞的迁移能力。通过小干扰RNA（HIF-1α-Si）转染舌鳞癌细胞,检测HIF-1α、vimentin、fibronectin与E-cadherin蛋白表达以及细胞迁移能力的变化。应用SPSS13.0软件包对数据进行独立样本t检验。结果 人舌鳞癌细胞SCC9、CAL27在低氧环境中培养48 h后,间质标志蛋白vimentin和fibronectin在蛋白和mRNA水平均显著升高,上皮标志蛋白E-cadherin表达降低,HIF-1α表达上调,细胞迁移能力显著增强。小干扰RNA（siRNA）转染舌鳞癌细胞SCC9、CAL27并于低氧下培养后,HIF-1α表达显著降低,vimentin和fibronectin表达也显著降低,E-cadherin表达升高,细胞迁移能力显著下降。结论 低氧通过上调HIF-1α表达而促进人舌鳞癌细胞发生上皮-间质转化及转移。     

口腔鳞癌癌细胞和癌相关成纤维细胞的原代培养、鉴定及其生物学特性研究

目的：对口腔鳞状细胞癌细胞（OSCCs）及癌相关成纤维细胞（CAFs）进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法：取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数培养法分离、纯化细胞,正常口腔成纤维细胞（NFs）和舌鳞癌细胞系Tca8113作为对照组。通过形态学观察、波形蛋白和角蛋白免疫组化染色对纯化的细胞进行鉴定。应用MTT法绘出OSCCs、CAFs、NFs和Tca8113细胞的生长曲线。结果：获得纯化的OSCCs和CAFs,通过对比研究阐明OS-CC和CAFs的生物学特点;OSCCs中免疫组化染色角蛋白呈阳性、波形蛋白呈阴性,CAFs中角蛋白呈阴性、波形蛋白呈阳性。结论：通过本实验研究成功获得纯化的OSCCs和CAFs,对比研究发现CAFs和NFs在形态结构、生长特点等方面不同。     

舌鳞癌抗原提呈相关基因表达的研究

目的：分析舌鳞状细胞癌组织中抗原提呈相关基因的表达。方法：选取2008年12月～2009年12月在南京市口腔医院口腔颌面外科就诊的30例原发舌癌患者的肿瘤及癌旁组织标本,采用实时定量PCR检测TAP-1和Tapasin的mRNA相对表达量,同时检测正常黏膜角化上皮细胞及舌鳞癌细胞系中TAP-1和Tapasin的表达。结果：与癌旁组织相比,肿瘤标本中TAP-1和Tapasin的表达显著下降,并且其mRNA表达水平与肿瘤的病理分级有显著相关性（P=0.001）。与正常口腔黏膜上皮细胞相比,肿瘤细胞中TAP-1和Tapasin的表达亦呈明显降低。结论：舌鳞癌中TAP-1和Tapasin的表达明显降低,可能是导致肿瘤发生免疫逃逸的机制之一。     

舌鳞状细胞癌血管生成的定量测定及其应用价值

目的 :探讨舌鳞状细胞癌血管生成密度与淋巴结转移的关系,确立淋巴结转移可能性的域值 ,并对其可靠性进一步测试。方法 :通过免疫组化染色法,应用单克隆抗体第 Ⅷ 因子相关抗原特异性使内皮细胞染色 ,在显微图像分析仪下定量测定肿瘤组织的血管生成密度。结果 :舌鳞状细胞癌新生血管生成密度明显高于正常舌体组织 ;有淋巴结转移组其血管生成密度为56.67±5.16条/mm2 ,无淋巴结转移组为35.37±4.81条/mm2 ,两组间比较差异有显著性 ;以 45条/mm2为淋巴结转移的诊断域值 ,其阳性预测率为95.45%。结论:舌鳞状细胞癌血管生成密度与淋巴结转移具有显著性相关 ,指示性强 ,淋巴结转移的诊断域值为45条/mm2,具有较高的预测价值。     

口腔鳞状细胞癌肿瘤相关成纤维细胞的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤,与其他恶性肿瘤相似,其肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中最重要的间质细胞,在肿瘤的增殖、转移、免疫耐受及治疗抵抗等方面发挥重要的调控作用。本文就OSCC中CAFs研究进展及其对临床治疗的启发,建立CAFs作为干预靶点,打破肿瘤细胞赖以生存的微环境,干扰肿瘤细胞的生长和侵袭,有效阻断肿瘤新生血管的形成,激活机体免疫功能,为OSCC辅助治疗提供新的思路和策略。     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的：探讨放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：应用免疫组化SP法检测放疗对P-糖蛋白（P-glycoprotein,P—gP）、多药耐药相关蛋白1（muhidrug resistance associate protein 1,MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π（glutathione S—tranferase π,GST-π）表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA细胞在放疗后4hP—gP,MRP1,GST-π耐药蛋白表达无明显上升,24h耐药蛋白的表达明显升高（P〈0．01）,Tca8113细胞的耐药蛋白表达在4h和24h时均有明显上升（P〈0．01）。放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降。结论：放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药。提醒我们对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点。     

3种方式处理下颌骨对舌鳞癌患者手术预后的影响

目的：探讨舌癌病人下颌骨的不同处理方法与手术远期预后的关系,为舌癌患者的手术选择提供参考。方法：随访71例接受手术治疗的舌癌患者5年,分析术后影响预后因素,评价3种不同的下颌骨处理方式与患者预后的关系。结果：下颌骨处理方式对于舌鳞癌患者生存率有直接影响,其中未处理下颌骨患者5年总体生存率56.3%,边缘性去骨截骨患者的5年总体生存率为53.6%,而节段性截骨患者的仅为51.7%。结论：舌癌的预后不完全由下颌骨的切除方式决定的,而是由其侵袭性决定的,因此对于舌癌患者要根据不同情况选择不同方式处理下颌骨,在提高患者生存率的情况下,尽量保存下颌骨的完整性。     

口腔鳞状细胞癌组织中Periostin的表达及其在上皮间质转化中的作用

目的:观察Periostin在口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况,及其在上皮间质转化(EMT)中的作用。方法:用免疫组化法检测59例口腔鳞状细胞癌组织(实验组)和15例正常口腔黏膜组织(对照组)中Periostin、E-cadherin、Vimentin表达情况,分析Periostin与E-cadherin、Vimentin间相关关系。结果:59例口腔鳞状细胞癌组织中Periostin、E-cadherin、Vimentin阳性表达率分别为71.2%、52.5%、39.0%, Periostin表达与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05);且Periostin与E-cadherin表达降低和Vimentin表达上调间均存在相关性(P＜0.01)。结论:Periostin可能通过调控上皮间质转化促进口腔鳞状细胞癌侵袭转移。     

E-cadherin和Vimentin在OSCC上皮-间质转化中的作用及表达

目的:探讨E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)上皮-间质转化中的作用及表达。方法:选取76例口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者和40例健康者作为对照组,利用RT-PCR检测OSCC和正常口腔黏膜组织中TGF-β1、E-cadherin和Vimentin表达。结果:OSCC患者组织中TGF-β1 mRNA和Vimentin mRNA相对表达量均高于对照组,而E-cadherin mRNA相对表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);TGF-β1、E-cadherin和Vimentin在OSCC组织中表达均与分化程度有关,分化程度越高,TGF-β1 mRNA和Vimentin mRNA相对表达量越高,而E-cadherin mRNA相对表达量则越低;Pearson相关分析显示,OSCC中TGF-β1 mRNA相对表达量与E-cadherin mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.322,P=0.004),而与Vimentin mRNA相对表达量呈正相关(r=0.661,P=0.000)。结论:TGF-β1和Vimentin 在OSCC组织中表达增强,而E-cadherin则表达降低,提示EMT过程在OSCC发生及进展过程中发挥重要作用。     

HMGB 1在舌鳞状上皮癌中的表达及临床意义

目的:探讨舌鳞癌中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达及其对淋巴结转移和疾病转归的关系。方法:收集51例有完整临床及随访资料的舌鳞癌石蜡标本,采用免疫组织化学染色法观察HMGB1在不同分类的口腔鳞癌组织中的表达,并分析HMGB1与肿瘤分化程度、淋巴结转移及患者预后之间的关系。结果:HMGB1在舌鳞癌组织中呈高表达,阳性率92.2%;HMGB1表达与肿瘤分化程度在统计学上无显著相关性;有淋巴结转移的高表达率为81.2% ,无淋巴结转移的高表达率为32.6%,其差异具有统计学意义(P＜0.05)。高表达HMGB1的舌鳞癌患者较低表达者转归差,其生存率较低(P＜0.05)。结论:舌鳞癌组织中HMGB1与淋巴结转移及转归密切相关; HMG1的表达在一定程度上可用作反映舌鳞癌预后的重要生物学指标。     

过表达IL-18诱导舌鳞癌细胞凋亡机制的初步研究

目的:探究白介素18(IL-18)的过表达对舌鳞癌细胞活性和凋亡的影响。方法:构建稳定转染人IL-18cDNA的舌鳞癌CRL1623细胞系,免疫荧光、qPCR和Western Blot证实IL-18的过表达;流式细胞术、吉姆萨染色和MTT法检测转染后CRL1623细胞活性的改变;qPCR检测凋亡相关基因的表达;用稳转的CRL1623细胞建立舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤模型,体内观察IL-18过表达对移植瘤生长的影响。结果:过表达的IL-18可以诱导CRL1623细胞凋亡。与对照组相比,实验组IL-18的表达量上调,caspase 3、7和9的表达量增加并被活化,IFN-γ和细胞色素C的mRNA表达量上调。与对照组裸鼠相比,实验组裸鼠移植瘤的生长受到了抑制(P<0.05)。结论:IL-18能够通过启动经典的凋亡途径诱导舌鳞癌细胞凋亡。