隐孢子虫感染与患者免疫功能表达

目的 :探讨隐孢子虫感染与细胞免疫功能的关系。方法 :采用生物素 -链霉亲和素 ( BSA)和EL ISA法对卵囊阳性患者分别进行 T细胞亚群、膜白细胞介素 - 2受体 ( m IL - 2 R)和血清特异性 Ig G、Ig M检测。结果 :隐孢子虫卵囊阳性者 CD+3、CD+4、CD+8和 CD+4/ CD+8阳性百分率分别为 ( 6 5 .83± 6 .5 5 ) %、( 4 3.5 5± 6 .10 ) %、( 2 8.4 3± 4 .32 ) %和 1.5 8± 0 .32 ) % ,静息期与诱导期 m IL- 2 R表达水平分别为 ( 2 .92±1.0 6 ) %和 ( 33.4 5± 2 .31) % ;隐孢子虫卵囊阴性者 CD+3、CD+4、CD+8和 CD+4/ CD+8阳性百分率分别为( 5 5 .87± 7.2 3) %、( 39.2 6± 6 .4 3) %、( 30 .0 4± 5 .6 7) %和 ( 1.36± 0 .4 1) % ,静息期与诱导期 m IL- 2 R表达水平分别为 ( 4 .31± 1.4 7) %和 ( 35 .4 1± 3.12 ) % ,两者相比 ,差异有显著性 ( P<0 .0 5～ P<0 .0 1)。隐孢子虫特异性抗体 Ig G、Ig M、Ig G + Ig M阳性率分别为 6 3.4 1% ( 2 6 / 4 1)、17.0 7% ( 7/ 4 1)、19.5 1% ( 8/ 4 1) ,隐孢子虫感染后的体液免疫以 Ig G为最多见。结论 :隐孢子虫感染以细胞免疫为主 ,体液免疫在隐孢子虫感染中具有一定的局限性。隐孢子虫感染者体内存在一定程度细胞免疫功能紊乱。     

生物素-氨基丁基乙基异鲁米诺与亲和素的结合特性及其在发光免疫中的应用

本文合成了生物素—氨基丁基乙基异鲁米诺偶联物,此物与亲和素结合后,降低了发光强度,亲和素含量与发光强度的变化有定量关系。因此,利用此特性于C—反应蛋白(CRP)发光免疫测定中。CRP标准曲线范围为1.25到160ng/mL。批内和批间变异系数分别为4.8％及14.8％。60名献血员血清CRP平均值为1.3μg/mL。此法与火箭电泳法测定同一血清CRP,相关性很好,r=0.96(n=20)。     

生物素—链霉亲和毒免疫学法测定地高辛的研究

采用国产链霉亲和素直接包被塑料板孔,生物素标记抗体,建立的竞争酶联免疫吸附试验的方法测定血中地高辛浓度,其测定灵敏度为０．９６４μｇ／Ｌ最低检测限为０．２２５１μｇ／Ｌ,测定三份低,中、高浓度的血甭标本,批内变异系数为８．９％、５．９％、２．４％;批间变民系数为１５．８％、１０．１％、９．２％,测定回收率在８９．１－１０７．２２％之间,此法与ＦＰＩＡ方法相关良好。     

生物素一亲和素系统试剂及其应用的研究I．试剂的制备和鉴定

本文报道生物索－亲和素系统(Bas)成套试剂的制备及其鉴定结果。活化生物素BNHs由生物素与羟基丁二酰亚胺脱水缩台而成。亲和素用cMc柱二次梯度层桁法从鸡蛋清中提取。生物素化羊抗兔(b—Sarg)和生物索化过氧化物酶(b-HRP)分别由Sarg和HRP与BNHs反应获得。经鉴定,上述四种试剂均符合要求。通过Abc ELIsA法检测兔抗人Ig表明,用全套自制的Bas试剂所得结果与进口产品一致,其灵敏度可达1：256000以上,超过常规ELIsA水平。现正进行Bas免疫酶法与其它免疫酶测定法的对比试验,并用Bas检测其它免疫反应体系,同时将研制成套Bas试剂盒。     

用生物素标记结核菌单克隆抗体检测脑脊液结核菌抗原的研究

应用生物素标记结核菌单克隆抗体酶联免疫吸附试验(BA-ELISA)检侧脑脊液结核菌扰原,并在同一滴定板上与常规ELISA比较。结果表明在85.4%的脑脊液中,BA-ELISA较常规ELiSA敏感,抗原滴度为后者的2.5倍。本法阳性率为88.5%,明显高于常规ELISA法(p<0.05),而其非特异性却无明显增加,提示本法为结核性脑膜炎的免疫学诊断提供了一种比常规ELISA更为敏感的新方法。     

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先, 将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应, 观察荧光信号的放大情况; 然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式, 对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化, 包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后, 采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明, BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附, 并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限; 另外, 与传统的与生物素-亲和素检测技术相比, 采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度, 有望用于蛋白质芯片的检测。     

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先, 将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应, 观察荧光信号的放大情况; 然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式, 对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化, 包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后, 采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明, BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附, 并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限; 另外, 与传统的与生物素-亲和素检测技术相比, 采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度, 有望用于蛋白质芯片的检测。     

用亲和素-生物素复合物法研究流行性乙型脑炎病毒感染小鼠中枢神经系统后的抗原定位

利用亲和素-生物素免疫组织化学技术,研究了流行性乙型脑炎(简称乙脑)病毒抗原(P3,A2株)感染小鼠中枢神经系统后的定位。观察到乙脑病毒抗原分布具有一定选择性,主要集中在脑干、小脑、间脑和大脑皮质。病变分布与H-E常规病理染色一致。该方法敏感、特异。同时比较了兔免疫血清与乙脑单克隆抗体的应用效果。对组织化学冰冻切片漂浮法诊断病毒抗原进行了探讨。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

微生物发酵液中生物素含量的ELISA测定

生物素与亲和素具有很强的亲和力,本文利用这一特性建立了一种直接竞争抑制的酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）,用于检测微生物发酵液中生物素含量．当标准品生物素含量在０．５～２０μｍｏｌ／Ｌ范围内,它与抑制率（Ｉ）负对数呈线性关系,因此发酵液样品中生物素含量可从标准曲线上查得。该法简便、准确,而且不需对样品作任何预处理。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲脂蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。     

免疫8亲和素与蛋白折叠,信号传导和免疫抑制的关系

免疫亲和素（ＣｙＰ,ＦＫＢＰ）分别是免疫抑制剂环饱素入Ａ、ＦＫ５０６和雷帕霉素的受体蛋白,对阻断Ｔ细胞信号传递,介导免疫抑制发挥重要作用。这些蛋白又具有肽基脯氨酸顺／反异构酶活性,是普遍存在于生物体内的两个蛋白家族,对蛋白质折叠、装配和运输等细胞生命过程起调节作用。     

纳米金标记基因芯片技术的优化

为了建立稳定的纳米金标记基因芯片技术,对点样液,预杂交,纳米金浓度,银染时间等进行了优化,并研究了该芯片方法的灵敏度。结果表明,使用50%DMSO作为点样液效果最好,预杂交会导致杂交信号降低70%,银染时间控制在15 min时候显色清晰且背景较低。该检测方法的灵敏度可达到80 fmol/L,可望在芯片检测领域得到更多的应用。     

单抗在人铁蛋白免疫亲和纯化中的应用

抗人铁蛋白单抗６Ｄ６和Ａ－ｈＦ－Ｃ与肝型铁蛋白和心型铁蛋白的反应性有所不同。６Ｄ６对两种铁蛋白的反应性相似;而Ａ－ｈＦ－Ｃ单抗与肝型铁蛋白的反应性较强。我们将６Ｄ６和Ａ－ｈＦ－Ｃ分别制成了亲和凝胶,用来纯化人肝脏和心脏粗抽提物中的铁蛋白。此法具有操作简便,产率和产品纯度高等优点。     

新生儿缺氧缺血性脑病患儿外周血CD25表达

目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿外周血CD25表达.方法 应用生物素-链霉亲和素(BSA)法检测新生儿HIE患儿及足月正常新生儿出生后第1、7天外周血CD25水平.结果 HIE患儿生后第1天静息期和诱导期CD25水平分别为(3.7±1.2)%和(22.4±6.5)%,与正常对照组相比,差异有显著性(P＜0.05);随着通气、换气等综合性治疗时间的延长,患儿缺氧缺血症状逐步改善,生后第7天静息期和诱导期CD25水平分别为(4.1±1.5)%和(25.3±7.2)%,与正常对照组相比,差异无显著性(P＞0.05).其中HIE(重度)患儿静息期和诱导期CD25水平均较低,与正常对照组相比,差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05).结论 HIE患儿存在一定程度的细胞免疫功能紊乱,主要表现为外周血CD25水平降低,并与HIE严重程度有关.     

两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。     

用生物素-亲和素ELISA法检测人胚肺二倍体细胞培养的甲型肝炎病毒抗原

利用生物素-亲和素生物放大系统的原理,建立了新的检测细胞培养的甲型肝炎病毒抗原的方法。用生物素标记的抗甲肝IgG,与免疫偶联于固相的甲肝抗原作用,然后用亲和素-生物素辣根酶复合物(ABPC)与生物素化的IgG偶合,邻苯二胺(OPD)显色。该法在检测甲肝抗原中获得满意结果,灵敏度比普通ELISA法提高约10倍,非特异性显著降低。该法可进一步发展成为一种高特异性的,灵敏的甲肝临床诊断和流行病学调查的技术。     

应用纳米金探针检测HSV-2的目视化基因芯片

本实验建立了一种应用金标链霉亲和素探针的目视化高灵敏度检测单纯疱疹病毒2型(Herpes Simplex Virus-2, HSV-2)的基因芯片.该芯片以HSV-2 DNA 聚合酶的高保守区为靶序列,设计HSV-2特异性引物和探针,通过PCR反应使扩增产物标记上生物素;氨基修饰的探针固定在活化的玻片上,与生物素标记的扩增产物杂交;利用生物素与链酶亲和素高亲合力的特性,加入纳米金标记的链酶亲和素后形成生物素-链酶亲和素-纳米金生物反应放大系统;银染反应后,达到目视化检测HSV-2效果.该HSV-2检测基因芯片能目视化检测出100fmol/L的HSV-2扩增产物,具有灵敏度高,低成本的特点,通过临床标本验证表明该芯片具有较高的准确性.     

生物素-亲和素微模式表面的制备与细胞定位

细胞在模式化表面的定位培养对于组织工程、生物传感器技术和细胞生物学基础研究具有重要意义。研究基于软光刻技术的生物素-亲和素微模式表面快速制备方法,并用所制备的模式进行牛主动脉血管内皮细胞的定位培养。表明该技术可在细胞尺度上有效地控制细胞生长的空间位置。 