澳研制出快速检测禽流感的新仪器

禽流感疫情仍在不断蔓延，最让人们担心的，就是如果有一天禽流感病毒在人与人之间传播，人类该如何应对。澳大利亚科学家们最近就发明了一种检测仪，它能快速判断被检测者是否感染了禽流感病毒。     

禽流感病毒HA蛋白与人受体的分子对接

血凝素(hemagglutinin,HA)是位于禽流感病毒表面的糖蛋白。在病毒感染过程中,HA与禽类宿主细胞表面受体结合,介导病毒膜与宿主核内体膜的融合,在传染过程中发挥关键作用。自然界中的禽流感病毒处于不断演化之中,其HA的禽受体结合位点常常发生氨基酸变异。因此,当HA变异体与人受体结合能力较强时,禽流感病毒往往会发生跨种传播而感染人。为预防禽流感的跨种传播,人们迫切需要发展大规模快速检测或预测HA变异体与人受体结合亲和力的方法,以评估各种新发禽流感病毒的跨种传播能力,提前筛选出有潜在危险的病毒株。针对此问题,本研究以H7N9亚型的HA蛋白H7为研究对象,发展了一种运用分子对接的计算方法,预测HA变异体与人受体的结合亲和力。该方法的计算结果表明,H7与人受体的结合亲和力普遍弱于有较强传染人能力的H1,说明H7N9亚型病毒的跨种传播能力普遍较弱;但是,计算分析也揭示,部分新发的H7N9毒株的HA有强的人受体结合亲和力,提示在自然演化过程中,H7N9病毒有可能演化出具有较强的感染人能力的新毒株,这与2013年禽流感疫情的实际发生情况相一致。因此,本文所发展的计算方法可用于快速预测新发禽流感病毒HA与人受体的结合亲和力,为新发禽流感病毒的跨种传播风险评估提供理论依据。     

焦测序法检测禽流感病毒

以焦测序技术为检测平台,在研究禽流感病毒基因特性的基础上,建立一种检测禽流感病毒及确定其是否为高致病性禽流感病毒的序列测定法。首先,选择一段保守的M基因序列及一段包含裂解位点的HA基因序列为研究对象,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增技术初步判断其是否为禽流感病毒及病毒亚型;然后采用焦测序法检测目的片段序列;最后,对焦测序法检测序列进行分析,从基因序列上判断其是否为禽流感病毒,并进一步判断病毒的亚型以及是否为高致病性禽流感病毒。研究结果表明,当焦测序反应中三磷酸酰苷双磷酸酶(Apyrase)的浓度为1.6U/mL时,能有效抑制错误信号的产生;当Klenow的浓度为90U/mL时,可读序列长度为33个碱基。采用优化的焦测序反应体系测定了4个样本,其中1个样本被判断为H5N1亚型禽流感病毒,具有潜在的高致病性;另外3个样本为H9N2型禽流感病毒,具有低致病性。本方法具有准确、快速和实时检测等优点。     

珠海检验检疫局成功研发H7N9亚型禽流感病毒双重荧光RT-PCR检测试剂盒

不久前,珠海检验检疫局成功研发了H7N9亚型禽流感病毒双重荧光RT-PCR 检测试剂盒,并应用于活禽的H7N9禽流感病毒检测和监控,取得了良好的防控效果。该H7N9禽流感诊断试剂盒可为H7N9禽流感病毒监测和疫情排查提供快速、准确的病原学检测方法,为加强供港澳活禽检验检疫,做好供港澳家禽注册养殖场H7N9禽流感防控工作提供技术支持。     

面向现场的活病毒高灵敏检测

禽流感病毒因为其高传染性,易致病性以及对人和禽类带来的危害,得到越来越多的关注.目前检测禽流感病毒方法主要有核酸检测,鸡胚病原分离等~([1]).     

禽流感病毒流式微球量子点探针免疫诊断新方法

采用微波法水相中合成羧基化的绿色量子点,通过羧基与禽流感单克隆抗体氨基的共价结合,制备了检测禽流感病毒的探针,并结合流式微球技术,建立了量子点生物探针流式微球免疫检测禽流感病毒的新方法.以聚苯乙烯微球为蛋白质载体,将多克隆抗体包被到荧光微球上,依次加入待测抗原和量子点生物探针,形成双抗体夹心复合物,用流式细胞仪进行检测.实验结果表明,多抗和单抗的最佳质量浓度分别为92和4 mg/L,检测禽流感病毒比双抗体夹心ELISA灵敏16倍,比FITC标记单抗检测方法灵敏4倍.对阳性尿囊液的检测与ELISA呈现良好的相关性,不与鸡传染性支气管炎病毒、鸡马力克氏病毒、新城疫病毒等发生交叉反应.     

美国批准禽流感快速检测新方法

美国卫生与公众服务部对媒体宣布，美国疾病防治中心及食品和药物管理局已批准一项用于诊断疑似感染者病毒种类的禽流感快速检测新方法。     

自动化磁珠提取纯化仪器快速检测禽流感

不久前,赛默飞世尔科技推出产品King Fisher系列自动化磁珠提取纯化仪器。据悉,此产品是联合Invitrogen公司Ambion病毒RNA提取试剂盒,将传统方法的禽流感检测由21天缩短至4h左右。此技术经过美国国家兽医服务实验室验证,是美国农业部认可的禽流感检测的分子生物学方法。禽流感快速高通量检测新技术是基于分子生物学的方法,在病毒感染的初期即可快速确诊病毒的存在。该方法包括两大主要步骤:(1)联合使用赛默飞世尔公司的King Fish-er自动化磁珠提取纯化仪器,及Invitrogen公司的Ambion病毒RNA提取试剂盒,进行自动化的病毒RNA提取,该步骤需时约30min;(2)实时定量RT-PCR检测病毒RNA,该步骤需时约3h。整体方法经过优化,并经过超过200000禽类咽喉拭子样品的检测验证。这项技术可以用于从生物体液和无细胞样品中(如血清、血浆、口腔拭子和细胞培养液)提取病毒RNA。从无细胞样品中分离纯化RNA比从组织和培养细胞中分离纯化RNA更具挑战性。自动化磁珠提取纯化仪器快速检测禽流感@林     

基于Tet-On 3G的IFITM3诱导表达MDCK细胞系的建立及功能分析

利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3,并将其与调控质粒pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK),转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选,用多西环素(Dox)对获得的细胞系进行诱导表达鉴定,并进行Dox敏感性分析、IFITM3~+细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶(Luciferase)报告基因的禽流感病毒H5/H7蛋白或VSV G蛋白包裹的假型慢病毒颗粒进行感染实验,检测萤光素酶活性.结果表明,筛选获得了携带人IFITM3的MDCK诱导表达细胞系,且IFITM3表达量与Dox剂量和诱导时间相关;确定Dox工作浓度为2.5μg/mL,诱导12 h时IFITM3~+细胞数达75%以上,且IFITM3在晚期内体/溶酶体存在分布;假型病毒感染及萤光素酶活性分析表明,IFITM3可显著抑制禽流感病毒H5,H7和VSV G蛋白介导的病毒进入,为深入探究其具体的抑制机制奠定了基础.     

支持向量机和线性判别分析用于禽流感病毒编码蛋白识别

以支持向量机(SVM)和线性判别分析(LDA)对200条禽流感病毒、100条B型流感和100条C型流感病毒蛋白共400条为训练集样本,从表征序列的200个整体与局部变量中以逐步(stepwise)方法选取24个变量作为LDA模型的输入建立线性识别模型,病毒蛋白总识别率达99.8%,留一法交互检验总识别率为99.4%.从原始200变量中经主成分分析得16个主成分作为SVM的输入,以径向基核函数(RBF)SVM建立非线性识别模型,病毒蛋白总识别率为99.8%,留一法交互检验总识别率为99.2%.以100条禽流感、50条B型流感和50条C型流感病毒编码蛋白质共200条为测试集样本,得LDA模型,对其总识别正确率为95.4%,SVM模型对其总识别正确率为96.5%.识别结果表明,两个模型都可较好识别禽流感病毒蛋白,并且SVM对禽流感病毒蛋白的识别结果优于LDA.     

荧光探针Ru(phen)2(dppx)2+测定H1N1禽流感病毒DNA

利用荧光探针Ru(phen)2dppx2+与ssDNA作用时不产生荧光或荧光很弱,而与dsDNA作用时荧光增强的机理,将H1N1禽流感病毒ssDNA与其完全互补ssDNA杂交形成dsDNA实现Ru(phen)2dppx2+对H1N1禽流感病毒DNA特定序列（5’-CTA CCA TGC GAA CAA TTC AAC CGA CAC TGT T-3’）的定量检测。在优化的实验条件下,测定H1N1禽流感病毒 DNA的线性范围为9.3×10-10～7.4×10-8 mol/L,线性关系：y = 3.3829x + 8.3948,R2 =0.9982,检出限为5.3×10-10 mol/L。该方法具有操作简单,检测快速,灵敏度高和选择好等优点。     

动物所等成功研制便携式禽流感病毒快速检测仪

中国科学院计划财务局组织专家,对由中国科学院动物研究所主持,电子研究所参加的院科研装备研制项目《便携式禽流感病毒快速检测仪的研制》项目进行了验收。     

免疫磁分离技术结合阻抗测量法快速检测禽流感病毒

采用免疫磁分离和阻抗测量技术联用的方法,实现了对禽流感H5亚型病毒的特异性快速检测。将偶联生物素的H5抗体固定于链霉亲和素修饰的纳米磁珠表面,制备成免疫磁珠,用于样品中禽流感H5N1病毒的分离和浓缩。使用金叉指阵列微电极测量样品阻抗,在特征频率(100 kHz)下,阻抗模值随样品中H5N1病毒浓度增加而增大。研究了抗体浓度、免疫反应时间和磁分离时间对阻抗信号的影响,结果表明,在优化的实验条件(抗体浓度0.25 g/L、免疫反应时间60 min、磁分离时间3 min)下,纯病毒样品和拭子样品中H5N1病毒浓度分别在2!1～24HA unit/50μL和20～24HA unit/50μL范围时,病毒浓度对数值与阻抗信号值呈线性相关关系,检出限分别为0.5 HA unit/50μL和2 HA unit/50μL。     

国外分析与生化分析实验室动态

1生物分析和研究用的消毒清洁剂 1．1简介和用法 从事生物分析和研究用的容器或其他工具必须防止其表面受到细菌、霉菌和病毒的污染。这也是最重要的清洁工序，忽略这点不仅影响分析和研究结果，而且可能引起工作人员受到细菌或病毒的感染。在实验室中感染非典病毒便是一例。     

“除菌离子技术”被用于空气净化器

8月27日,日本夏普公司发表的一项实验结果称,通过向密封空间喷射高浓度离子,可有效杀灭悬浮在其中的禽流感病毒。这种“除菌离子技术”目前被用于空气净化器。除菌离子技术是指向空气中放射离子,包围病毒后进行分解并清除,据称不会对人体造成影响。     

靶向流感病毒进入(细胞)抑制剂研究进展

目前临床上抗流感病毒感染的药物主要有M2离子通道抑制剂及神经氨酸酶抑制剂两大类.随着流行性感冒、季节性流感、高致病性禽流感的爆发以及耐药流感病毒株的出现,使得对具有新作用机制的抗流感药物的需求更加紧迫.近年来,随着流感病毒进入细胞分子机制研究的深入,为以"病毒进入细胞为靶"的抗流感抑制剂的研究带来了契机.本文在介绍流感病毒进入细胞分子机制的基础上,重点介绍了靶向流感病毒进入的抑制剂及其作用机制的最新研究进展.     

钒取代杂多钨酸盐抗伪狂犬病病毒的活性

合成了10种钒取代的杂多钨酸盐，采用细胞培养法，测定了各化合物对兔肾（RK）细胞的毒性及在无毒浓度下，抗伪狂犬病病毒（PRV）的活性，结果表明，部分化合物在无毒浓度下，具有较强的抗伪狂犬病病毒的活性．其中3种化合物显示出相当高的效力和选择性，半有浓度为3．5～5.0mg/L，半中毒浓度在400～420mg/L之间，化合物的浓度在25mg/L时，对伪狂犬病病毒的抑制作用达70％～80％，病毒的感染滴度TCID50下降4个对数．对其构效关系以及抗病毒机理也作了初步探讨．     

喷射式流动注射电化学发光免疫检测禽流感H9亚型

利用磁分离和生物素亲和素技术,形成亲和素化磁微球-生物素化抗体-抗原-钌标抗体的免疫夹心复合物,初步建立了体外免疫诊断试剂的制备方法,并利用喷射式流动注射电化学发光体系对制备出的禽流感病毒H9免疫复合物进行检测。实验选择最适的包被抗体,检测抗体和封闭剂,优化Ru标抗体的最佳稀释度。在生物素化的兔抗H9多抗作为亲和素化的磁微球的结合抗体,鼠抗H9单抗作为Ru(bpy)32+标记抗体,2%BSA作为封闭剂,1:50倍稀释的Ru-鼠抗H9单抗条件下,非特异性吸附最低。测定不同浓度的H9抗原,发现抗原浓度在3.125～100μg/mL范围内与电化学发光强度呈较好的线性关系。实验还测定了不同亚型的禽流感病毒、不同来源的毒株和鸡的棉拭子样品。     

莽草酸与禽流感治疗药--达菲

人禽流感是禽甲型流感病毒某些亚型中的一些毒株引起的急性呼吸道传染病。目前世界各国十分关注禽流感疫情,在许多国家和地区蔓延的禽流感疫情已对人类健康构成威胁。现介绍人禽流感的治疗药物———达菲的结构、性质以及合成,并简单介绍其药理作用。     

北京成功研发-荧光RT—PCR技术

一种通过分析活体犬猫唾液样本可在4h内检测出是否感染狂犬病病毒的荧光RT—PCR技术，由北京检验检疫局张鹤晓研究员主持研发成功。该课题已通过了国家质检总局科技司组织的专家鉴定。