肝细胞癌免疫组化染色中内源性生物素的封闭

免疫组化染色中，人们对内源性过氧化物酶已有了充分认识，并采用了有效的过氧化氢法消除组织中的过氧化物酶活性，从而达到避免非特异性染色的目的；然而对内源性生物素(EABA)产生的影响知之甚少，几乎没有采取任何防范的措施。其实，在某些正常组织或肿瘤组织中，内源性生物素对免疫组化染色的影响程度和范围远高于内源性过氧化物酶。作者以蛋清液封闭肝细胞癌组织中的内源性生物素，效果良好，现介绍如下。     

免疫组化单克隆抗体标记(ABC 法)在淋巴瘤科研中的应用

免疫组织化学技术发展较快,近年来国内外将此法先后运用到临床病理诊断和科研工作中。我们在1982年以来的淋巴瘤科研中,应用双 PAP 法标记 B 细胞性淋巴瘤,收到较好的效果。最近应用单克隆抗体(ABC 法)来标记T 细胞性淋巴瘤也获得成功。ABC 法(Avidin—Biotin—Complexmethod)是应用从蛋清中提取的一种糖蛋白—卵白素(Avidin)和生物素之间的相互作用,卵白素有四个可与生物素(biotin)结合的部位,两者有很强的亲和性;生物素先与抗体或     

生物素亲和素系统在ECP的实验效能

目的:评估生物素亲和素系统检测嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)双抗夹心ELISA试验中的应用。方法:建立直接包被抗体的检测法、先包被生物素的检测法和先包被亲和素的检测法,比较3种方法的灵敏度、不准确度和变异度,并用3种方法检测皮肤病患者和正常对照人群的ECP水平。结果:直接包被抗体的ECP检测法线性范围为2.5~200μg/L,灵敏度为2.75μg/L,不准确度为11.5%;先包被生物素的检测法线性范围为2.5~500μg/L,灵敏度为2.61μg/L,不准确度为10.9%;先包被亲和素的检测法线性范围为2.5~500μg/L,灵敏度2.68μg/L,不准确度为11.9%;3种方法的重复性差异无统计学意义;先包被亲和素的检测法最稳定,直接包被抗体的检测法次之,先包被生物素的检测法最不稳定;3种方法及ADL双抗夹心检测试剂盒检测患者及正常对照者血清ECP水平,差异无统计学意义。结论:生物素亲和素包被可提高实验的灵敏度、线性范围,减少抗体用量,节约抗体包被时间。     

The Application of Biotin-Avidin System in Double-Antibody Sandwich ELISA Method for Eosinophilia Cationic Protein

目的:评估生物素亲和素系统检测嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)双抗夹心ELISA试验中的应用.方法:建立直接包被抗体的检测法、先包被生物素的检测法和先包被亲和素的检测法,比较3种方法的灵敏度、不准确度和变异度,并用3种方法检测皮肤病患者和正常对照人群的ECP水平.结果:直接包被抗体的ECP检测法线性范围为2.5～200 μg/L,灵敏度为2.75 μg/L,不准确度为11.5％;先包被生物素的检测法线性范围为2.5～500 μg/L,灵敏度为2.61 μg/L,不准确度为10.9％;先包被亲和素的检测法线性范围为2.5～500μg/L,灵敏度2.68 μg/L,不准确度为11.9％;3种方法的重复性差异无统计学意义;先包被亲和素的检测法最稳定,直接包被抗体的检测法次之,先包被生物素的检测法最不稳定;3种方法及ADL双抗夹心检测试剂盒检测患者及正常对照者血清ECP水平,差异无统计学意义.结论:生物素亲和素包被可提高实验的灵敏度、线性范围,减少抗体用量,节约抗体包被时间.     

生物素化壳聚糖微球的体外抗癌活性

目的　研究一套有预定位及肿瘤导向作用的药物载体系统。方法　以生物素化无唾液酸胎球蛋白为分子识别系统,与肝癌细胞特异性结合,将包封有5-Fu的壳聚糖微球生物素化,作为药物载体,通过生物素-亲和素系统将二者桥连,用“三步法”研究微球体外抗肿瘤作用。结果　亲和素-生物素化受体介导的生物素化壳聚糖微球能与体外培养的肝癌细胞特异结合并有显著的抗癌作用。结论　生物素化微球-亲和素-生物素化受体(或单克隆抗体)系统可望在体内有预定位及肿瘤靶向作用,有广泛的应用前景。     

免疫组织化学染色中应注意的问题

免疫组织化学 (免疫组化 )是一门免疫学与病理形态学相结合的新兴学科 ,是现代生物医学的一项重要方法学 ,具有操作简单、敏感性高、特异性强等特点 ,已经广泛应用于临床病理及其相关学科的研究之中。免疫组化技术是一项复杂的生物技术 ,对每一个抗体标记物都有独自特定的染色方法 ,目的是能够明确各种组织起源 ,判定组织中是否存在特异抗原。免疫组化染色是以酶为标记物 ,可分为直接法、间接法、补体法、免疫酶桥法、免疫酶双桥法、过氧化物酶抗氧化酶法(PAP)和双PAP法等。以酶标的葡萄球菌A蛋白、生物素卵白素酶标记复合物 (ABC)以及…     

用ELISA法测定基因转殖酵母菌发酵液中生物素

目的:采用一种简便、高灵敏度、高准确度的ELISA方法,对基因转殖可制造生物素的酵母菌发酵液中生物素含量的直接定量。方法:采用猪肺炎霉浆菌包被酶标板,再依次结合兔抗猪肺炎霉浆菌血清及生物素化羊抗兔IgG,形成生物素的固定相,用竞争抑制法测定生物素含量,各步实验条件均经优化。结果:测定的线性范围为 50～2 000ng/L,灵敏度I C_(50)=410ng/L,检测限为83 ng/L,线性相关系数r=-0.990;样品液1:1000稀释后,可消除基质效应的影响直接测定,加标平均回收率为101.13％。结论:用本文ELISA法测定基因转殖酵母菌发酵液中生物素的方法简便,结果可靠。     

SP法与MaxVision法免疫组织化学染色的对比观察

免疫组织化学技术在我国开展已有二十多年,随着这项技术的不断改进和完善,已被病理学工作者广泛应用,目前已成为病理学科的常规行业技术,为病理诊断提供可靠的诊断依据.免疫组化染色方法 有多种,如SP法、ABC法、PAP法、SABC法、二步法等,我们对常用的SP三步法和MaxVision二步法进行比较,探讨其特异性和敏感性,为免疫组化染色提供更好的选择方法 .     

不同引物标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中应用比较

目的比较不同标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中的影响。方法分别采用地高辛、荧光素和生物素标记引物,建立地高辛-抗地高辛、荧光素-抗荧光素和生物素-亲和素酶呈色法芯片检测结核分支杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药基因方法,同时用3种方法检测46株结核分支杆菌临床分离株、19种非结核分支杆菌标准株、9种非分支杆菌标准株和结核分支杆菌H37Rv标准株,并对3种方法的敏感性和重复性进行比较。结果经3种方法平行检测,46例结核分支杆菌临床分离株结果完全一致;19种非结核分支杆菌标准株、9种非分支杆菌标准株结果均为阴性,结核分支杆菌H37Rv标准株结果均为野生型;地高辛系统和荧光素系统敏感度为2.0×103拷贝/ml,生物素-亲和素系统敏感度为2.0×104拷贝/ml;3种方法均有良好的重复性。结论3种方法均具有良好的重复性和特异性,生物素系统敏感度略低于地高辛系统和荧光素系统。     

应用亲和素——生物素——过氧化物酶复合物技术检测组织细胞中的禽呼肠孤病毒抗原

应用亲和素——生物素——过氧化物酶复合物(ABC)技术检测经不同途径接种ARV的鸡只,结果表明ARV抗原广泛分布于内脏实质器官、肠道、腱鞘和滑膜。在接种后4周除腱鞘和滑膜外,都检不到病毒抗原的存在,而这两种组织到试验结束时(60d)仍为阳性,感染鸡血液涂片的ABC检测结果均为阴性,ABC技术比病毒分离法更敏感。     

结核分枝杆菌生物素合成途径是抗结核菌药物开发的新靶点

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)感染导致的结核病仍然是全球主要的公共卫生难题。生物素即维生素H是脂肪酸生物合成、糖异生及氨基酸代谢等途径所需的辅因子。结核分枝杆菌无法从外界吸收生物素,生物素的合成是分枝杆菌生物素的唯一来源。不同于经典的BioC-BioH、BioI-BioW途径及非经典的BioZ途径,结核分枝杆菌早期阶段通过“BioC-BioH(2)”途径合成生物素。本综述重点总结结核分枝杆菌独特的生物素合成途径及其关键基因,尤其是该途径及生物素依赖性羧化酶对结核病一二线药物的响应,以及靶向生物素合成的抑制剂和天然产物。     

唾液腺肿瘤铜锌超氧化物歧化酶的免疫组化研究

采用生化手段检测肿瘤组织匀浆中铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)的含量及活性在献上已有报道，而肿瘤组织中CuZnSOD的免疫定位及定量研究报道较少，唾液腺肿瘤的CuZnSOD的免疫定位及定量仍不清楚，本应用卵白素一生物素一酶复合物(ABC)免疫组化法、免疫荧光直接法定位72例唾液腺肿瘤组织中的CuZnSOD，旨在探讨唾液腺肿瘤CuZnSOD的定位和含量变化及其与抗肿瘤治疗敏感性的关系。     

用亲和素-生物素-过氧化物酶法检测结合到聚苯乙烯板上的合成肽

本文介绍了一种检测肽是否吸附到聚苯乙烯板上的称为生物素-亲和素-生物素复合物(ABC)试验的简单化学方法,以助正确解释多肽抗体筛选中免疫吸附试验阴性的结果。具体程序是将合成的含11～27个氨基酸的肽(属人肌肉烟酸胆碱受体的α亚单位和人的小脑抗原等)加入板中,用NHS-LC-生     

基因转殖酵母菌培养液中生物素的高灵敏ELISA竞争测定法

目的　发展一种测定基因转殖酵母菌培养液中生物素的灵敏ELISA竞争测定法。方法　酶标板先用猪肺炎支原体包被 ,再依次用兔抗猪肺炎支原体抗血浆、羊抗兔IgG -生物素温育形成固态生物素 ,同溶液中的生物素 (标准液或试样 )竞争有限量的链霉亲和素 HRP。建立了在 5 0 - 2 0 0 0ng·L- 1 范围内生物素的标准曲线。结果　检测限为 83ng·L- 1 ,比文献报告的ELISA测生物素的最低测定浓度小 10 0 0倍。测定生物素浓度为 2 0 0、5 0 0、10 0 0ng·L- 1 的用空白培养液稀释的标准生物素试样的相对标准偏差分别是 2 4 87%、6 15 %、7 86 % ,平均回收率为 10 1 13%。在用本法测定野生酵母菌及其 6 3个基因转殖酵母菌培养液中的生物素时 ,发现 85 %以上的培养液试样中生物素浓度均得到不同程度扩增。结论　用猪肺炎支原体作包被蛋白 ,提高了ELISA结果的精确度和准确度 ,可供测定其它介质中生物素的参考     

Survivin蛋白在肺鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨Survivin蛋白在肺鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法用链霉菌生物素蛋白 过氧化物酶免疫组织化学法 (SP法 ) ,检测 4 2例手术切除的肺鳞癌组织及其 30例正常肺组织中Survivin蛋白的表达。结果 5 9 0 9%的肺鳞癌组织有Survivin蛋白表达 ,30例正常肺组织中无Survivin蛋白表达 (P <0 0 0 1)。Survivin蛋白与肺鳞癌组织病理分级、TNM分期、淋巴结转移预后正相关与性别、年龄、吸烟史无明显相关性 (P均 >0 0 5 )。结论Survivin蛋白在肺鳞癌组织发生发展中起抑制癌细胞凋亡的重要作用 ,从而Survivin基因有望成为基因治疗的新靶点。     

利用生物素-亲和素系统提高ELISA的灵敏度

ELISA的灵敏度一般低于或相当于微量固相放射免疫测定(RIA)。结合使用生物素-亲和素(Biotin-Avidin,B-A)系统,可提高ELISA灵敏度。B-A的优点表现为:(1)亲和     

用亲和素-生物素改良的反向被动血凝试验检测HIV抗原

分离和定量测定人类免疫缺陷症病毒(HIV),需要有鉴定感染细胞中病毒或其蛋白或核酸的方法.目前常用的方法有逆转录酶测定、分子杂交或ELISA.这些方法都需要昂贵的设备和材料且费时.作者介绍了一种检测HIV抗原的新方法,称为亲和素-生物素改良的反向被动血凝试验(AB RPHA).它是把人O型Rh阴性红细胞经过处理后,用亲和素包被,然后与生物素化的HIV抗体结合,在1%胎牛血清生理盐水中制成2%悬液,-70℃冻存或加10%葡萄糖冻干.     

喉癌组织中Survivin、MMP-2的表达、临床意义及相关性研究

目的探讨喉癌组织中存活素(Survivin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学链酶卵白素-生物素复合体(SABC)法检测Survivin、MMP-2蛋白在92例喉鳞状细胞癌及相距10 mm的癌旁组织和25例喉正常黏膜中的表达。结果 Survivin在喉癌组织中的阳性率(76.09%)明显高于癌旁(13.04%)及喉正常黏膜组织(8.00%),差异有统计学意义(P<0.05),与临床分期有关,与年龄、淋巴结转移、分化程度无关。MMP-2在喉癌组织中的阳性率(78.26%)明显高于癌旁(18.48%)及喉正常黏膜组织(12.00%),差异有统计学意义(P<0.05),与分化程度和临床分期有关,与年龄、淋巴结转移无关。两者呈正相关。结论 Survivin、MMP-2的异常表达可能对喉癌的发生、发展起重要作用,联合检测可能对喉癌的早期诊断、进一步治疗和判断预后有一定参考价值。     

游离PSA与总PSA比值在前列腺疾病诊断中的应用

目的 :探讨总前列腺特异性抗原 (T_PSA)、游离前列腺特异性抗原 (F_PSA)及F_PSA/T_PSA(F/T)比值的变化在良性与恶性前列腺疾病诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法 :应用链霉亲和素生物素酶联免疫吸附试验 (SAB_ELISA)方法 ,检测50例前列腺增生 (BPH)、41例前列腺癌 (PCa)及11例前列腺炎患者血清T_PSA、F_PSA含量并计算F/T比值。结果 :F/T比值在前列腺增生和前列腺癌中有显著性差异(P<0.01) ,当T_PSA在4～10μg/L之间时 ,前列腺增生和前列腺癌患者中F/T比值呈现显著差异(P<0.01)。结论 :同时检测T_PSA和F_PSA ,计算F/T比值 ,可弥补在诊断前列腺疾病的传统检验中单纯测定T_PSA的不足 ,尤其对T_PSA在4～10μg/L之间的诊断“灰色区”更有鉴别诊断的意义     

生物素修饰的冬凌草甲素脂质体的处方工艺优化

目的制备生物素修饰的冬凌草甲素脂质体,考察处方和工艺各因素对包封率的影响。方法以包封率为指标,应用L_9(3~4)正交实验设计优化生物素修饰的冬凌草甲素脂质体的处方和工艺。结果最佳处方组成为磷脂的质量浓度为30 g·L~(-1),氢化大豆卵磷脂(hydrogenated soybean phospholipids,HSPC)与大豆卵磷脂(soybean phospholipids,SPC)的质量比为1∶1,pH6.8的磷酸盐缓冲液,药物与磷脂的质量比为1∶18,磷脂与胆固醇的质量比为6∶1。生物素-甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(Biotin-PEG2000-DSPE)摩尔浓度为6 mol·L~(-1)。最佳制备工艺为二氯甲烷10 mL,成膜温度40℃。包封率为(81.52±2.21)%(n=3),平均粒径为(131±26)nm,Zeta电位为-(26.2±1.1)mV。结论优化得到最佳处方,制得的生物素修饰的冬凌草甲素脂质体粒径较小,包封率较高。