条斑紫菜多糖的降解条件优化及其生物活性

本实验采用水提醇沉法提取条斑紫菜多糖(Porphyra yezoensis polysaccharide,PSPY),用H2O2和VC结合法降解PSPY,以对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除率为指标,经单因素试验和响应面法优化得到最佳降解条件:H2O2-VC浓度4.1 mmol/L、温度52.4℃、降解时间2...     

条斑紫菜活性肽的抗氧化作用

以条斑紫菜为原料,使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,采用还原能力、清除羟自由基和二苯代苦味酰基自由基作为抗氧化性评价指标,研究紫菜活性肽的体外抗氧化活性,并测定其分子质量分布。结果表明：3种蛋白酶对紫菜蛋白具有较好的酶解效果,酶解产物具有一定的还原能力;自由基清除率和底物浓度之间具有正相关关系,木瓜蛋白酶酶解活性肽清除羟自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.397mg/mL;胃蛋白酶酶解活性肽清除二苯代苦味酰基自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.261mg/mL;经测定,具有抗氧化活性的小分子肽分子质量分布在148～1963u之间。     

条斑紫菜多糖对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨Fas、Bcl-2基因在条斑紫菜多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用。方法:不同浓度条斑紫菜多糖作用于MCF-7细胞48h后,荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果条斑紫菜多糖能诱导MCF-7细胞凋亡,并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论:条斑紫菜多糖促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2表达有关。     

基于斑马鱼模型研究不同磷脂促血管生成活性

目的：利用斑马鱼模型研究不同来源和不同类型的磷脂对血管生成的促进作用及其活性差异。方法：将受精后发育24 h和72 h的斑马鱼胚胎脱膜,分别用于评估各磷脂样品（分别以大豆、蛋黄和南美白对虾虾头制备）对斑马鱼体节间血管（intersegmental vessel,ISV）和肠下静脉（subintestinal vein vessel,SIV）生长情况的影响,设置空白对照组、模型组（0.25 μg/mL PTK787）、阳性对照组和磷脂样品组（20、40、80 mg/mL）,给药24 h后用荧光显微镜观察并记录各实验组转基因斑马鱼ISV和SIV的生长情况。结果：对于ISV受损斑马鱼而言,3 种磷脂提取物以及2 种磷脂市售产品（药品和保健品）均表现出明显的血管生成促进作用,对于SIV而言,3 种磷脂提取物以及4 种磷脂市售产品（药品和保健品）均表现出明显的血管生成促进作用,相对而言,南美白对虾虾头磷脂促进血管生成活性更强,效果更加明显;5 种磷脂标准品表现出不同程度的血管生成促进作用,对于ISV受损斑马鱼而言,磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸以及高质量浓度（80 mg/mL）的鞘磷脂表现出明显的促血管生成作用,对于SIV受损斑马鱼而言,所有的磷脂标准品均表现出较明显的血管生成促进作用。结论：不同质量浓度的磷脂提取物、市售产品以及磷脂标准品对斑马鱼均具有一定的促血管生成活性。     

条斑紫菜多糖的分离纯化及Mark-Houwink方程参数测定

目的:获得均一性的条斑紫菜多糖,测定相应的Mark-Houwink方程参数。方法:条斑紫菜经超临界CO2脱脂、水提、醇沉、脱蛋白和DEAE-52柱层析分级分离,获得条斑紫菜多糖,凝胶渗透色谱法鉴定多糖的均一性并同时测定分子量,利用均一性的条斑紫菜多糖测定其Mark-Houwink方程参数,非均一性的条斑紫菜多糖进行验证。结果:分离到分子量分别为2.2×105、3.8×105和6.1×105的均一性条斑紫菜多糖的组分,确定了条斑紫菜多糖在水溶液中25℃下的Mark-Houwink方程的参数为:K=7.86×10-3,α=0.626。结论:经检验,测定的K和α的值可靠,可用于条斑紫菜多糖分子量的研究。     

条斑紫菜多糖与薏米仁多糖复配物的制备及其降血脂功效研究

本文通过对粗粮的筛选,选出最佳粗粮与浡海条斑紫菜进行复配,对其进行吸油量及脂肪酶等降血脂功能性指标的测定进行研究,首先响应面法优化条斑紫菜可溶性多糖的最佳超声波法提取工艺,再在9种粗粮中筛选出最适复配的粗粮种类,再以体外油脂吸附能力即吸油量为指标,筛选出条斑紫菜多糖和粗粮多糖的最佳复配比,最后使用复配物对小鼠脂肪酶进行抑制活性实验。结果表明:超声波法最佳提取条斑紫菜多糖的工艺为:料液比1:25,超声功率为150 W,超声温度60 ℃,超声时间30 min,获得水溶性多糖得率为4.24%±0.19%。筛选9种粗粮中得到薏仁米最适合与条斑紫菜多糖复配,且最佳复配比为1:1,吸油量最大为45.87%±5.27%,对小鼠脂肪酶抑制率为34.67%。本实验为研发新型渤海紫菜降血脂功能性食品提供理论依据。     

水不溶性条斑紫菜多糖酸水解的研究

小分子多糖水解产物能够克服大分子多糖溶解性差、生物利用率低的不足。文中对水不溶性条斑紫菜多糖的盐酸水解进行研究。结果表明,盐酸水解多糖的最适条件为,酸浓度0.050 mol/L,温度80℃,时间2.0h。水解产物中还原糖占总糖的0.24%,低聚糖产物可能为二糖或三糖。产物的红外光谱分析表明粉状样品是含硫酸基的β-糖苷键连接的吡喃型低聚糖,其具有糖环内醚结构。产物的紫外光谱分析表明粉状样品含有蛋白质,进一步分析表明样品含有蛋白质6.88%、总糖88.92%。     

条斑紫菜活性肽的制备及其功能性质研究

采用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,以水解度为评价指标,优化酶水解条件;研究条斑紫菜活性肽的溶解性、乳化性与乳化稳定性、起泡性与泡沫稳定性等功能性质.结果表明,3种酶解物都具有良好的溶解性且在等电点附近不沉淀,乳化性及其稳定性不如紫菜蛋白且随着pH升高而增强,酸性条件下起泡性较好,胰蛋白酶解物起泡性最强.     

冲泡过程对条斑紫菜多糖溶出的影响及其动力学研究

基于Fick第二定律,对颗粒状和片状条斑紫菜冲泡过程中多糖的溶出进行动力学分析。测定条斑紫菜冲泡液中多糖溶出随冲泡水温及时间的变化,建立颗粒状和片状条斑紫菜冲泡过程的多糖溶出动力学模型。结果表明在整个冲泡过程中,颗粒状紫菜中多糖溶出率均大于片状紫菜。对于颗粒状紫菜,冲泡水温的影响大于冲泡时间,以363.15 K(90℃)热水或373.15 K(100℃)沸水冲泡20 min,其多糖溶出率达到62.07%和64.05%。实验数据与动力学模型计算值吻合良好(R>0.933);紫菜多糖溶出表观速率常数和扩散系数均随冲泡温度的升高而增加;颗粒状和片状紫菜多糖溶出过程的活化能分别为5.984、1.406 k J/mol;多糖溶出相对萃余率符合指数模型。该动力学模型可为条班紫菜多糖最佳冲泡方式奠定理论基础。      

条斑紫菜多糖对人肝癌Bel7402抗肿瘤作用的初步研究

目的：研究条斑紫菜多糖对人肝癌Bel7402体外抗肿瘤作用。方法：采用MTT法观察条斑紫菜多糖体外对肝癌Bel7402的增殖抑制作用;荧光显微镜观察不同浓度条斑紫菜多糖诱导Bel7402细胞凋亡作用情况,RT—PCR检测survivin、Bax基因表达量的变化。结果：条斑紫菜多糖对人肝癌Bel7402细胞有显著地增殖抑制作用,能诱导Bel7402细胞凋亡,并且能上调Bax、降低Survivin表达。结论：条斑紫菜多糖体外有一定的抗肿瘤作用,并能促进BelZ402~wJ＆凋亡．其机制可能与激活Bax、抑制Survivin表达有关。     

反油酸对人脐静脉内皮细胞活力的影响

目的：观察反油酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖活力的影响。方法：采用50、100、200、400、600μmol/L 等5 个浓度的反油酸作用于人脐静脉内皮细胞,以正常组为阴性对照组,NaOH 组(200μmol/L)为阳性对照组,MTT 法和台盼蓝排斥实验检测其对内皮细胞的毒性。结果显示：反油酸组内皮细胞增殖活力明显低于正常组,且高浓度组(400、600μmol/L)对细胞增殖抑制率明显高于低浓度组(50μmol/L);而NaOH 组与正常组比较却无明显差异。此外,反油酸组活细胞率降低。结论：反油酸对内皮细胞有明显毒副作用,其生长抑制率与反油酸浓度和作用时间呈正相关。     

反式脂肪酸对血管内皮细胞损伤的影响

探讨不同反式脂肪酸促动脉粥样硬化(AS)的共同机制。通过采用反油酸和反亚油酸作用于人脐静脉内皮细胞,对其存活率、一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)生成量以及乳酸脱氢酶(LDH)渗出率的影响,比较不同反式脂肪酸对血管内皮细胞损伤的影响。结果表明：反式脂肪酸能抑制细胞增殖,可通过降低NOS活性影响NO分泌,能增加细胞LDH渗出率,从而影响细胞氧化应激水平,降低血管舒张能力。此外,实验发现反亚油酸对细胞损伤能力较反油酸强。     

圣草次苷的合成及其对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

以橙皮苷为原料,经三氯化铝-吡啶去甲基反应合成药用天然产物圣草次苷,产物通过1H核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）和13C NMR进行结构确证,并探究其对过氧化氢（H2O2）诱导氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞系（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）细胞的保护作用机制。结果表明：圣草次苷对HUVEC细胞无毒性作用,能显著提高氧化损伤HUVEC细胞的存活率（P＜0.05）,但无显著剂量效应;显著降低细胞中活性氧水平和丙二醛含量（P＜0.05）,显著提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等抗氧化酶的活力（P＜0.05）;显著上调Bcl-2/Bax蛋白比值和下调p53蛋白表达（P＜0.05）。结论：圣草次苷能有效阻止H2O2所致HUVEC细胞损伤,该作用与圣草次苷的抗氧化活性和抑制细胞死亡有关。     

苦荞蛋白源肽AFYRW对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的：探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法：采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测AFYRW对细胞增殖活力的影响;Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)、细胞内黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素（interleukin,IL）-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,e NOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase,iNOS）水平及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65的磷酸化水平;酶法...     

蓝莓花青素氯化锦葵色素在人脐静脉内皮细胞中的抗氧化作用

目的：研究氯化锦葵色素对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）中活性氧（reactive oxygen species,ROS）和黄嘌呤氧化酶-1（xanthine oxidase-1,XO-1）含量的影响,探讨氯化锦葵色素在血管内皮细胞中的抗氧化作用。方法：体外培养HUVEC,分别设定空白组（仅加入二甲基亚砜）,血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）刺激组（10－2 μmol/L）,终浓度为1、5、10 μmol/L氯化锦葵色素组,以及终浓度为1、5、10 μmol/L氯化锦葵色素联合AngⅡ刺激（10－2 μmol/L）组。采用荧光免疫法测定HUVEC内ROS含量的变化,酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定细胞上清液中可溶性XO-1含量的变化,Western blotting法检测细胞中XO-1含量的变化。结果：氯化锦葵色素处理HUVEC时,细胞ROS和XO-1含量降低;AngⅡ引起HUVEC内ROS和上清液中XO-1含量显著增加,各浓度氯化锦葵色素预处理能有效抑制ROS和XO-1含量的增加。结论：氯化锦葵色素在HUVEC中具有抑制ROS和XO-1的作用,从而达到抗氧化、保护内皮细胞的功效。蓝莓花青素氯化锦葵色素具有抑制ROS和XO-1的作用,为蓝莓的开发利用提供了理论依据。     

刺五加提取物对人脐静脉内皮细胞紫外线辐射损伤的防护作用

研究刺五加提取物对紫外线辐射损伤人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的影响。将进入对数生长期的HUVEC细胞分为空白对照组、辐射组、给药预防组(低、中、高剂量)和给药修复组(低、中、高剂量)。各组均接受相同辐射,给药预防组提前加入不同质量浓度的刺五加提取物孵化12 h。采用MTT法检测细胞存活率,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,WST法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,通过DNA-Ladder检测细胞凋亡。结果表明:经辐射后,给药预防组和给药修复组细胞存活率均有所提高,且呈质量浓度依赖性。与空白对照组相比,辐射组MDA含量升高,SOD水平下降;与辐射组比较,实验组给药后MDA含量降低,SOD水平升高。DNA-Ladder可以得到明显DNA凋亡条带。刺五加提取物能有效预防和修复辐射损伤的HUVEC细胞,且上述试验中给药预防组效果均优于给药修复组。     

酪蛋白水解物类蛋白反应修饰产物对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUPVC)氧化损伤的保护作用

本研究以Neutrase 0.8 L对酪蛋白进行水解,水解后的酪蛋白(HC)分别导入外源性氨基酸苯丙氨酸、组氨酸与脯氨酸进行类蛋白反应。所得的修饰产物(HCPHE、HCHIS和HCPRO)体外的DPPH?清除活性,羟自由基清除能力和还原能力与HC相比最大可分别提高30.51%、45.83%和42.81%(p0.05)。HUPVC与修饰产物单独预孵育24 h后经300μmol/L H2O2氧化损伤考察修饰产物对HUPVC的保护作用,CCK-8法测定细胞存活率结果表明修饰产物高剂量组的细胞成活率分别高于HC组7.86%、5.21%和10.52%(p0.05),与茶多酚(TP)给药组无明显差异(p0.05),并存在剂量依赖关系。与氧化损伤模型组相比,HCPHE、HCHIS和HCPRO可有效降低LDH渗出率,MDA生成量,SOD活力,降低效果强于同浓度的HC组,与此同时可使GSH-Rd,CAT的活力显著增强,然而细胞内GSH的含量变化不明显。综上所述,三种类蛋白反应修饰产物对H2O2诱导的HUPVC损伤具有很好的保护作用,且保护效果高于HC。     

几种美拉德反应产物的制备及对内皮细胞增殖的影响

以美拉德反应所制得的红烧香型和烤香型的牛肉、鸡肉和猪肉的美拉德反应产物为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)比色法,考察美拉德反应产物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。结果表明：红烧香型和烤香型的牛肉、鸡肉和猪肉的美拉德反应型产物均具有抑制HUVEC细胞增殖的作用,其中烤香型产物对HUVEC细胞增殖抑制效果较强。美拉德反应原料的差异会导致反应产物的差异,最终会对HUVEC细胞增殖抑制效果产生一定影响。