禽安卡拉病毒Hexon蛋白多克隆抗体的制备

为进一步建立Ⅰ群血清4型禽腺病毒(FADV-4)的特异性检测方法,根据本实验室分离鉴定的安卡拉病毒的基因组序列,设计针对六邻体蛋白(Hexon)基因的特异性引物,经PCR扩增,连接至p ET-28a中,构建原核表达载体p ET-28a-Hexon。将其转化感受态BL21中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE分析,获得重组蛋白大小为49 ku。Western blot分析纯化后重组蛋白能与FAd V-4阳性血清发生特异性反应。将纯化后的重组蛋白免BALB/c小鼠,制备了六邻体蛋白多克隆抗体,采用间接ELISA方法测定效价表明制备的血清效价大于1∶64 000。     

雌二醇多克隆抗体的制备与鉴定

制备雌二醇完全抗原,并通过免疫家兔得到多克隆抗体,为下一步制备雌二醇单克隆抗体和雌二醇检测ELISA试剂盒奠定基础。试验以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用碳化二亚胺法,合成了雌二醇(E2)的2种免疫偶合物:免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否,并对偶合物的蛋白含量、结合比进行测定并以免疫原E2-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,用包被原E2-OVA进行ELISA,对多克隆抗体特异性及效价进行检测。结果表明成功合成了雌二醇人工抗原即免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA,二者的蛋白浓度分别为5.455和7.533mg/mL,结合比分别为7:1和8:1;制备的多克隆抗体特异性好,血清效价为1:106。     

熊蜂SMRTER蛋白多克隆抗体的制备

熊蜂是重要的传粉昆虫,在促进农业生产及维护生态系统平衡等发面发挥着重要作用。Smr基因编码的蛋白为SMRTER(SMRT-related and ecdysone receptor interacting factor),是一个转录因子。在模式生物中发现,Smr基因参与调控包括器官发育、代谢及其他多个重要的生物学过程。本研究利用基因合成技术获得熊蜂Smr基因的编码序列,并把它克隆进原核表达载体进行诱导表达,产生SMRTER重组蛋白。然后,利用纯化的SMRTER蛋白制备兔抗SMRTER多克隆抗体。进一步的检测发现,此多克隆抗体对SMRTER蛋白具有良好的特异性。该研究对于更好理解Smr基因在熊蜂中所发挥的生物学功能具有重要的意义。     

三聚氰胺抗原合成及其多克隆抗体的制备

以2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪为原料,强碱条件下与3-巯基丙酸反应,制备三聚氰胺半抗原并经质谱和红外鉴定;应用碳二亚胺法将半抗原与BSA和OVA偶联制备三聚氰胺免疫原和包被原,完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功,偶联比分别为16:1和10:1,通过免疫新西兰大白兔成功制备三聚氰胺多克隆抗体,抗体效价可达1:128000以上。本研究为三聚氰胺人工抗原的制备提供了有效途径,为三聚氰胺免疫检测方法的研发奠定了基础。     

禽胰多肽小脑膜受体多克隆抗体的制备与效价测定研究

本试验对禽胰多肽小脑膜受体多克隆抗体进制备,进而进行效价测定研究。试验表明:成功制备出禽胰多肽小脑膜受体多克隆抗体,构建的多克隆抗体效价是稳定的,效价也是较为满意的。     

一种制备大量高效价多克隆腹水的改良方法

因可用的抗原量有限而要获得大量多克隆抗血清通常是困难的，所以曾用小啮齿动物生产抗血清，但产量很少，为了解决这些问题，我们设计了一种生产多克隆腹水的改进方法，选用合适品系的小鼠和佐剂，注射１－１００μｇ蛋白后得到高效价血清，接着腹腔注射合适的瘤细胞，即可获得１３－１９ｍｌ／只高效价（１：１０００－１：２０００）的多克隆腹水，试用９种不同抗原均得到相似的结果。     

鸡plgR多克隆抗体的制备及初步鉴定

根据GenBank中鸡pIgR基因序列和蛋白序列,设计引物,利用PCR技术扩增胞外配体结合区片段,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)/pIgR,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG的诱导表达融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡pIgR多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验(ELISA法)和Western Blot法检测抗体的效价和特异性。结果显示,成功制备特异性的鸡pIgR抗体,为研究鸡pIgR的功能提供有力依据。     

磺胺类药物广谱性多克隆抗体的制备

基于磺胺类药物(Sulfonamides,SAs)公共母环(对氨基苯磺酰胺)结构,合成了两种具有该结构的半抗原∶2-(对氨基苯磺酸氨基)-4-噻唑乙酸(TS)和对氨基苯磺酰胺基苯甲酸(SS).采用碳二亚胺法合成了免疫原和包被原,分别免疫10只新西兰大白兔,制备广谱性磺胺类药物抗体.应用间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清的灵敏度和特异性,发现所有兔子对TS-BSA和SS-BSA均产生较高效价和特异性.其中SS-1号和TS-6号兔的血清灵敏度最好,效价分别为1∶80 000和1∶160 000,对10种磺胺类药物均有不同程度的识别能力.SS-BSA组IC50为257.9～6 590.9 ng/mL,而TS-BSA组IC50为12.9～586.1 ng/mL.结果表明,具有磺胺母环结构的半抗原TS和SS,可以应用于广谱性磺胺类抗体的制备.通过10只兔子免疫试验证明,应用SS获得的血清具有较高的簇特异性、相似的亲和性,优于TS.     

己烯雌酚多克隆抗体的制备和鉴定

用混合酸酐法合成的BSA-DES免疫兔子,制备抗DES的特异性抗体,分别用混合酸酐法和碳二亚胺法合成的OVA-DES作为包被原检测抗体;用混合酸酐法合成的OVA-DES和碳二亚胺法合成的OVA-DES免疫小白鼠,制备抗DES的特异性抗体,分别用混合酸酐法合成的BSA-DES和碳二亚胺法合成的BSA-DES作为包被原检测抗体。检测结果表明:三种免疫原免疫动物,都产生了DES的特异性抗体,并建立了间接阻断ELISA法。这为残留DES酶免疫检测试剂盒的制备奠定了基础。     

动物源性多克隆抗体制备方法及其应用

多克隆抗体因其制备成本低廉、制备过程简单等特点被广泛应用于日常实验室诊断及疾病的预防与治疗。文章主要从抗原的选择与表达、宿主动物的选择以及多克隆抗体的应用等方面进行综述,以期为制备多克隆抗体及相关研究提供参考。     

卵黄抗体的特性及其在仔猪腹泻防治上的应用

仔猪腹泻是困扰养猪业的一大难题,早期断奶仔猪腹泻尤其严重.过去这一问题的解决通常是依赖抗生素或高免血清,但由于安全性和价格等因素影响了它们在养猪业的应用.卵黄抗体作为一种价格低廉、安全高效的新型兽药,在防治仔猪腹泻上展现出良好的应用前景.本文介绍了IgY的形成、分子结构、特点、吸收和转运以及IgY在防治仔猪腹泻上的应用.     

猪流行性腹泻病毒及其卵黄抗体研究进展

猪流行性腹泻病毒是引起仔猪病毒性腹泻甚至死亡的关键诱因,而安全高效的抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体具有降低仔猪腹泻率、死亡率等优点已应用于生猪养殖。本文总结了近年来猪流行性腹泻病毒的致病机理及其卵黄抗体的制备与应用效果的研究进展,为卵黄抗体在防治猪流行性腹泻上的应用提供理论基础和技术指导。     

两种卵黄抗体不同提取方法的比较试验

卵黄抗体(Ig Y)具有许多其他类型抗体所没有的优点,其分离纯化的方法有有机物抽提法、盐析法、水稀释法等。试验分别用聚乙二醇(PEG)6000和氯仿来提取卵黄抗体,对其收集的抗体量和抗体效价进行比较分析。结果表明:100 g的卵黄用PEG6000法比氯仿法多收集71 m L卵黄抗体溶液,且PEG6000法的成本远远低于氯仿法,有很好的经济效益,而PEG6000法提取的卵黄抗体效价比氯仿法略低一个滴度。     

抗鸡白痢沙门氏菌病卵黄抗体粉饲料添加剂的研制

采用吉林市郊区数家鸡场分离鉴定的致病性鸡白痢沙门氏菌,经固体增菌培养纯化后甲醛灭活,制成油佐剂灭活抗原免疫健康蛋鸡;用平板凝集试验检测卵黄抗体效价,当抗体效价达到1:320倍时,收集免疫鸡蛋分离卵黄,减压低温干燥制成卵黄抗体细粉并进行效价测定和安全检测。最后将卵黄抗体细粉以不同比例加入雏鸡饲料,对试验雏鸡进行预防量饲喂后强毒菌攻毒试验、强毒菌攻毒后治疗量的饲喂试验及小区域雏鸡饲喂试验。结果表明,卵黄抗体粉预防添加量为3%和卵黄抗体治疗添加量为6%时,攻毒保护率、治愈率分别为77.50%和72.50%;饲料添加组较同期普通饲养组总发病率降低7个百分点,抗生素用量降低33%,增重率提高6%。     

泊洛沙姆对鸡卵黄脱脂作用的研究

通过对鸡法氏囊高免蛋卵黄进行泊洛沙姆脱脂研究证明:泊洛沙姆对鸡卵黄具有良好的脱脂作用,并且具有脂类自然沉降速度快、对抗体影响小、简化工艺以及本身无毒、无害的特点,适合于卵黄的综合开发利用。     

Hen egg yolk lipid fractions with antiatherogenic properties

Three different types of hen egg yolk, cage‐free, organic and daily fresh, were tested for their antiatherogenic properties. Total lipids (TL) of all hen egg yolk samples were extracted by the method of Bligh and Dyer and further separated into total polar lipids (TPL) and total neutral lipids (TNL) by counter current distribution chromatography. TPL and TNL were further separated by preparative thin‐layer chromatography (TLC). TL, TPL, TNL and the obtained polar and neutral lipid fractions after TLC separation were tested to determine whether they induce platelet activation or inhibit platelet activating factor (PAF)‐induced platelet activation. All three hen egg yolk TL samples possessed strong inhibitory activity against PAF‐induced platelet activation that was mainly attributed to TPL, especially to PL fraction 4. Cage‐free hen egg yolk exhibited the most potent anti‐PAF activity in all lipid classes (TL, TPL and TNL). Thus hen egg yolk contains PAF inhibitors that reinforce their nutritional value in terms of protection against cardiovascular diseases, since PAF is a crucial inflammatory phospholipid mediator that is implicated in the mechanism of atherogenesis.     

卵黄抗体及其在重大动物疫病防治与诊断中的应用进展

卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,IgY）又称卵黄免疫球蛋白,具有产量高、成本低、利于生产、产生有效免疫反应所需抗原量小、免疫检测时有较高的敏感性、无副作用、性质稳定等优点,近年来对其研究越来越多,认识也越来越深入。本文就卵黄抗体的产生、结构、特点及其在猪瘟、猪蓝耳病、禽流感和口蹄疫等重大动物疫病防治与诊断中的应用进展作以综述。     

用HI和ELISA方法检测SPF鸡血清和蛋黄中ND抗体的比较

分别用血凝抑制试验（HI）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测42周和48周SPF鸡血清、以及同期SPF鸡蛋蛋黄中新城疫（ND）抗体。结果表明,两种方法检测的120份血清中均无ND抗体,呈阴性;120枚SPF鸡蛋蛋黄检测,ELISA方法检测结果全为阴性;HI方法检测结果25份阳性,差异较为明显。     

Effect of chicken egg yolk immunoglobulins on serum biochemical profiles and intestinal bacterial populations in early‐weaned piglets

This study was conducted to test the hypothesis that dietary supplementation with anti‐E. coli, chicken egg yolk immunoglobulins (IgY), may affect early weaned piglet (EWP) intestinal functions and enteric micro‐organisms. One hundred and forty‐eight ([Landrace × Yorkshire] × Duroc) piglets, weaned at age day 21, were randomly assigned to receive one of three diets for 14 days. Treatment group one (control group) was fed the base diet. Treatment group two (antibiotics group) was fed the base diet which was supplemented with 100 ppm colistin sulphate and 15 ppm enramycin; treatment group three (IgY group) was fed the base diet which was supplemented with 500 mg/kg anti‐E. coli IgY. The study evaluated the effects on EWPs of IgY on growth, serum biochemical, inflammatory profiles and also digestion content intestinal bacterial populations. Results showed no significant difference in diarrhoea rates between IgY‐fed EWPs and antibiotic‐treated EWPs. Serum biochemical analysis showed that EWPs fed an IgY‐containing diet had both lower (p < 0.05) cholesterol and low‐density lipoprotein compared to antibiotic‐treated EWPs. Escherichia coli populations measured in IgY‐fed EWP ileal contents, compared to the control group, were significantly reduced (p < 0.05). Enterococcus, Lactobacillus, Clostridium and Bifidobacterium populations were unaffected by the IgY treatment. Larger (p < 0.05) Enterococcus populations and lower (p < 0.05) expression levels of heat‐stable enterotoxin b (STb) were observed in IgY‐fed EWP caecal digesta compared to the control group. Enteric Lactobacillus significantly decreased (p < 0.05) in EWPs fed antibiotics while it was unaffected by IgY treatment. Dietary supplementation with anti‐E. coli IgY has the potential to suppress enteric E. coli growth, but not Lactobacillus, Clostridium and Bifidobacterium. This promotes and maintains a healthy EWP intestinal environment. These findings suggest that IgY may be used as an alternative to antibiotics in EWP diets.