活血化瘀汤对大鼠骨折愈合过程中血清骨钙素和Ⅰ型胶原表达的影响

目的:研究活血化瘀汤在骨折愈合过程中对骨钙素(bone gamma carboxyglutamate protein,BGP)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)表达的影响,探讨该方在骨折愈合中对软骨内成骨的作用。方法:选用雄性SD大鼠60只,造成左胫骨中段闭合折骨标准的骨折模型,术后采用髓内针固定。随机分成中药组(麻醉苏醒后灌服活血化瘀汤,n=30)和对照组(麻醉苏醒后灌服等量生理盐水,n=30),分别于灌胃后3、5、7、14、21d腹主动脉取血,然后取骨折端上下各0.5cm长的一段骨质。应用Elisa技术,动态观察骨钙素和Ⅰ型胶原表达的变化。结果:血清骨钙素、Ⅰ型胶原在骨折愈合过程中表达持续增高,且表达具有一致性;活血化瘀汤组血清骨钙素、Ⅰ型胶原的表达均较生理盐水组明显(P<0.05)。结论:活血化瘀汤能调控骨钙素和Ⅰ型胶原表达,可能通过影响大鼠骨折愈合过程中软骨内成骨,促进骨折愈合。     

缺氧诱导因子-1αmRNA表达与胃癌血管生成、侵袭转移及预后的关系

近年来发现的转录因子缺氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）在氧平衡及肿瘤微血管形成中起着重要作用,HIF-1由α和β两个亚单位组成.其中HIF-1α是决定HIF-1活性的缺氧调节亚基.为此,我们采用原位分子杂交方法检测胃癌组织中的HIF-1α mRNA表达并分析其与血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白,微血管密度（MVD）及生存期的关系,旨在探讨HIF-1α和VEGF在胃癌侵袭转移中的作用及对胃癌患者预后的影响.     

大肠腺癌中辅助蛋白同源的磷脂酶基因和缺氧诱导因子-1α的表达及与血管内皮生长因子的关系

目的研究大肠腺瘤和腺癌组织中与张力蛋白和辅助蛋白同源的磷脂酶mRNA(PTENmRNA)、缺氧诱导因子-1αmRNA(HIF-1αmRNA)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达及其临床意义。方法PTENmRNA、HIF-1αmRNA检测采用原位杂交技术,应用免疫组织化学方法检测VEGF蛋白的表达。结果HIF-1αmRNA阳性表达为棕黄色杂交颗粒,主要定位于肿瘤组织坏死边缘区域的肿瘤细胞胞浆中。62例大肠腺癌标本中,PTENmRNA、HIF-1mRNA、VEGF蛋白阳性表达率分别为51.6%、67.7%、59.7%。18例大肠腺瘤标本中,PTENmRNA、HIF-1mR-NA、VEGF蛋白阳性表达率分别为77.8%、44.4%、33.3%。大肠腺癌VEGF蛋白阳性表达率显著高于大肠腺瘤(P<0.05),而PTENmRNA则相反。有局部复发、淋巴结转移、肝转移、Dukes分期高的大肠腺癌组织中HIF-1mRNA阳性表达率显著增高,而PTENmRNA表达则相反。HIF-1α与VEGF呈显著正相关(χ2=4.751,P<0.05);HIF-1αmRNA表达与PTENmRNA呈显著负相关(χ2=21.84,P<0.01);HIF-1αmRNA与VEGF无相关性(χ2=2.597,P>0.05)。结论抑癌基因PTEN的低表达或突变缺失诱导HIF-1α及其靶基因VEGF的过度表达在大肠腺瘤-腺癌发展过程中起重要作用。     

PTEN和缺氧诱导因子-1α在大肠腺瘤-腺癌序列中的表达及意义

目的:观察大肠腺瘤和腺癌组织中PTEN、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达情况,探讨两者在大肠腺瘤一腺癌序列发生发展中的作用及相互关系.方法:采用原位杂交技术检测18例大肠腺瘤和62例大肠腺癌组织中PTEN-mRNA、HIF-1αmRNA,用免疫组织化学S-P方法检测VEGF蛋白的表达.比较三者与大肠癌Dukes分期、淋巴结转移、肝转移及组织学分级等病理特征的关系.结果:18例大肠腺瘤PTEN-mRNA、HIF-1αmRNA、VEGF蛋白阳性表达率分别为77.8%(14/18),38.9%(7/18),33.3%(6/18),大肠腺癌分别为51.6%(32/62),67.7%(42/62),59.7%(37/62).腺瘤组织HIF-1αmRNA、VEGF阳性表达率均低于腺癌细织(P ＜0.05),腺瘤组织PTEN-mRNA阳性表达率显著高于腺癌组织(P ＜0.05).大肠腺癌细织中PTEN-mRNA吸光值随Dukes分期增高而逐渐降低,A期(0.1782±0.0271),B期(0.1538±0.0397)分别与C+D期(0.1470±0.0524)比较差异均具有显著性(P ＜0.05).HIF-1αmRNA、VEGF蛋白吸光值随Dukes分期增高而逐渐升高,A期,HIF-1α(0.1029±0.045),VEGF(0.1207±0.0436)分别与B期(0.1656±0.0329、0.1572±0.0514)比较差异均具有显著性(P ＜0.05).A期,B期分别与C+D期(0.2335±0.0748、0.2219±0.0803)比较差异具有高度显著性(P＜0.01).PTEN-mRNA表达分别与HIF-1α、VEGF呈显著负相关(rs=-0.36,P＜0.05:rs=-0.68,P ＜0.05),HIF-1αmRNA与VEGF呈显著正相关(rs=0.71,P＜0.05).结论:抑癌基因PTEN的丢失或表达下调,HIF-1α及其靶基因VEGF的过度表达在大肠腺瘤-腺癌序列的发生发展浸润转移中起促进作用.     

小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α加重缺氧状态肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死

目的 探讨沉默缺氧诱导因子1α （HIF-1α）对缺氧状态肾小管上皮细胞增殖、凋亡和坏死的影响。 方法 利用氯化钴模拟缺氧状态,并应用小分子RNA干扰（siRNA）技术沉默HIF-1α基因表达。将细胞分成5组,分别是正常培养组、缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组。用MTT试验检测细胞的生长抑制率;用TUNEL法、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（aspase）-3蛋白定量法检测细胞的凋亡率;检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力来测定细胞的坏死情况;用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞HIF-1α、HIF-2α、葡萄糖转运蛋白1（Glut-1）、血管内皮生长因子（VEGF） mRNA和蛋白表达水平。 结果 （1）siRNA的细胞转染效率为95%～100%。在常氧条件下,终浓度100 nmol/L 的HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率为70%;在缺氧条件下,HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率达到97%。（2）HIF-1α siRNA组细胞的生长抑制率显著高于其它组（P < 0.05）;细胞凋亡率在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）;HIF-1α siRNA组细胞培养液中LDH水平显著高于缺氧培养组、转染试剂组和阴性对照组（P < 0.05）。（3）HIF-1α siRNA组细胞的HIF-1α、Glut-1、VEGF mRNA和蛋白表达量显著低于缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组（P < 0.05）;而HIF-2α mRNA和蛋白表达在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞Glut-1和VEGF表达,加重缺氧状态下肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死。     

瘢痕中HIF-1α的表达及其与VEGF和HO-1的关系

目的:探讨HIF-1α减轻瘢痕内缺氧环境的机制。方法:采用免疫组化法检测烧伤后肉芽、不同时期瘢痕和正常皮肤中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor1α,HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)的表达,采用权重方法分别对各组瘢痕的HIF-1α、VEGF、HO-1表达结果进行量化,分析各自规律及相互间关系。结果:随瘢痕的成熟,HIF-1α、VEGF、HO-1表达强度均逐渐减弱,相互间具有正相关性(P<0.01)。结论:HIF-1α、VEGF、HO-1在瘢痕成熟过程中起重要作用,HIF-1α可能通过诱导VEGF、HO-1的表达,促进血管生成、成熟,增加组织内供氧,来减轻瘢痕内缺氧环境。     

缺氧诱导因子-1α在去势前后大鼠腹叶前列腺中表达的变化

目的探讨与缺氧相关的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是否参与去势后前列腺萎缩过程.方法24只SD大鼠分为3组,其中A组(n=8)为假手术对照组,B组(n=8)为去势组,C组(n=8)为雄激素替代组(去势后肌注十一酸睾酮50mg/kg);术后3天处死,通过半定量RT-PCR检测与HIF-1α在去势前后前列腺表达变化.结果去势后大鼠前列腺的体积萎缩变小;雄激素替代组出现前列腺增生变大;对照组正常的大鼠前列腺有HIF-1 α mRNA低水平表达,去势组HIF-1α mRNA表达量增加,雄激素替代组HIF-1αmRNA表达量减少,与正常对照组比较,去势组的HIF-1α mRNA的表达量显著增加(P＜0.05),雄激素替代组的HIF-1αmRNA的表达量显著减少(P＜0.01).结论前列腺组织的缺氧参与去势后大鼠前列腺的早期萎缩过程.     

缺氧应激对HepG2细胞中甲硫氨酸腺苷转移酶2A基因表达的影响

目的 观察体外缺氧条件下肝癌细胞株HepG2中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对MAT2A基因表达的调控作用.方法 构建人MAT2A启动子真核表达载体质粒,CoCl2化学模拟肿瘤缺氧环境,检测缺氧条件下MAT2A启动子活性,HIF-1α和MAT2A在HepG细胞中的共定位、mRNA和蛋白水平的表达.以及小干扰RNA(siRNA)沉默HIF-1α后对MAT2A基因表达的影响.结果　缺氧24 h能使HepG2细胞活性增加到高峰(41.26±2.34),同时MAT2A基因的表达也较常氧时显著升高(P＜0.01),siRNA转染HepG2细胞后能显著下调HIF-1α蛋白表达(抑制率90%),并导致MAT2A基因的表达也受到明显抑制.结论　缺氧促使HepG2细胞中HIF-1α在蛋白水平表达升高,缺氧时HIF-1α能上调MAT2A基因的表达水平.

Abstract：

Objective To observe the expression of hypoixa inducible factor-1α (HIF-α) and methionine adenosyltransferase-2A (MAT2A) gene in HepG2 cells under hypoxia in vitro, and explore the regulation of MAT2A gene expression by HIF-1α. Methods Human MAT2A promoter eukaryotic expression vector was constructed. CoCl2 was used as a chemical hypoxia-inducible reagent to mimic tumor bypoxic microenvironment. MAT2A promoter activity, and mRNA and protein expression of HIF-α were detected in the HepG2 cells transfected with RNA interference (RNAi) originated by small interfering RNA (siRNA). The change of MAT2A gene expression was observed after HIF-1α gene silencing. Results Under hypoxia for 24 h, HepG2 cell activity was increased to (41.26 ± 2. 34 ), and the mRNA and protein expression levels of MAT2A were up-regulated (P ＜0. 01 ). After siRNA targeting, the HIF-1α was downregulated efficiently in HepG2 cells (inhibition ratio: 90% ), and MAT2A gene was down-regulated as well. Conclusion Hypoxia can increase protein level of HIF-1α in HepG2 cells, and HIF-1α up-regulates the gene expression of MAT2A.     

胰岛素调节人胰腺癌细胞ASPC-1中HIF-1α的表达研究

目的 探讨胰岛素对胰腺癌细胞株ASPC-1中缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响.方法 将ASPC-1细胞分为5组:常氧组,常氧加胰岛素组,缺氧组,同一缺氧时间不同胰岛素浓度组以及相同胰岛素浓度不同缺氧时间组,实时定量PCR检测HIF-1α基因表达,免疫细胞化学与Western blot检测HIF-1α蛋白表达水平的变化.Transwell实验检测加入胰岛素后肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果 常氧下ASPC-1细胞即有一定水平HIF-1α表达,加入胰岛素刺激后HIF-1α蛋白表达随着胰岛素浓度的升高和作用时间的延长而逐渐升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);缺氧条件下HIF-1α表达较常氧时升高(P＜0.05);相同缺氧时间使用不同浓度胰岛素刺激时,高浓度胰岛素刺激下HIF-1α的表达较单纯缺氧更高(P＜0.05),低浓度胰岛素对HIF-1α无明显作用(P＞0.05);使用相同胰岛素处理后再进行缺氧处理,随着时间延长HIF-1α的表达先升高后下降,但各处理组较对照组差异均有统计学意义(P＜0.05).Transwell实验显示胰岛素可增强胰腺癌细胞的侵袭能力(P＜0.05).结论 胰岛素可上调胰腺癌细胞ASPC-1中HIF-1蛋白表达,并且这种作用具有一定的剂量依赖性和时间依赖性.胰岛素还可以增加ASPC-1的侵袭能力.

Abstract：

Objective To investigate the effect of insulin on the expression of hypoxia-inducible factor-1α in human pancreatic cancer cell line ASPC-1. Methods We divided ASPC-1 cells into five groups: normoxia; normoxia stimulated with insulin; hypoxia; hypoxia pretreated with different concentration of insulin; hypoxia of different time points pretreated with same concentration of insulin. Real-time PCR was used to test the expression of HIF-1α mRNA. Immunohistochemistry was used to examine the expression of HIF-1α in ASPC-1 of insulin treated cancer cells. Western blot was used to determine the expression of HIF-1 α protein in those cells. Transwell was used to test whether insulin could enhance the invasion ability of ASPC-1 pancreatic cancer cells. Results Insulin promotes HIF-1α protein expression. ASPC-1 cells expressed low levels of HIF-1α protein under normoxic condition. After stimulated with insulin, the expression of HIF-1 α protein significantly increased (P ＜ 0. 05 ). After treated with hypoxia, the expression of HIF-1α protein also increased(P ＜ 0. 05 ). Low concentrations of insulin didn't increase the expression of HIF-1α under hypoxic environment ( P ＞ 0. 05 ), while high concentration of insulin could increase its expression(P ＜ 0. 05). When ASPC-1 cells pretreated with insulin suffered from hypoxia, the expression of HIF-1α first increased then decreased moderately( P ＜0. 05). Insulin could enhance the invasion ability of pancreatic cancer cells( P ＜ 0. 05 ). Conclusions Insulin mediates the expression of HIF-1α protein in human pancreatic cancer ASPC-1 cells with the characteristics of dose and time dependency. Insulin could enhance the invasion ability of ASPC-1 cells.     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮细胞生长因子在前列腺癌组织中的表达

目的：探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在前列腺癌中的表达及其与病理分级、临床分期的关系。方法：采用免疫组化方法检测前列腺癌和良性前列腺增生(BPH)组织中HIF-1α和VEGF的表达。结果：前列腺癌中HIF-1α和VEGF的表达均明显高于BPH；HIF-1α和VEGF在前列腺癌中的表达水平与其病理分级和临床分期均呈正相关；前列腺癌中的HIF-1α表达水平和VEGF的表达水平呈正相关。结论：HIF-1α和VEGF是检测前列腺癌的较好分子标志物，可望用于前列腺癌的辅助诊断和预后判断，HIF-1α是VEGF表达的调控因子之一。     

缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子在兔早期肝硬化形成过程中的表达

目的 观察兔早期肝硬化形成过程中缺氧诱导因子(HIF)-α、血管内皮生长因子(VEGF)在肝组织的表达.方法 实验设四氯化碳诱导和正常对照组各15只新西兰大白兔,分别每2周处死实验组3只,正常对照组3只,同时进行常规病理学检测及免疫组织化学检测.结果 HIF-α免疫组织化学染色阳性细胞主要位于肝细胞的细胞质中,部分细胞核中也有表达.VEGF免疫组织化学染色阳性细胞位于肝细胞的细胞质、细胞核和血管内皮细胞中.HIF-1α、VEGF阳性表达均呈棕黄色颗粒.HIF-1α、VEGF在早期肝硬化期(12周末)阳性表达数均为10例;在肝纤维化期(8周末)阳性表达数均为9例;在肝炎期(4周末)阳性表达数均为4例.HIF-1α mRNA、VEGF mRNA在3个时期表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),并随时间延长其阳性表达率增加.结论 通过对兔早期肝硬化形成过程中HIF-1α、VEGF在肝组织的表达的观察,为临床基因靶点治疗肝脏疾病提供实验基础.     

RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响

目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响.方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细胞分为正常对照组、缺氧组(置于含体积分数1%O_2的混合气体环境中缺氧处理6 h)、转染组、转染缺氧组(转染载体后再进行缺氧处理).采用RT-PCR法检测正常对照组、转染组HIF-1αmRNA表达,采用蛋白质印迹法检测4组细胞HIF-1α蛋白表达.荧光分光光度计检测单层VE细胞的通透性.将上述缺氧处理替换为HIF-1α特异性诱导剂1 mmol/L二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG),分为DMOG组、转染DMOG组、正常对照组、转染组,采用蛋白质印迹法观察各组HIF-1α蛋白表达.除通透性检测数据用荧光强度值表示外,其他数据用密度比值表示.实验结果进行组间两两t检验.结果 正常对照组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.765±0.069,转染组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.093±0.007,组间比较,差异有统计学意义(t=16.696,P<0.05).转染缺氧组细胞HIF-1α蛋白含量为0.591±0.029,显著低于缺氧组(2.612±0.259,t=13.415,P<0.05);转染DMOG组HIF-1α蛋白含量为0.566±0.008,显著低于DMOG组(3.243±0.551,t=6.975,P<0.05).缺氧组单层血管内皮细胞通透性(41.6±11.1)较正常对照组(9.4±1.5)显著升高(t=6.238,P<0.05),转染缺氧组单层血管内皮细胞通透性(13.3±4.5)显著低于缺氧组(t=5.430,P<0.05).结论 采用特异性针对HIF-1α基因的RNA干扰技术,能有效抑制内皮细胞HIF-1α表达,并明显抑制缺氧引起的血管内皮细胞通透性增强.     

乳腺癌血行转移与血管生成相关因子相关性研究

目的探讨血管生成相关因子:癌基因HER2、缺氧诱导因子(HIF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在乳腺癌组织中的表达及其与血行转移的相关性。方法应用免疫组织化学技术(SP法)检测51例乳腺浸润性导管癌组织中HER2、HIF-1α、VEGF蛋白的表达并随访其术后5年内远处血行转移的情况。结果51例乳腺浸润性导管癌组织中HER2、HIF-1a和VEGF表达均彼此相关。单因素分析显示44例乳腺浸润性导管癌中HER2、VEGF、淋巴结转移和临床肿瘤分期与癌的远处血行转移相关,HIF-1α表达与远处血行转移不相关(P>0.05)。23例淋巴结阴性乳腺癌中,仅VEGF表达与其远处血行转移密切相关(P<0.05)。结论乳腺浸润性导管癌组织中HER2可能通过HIF-1α途径调节VEGF蛋白的表达,参与乳腺癌血管的生成。VEGF表达可作为术后预测血行转移的指标之一,HER2过度表达和HIF-1α表达不能预测远处血行转移。     

门静脉高压症大鼠断流术后胃黏膜缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子的表达

目的 观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在断流术前后肝前性门静脉高压症（PHPH）大鼠胃黏膜的表达，探讨HIF-1α和VEGF在门静脉高压胃病（PHG）的发生发展的作用。方法 取Wistar大鼠制备PHPH模型80只，设假手术组（SO）60只，在术后3周施断流术。检测HIF-1α、VEGF和CD34在大鼠胃壁组织中的表达。结果 断流术前PHPH组大鼠胃壁中HIF-1α（5．8±1．3）和VEGF（12．0±3．0）的表达均明显高于SO组[HIF-1α（0．03750±0．05175），VEGF（0．7±0．1），P〈0．01]。术后HIF-1α、VEGF和MVD均有升高趋势。结论 HIF-1α和VEGF可能参与了PHG的发生发展，断流术本身能通过某种机制影响HIF-1α和VEGF的表达，加重PHG。     

大鼠重度烫伤后早期心肌组织内缺氧诱导因子-1α表达的变化

目的　观察烫伤大鼠伤后早期心肌组织中缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA和蛋白的表达变化 ,探讨其意义。　方法　制作 4 0 %TBSAⅢ度烫伤大鼠模型 ,设正常对照组及伤后不同时相组。取心脏解剖左、右心室 ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达 ,采用蛋白免疫印迹法测定其蛋白水平的变化。　结果　正常大鼠左、右心室肌HIF 1αmRNA、蛋白表达结果有所不同。大鼠烫伤后 ,心肌组织内HIF 1αmRNA水平、蛋白表达量明显升高 (P <0.0 1)。结论　正常状态下 ,大鼠左心室肌对缺血缺氧耐受能力较右心室肌强。严重烫伤可以诱导大鼠心肌细胞HIF 1α表达增加 ,介导心肌保护效应     

缺氧诱导对人结肠癌SW480细胞缺氧诱导因子-1α和Survivin基因表达的影响

目的 构建缺氧诱导模型和观察缺氧对人结肠癌SW480细胞系缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Survivin基因表达的影响。方法 利用氯化钴（CoCl2）构建缺氧诱导模型；利用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分别测定CoCl2缺氧诱导与SW480细胞HIF—1α和Survivin基因mRNA表达的时效关系（0、2、4、8、24h）和量效关系（0、50、100、150、200／μmol／L）。结果HIF-1α和Survivin基因mRNA表达与氯化钴浓度呈明显的剂量依赖关系；HIF-1α基因表达随诱导时间的延长而逐渐增强，4h亚组出现一个表达高峰，Survivin基因在缺氧诱导4h呈现表达最高峰；HIF-1α与survivin基因mRNA的表达在缺氧诱导量效关系（r=0．521，P＜0．05）和时效关系（r=0．693，P＜0．05）中均呈显著正相关。结论 缺氧可以诱导HIF—1α和Survivin基因的表达增加；HIF—1α与Survivin基因的表达均呈显著相关，提示Survivin基因可能与HIF—1α存在某种调控关系并在缺氧抗凋亡机制中发挥作用。     

血管瘤中缺氧诱导因子-1α的表达和血管生成的研究

目的　探讨缺氧诱导因子- 1α(HIF-1α)在血管瘤中的表达以及其和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、新生微血管密度 (MVD)的关系。方法　采用免疫组化SP法检测 2 8例婴幼儿血管瘤中HIF 1α、VEGF的蛋白表达和MVD。结果　 2 8例血管瘤中HIF-1α、VEGF的蛋白表达阳性率分别是6 4 % ,71.4 %。其中增生期和消退期HIF 1α阳性率分别为 87.5 %、33.3% (P <0.0 1) ,VEGF阳性率分别为 93.7%、4 1.7% (P <0.0 1) ;MVD分别为 73 4± 14 6 3、30 2± 9 1(P <0.0 1)。HIF 1α蛋白表达与VEGF成正相关 (P <0.0 1) ,HIF 1α和VEGF与MVD都成正相关 (P <0.0 1)。结论　血管瘤增生期血管内皮细胞存在着特殊的缺氧微环境 ,并通过HIF-1α表达水平提高调节VEGF等血管生成相关因子表达水平升高 ,促进了新生微血管生成     

亚低温对大鼠慢性脑缺血再灌注时缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1表达的影响

目的 探讨亚低温对大鼠慢性脑缺血再灌注时缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)表达的影响.方法 健康清洁级雌性SD大鼠36只,体重170～210 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、常温再灌注组(NT组)和亚低温再灌注组(MH组).除S组外,其余2组采用右侧颈总动脉与右侧颈外静脉端端吻合6周恢复灌注的方法制备大鼠慢性脑缺血再灌注模型.再灌注期间S组和NT组维持直肠温37～38 ℃,MH组维持直肠温31.5～32.5℃.分别于再灌注3和48 h时每组处死6只大鼠,取脑组织,采用免疫组化法和荧光PCR法测定HIF-1α和GLUT-1及其mRNA的表达水平,电镜下观察血脑屏障的超微结构.结果 与S组比较,NT组再灌注3和48 h时脑组织HIF-1α及其mRNA表达上调,再灌注48 h时GLUT-1及其mRNA表达下调,再灌注3 h时GLUT-1 mRNA表达上调(P＜0.05);与NT组比较,MH组再灌注48 h时HIF-1α及其mRNA表达下调,再灌注3 h时HIF-1α mRNA表达下调,再灌注48 h时GLUT-1及其mRNA表达上调,再灌注3 h时GLUT-1 mRNA表达下调(P＜0.05).MH组血脑屏障结构损伤程度轻于NT组.结论 亚低温可下调HIF-1α表达,上调GLUT-1表达,从而减轻大鼠慢性脑缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of mild hypothermia on the expression of hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) and glucose transporter-1 (GLUT-1) in a rat model of chronic cerebral ischemia-reperfusion.Methods Thirty-six female SD rats weighing 170-210 g were randomly divided into 3 groups (n = 12 each):sham operation group (group S), normal body temperature group (group NT ) and mild hypothermia group (group MH). Arterio-venous fistula was established by end-to-end anastomosis between the right common carotid artery and right external jugular vein for 6 weeks followed by reperfusion. In group MH, mild hypothermia was induced at the initiation of reperfusion and the rectal temperature was reduced to 31.5-32.5 ℃. In group S and NT, the rectal temperature was maintained at 37-38 ℃. Six rats in each group were sacrificed at 3 and 48 h of reperfusion. The brains were immediately removed for determination of the expression of HIF-1α, GLUT-1, HIF-1α mRNA and GLUT-1 mRNA and microscopic examination. Results Compared with group S, the expression of HIF-1α and HIF-1α mRNA at 3 and 48 h of reperfusion and GLUT-1 mRNA at 3 h of reperfusion was up-regulated, while the expression of GLUT-1 and GLUT-1 mRNA at 48 h of reperfusion was down-regulated in group NT (P ＜ 0.05).Compared with group NT, the expression of HIF-1α and HIF-1α mRNA at 48 h of reperfusion and HIF-1α mRNA and GLUT-1 mRNA at 3 h of reperfusion was down-regulated, while the expression of GLUT-1 and GLUT-1 mRNA at 48 h of reperfusion was up-regulated in group MH (P ＜ 0.05).Microscopic examination showed that the injury to the ultrastructure of blood-brain barrier was significantly attenuated in group MH compared with group NT. Conclusion Mild hypothermia can attenuate chronic ischemia-reperfusion injury by down-regulating the expression of HIF-1α and up-regulating the expression of GLUT-1.     

缺氧诱导因子-1α及其相关基因在腹主动脉瘤中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子(HIF)-1α信号转导通路及其相关基因在腹主动脉瘤(AAA)中的表达,探讨AAA的发病机制。方法选取AAA标本22例,以5例腹主动脉(NA)标本作对照。采用Northern杂交、Western蛋白印迹及免疫组织化学方法检测HIF-1α的mRNA及蛋白产物表达,Western蛋白印迹或免疫组织化学方法检测血管内皮生长因子(VEGF)及半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,免疫组织化学抗CD34染色法检测微血管密度(MVD)。结果 AAA组织中HIF-1α的mRNA及蛋白产物表达明显高于NA(P<0.01);caspase-3和VEGF表达亦明显增强(P<0.01),与HIF-1α表达呈显著正相关(r值分别为0.783和0.693,P<0.01)。HIF-1α表达主要分布在AAA中层血管平滑肌细胞及外膜处,与caspase-3和VEGF的分布部位基本一致。AAA中微血管密度明显增加(P<0.01))。结论HIF-1α在AAA疾病进展过程中可能发挥重要作用,其作用机制可能是通过调控VEGF或caspase-3的表达而实现的。