胰腺癌组织SPARC基因CpG岛甲基化状态及临床意义

目的 检测胰腺癌SPARC基因CpG岛的甲基化状态及其与临床病理参数的关系.方法 收集17例胰腺癌及相应癌旁组织、6例CP和6例正常胰腺组织以及6例健康成人外周血液标本,抽提DNA,进行亚硫酸氢盐修饰,然后行甲基化特异性PCR,检测SPARC基因第一外显子区CpG岛的甲基化状态,并分析与肿瘤病理参数的关系.结果 健康人外周血白细胞DNA中SPARC基因第一外显子区CpG位点均无甲基化.正常胰腺、CP、胰腺癌及相应癌旁组织SPARC基因第2、3、4、5、6、7 CpG位点的甲基化率分别为61.6%、47.1%、37.5%、24.7%;第1,8、9、10、11、12 CpG位点的甲基化率分别为52.0%、28.7%、16.7%和0.胰腺癌SPARC基因甲基化率与正常胰腺、CP比较均差别非常显著(P＜0.001),与相应癌旁组织比较差别不显著.胰腺癌SPARC基因CpG岛甲基化与患者性别、年龄、危险诱因(如长期吸烟或饮酒、CP)、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移等均无显著差异.结论 胰腺癌SPARC基因第一外显子区CpG岛为高甲基化状态,可能为胰腺癌发生、发展的早期事件.     

非小细胞肺癌11个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化的研究

目的观测11个基因在非小细胞肺癌中的甲基化谱,探讨肺癌基因诊断的新途径.方法应用甲基化特异性的PCR（methyl-specific PCR,MSP）.方法检测甲基化率,回收产物测序.结果11个基因中有6个基因在癌组织中的甲基化率均＞40%并且高于癌旁组织,6个基因的甲基化率分别是APC 61%,RASSF1a 55%,p73 45%,p16INK4a 43%,CDH13 43%及RAR-β 41%,＞65岁组RASSF1a、p16INK4a和RAR-β甲基化率高于≤65岁组;吸烟史组APC、RASSF1a、p16INK4a和CDH13的甲基化率高于无吸烟史组;腺癌组APC、CDH13和RAR-β甲基化率高于鳞癌组,而鳞癌组p16INK4a甲基化率高于腺癌组;RASSF1a和p16INK4a甲基率随TNM 临床分期而逐渐增加.结论6个基因甲基化率的发生具有肿瘤特异性,并且相关基因的甲基化与NSCLC患者的病理生理密切相关,我们的研究为早期诊断NSCLC提供帮助.     

甲基化CpG结合蛋白2在胰腺癌及癌旁组织中的表达及临床意义

目的:分析甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)在胰腺癌及癌旁组织中的表达及其对预后的评估价值。方法:采用组织芯片和免疫组织化学染色法检测59例胰腺癌组织和53例癌旁正常胰腺组织中MeCP2的表达,分析MeCP2表达水平与患者临床病理特征的关系,应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox回归法分析MeCP2表达对...     

肺癌患者Ras相关区域家族1A基因启动子异常甲基化的检测

目的探讨肺癌组织和外周血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子异常甲基化状况及其在肺癌诊断中的价值。方法用甲基化特异PCR方法对肺癌患者癌组织、癌旁组织及相应血浆、BALF进行RASSF1A异常甲基化检测。结果45例肺癌组织中,RASSF1A基因启动子异常甲基化率为53.33%(24/45),相应血浆中RASSF1A的甲基化检出率为28.89%(13/45),BALF检出率为42.22%(19/45),而癌旁组织中的RASSF1A启动子甲基化检出率为13.04%(3/23)、正常对照血浆、非肺癌患者BALF中未检出甲基化,只检出未甲基化的RASSF1A。血浆、BALF中甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.01);但与患者年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类的差异无统计学意义(P>0.05)。结论血浆、BALF中RASSF1A基因异常甲基化改变的检测在肺癌的特异诊断等方面有一定的应用价值。     

结直肠癌CpG岛甲基化表型的研究进展

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的恶性肿瘤之一,是由遗传学和表观遗传学改变逐渐积累导致的.随着一类被称为CpG岛甲基化表型(CpG island methylator phenotype,CIMP)的CRC被发现,表观遗传学修饰在CRC发病中的作用就受到了越来越多的重视.CIMP是一类基因组中有高比例的基因启动子区发生了DNA高甲基化的CRC.目前研究显示CIMP具有多个分子水平的特征,而且CIMP与多个临床特征显著相关,但是还不清楚CIMP的具体致病原因和发病机制.CIMP在治疗上的预后和反应与其他CRC存在很大差异,但是目前没有被广泛认可的鉴定CIMP的生物标记,从而阻止了CIMP用于指导临床上CRC的个体化治疗.     

人肝癌细胞系Slit/Robo启动子甲基化状态及基因表达的研究

目的 研究Slit/Robo信号通路相关基因Slit1、Slit2、Slit3和Robo1、Robo3在多种人肝癌细胞系中的表达及甲基化状态,探讨与肝癌发生和发展的关系. 方法提取9种人肝细胞癌细胞株(Hep3B、HepG2、PLC/PRF/5/PRF/5、SMMC-7721、BEL-7402、MHCC97-H,MHCC97-L、LM3、LM6)及对照细胞株L02的基因组DNA和总RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应技术和甲基化特异性聚合酶链反应技术检测Slit1、Slit2,Slit3和Robo1,Robo3基因的基因表达水平与启动子甲基化状态.实验数据应用Paired t检验. 结果 Slit1、Slit2、Slit3基因除个别细胞株外,在不同转移潜能细胞株中均发生了DNA甲基化,同时Slit1和Slit3在mRNA水平几乎均不表达,Slit2基因表达程度在不同转移潜能的细胞株之间存在差异,随着转移潜能的增加表达大致呈下降趋势.作为Slit2受体的Robo1基因在10株肝癌细胞株中均发生甲基化修饰,但除在SMMC-7721、BEL-7402、L02不表达外,其余7种细胞株均有表达.Robo3基因相关CpG岛在9种肝癌细胞株中均未发生甲基化,同时其在mRNA水平均无表达. 结论 Slit/Robo可能在肝癌发生和发展中发挥作用.而Robo3则在肝癌中不发生表达而且其表达沉默可能不受甲基化方式调控.     

nm23-H1基因CpG岛甲基化与食管癌的关系

肿瘤细胞普遍存在DNA甲基化模式的改变,DNA甲基化异常包括原癌基因低甲基化和抑癌基因高甲基化。近年来研究结果表明,在食管癌发生过程中同样存在相关抑癌基因启动子区甲基化导致的基因表达的紊乱,其中由DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）和去甲基化酶的活性改变导致的抑癌基因CpG岛超甲基化的研究,已成为食管癌发病机制研究中的热点之一。     

肺癌细胞株抑癌基因启动子CpG岛甲基化与转录的关系

基因特别是抑癌基因肩动子区CpG岛甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展关系的研究正受到越来越多的重视。本研究用甲基化特异性的PCR(MSP)测NSCLC细胞株中12个肿瘤相关基因的甲基化发生情况，并观察甲基化与mRNA转录之间的关系，以进一步阐明抑癌基因甲基化在NSCLC中的作用。     

胰腺癌细胞株中Elastase 3B基因启动子异常甲基化研究

目的探讨Elastase 3B（ELA3B）基因在胰腺癌中低表达的分子机制。方法应用RT-PCR方法检测2例正常胰腺组织和BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1、SW1990 5株胰腺癌细胞株ELA3B基因表达。利用去甲基化试剂5-氮-2′-脱氧胞嘧啶（DAC）处理细胞株,再检测ELA3B基因表达,并用甲基化特异性PCR检测和测序进行验证。结果ELA3B在正常胰腺组织中表达,而在BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1和SW1990 5株胰腺癌细胞株中均无表达。DAC处理后,BxPC、PaTu8988、PANC1和SW1990 4株胰腺癌细胞株表达ELA3B,而CFPAC仍不表达。正常胰腺组织和PANC1 ELA3B基因部分甲基化,而其他4株胰腺癌细胞株则高甲基化。结论ELA3B基因启动子的高甲基化是导致该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一。     

Aberrant methylation frequency of TNFRSF10C promoter in pancreatic cancer cell lines

BACKGROUND:A growing body of evidence suggests that many tumors are initiated by both epigenetic abnormalities and gene mutations,which promote tumor progression. Epigenetic abnormalities include changes in DNA methylation and in the modification of histones.This study aimed to assess the status of methylation in the CpG island(CGI)of the tumor necrosis factor receptor superfamily member 10c(TNFRSF10C) with combined bisulfite restriction analysis(COBRA)and to evaluate its role in the progression of pancreat...     

胃腺癌凝血栓蛋白1基因异常甲基化及其临床意义

目的　探讨凝血栓蛋白 1(THBS1)基因CpG岛异常甲基化与胃腺癌 (GAC)发生的关联。方法　应用甲基化特异性PCR检测技术 ,检测 82例GAC患者肿瘤组织 ,30例十二指肠球部溃疡 (对照组 )、30例慢性胃炎伴肠上皮化生或异型增生患者胃窦黏膜组织中 ,THBS1基因启动子CpG岛甲基化分布情况。结果　THBS1基因启动子CpG岛甲基化在对照组 (6 .7% )中的频率明显低于胃炎组(2 6 .7% ,χ2 =4 .32 ,P =0 .0 38)和胃癌组 (4 7.6 % ,χ2 =16 .2 ,P <0 .0 0 1) ,在胃炎组与胃癌组之间的频率差异也有显著性 (χ2 =4 .14 ,P =0 .0 4 2 ) ,老年胃癌患者 (6 3.6 % )中的频率明显高于非老年 (36 .7% ,χ2 =5 .72 ,P =0 .0 17) ,在TNMⅢ和Ⅳ期肿瘤 (6 6 .7% )组织中的频率明显高于Ⅰ期 (36 .8% )或Ⅱ期(36 .4 % ,χ2 =6 .93,v =2 ,P =0 .0 31) ,而肿瘤部位之间、Lauren分型肿瘤之间及不同分化程度肿瘤之间 ,THBS1基因甲基化率的差异无显著性。结论　THBS1基因启动子CpG岛甲基化可能与胃腺癌的发生有关 ,且以老年患者及Ⅲ和Ⅳ期肿瘤多见。     

Examination of ATM,BRCA1, and BRCA2 promoter methylation in patients with pancreatic cancer

BackgroundPancreatic cancer is a lethal disease with a poor 5-year survival rate. Pathogenic germline variants in the coding regions of ATM, BRCA1, and BRCA2 are found in up to 4.8% of pancreatic cancer patients. Germline promoter methylation and gene silencing arising from a germline variant or through other mechanisms have been described as a cause of tumor suppressor gene inactivation.MethodsWe measured the level of promoter methylation of the ATM, BRCA1, and BRCA2 genes in peripheral blood lymphocytes from 655 patients with pancreatic cancer using real-time PCR.ResultsNo evidence of germline promoter methylation of any of these genes was found. Promoter methylation levels were minimal with no patient having promoter methylation greater than 3.4%, 3.3%, and 7.6% for ATM, BRCA1 and BRCA2, respectively, well below levels found in patients who have inherited promoter methylation (∼50%).ConclusionsWe found no evidence of germline promoter methylation for the pancreatic susceptibility genes ATM, BRCA1 and BRCA2 in patients with pancreatic cancer. This study reveals that constitutive germline methylation of promoter CpG islands is rare in pancreatic cancer.     

CpG ODN对胰腺癌细胞PANC1吉西他滨化疗敏感性的影响

目的 观察用Toll样受体9（TLR9）激动剂CpG ODN2216处理后胰腺癌PANC1细胞对吉西他滨化疗敏感性的影响.方法 采用免疫荧光化学法及蛋白质印迹法检测胰腺癌PANC1细胞TLR9蛋白的表达,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测CpG ODN2216处理后PANC1细胞对不同浓度吉西他滨敏感性的变化.结果 胰腺癌PANC1细胞高表达TLR9蛋白.CpG ODN2216±吉西他滨组的PANC1细胞对吉西他滨的半数抑制剂量（IC50）为（0.28 ±0.13） mg/L,吉西他滨组PANC1细胞的IC5o为（1.23±0.14） mg/L,两组差异有统计学意义（P＜0.01）.0.01、0.1、1、10 mg/L吉西他滨干预经CpGODN2216处理的PANC1细胞的生长抑制率分别为（34.1±1.3）％、（43.5±2.7）％、（76.3±2.5）％、（95.3±2.2）％;干预未经CpG ODN2216处理的PANC1细胞的生长抑制率分别为（14.5±0.9）％、（23.5±1.1）％、（44.8±1.4）％、（63.6±1.8）％,两组差异均有统计学意义（P值均＜0.01）.结论 TLR9激动剂CpG ODN2216能增加人胰腺癌细胞PANC1对吉西他滨的敏感性.     

间隙连接蛋白43对胰腺癌细胞株BxPC3凋亡的作用及其机制研究

目的研究间隙连接蛋白43（Cx43）在胰腺癌细胞凋亡中的作用,并探讨其机制。方法采用脂质体2000法将pcDNA—Cx43、pcDNA—Cx43N、空质粒pcDNA3．0、siRNA—Cx43和对照siRNA-NC分别转染BxPC3细胞。Western blotting检测细胞Cx43蛋白表达、细胞色素C（Cyt C）含量;流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位;荧光分光光度计检测细胞Caspase-9和Caspase-3活性;染料传递法测定细胞间间隙连接（GJ）。结果Cx43转染BxPC3细胞后,Cx43蛋白表达明显上调,细胞凋亡从空质粒转染组的（6．35±0．43）％增加到（14．29±1．24）％,经H2O2处理后,从（20．34±2．47）％增加到（31．27±2．56）％（P〈0．05）,同时线粒体膜电位下降,CytC从线粒体释放增多,Caspase蛋白酶活性增加;而siRNA43干扰细胞后,细胞凋亡从（7．42±0．47）％减少到（5．19±1．37）％,经H2O2处理后,从（19．43±1．71）％减少到（11．67±1．97）％（P〈0．05）,线粒体膜电位去极化,CytC从线粒体释放减少,Caspase酶活性下调。细胞间间隙连接指数在无GJ抑制剂B—GA情况下从对照组的14．52±0．57增加到pcDNA—Cx43转染组的23．05±3．84,在存在β—GA情况下从1．70±0．24增加到3．84±0．45（P〈0．05）,但细胞凋亡率改变无显著差异。结论Cx43可通过线粒体凋亡途径促进BxPC3细胞凋亡,Cx43调节细胞凋亡存在间隙连接以外的机制。     

Association between Ras association domain family 1A promoter methylation and hepatocellular carcinoma: A meta-analysis

AIM:To assess diagnostic accuracy of Ras association domain family 1A(RASSF1A)promoter methylation in body fluids(serum,plasma and whole blood)for hepatocellular carcinoma(HCC).METHODS:Relative information about study characteristics and incidence of RASSF1A methylation was collected.Quality of all included studies was evaluated by Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies-2.Sensitivity and specificity were pooled using a randomeffect model,and a summary receiver operating characteristic curve was used to demonstrate the overall diagnostic performance.Positive likelihood ratio(PLR),negative likelihood ratio(NLR),and diagnostic odds ratio(DOR)with 95%CI were also calculated.Meta-regression was applied to analyze observed heterogeneity,and Deeks’test was performed to detect publication bias.RESULTS:After a systematic literature review,seven studies with a total of 302 cases of HCC and 250 cases of chronic liver diseases were included in the analysis.The pooled sensitivity and specificity were 0.70(95%CI:0.49-0.85)and 0.72(95%CI:0.54-0.85),respectively.The PLR was 2.51(95%CI:1.64-3.86),NLR was 0.41(95%CI:0.25-0.68),and DOR was 6.13(95%CI:3.17-11.84).Theχ2values of sensitivity,specificity,PLR,NLR and DOR were 59.41(P<0.001),50.50(P<0.001),17.40(P=0.010),31.24(P<0.001)and80.51(P<0.001),respectively.The area under the curve was 0.77(95%CI:0.73-0.81).Three factors were analyzed by univariate meta-regression and none was significant to interpret the observed heterogeneity(P>0.05).No significant publication bias was detected by Deeks’test(P=0.346).CONCLUSION:We showed the potential diagnostic value of RASSF1A methylation in body fluids in HCC patients and it may improve diagnostic accuracy combined with theα-fetoprotein test.     

间隙连接蛋白43对胰腺癌细胞株BxPC3凋亡的作用及其机制研究

目的 研究间隙连接蛋白43(Cx43)在胰腺癌细胞凋亡中的作用,并探讨其机制.方法 采用脂质体2000法将pcDNA-Cx43、pcDNA-Cx43N、空质粒peDNA3.0、siRNA-Cx43和对照siRNA-NC分别转染BxPC3细胞.Western blotting检测细胞Cx43蛋白表达、细胞色素C(Cyt C)含量;流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位;荧光分光光度计检测细胞Caspase-9和Caspase-3活性;染料传递法测定细胞间间隙连接(GJ).结果 Cx43转染BxPC3细胞后,Cx43蛋白表达明显上调,细胞凋亡从空质粒转染组的(6.35±0.43)%增加到(14.29±1.24)%,经H_2O_2处理后,从(20.34 ±2.47)%增加到(31.27±2.56)%(P<0.05),同时线粒体膜电位下降,Cyt C从线粒体释放增多,Caspase蛋白酶活性增加;而siRNA43干扰细胞后,细胞凋亡从(7.42±0.47)%减少到(5.19±1.37)%,经H_2O_2处理后,从(19.43±1.71)%减少到(11.67±1.97)%(P<0.05),线粒体膜电位去极化,Cyt C从线粒体释放减少,Caspase 酶活性下调.细胞间间隙连接指数在无GJ抑制剂B-GA情况下从对照组的14.52±0.57增加到peDNA-Cx 43转染组的23.05±3.84,在存在β-GA情况下从1.70±0.24增加到3.84±0.45(P<0.05),但细胞凋亡率改变无显著差异.结论 Cx43可通过线粒体凋亡途径促进BxPC3细胞凋亡,Cx43调节细胞凋亡存在间隙连接以外的机制.