巨噬细胞内结核分枝杆菌DNA的检测及实验评价

应用ＰＣＲ检测从５７例结核病人和５０例非结核病人的胸水、腹水、脑脊液、支气管灌洗液和血液中分离分纯巨噬细胞内的ＴＢ－ＤＮＡ。结果表明此法特异性为９６％,精确度为９２％,灵敏度为８８％。采用分离分纯的巨噬细胞作为ＰＣＲ检测ＴＢ－ＤＮＡ的标本,具有良好特异性和精确度,可作为诊断结核病、特别是肺外结核病的一种有效指标。检出临床标本中巨噬细胞内ＴＢ－ＤＮＡ的基础和临床确切意义值得深入探讨。关键词　巨噬细胞　ＴＢ－ＤＮＡ　ＰＣＲ　诊断聚合酶链反应（ＰＣＲ）为临床感染性疾病的病原诊断提供了一种敏感、准确、快…     

结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的 研究农村结核病人中利福平（RIF）耐药结核分枝杆菌（M．TB）临床分离株rpoB基因突变情况。为农村结核病防制提供分子遗传学依据。方法 以标准菌株H37Rv为对照，采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）分析技术，对来自苏北2个县2001年的145株M．TB分离株（其中敏感株117株。耐RIF或含RIF耐多药株28株）的rpoB基因突变的发生率进行研究。结果 农村RIF耐药或含RIF耐多药M．TB临床分离株中rpoB基因突变的发生率平均为71．4％，所有受试117株敏感株rpoB基因均无突变。与药敏试验结果对比PCR—SSCP试验的灵敏度为71．4％；其特异度为100％。结论 M．TB耐RIF与rpoB基因突变密切相关，PCR—SSCP方法可检出RIF耐药M．TB的rpoB基因突变。有助于M．TB耐药性的快速检测和耐药性防治。     

PCR-SSCP检测巨噬细胞内结核分支杆菌耐药性的探讨

[目的]检测结核分枝杆菌耐药性。[方法]PCR检测分离分纯结核患者标本中巨噬细胞内TB-DNA,SSCP分析其耐药基因变异情况。[结果]PCR检测TB-DNA阳性率为90.8％;SSCP检测rpoB的耐药突变率为42.0％,KatG为30.4％,rpsL为42.0％。rpoB和KatG同时发生突变的机率为53.6％,rpoB和rpsL为47.7％,KatG和rpsL为50.7％,而rpoB、KatG和rpsL三者同时发生突变的机率为52.2％。[结论]分离分纯结核患者标本中巨噬细胞以PCR-SSCP测定其TB-DNA及其耐药性,可作为对结核病病原诊断和耐药情况判断的实用方法之一。     

PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的:建立PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变。方法:用比例法筛选出70株耐利福平结核分枝杆菌临床分离株,用PCR-SSCP方法检测菌株ropB基因突变,并与比例法检测结果进行对比。结果:70株耐利福平菌株中,单耐利福平菌株为12株,同时耐福平和异烟肼菌株为58株。扩增菌株rpoB基因,70株结核分枝杆菌临床分离株ropB基因突变率为91.43%(64/70),其中,耐多药菌株ropB基因突变率为91.38%(53/58),单耐利福平菌株ropB基因突变率为91.67%(11/12)。结论:用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性所用时间大幅缩短,检测出的结果与传统方法一致率高,但结核分枝杆菌表型耐药菌株,存在rpoB基因位点无突变的现象,是否存在其他耐药位点或耐药机制,值得深入研究。     

结核分枝杆菌的优化PCR检测方法的研究

〔目的〕的建立了检测结核分枝杆菌的高灵敏度和高特异性PCR扩增体系。[方法]以国内结核病人常见病原菌-结核分枝杆菌、牛分枝杆菌特异性抗原Pab编码基因上的419bp段作为扩增靶序列,扩增引物序列为5’-ACC、ACC、GAG、CGG、TTC、CCC、TGA-3’、5’-GAT、CTG、CCG、GTC、GTC、CCA、GGT-3’。〔结果〕变性温度选择69℃-70℃。PCR扩增体系的成份经优化,选择引物浓度为0.30μmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,MgC12浓度为3.5mmol/L。〔结果〕该体系对11株标准菌株和12株临床分离菌株提纯的染色体进行扩增,其中卡介苗、结核分枝杆菌、牛分枝杆菌的扩增为阳性,其他分枝杆菌为阴性。〔结论〕以提纯的染色体DNA作模板,该体系可检出5fg结核杆菌染色体DNA,相当于一个结核分枝杆菌。     

结核分支杆菌药敏和耐药基因检测的临床应用和分析

目的 采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）检测结核分支杆菌耐药基因（rPOB、katG和rPSL),评估它的临床应用价值。方法 通过Bactec-960快速培养,PCR－SSCP和药物敏感试验了解114例肺结核病人结核分支杆菌耐药情况,分析了临床治疗效果。结果 近1／3的初治肺结核病人至少耐一种抗结核药物,RFP、INH和SM敏感株rPOB、katG和rPSL基因突变率分别为6．5％、11．4％和27．2％,耐药株基因突变率分别为60．2％、45．7％和62．7％,耐药基因突变率随着耐药浓度增而高而增高。药敏试验联合耐药基因检测指导治疗效果满意。结论 耐药基因检测指导治疗是一种新探索,与药敏试验联合应用可互相弥补,可能成为临床指导用药的好方法。     

结核分枝杆菌耐药性检测技术研究进展

结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染引起的一种危害人类健康的慢性传染病,是我国面临的重要公共卫生问题之一。近年来,结核病在我国总体呈现稳步上升的态势,疾病负担日益增加。MTB耐药,尤其是多重耐药、广泛耐药,是结核病临床治疗面临的主要问题,MTB耐药性检测已成为结核病临床治疗、监测的关键性问题。目前MTB耐药检测方法主要有表型检测、分子检测以及新型检测技术。本研究对现有MTB耐药性检测的技术方法进行综述,为结核分枝杆菌耐药性检测新型技术的开发提供参考。     

结核分枝杆菌聚合酶链反应检测技术进展

结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Myco-bacterium tuberculosis,MTB)感染引起的一种传染性疾病。根据最新的《世卫组织全球结核控制报告》,2009年约有940万结核新发病例,170万人因结核病而死亡[1]。早期诊断并及时治疗是预防TB发病率和死亡率的关键。目前,TB实验室诊断方法以痰涂片检查为主,价廉且快速,但缺乏特异性和敏感性。传统的微生物培养法虽然仍被视为诊断TB的金标准,但费时(6周～8周),自动化或半自动化的液体培养体系也需要14 d左右,然     

应用PCR-SSCP检测耐异烟肼结核分支杆菌Kat G基因突变

结核分支杆菌对抗结核药物产生耐受性，已成为全球结核防治工作面临的一个严重问题［１，２］。传统的药敏试验需１～２个月，难以满足临床诊治的需要。近年来发展的ＢＡＣＴＥＣ法测定耐药性也需要３～４周，仍为生长依赖性，且需昂贵仪器设备，因而限制其推广应用。因此对结核分支杆菌耐药机制深入了解，并依此建立准确的药敏检测新方法已成为结核病防治工作的一项重要而紧迫的课题。异烟肼（ＩＮＨ）是一线抗结核药物，最近的研究结果表明，结核分支杆菌耐ＩＮＨ的产生与过氧化氢一过氧化物酶编码基因（Ｋａｔ Ｇ）改变有关。聚合酶链反…     

基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果。方法选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值。结果基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P>0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(P>0.05)。结论基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法。     

多色荧光探针的滚环扩增技术检测结核分枝杆菌耐药基因

本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术,并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间,于陆军军医大学第一附属医院检验科,针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC?ACC）、rpoB531（CAC?TAC）和rp...     

北仑区229株结核分枝杆菌的耐药性分析

目的分析结核病患者的耐药性和患者特征为临床治疗提供依据。方法回顾分析宁波市北仑区人民医院2017年7月1日-2018年6月30日送检的984例疑似结核病患者的痰液样本,进行MGIT320结核分枝杆菌液体培养,并对结核分枝杆菌分离培养阳性者采用结核液体药敏试验,对4种抗结核药物:链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)进行药物敏感性试验,分析其耐药性,为临床合理选用抗结核药物提供依据。结果全部敏感为183株,占79.9%;单耐药为23株,占10.0%;耐多药率为17株,占7.4%;耐INH为31株,占13.5%;耐RFP为17株,占7.4%;耐SM为38株,占16.6%;耐EMB为15株,占6.5%。结论结核病的耐药率相对较低,INH和SM是结核病一线药物中耐药性较高的药物。     

肺结核患者下呼吸道病原菌分布及耐药性分析

目的 了解并探讨肺结核患者并发呼吸道感染的病原菌分布及耐药性.方法 对医院2009年1月-2010年12月住院的肺结核患者送检的合格痰标本做细菌培养和药敏试验,并进行统计分析.结果 共分离出161株病原菌,其中革兰阴性杆菌108株占67.1％,革兰阳性球菌34株占21.1％,真菌19株占11.8％;革兰阴性杆菌中前3位依次为肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌,分别占37.9％、16.1％、8.1％,革兰阳性球菌中前3位依次为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌,分别占6.8％、4.4％、3.7％;不同病原菌对常用抗菌药物呈现不同程度的耐药.结论 肺结核患者并发呼吸道感染的病原菌以革兰阴性杆菌多见,最常见为肺炎克雷伯菌,且细菌耐药性较高,应加强病原菌的检测及耐药性监测,合理使用抗菌药物.     

许昌市363株结核分枝杆菌耐药性和菌型分析

目的 分析河南省许昌市363株结核分枝杆菌对9种抗结核药物的耐药和菌型分析,为结核病防治工作提供参考依据。方法 收集2016 - 2017年许昌市结防机构分离培养的363株结核分枝杆菌分离株,采用比例法进行9种抗结核药物（INH、RFP、SM、EMB、OFX、KM、CPM、PTO、PAS）敏感试验和菌群鉴定试验。耐药率的比较采用χ2检验。结果 363株结核分枝杆菌总耐药率、单耐药率和耐多药率分别为24.24%（88/363）,11.85%（42/363）,7.44%（27/363）;获得性耐药率明显高于初始耐药率,两者差异有统计学意义（χ2 = 38.496,P＜0.001 ）;9种药物耐药顺位为SM 14.33%（52/363）＞INH 12.12%（44/363）＞RFP 10.47%（38/363）＞OFX 4.96%（18/363）＞EMB 3.03%（11/363）＞CPM 1.93%（7/363）＞PAS 0.83%（3/363）＞KM 0.55%（2/363）＞PTO 0.28%（1/363）;共出现了11种耐多药谱类型;结核病分枝杆菌以人结核分枝杆菌为主,人结核分枝杆菌耐药率（30.71%,82/267）高于牛结核分枝杆菌（6.25%,6/96）,两者差异有统计学意义（χ2 = 23.007,P＜0.001）。结论 许昌市结核病总耐药率低于全国耐药水平,而耐多药率高于全国水平。复治患者耐药率仍然比较高,因此耐药结核病防治工作成为今后许昌市结核病防治工作的重点。     

上海市奉贤区结核杆菌耐药性分析

[目的 ]　了解初治和复治肺结核病人对抗结核化学药物的敏感性。　 [方法 ]　收集 2 0 0 2年 1月至 2 0 0 3年7月痰菌阳性标本 ,用改良罗氏培养基绝对浓度法试验 ,最终获取培养阳性标本 2 14份 ,对全部培养阳性标本进行 5种抗结核药物 (SM、INH、PAS、EMB、RFP)的耐药性测定。　 [结果 ]　总耐药率为 3 9.2 5 % ( 84/2 14 ) ;初始耐药率为 11.83 %( 11/93 ) ,初始耐多药率为 7.5 3 % ( 7/93 ) ;获得性耐药率为 60 .3 3 % ( 73 /12 1) ,耐多药率为 47.93 % ( 5 8/12 1)。对抗结核药物的耐受 ,主要是耐受SM ( 75 .0 0 % ,63 /84)和INH( 63 .10 % ,5 3 /84)。　 [结论 ]　获得性耐药率高于初始耐药率 ,应进一步加强对结核杆菌药物敏感性监测。     

148例肺结核合并真菌感染或定植的临床特点及耐药分析

目的探讨肺结核合并真菌感染或定植的临床特点。方法回顾2009年1月-2010年7月医院住院的肺结核合并肺部真菌感染或定植患者的资料并进行分析。结果肺结核合并真菌感染或定植主要以老年、低蛋白血症、糖尿病、合并肺部细菌感染患者为主,其分别占33.11%、33.11%、21.62%、40.54%;检出的病原菌以白色假丝酵母菌为主,占75.68%;148例感染患者死亡8例,死亡率为5.41%。结论肺结核合并肺部真菌感染或定植的患者有增多趋势,应重视真菌的变迁及耐药菌株的发生。     

黏液型铜绿假单胞菌的耐药特点和耐药基因研究

目的 分析黏液型铜绿假单胞菌（mucoid pseudomonas aeruginosa,mPA）的耐药特点,检测其耐药基因携带情况,为临床合理选用抗菌药物提供参考依据。方法 收集赣南医学院第一附属医院2017年1月 - 2018年12月临床标本中分离的40株黏液型铜绿假单胞菌,采用K - B纸片扩散法检测黏液型铜绿假单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药性,用PCR对耐药基因AmpC、KPC - 2、TEM、IMP、SPM - 1、VIM - 1、VIM - 2、OXA - 10、OprD2进行检测。结果 40株mPA除1株来自中段尿以外,其余39株均来自呼吸道,患者以支气管扩张、慢性阻塞性肺疾病为主,主要来自呼吸内科,占52.5%（21/40）。mPA对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、阿米卡星、庆大霉素的耐药率均＜30%,但对亚胺培南和美罗培南的耐药率高达31.6%和21.1%,2018年与2017年比较,mPA对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率明显下降,差异具有统计学意义（P＜0.05）。11株对亚胺培南和（或）美罗培南耐药的mPA中IMP基因阳性10株（90.9%）,TEM基因阳性9株（81.8%）,同时携带IMP和TEM基因8株（72.7%）,外膜孔蛋白OprD2基因缺失3株（27.3%）,未检测出其他基因型。结论 mPA对亚胺培南和美罗培南的耐药率较高,其耐药机制主要与携带IMP基因和TEM基因密切相关。     

实施DOTS策略后合肥市结核病人耐药性分析

目的 了解合肥市实施DOTS策略后肺结核病例的耐药状况,为制定控制耐药结核病提供科学依据.方法 对合肥市疾病预防控制中心结核病门诊2009年2月～2010年1月392例培养阳性病例进行菌型鉴定,获得352例结核分枝杆菌并对其进行异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇等药物敏感性鉴定.结果 352例结核分枝杆菌中总耐药率及耐多药率分别是20.5％和3.1％.初始耐药率为16.3％,初始耐多药率为1.9％;其获得性耐药率为52.5％,获得性耐多药率为12.5％.复治病人的耐药率明显高于新病人;耐药率最高的是SM 25％.结论 合肥市总耐药率和耐多药率低于全国耐药基线调查结果,但控制结核分枝杆菌耐药形势刻不容缓,今后要加强对新发男性青壮年病人的管理措施,提高病例的依从性和治愈率.     

Genotypes of Mycobacterium tuberculosis in patients at risk of drug resistance in Bolivia

Bolivia ranks among the 10 Latin American countries with the highest rates of tuberculosis (TB) and multidrug resistant (MDR) TB. In view of this, and of the lacking information on the population structure of Mycobacterium tuberculosis in the country, we explored genotype associations with drug resistance and clustering by analyzing isolates collected in 2010 from 100 consecutive TB patients at risk of drug resistance in seven of the nine departments in which Bolivia is divided. Fourteen isolates were MDR, 29 had other drug resistance profiles, and 57 were pansusceptible. Spoligotype family distribution was: Haarlem 39.4%, LAM 26.3%, T 22.2%, S 2.0%, X 1.0%, orphan 9.1%, with very low intra-family diversity and absence of Beijing genotypes. We found 66 different MIRU-VNTR patterns; the most frequent corresponded to Multiple Locus Variable Analysis (MLVA) MtbC15 patterns 860, 372 and 873. Twelve clusters, each with identical MIRU-VNTR and spoligotypes, gathered 35 patients. We found no association of genotype with drug resistant or MDR-TB. Clustering associated with SIT 50 and the H3 subfamily to which it belongs (p < 0.0001). The largest cluster involved isolates from three departments and displayed a genotype (SIT 50/MLVA 860) previously identified in Bolivian migrants into Spain and Argentina suggesting that this genotype is widespread among Bolivian patients. Our study presents a first overview of M. tuberculosis genotypes at risk of drug resistance circulating in Bolivia. However, results should be taken cautiously because the sample is small and includes a particular subset of M. tuberculosis population.