氨基胍对大鼠脊髓压迫伤后后肢运动功能的影响

OBJECTIVE: To study the effects of aminoguanidine (AG), the inhibitor of inducible nitric oxide synthase (NOS), on the recovery of rat hindlimb motor function after spinal cord injury and explore the possible mechanism. METHODS: Thirty rat models of spinal cord compression injury were established according to Nystrom's method. AG therapy was administered for 4 times at 1 h before and 8, 24, 36 h after the injury, and 24 h after the completion of the therapy, spectrophotography was performed to measure the content of NO and activity of NOS in the injured spinal cord, followed by flow cytometry for determining the apoptotic rate 48 h later. The evaluation of the hindlimb motor function recovery was conducted by electrophysiological method and by measuring the behavior scores. RESULTS: AG significantly decreased the NO content (from 2.2714+/-0.4239 micromol/g.pro to 0.8466+/-0.0477 micromol/g.pro, P <0.05) and NOS activity (from 0.3408+/-0.0228 U/mg pro to 0.2702+/-0.0148 U/mg pro, P <0.05) in the injured spinal cord. The apoptotic rats were also reduced (from 7.88% +/-0.79% to 3.10% +/-0.66%, P <0.05). Four weeks after the therapy, the behavior score of the rats improved from 7.1+/-4.5 to 17.3+/-4.7 (P <0.01), and the latency and amplitude of the motor evoked potentials improved from 0 ms to 8.89+/-0.91 ms and from 0 mv to 1.99+/-0.48 mv respectively, showing significant therapeutic effect of AG (P <0.05). CONCLUSION: AG can improve motor functions of injured spinal cord in rats, possibly resulting from decreased apoptotic cells of the neurons in the spinal cord in the early stages of the injury.     

选择性COX-2抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后运动诱发电位和后肢运动功能的影响

目的 探讨选择性COX-2抑制剂对大鼠脊髓损伤后运动诱发电位(MEP)和后肢运动功能的影响.方法 将24只Wistar大鼠随机分为对照组和选择性COX-2抑制剂组(COX-2组),每组12只.改良Allen方法致T11段脊髓不完全损伤,两组分别经尾静脉注射生理盐水0.5 mL、哌瑞昔布10 mg/kg, 分别于伤后即刻、30 min、1 h、4 h、8 h、1 d、3 d、5 d进行MEP测定, 伤后2周进行行为学检查(斜板实验+Gale评分).结果 大鼠脊髓损伤后,COX-2组MEP潜伏期延长和波幅降低的变化小于对照组(t=2.947～5.627,P<0.05); COX-2组后肢运动功能的变化优于对照组(t=2.538、2.863,P<0.05).结论 选择性COX-2抑制剂能有效地阻止潜伏期的延长,明显抑制波幅的降低,并促进后肢运动功能的恢复;MEP恢复早于后肢运动功能的恢复.     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响.方法成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),损伤后不同时间点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化;用免疫组化染色检测iN-OS的表达变化;原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞;采用开放场地试验BBB评分和斜板试验,评价神经功能.结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组.A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达,神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0.05).治疗组神经功能改善优于B组.结论二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡.     

氨基胍对糖尿病大鼠一氧化氮一氧化氮合酶及尿蛋白的影响

目的探讨氨基胍(AG)对早期糖尿病(DM)大鼠NO、一氧化氮合酶(NOS)活性及24 h尿蛋白排泄量(24 hUPE)的影响。方法选择健康清洁级Wistar大鼠40只,检测24 hUPE、血清NO、总一氧化氮合酶(tNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及结构型一氧化氮合酶(cNOS)活性等5项指标后,用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg制备成糖尿病大鼠模型,将其随机分为对照组和氨基胍组(AG组)。于8周末时再检测大鼠的上述5项指标并进行统计分析。结果对照组在8周末时24 hUPE、NO和iNOS均高于造模前(P<0.01或P<0.05),AG组:24 hUPE高于造模前(P<0.01),tNOSi、NOS、cNOS低于造模前(P<0.01或P<0.05)。8周末时AG组5项指标均低于对照组(P<0.05)。结论糖尿病患者早期应用AG可通过降低血NOS活性、NO生成量及其它机制,使24 hUPE减少,减轻肾脏的损害。     

大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后病理与后肢肌力的变化

目的 观察大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后脊髓病理与后肢运动功能的变化.方法 构建大鼠T9脊髓慢性压迫性损伤模型,30只Wistar大鼠按完全随机法分组:假手术对照组(5只)、慢性压迫组(5只)、减压组(20只),减压组分为减压后1周、2周、4周、6周,采用斜板试验,观察大鼠后肢功能;利用HE染色、NissⅠ染色和TUNEL染色方法,观察受压部位脊髓及临近上下节段的脊髓前角病理变化和细胞凋亡现象.结果 慢性压迫组大鼠斜板试验角度明显低于对照组(P＜0.01),脊髓减压后第1周,斜板角度显著提高(P＜0.01),随着时间延长后肢肌力逐渐增强;受压部位脊髓减压后早期病理变化无明显改变,减压后第2周细胞凋亡指数仍较高,为(24.31±4.73)％,与慢性压迫组差异无统计学意义(P＞0.05);临近上下节段脊髓减压后早期病理恢复可见,细胞凋亡率于减压后1周显著下降(P＜0.05),分别为(15.21±4.81)％和(16.21±3.98)％,以后继续降低.结论 大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后,其早期的后肢运动功能恢复,可能主要因受压部位临近上下节段脊髓功能代偿所致.     

抑制诱导性一氧化氮合酶对脊髓损伤的影响

目的探讨在动物脊髓损伤模型中,甲基强地松龙(methylprelnisolone,MP)与氨基胍(aminoguanidin,AG)分别及联合应用对诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide     

环孢素A对大鼠急性脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨急性脊髓损伤后应用环孢素A（CsA）对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及细胞凋亡的影响。方法108只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CsA治疗组。使用免疫组织化学EnVision法检测急性脊髓损伤大鼠损失节段iNOS表达,原位末端标记法（TUNEL法）标记细胞凋亡并计算凋亡指数。结果损伤组、CsA治疗组及对照组iNOS表达及凋亡指数经单因素方差分析,差异有统计学意义。结论CsA能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS的表达及细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤。     

实验性家兔脊髓损伤后后肢运动功能与肌肉运动诱发电位的关系

目的 了解实验性家兔脊髓损伤模型损伤后肢体肌力和肌肉运动诱发电位(MEP)之间的关系.方法 45只家兔随机分为打击组和对照组共9组,打击能量分别为0、50、75、100、125、150、175、200、250 gcf.打击后和第4周末记录实验兔双后肢肌力、MEP的潜伏期和波幅,并在第4周末取家兔脊髓固定,脊髓神经中丝(NF)免疫组化及病理形态观察,测量NF光密度,进行统计分析.结果 脊髓受到外伤打击后,术中MEP的表现是出现或消失,即"有或无",并与伤后实验兔后肢运动功能状态、术后皮质脊髓束神经微丝NF光密度相关.伤后4周实验兔的后肢MEP潜伏期延长程度与肌力下降呈线性相关,但其波幅与伤后肌力变化无相关.结论 在脊髓损伤中可以通过肌肉MEP的"有或无"作为判断脊髓损伤程度的指标.     

氨基胍对骨关节炎软骨细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的:研究氨基胍对骨关节炎软骨细胞诱导型一氧化氮合酶的影响。方法:将32只兔子随机分组,正常组不予任何处理,试验组及对照组行右后肢伸直位管型石膏固定造模,试验组腹腔内注射氨基胍硫酸盐溶液100mg/(kg·d),对照组每天腹腔内注射相同体积的生理盐水。分别于4周和8周处死动物,切取标本进行后续研究。结果:与对照组相比,试验组在大体形态、HE染色方面更接近于正常组、iNOS表达阳性细胞数较少。结论:氨基胍能有效减少iNOS表达,延缓骨性关节炎的病情发展。     

氨基胍对炎症性痛大鼠痛阈的影响

目的:氨基胍对炎症性痛大鼠痛阈的影响.方法:用热板法观测鞘内注射诱导型NOS抑制剂氨基胍(AG)对大鼠右后掌皮下注射甲醛诱发的炎症性痛及痛过敏过程中不同时段痛阈的影响.结果:抑制剂对皮下注射甲醛后第一期痛阈(5分钟内)并无显著变化,而第二期(10-75分钟)痛阈均明显升高.结论:在大鼠后掌注射甲醛所引起的痛及痛过敏过程中,诱导型NOS对二期痛阈影响显著.     

脊髓伤后早期NOS活性变化及其组织细胞来源

目的：探讨脊髓伤后早期伤段脊髓组织一氧化氮合酶(NOS)活性动态变化的规律及其组织细胞来源。方法：检测伤段脊髓组织中3H标记的精氨酸转化生成3H-瓜氨酸的量,了解脊髓压迫伤后0-60min伤段脊髓组织NOS的活性变化;并应用免疫组织化学方法研究其细胞定位。结果：脊髓压迫伤后,NOS活性明显增加,伤后5min达最高点,后又迅速下降,于伤后1h恢复至正常水平。免疫组化可见脊髓灰质中间外侧细胞柱、中央管周围及背角和腹侧角有大量的NOS-Ⅰ型阳性细胞,而未见NOS-Ⅲ型阳性细胞。结论：在脊髓伤后1h内,伤段脊髓组织NOS活性迅速而短暂升高;其来源可能主要是脊髓灰质的神经细胞。     

继发性脊髓损伤中一氧化氮作用机制的探讨

目的：探讨一氧化氮在继发性脊髓损伤中的作用及机制。方法：采用闭合性液压损伤装置致大鼠脊髓（Ｔ９）中度损伤，分别静脉注射生理盐水及一氧化氮合成酶抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ（８，２０，４０ｍｇ／ｋｇ），利用多功能生理仪、手术显微镜、激光多谱勒血流仪、神经肌电图仪分别监测损伤前及后不同时间点平均动脉压、软脊膜小动脉直径、局部血流量、脊髓诱发电位变化、神经行为学评分、组织病理学改变。结果：８ｍｇ／ｋｇＬ－ＮＡＭＥ对大鼠全身血流动力学影响不大，但可促进神经功能恢复；２０ｍｇ／ｋｇＬ－ＮＡＭＥ组神经功能无改善；４０ｍｇ／ｋｇＬ－ＮＡＭＥ明显升高平均动脉压、收缩软脊膜小动脉（９０ｍｉｎ时直径减少１０％）、减少局部血流量（９０ｍｉｎ时减少２２％），局部离子分布紊乱、水肿严重，神经功能障碍不能恢复、甚至加重，体重进行性减轻，死亡率增加。结论：提示一氧化氮在继发性脊髓损伤中，既可起到保护作用又可以起到破坏作用。适当控制一氧化氮生成，有利于组织保护及神经功能恢复。     

重组可溶性补体受体I型对大鼠急性脊髓损伤后神经功能的影响

目的 :探讨重组可溶性补体受体 I型 ( s CR1 )对大鼠急性脊髓损伤后神经功能的影响。方法 :采用改良 Allen重物打击法制成 SD大鼠脊髓急性损伤模型 ,观察 s CR1组与生理盐水 ( NS)组在伤后 1、3、7、1 4、2 1 d时间点损伤组织 C3c、C9、CD5 9阳性表达的部位及时程 ,采用斜板实验及 BBB评分法评定大鼠下肢神经功能。结果 :s CR1组在伤后各个时间点C3c、C9阳性表达均明显轻于 NS组 ,有非常显著性差异 ;s CR1组在伤后 1、3d时间点 CD5 9的表达明显轻于 NS组 ,有非常显著性差异 ,伤后 7d两组间有显著性差异 ,伤后 1 4、2 1 d两组间无显著性差异 ;s CR1组在伤后 7、1 4、2 1 d时间点大鼠下肢神经功能明显优于 NS组 ;结论 :重组可溶性补体受体 I型可通过抑制补体系统激活机制对急性脊髓损伤后的神经功能发挥显著性的保护作用。     

脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义

目的探讨脊髓损伤后早期伤段脊髓组织一氧化氮合酶（NOS）活性的动态变化规律。方法通过伤段脊髓组织催化［3H］标记的精氨酸转化生成［3H］标记的瓜氨酸的量,测定脊髓压迫伤后0～60min伤段脊髓组织NOS的活性。结果脊髓压迫伤后,NOS活性明显增加,伤后5min达最高点;然后又迅速下降．于伤后1h恢复至正常水平。结论在脊髓伤后1h内,伤段脊髓组织NOS活性迅速而短暂升高。     

大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达

目的研究大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的变化规律。方法建立大鼠脊髓压迫伤模 型,用逆转录聚合酶链反应法测定伤段脊髓组织 ｅＮＯＳ ｍＡＮＡ的表达情况。结果正常脊髓组织内存在 ｅＮＯＳ ｍＲＮＡ 的表达,脊髓压迫伤后 ｅＮＯＳ ｍＲＮＡ表达迅速增强,在伤后 ６ ｈ达到高峰。结论 ｅＮＯＳ可参与脊髓组织正常的生理调 节,并可能在继发性脊髓损伤过程中起保护作用。     

微RNA对脊髓损伤小鼠恢复的影响

目的 研究微RNA(miRNA)对脊髓损伤模型小鼠恢复的影响。方法 查询、预测靶基因和miRNA并在293T细胞中验证;构建小鼠脊髓损伤模型并过表达miRNA,进行BBB评分,观察脊髓形态,检测标记基因及靶基因的表达。结果 miR-9、miR-124和miR-125在体外都能引起3个及以上靶基因的下调;miR-9和miR-124组小鼠脊髓钳夹伤口恢复较好;miR-9组小鼠运动功能恢复比对照组好,miR-124组比对照组差;miR-9组小鼠GFAP下调,MAP2和NeuN上调,靶基因GLIS3和CYBRD1下调。结论 脊髓损伤小鼠模型中,miR-9可能通过靶向下调GLIS3和CYBRD1促进脊髓损伤的修复。     

脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的　探讨大鼠脊髓损伤后诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）基因表达变化规律。方法参考Ｎｙｓｔｒｏｍ方法建立的大鼠脊髓压 迫伤模型,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定伤段脊髓组织ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达情况。结果正常脊髓组织内未 见ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达,脊髓压迫伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,伤后２４ｈ达到高峰。结论ｉＮＯＳ未参与脊髓 组织正常生理调节,脊髓损伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,提示ｉＮＯＳ参与了继发性脊髓损伤过程。     

脊髓分级压迫损伤病理组织学改变与磁刺激运动诱发电位相关性研究

目的：探讨脊髓分级压迫损伤的病理改变与磁刺激诱发电位之间的相关性．方法：选用４１只成年家猫,随机分为对照组,轻、中、重度损伤４组．应用磁刺激运动诱发电位（ＭＥＰｓ）对脊髓压迫前、压迫后３０ｍｉｎ,６ｈ,１ｗｋ,２ｗｋ及４ｗｋ做动态观察,观察血管、神经细胞、神经纤维及中央管的病理改变．结果：轻和中度损伤的病变是可逆的,而重度损伤导致神经细胞的不可逆改变和运动功能丧失．轻度损伤ＭＥＰｓ潜伏期在损伤后３０ｍｉｎ及６ｈ比术前分别延长０．３７倍和０．３８倍,至４ｗｋ复原;中度损伤ＭＥＰｓ潜伏期延长０．７７倍和０．８１倍,重度组延长１．３２２倍和１．３６１倍．中度损伤组有部分恢复而重度组无明显变化．结论：脊髓分级压迫损伤病理组织学变化与运动功能和ＭＥＰｓ之间在统计学上具有明显相关性．     

诱导型一氧化氮合酶反义核酸在脊髓损伤后细胞凋亡和p-p38 MAPK信号转导通路中的作用

目的研究一氧化氮合酶(NOS)反义核酸(ASODN)对脊髓损伤后NOS表达、细胞凋亡、信号转导通路的影响。方法设计并合成诱导型NOS反义寡脱氧核苷酸(ASODN-iNOS)及诱导型NOS无义寡脱氧核苷酸(NSODN-iNOS),微量注入大鼠蛛网膜下腔并制备成脊髓压迫伤动物模型。伤后6 h分别用RT-PCR检测iNOS mRNA表达及用Western blotting检测组织中磷酸化丝裂原激活蛋白激酶(p-p38 MAPK)的变化,用双标染色流式细胞术检测伤后72 h细胞凋亡情况。损伤对照组鞘内注射不含核酸的溶液成分。结果脊髓损伤后组织中存在iNOS的表达和p-p38 MAPK变化;损伤后局部组织中存在明显的细胞凋亡;ASODN-iNOS可以抑制iNOS的表达,并可以显著抑制损伤后p-p38 MAPK的表达和细胞凋亡的发生,与损伤对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论ASODN-iNOS可以抑制脊髓损伤后iNOS的表达和细胞凋亡,ASODN的这种作用可能与p-p38 MAPK信号转导通路有关。