醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase-3活性的影响

目的　探讨醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase 3活性的影响。方法　采用四唑盐 (MTT)法检测IC50 值 ,用流式细胞仪、Hoechst3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡 ,比色法测定caspase 3活性。结果　用不同浓度的醋酸铅处理细胞 48h ,其IC50 值为 (0 44 5± 0 0 80 )mmol/L ;用 0 2 5、 0 5mmol/L醋酸铅处理细胞 48h ,可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改变 ,两铅处理组经流式细胞仪和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,cas pase 3活性也明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论　醋酸铅可诱导PC12细胞凋亡 ,其机制可能与caspase 3的活化有关。     

caspase-3和caspase-9在甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导肝癌细胞SMMC7721细胞凋亡中的影响

[目的]观察甘氨鹅脱氧胆酸钠(glycochenodeoxycholate,GCDCA)诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡过程中caspase3,9活性变化,探讨GCDCA诱导肝癌细胞凋亡的机制。[方法]体外培养SMMC7721细胞,GCDCA为处理因素,Annexin V—FITC/PI双染色法结合流式细胞技术仪检测细胞凋亡率,比色法测定caspase3,9活性。[结果]200μmol/L的GCDCA处理SMMC7721细胞24h,48h,72h后,其细胞凋亡率明显增加;caspase3,9活性表达水平明显升高,并与GCDCA呈浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]GCDCA可明显诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡,caspase3,9参与GCDCA诱导SMMC7721细胞凋亡调控。     

锰对大鼠生精细胞凋亡及caspase-3表达的影响

[目的]研究染锰大鼠睾丸生精细胞凋亡和caspase-3表达的变化。[方法]雄性SD大鼠48只随机分为6组:空白对照组,15mg/kg、30mg/kgMnCl2组。8只/组。15mg/kg、30mg/kgMnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水(NS),给锰及生理盐水途径均为腹腔注射,5d/周,1次/d,大鼠分别于第4周末和第6周末处死,取睾丸和附睾作以下检测:①检测精子数量;②应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(terminal deoxynucleotidy transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);③免疫组组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(streptavidin-biotin-peroxidase complex,SABC)法检测生精细胞caspase-3表达。[结果]①与空白对照组比较,各染锰组精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI均升高(P﹤0.05),caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。②染锰剂量相同,染锰6周组与染锰4周组比较,精子数量均显著降低,生精细胞AI与caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。③染锰时间相同,30mg/kgMnCl2组与15mg/kgMnCl2组比较,精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。④各组大鼠精子数量和生精细胞AI呈负相关(r=-0.700,P﹤0.05),和生精细胞caspase-3阳性细胞率呈负相关(r=-0.870,P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率呈正相关(r=0.855,P﹤0.05)。[结论]过量锰诱发大鼠生精细胞caspase-3高表达,从而导致凋亡增加,精子数量减少,这可能是大鼠生精障碍的主要机制。     

氟对大鼠肾脏组织中caspase-3和caspase-9蛋白表达影响

目的探讨氟对大鼠肾脏组织细胞凋亡过程中caspase-3和caspase-9蛋白表达的影响。方法48只SD大鼠分为对照组和低、中、高染氟组（氟化钠50、100、200 mg/L）,每组12只,120 d后测尿氟含量,处死大鼠,称体重及肾脏脏器重量,计算肾脏脏器系数,肾病理切片观察及caspase-3和caspase-9免疫组化测定。结果与对照组比较,高氟组大鼠体重降低（P<0.01）,中氟组肾脏脏器系数降低（P<0.05）,各染氟组大鼠尿氟含量均升高（P<0.01）,且尿氟含量与染氟浓度呈剂量-效应关系（r=0.925,P<0.01）;染氟组肾小球体型变大,肾小管排列结构紊乱、疏松,肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞发生变形、坏死、空泡、萎缩;与对照组比较,中、高剂量染氟组大鼠肾脏caspase-3、caspase-9蛋白表达量均明显增高（P<0.01）。结论氟中毒诱导大鼠肾脏组织中caspase-3和caspase-9蛋白表达增强,促进肾脏细胞凋亡。     

探讨中医疗法对大鼠局灶脑缺血模型caspase-3的影响

目的：探讨中医疗法对大鼠局灶脑缺血模型caspase-3（半胱天冬酶-3蛋白）的影响。方法：将72只大鼠制备局灶脑缺血模型,随机分为实验组48只和对照组24只,实验组应用中医疗法进行治疗,应用免疫组化观察caspase-3表达。结果：中医疗法能明显减少caspase-3蛋白阳性细胞的表达。结论：中医疗法对脑缺血治疗有效。     

caspase-3基因在染铝小鼠神经细胞凋亡中的作用

[目的]通过观察染铝小鼠海马的线粒体膜电位、组织形态以及脑组织内活化的caspase-3蛋白含量表达的变化,研究caspase-3 siRNA在铝致神经细胞凋亡中的作用。[方法]取3月龄雄性昆明小鼠,按体重随机分为4组,即空白对照组（生理盐水4μL）、染铝组（0.5%AlCl3.6H2O 4μL）、Al＋RNAi组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋目的siRNA表达载体1μL）、空载体组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋对照siRNA表达载体1μL）,通过侧脑室注射进行染毒,连续染毒5 d,各组小鼠海马的凋亡率用流式细胞术检测;线粒体膜电位用罗丹明123（Rhl23）染色流式方法检测;观察小鼠组织学变化;脑组织中活化的caspase-3蛋白的含量用蛋白印迹（Western blot）技术检测。[结果]凋亡率结果显示：与空白对照组相比,染铝组、空载体组的细胞凋亡率升高有统计学意义（P〈0.05）,Al＋RNAi组凋亡率尚无差别（P〉0.05）;线粒体经Rhl23染色呈现明亮绿色的荧光,染铝组和空载体组荧光强度较对照组明显减弱（P〈0.05）,Al＋RNAi组与空白对照组差异无统计学意义;常规HE染色镜下可见空白对照组小鼠海马神经元排列整齐,染铝组细胞排列零乱,细胞连接松解,空载体组细胞数量减少,siRNA处理后细胞状态与空白对照组相似;活化的caspase-3蛋白表达量结果显示染铝组高于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;空白对照组、空载体组、Al＋RNAi组之间尚无差别（P〉0.05）。[结论]RNA能通过下调caspase-3基因的表达,从而对铝致小鼠神经细胞凋亡产生抑制作用。     

藏茵陈对小鼠冠状病毒性肝炎细胞caspase-3影响

目的观察小鼠冠状病毒性肝炎肝细胞中caspase-3介导的凋亡机制变化,探讨藏茵陈对其干预作用及相关机制。方法将24只小鼠随机分成对照组、模型组、阳性对照组和藏茵陈组,造模成功后用赖氏法测定小鼠血清肝功能2项,苏木素-伊红染色光镜观察小鼠肝脏病理变化,用酶标仪检测肝匀浆caspase-3活性,用荧光定量PCR检测肝组织中Fas和caspase-3 mRNA含量。结果与对照组比较,模型组小鼠ALT、AST活力分别为(225.349±9.904)、(180.823±17.34)U/L,明显升高;病理切片显示肝脏损伤明显,caspase-3活性(0.371±0.051)、Fas和caspase-3 mRNA含量(1.93±0.08、0.867±0.102)均明显升高;藏茵陈干预后ALT、AST分别为(181.906±20.164)和(139.824±12.153)U/L,Fas和caspase-3 mRNA含量为(1.673±0.047)和(0.518±0.103),明显低于模型组(P<0.05),病理切片显示,藏茵陈组小鼠肝脏损伤与模型组比较有所改善。结论 Fas诱导的caspase-3细胞凋亡可能是小鼠冠状病毒性肝炎的致病机制之一,藏茵陈可通过抑制细胞凋亡并改善肝脏损伤程度。     

百草枯中毒大鼠肾脏病理变化及caspase-3的表达

目的观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肾脏病理变化和肾脏caspase-3的表达,探过PQ中毒肾损伤病理生理机制。方法 36只健康SD大鼠随机分为对照组和染毒组,染毒组合予80 mg/kg PQ一次性灌胃染毒建立急性中毒模型,对照组等量生理盐水灌胃。分别观察24、48、72 h肾组织病理学变化,同时采用免疫组织化学法观察caspase-3蛋白表达。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间单因素方差分析,结果以P<0.05为差异有统计学意义。结果对照组肾组织结构清晰,染毒组肾组织结构清晰度明显下降,染毒24 h可见充血、水肿等病理变化,随时间延长而加重;肾小球亦可受累。对照组caspase-3蛋白多不表达;染毒组染毒24 h在皮质部肾小管上皮细胞的胞膜及胞浆中caspase-3蛋白呈阳性表达,免疫组织化学评分(IHS)升高,与对照组各时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 caspase-3蛋白高表达提示其可能参与PQ中毒肾损伤病理生理过程。 更多还原     

氟化钠对大鼠软骨细胞活性的影响及DNA损伤作用

目的探讨氟化钠(NaF)对体外大鼠软骨细胞活性及DNA损伤作用的影响。方法自2月龄SPF级雌性SpragueDawley大鼠制取膝关节软骨细胞悬液。取对数生长期细胞(细胞密度为2×105个/孔),用含NaF终浓度为0(阴性对照)、0.1、1.0、10.0、20.0、40.0mmol/L的培养基分别处理2、4、8、24h,同时设立空白对照(DMEM/F12)组,采用MTT法检测细胞活性。根据MTT检测的结果,取对数生长期细胞(细胞密度为2×105个/孔),用0(阴性对照)、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mmol/LNaF染毒4h,阳性对照组在紫外灯下照射10min。用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测细胞DNA的损伤情况。结果与阴性对照组比较,染毒2h后20.0、40.0mmol/LNaF染毒组和染毒4、8、24h后10.0、20.0、40.0mmol/LNaF染毒组大鼠软骨细胞的细胞活性均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。与阴性对照组相比,各浓度NaF染毒组大鼠软骨细胞DNA损伤率均较高,差异有统计学意义(P0.01)。且随着NaF染毒浓度的升高,大鼠软骨细胞DNA损伤率呈升高趋势。与阴性对照组相比,1.0～10.0mmol/LNaF染毒组大鼠软骨细胞尾长、Olive尾矩和彗星矩较高,差异有统计学意义(P0.01)。且随着NaF染毒浓度的升高,大鼠软骨细胞尾长、Olive尾矩和彗星矩均呈上升趋势。结论在体外培养条件下,NaF能明显抑制大鼠软骨细胞的增殖,其作用机制可能与DNA损伤有关。     

苦参碱诱导NB4细胞凋亡作用及机制

目的 探讨苦参碱(Mat)诱导急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞凋亡作用及机制。方法 不同剂量Mat(0.25、0.50、1.00 mg/mL)作用于NB4细胞(24、48、72 h),噻唑蓝法(MTT) 检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色观测细胞形态学变化;流式细胞术(FCM)检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;分光光度法检测NB4细胞内caspase-3和caspase-8活性。结果 与对照组比较,Mat可明显抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈时间和剂量效应(P < 0.05);细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡特征;与对照组比较,0.50、1.00 mg/mL Mat组G₀/G₁期细胞比例(分别为57.91%、83.00%)明显增加,S期比例(分别为40.95%、16.10%)减少;与对照组比较,0.50、1.00 mg/mL Mat组NB4细胞内caspase-3酶活性[分别为(77.41±4.01)、(111.78±4.05)]、1.00 mg/mL Mat组NB4细胞内caspase-8酶活性(44.98±7.63)明显增强(P < 0.05)。结论 Mat可抑制NB4细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与G₀/G₁期细胞阻滞、抑制DNA合成并激活细胞内caspase-3、caspase-8凋亡途径有关。     

c-jun氨基末端激酶通路在一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡中的作用

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125,研究JNK通路对NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测软骨细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)法测定核因子(NF-κB)p65和p53蛋白的表达水平.结果 SNP作用于软骨细胞后,随着其浓度的增大,细胞早期凋亡率与对照组比较呈浓度依赖性增加,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-κB p65和p53的表达分别出现上调,差异有统计学意义(P＜0.05);加入JNK抑制剂SP600125能抑制这种增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JNK信号转导通路在NO诱导的软骨细胞凋亡起着非常重要的作用,JNK的特异性抑制剂SP600125能以浓度依赖方式减少兔关节软骨细胞中NO诱导的凋亡和NF-κBp65及p53蛋白的表达活性.     

促红细胞生成素对新生儿窒息后血清诱导HK-2细胞 Omi/HtrA2、caspase-3表达的影响

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对新生儿窒息后血清诱导的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)Omi/HtrA2、caspase-3表达的影响。方法:以HK-2为研究对象,分为对照组、窒息组、EPO干预组、EPO+5-HD(5-Hydroxydecanoic acid sodium salt,5-羟葵酸盐)干预组。以200 ml/L窒息后24 h血清作为攻击浓度。观察各组细胞形态,采用免疫组化法检测细胞Omi/HtrA2、caspase-3的表达。结果:与对照组相比,窒息组细胞形态变化显著,Omi/HtrA2、caspase-3表达明显增加;而与窒息组比较,EPO组细胞形态明显改善,Omi/HtrA2、caspase-3表达明显减少;加入5-HD后,EPO的保护作用被抑制。各组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:EPO可减少新生儿窒息后血清诱导的HK-2细胞内Omi/HtrA2、caspase-3表达。     

肝纤维化过程中calpain 2与caspase-3表达变化及意义

目的 探讨大鼠肝纤维化过程中钙激活中性蛋白酶2（calpain 2）与半胱氨酸天冬氨酸酶3（caspase-3）表达变化及其在肝纤维化发生发展中作用。方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照4、8周组和肝纤维化模型4、8周组,每组各10只;肝纤维化组按0.3 mL/100g皮下注射40% CCl₄植物油溶液,每隔3 d注射1次,对照组给予等量植物油;测定肝脏指数、血清谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）含量,苏木素伊红（HE）染色观察肝组织病理学改变;免疫组织化学法及western blot检测肝组织中calpain 2与活化的caspase-3蛋白表达含量;聚合酶链反应检测肝组织中calpain 2 mRNA表达。结果 肝纤维化4、8周组大鼠血清ALT、AST分别为（727.00±249.70）、（1 260.00±579.25）和（616.00±209.98）、（1 167.00±318.18）U/L,均高于对照组（P<0.01）;肝纤维化组大鼠肝组织发生明显的纤维化改变,其中以8周组更为明显;与对照组比较,肝纤维化8周组大鼠肝组织中calpain 2蛋白（23.1±3.77）和mRNA（167.93±50.39）表达均升高（P<0.01）,而在肝纤维化4、8周组活性caspase-3蛋白表达[（18.76±3.54)、（25.46±4.77)]均增加（P<0.01）。结论 calpain 2与caspase-3在蛋白及基因水平表达变化,可能参与了肝纤维化的发生发展过程。     

黄芪甲苷对阻塞性肺疾病大鼠caspase-12表达影响

目的 观察黄芪甲苷对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠内质网应激诱导的肺泡上皮细胞凋亡的保护作用。方法 将60只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和黄芪甲苷低、中、高剂量组,每组12只;除对照组其余各组均采用气管内滴注脂多糖联合熏烟方法制备COPD大鼠模型,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)法测定各组大鼠肺组织中细胞凋亡情况,采用Western blot法检测各组大鼠肺组织中caspase-3、caspase-12的表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织中细胞凋亡数量[(173.13±19.20)个/视野]明显升高;与模型组比较,黄芪甲苷高、中、低剂量组大鼠肺组织中细胞凋亡数量[分别为(149.23±8.95)、(118.77±9.47)、(78.87±9.59)个/视野]均减少(P<0.01);与对照组比较,模型组大鼠肺组织中caspase-3、caspase-12表达[分别为(0.847±0.103)、(0.706±0.042)]均升高;与模型组比较,黄芪甲苷高、中、低剂量组大鼠肺组织中caspase-3表达量[分别为(0.412±0.057)、(0.508±0.084)、(0.714±0.061)]与caspase-12表达量[分别为(0.341±0.052)、(0.393±0.065)、(0.516±0.087)]均降低(P<0.01)。结论 黄芪甲苷可减轻内质网应激介导的肺组织细胞凋亡,其机制可能与降低大鼠肺组织中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-12表达有关。     

2,5-hexanedione induced apoptosis in mesenchymal stem cells from rat bone marrow via mitochondria-dependent caspase-3 pathway

2,5-hexanedione (HD) induces apoptosis of nerve cells. However,the mechanism of HD-induced apoptosis remains unknown. Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotential stem cells with the ability to differentiate into various cell types. This study is designed to investigate the apoptosis induced by HD in rat bone marrow MSCs (BMSCs) and the related underlying mechanisms. The fifth generation of MSCs was treated with 0, 10, 20 and 40 mM HD respectively. The viability of BMSCs was observed by MTT. Apoptosis were estimated by Hoechst 33342 staining and TUNEL assay. The disruption of mitochondrial transmembrane potential (MMP) was examined by JC-1 staining. Moreover, the expression of Bax and Bcl-2, cytochrome c release, and caspase-3 activity were determined by real-time RT-PCR, Western blot and Spectrophotometry. Our results showed that HD induced apoptosis in MSCs in a dose dependent manner. Moreover, HD downregulated the Bcl-2 expression,upregulated the Bax expression and the Bax/Bcl-2 ratio, promoted the disruption of MMP, induced the release of cytochrome c from mitochondria to cytosol, and increased the activity of caspase-3 in MSCs. These results indicate that HD induces apoptosis in MSCs and the activated mitochondria-dependent caspase-3 pathway may be involved in the HD-induced apoptosis.     

子痫前期患者胎盘组织p-p38与caspase-3、8的表达及临床意义

目的 研究p-p38、caspase-3、caspase-8在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义.方法 选择2016年 6月至2017年 2月在西京医院妇产科住院分娩的孕妇80例,分为子痫前期组40例,正常妊娠组40例,采用免疫组化法及蛋白印迹法检测子痫前期患者和正常妊娠妇女胎盘滋养细胞中p-p38、caspase-3、caspase-8的表达.结果 p-p38、caspase3、caspase8在子痫前期胎盘和正常妊娠胎盘中均有表达;在子痫前期患者胎盘中p-p38、caspase-3、caspase-8表达与正常胎盘相比显著升高(2.08±0.04vs 1.44±0.04、1.72±0.03 vs 1.12±0.06、1.59±0.04 vs 1.18±0.01,t值分别为71、60、61,均P<0.01).结论 胎盘组织中p-p38、caspase-3、caspase-8的异常表达可能促进滋养细胞凋亡增加,推进子痫前期的发生发展.     

N-乙酰半胱氨酸和caspase-3抑制剂对镉诱导293细胞凋亡的拮抗作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(-Nacetyl cysteine,NAC)和caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)对镉致293细胞凋亡的影响,探讨氧化损伤和caspase途径在镉致细胞凋亡中的作用。方法体外培养的转化人胚肾293细胞分别以0、20、40、80、120、200μmol/L的氯化镉(CdCl2)处理0、3、6、12、24 h,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组分别在镉处理前以2.5、5.0、10.0 mmol/L的NAC和0.1、1.0、10μmol/L的Z-DEVD-fmk预处理24 h和1 h,然后再以40μmol/LCdCl2处理24 h,MTT法测细胞相对存活率,流式细胞术Annexin-V-PI双染法检测细胞凋亡百分率。结果随着镉处理浓度的增加,CdCl2对细胞活力的抑制作用增强,细胞的相对存活率明显降低,与0μmol/L镉处理组比较,40、80、120、200μmol/L镉处理组293细胞的凋亡百分率显著升高(P<0.01);200μmol/L镉处理组与120μmol/L CdCl2组比较293细胞的凋亡百分率显著下降(P<0.01)。与40μmol/L镉处理组比较,5.0 mmol/L和10 mmol/L NAC预处理组细胞凋亡百分率显著降低,0.1、1.0、10μmol/L Z-DEVD-fmk预处理可使镉致293细胞凋亡百分率显著降低。结论NAC和Z-DEMD-fmk对镉诱导293细胞凋亡有明显的抑制作用,镉诱导细胞凋亡与氧化损伤和caspase途径密切相关。