植物抗体基因工程：Ⅱ.马铃薯Y病毒中和抗体cDNA基因文库的构建及抗体…

从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中提取制备其基因组ｍＲＮＡ，并以此为模板，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔ１１中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。经免疫原位杂交，从该基因文库中筛先出３０个含抗体轻链基因和１０个含抗体重链基因的阳性克隆，进一步将其插入到ｐＧＥＭ－７Ｚ（＋）质粒中，经酶切分析和电泳检测，证实在获得的轻链和重链阳性克隆中各有一个质粒具有较长的外源ＤＮＡ     

淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达

淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307，提取细胞总RNA，采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0．6kb基因片段。构建其原核表达载体，IPTG诱导表达。结果表明，该融合蛋白分子量约48kD，可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。     

植物抗体基因工程：II．马铃薯Y病毒中和抗体cDNA基因文库的构建及含抗体轻链和重链基因阳性克隆的筛选

从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中提取制备其基因组ｍＲＮＡ，并以此为模板，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔ１１中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。经免疫原位杂交，从该基因文库中筛选出３０个含抗体轻链基因和１０个含抗体重链基因的阳性克隆，进一步将其插入到ｎＧＥＭ－７Ｚ（＋）质粒中，经酶切分析和电泳检测，证实在获得的轻链和重链阳性克隆中各有一个质粒（Ｋ６和Ｇ９）具有较长的外源ＤＮＡ插入（分别为１Ｋｂ和１．６Ｋｂ），它们可能编码完整的抗体轻链和重链蛋白。     

MnFe2O4多晶微粉的共沉淀法制备及磁性研究

用化学共沉淀法制备了MnFe2O4铁酸盐多晶微粉,发现与NiFe2O4相比,MnFe2O4的制备有其独特之处:反应温度在80℃以上时,经沉淀洗涤后直接得到MnFe2O4纳米微粉,不需热处理过程;反应温度在80℃以下时,需要对沉淀洗涤后前驱体进行热处理才能得到MnFe2O4纳米微粉.利用振动样品磁强计测量了样品在室温下的磁性能;利用X射线衍射确定了粉体的组成、晶粒大小和晶格常数;利用扫描电子显微镜观察了颗粒的形貌.     

SnO2-K2O-LiZnVO4系材料湿敏性能及导电机理的研究

采用共沉淀法制备出SnO2-K2O-LiZnVO4系湿敏粉体,考察了液相掺杂K 对材料湿敏特性的影响,并用直流特性法对材料的导电机理进行了分析.实验结果表明,适当的K 液相掺杂可使材料具有低湿电阻小,灵敏度适中的特性.直流特性法分析表明,材料属电子-离子混合导电机制,且离子电导成分越多材料的湿敏特性越好.     

Pb掺杂TiO2薄膜的制备及光催化活性研究

以硝酸铅和钛酸丁酯[Ti(OBt)4]为前驱体，用溶胶—凝胶法在活性炭表面制成了Pb掺杂TiO2薄膜，并用X射线衍射(XRD)、紫外可见光谱(UV—VIS)、透射电镜(TEM)对制得的Pb掺杂TiO2薄膜进行了表征，分别用甲基橙水溶液的光催化脱色反应、有机磷农药—氧化乐果(omethoate)水溶液的光催化降解反应评价了不同Pb掺杂TiO2薄膜的光催化活性。结果表明，薄膜为金红石和锐钛矿的混合晶相，相对于未掺杂的TiO2薄膜，由于金红石含量的增加，不同Pb掺杂TiO2薄膜的吸收带发生了微小的红移，Pb掺杂使薄膜的光催化活性明显提高，当Pb／TiO2质量分数为1．7％时，薄膜显示出最高的光催化活性。TiO2薄膜中的Pb可能以Pb(Ⅳ)和Pb(Ⅱ)两种形态存在，在紫外光的辐射下，Pb(Ⅳ)和Pb(Ⅱ)可能通过浅势俘获TiO2的光生电子和空穴而发生相互转化，减少了光生电子和空穴的简单复合，从而提高了薄膜的光催化活性。     

NaCo2O4及其Na位掺杂热电材料的制备研究

NaCo2O4是氧化物热电材料的典型代表,也是目前人们研究较多的一种热电材料,本文采用固相反应法和溶胶-凝胶法对NaCo2O4以及Na位掺杂K、Ca、Sr、Ce试样进行制备研究.选择合适的工艺参数,采用快速升温法,可获得纯度较高(大于94%)的NaCo2O4,并使掺杂元素K、Ca、Sr进入到NaCo2O4晶格中,而Ce由于原子半径太大,难以掺杂入NaCo2O4晶格.实验结果表明采用柠檬酸溶胶-凝胶法比固相反应法制备的试样晶粒尺寸更细小,增加声子散射,使晶格热导率降低,由此提高材料的热电优值,进一步改善材料的热电性能.     

花瓣状Fe_3O_4/Bi_2O_3复合粒子的制备及光催化活性

用共沉淀法制备的Fe3O4纳米粒子作为种子,通过水热法获得了微米尺寸的Fe3O4/Bi2O3复合粒子。X射线衍射和X光电子能谱表征结果说明复合粒子是由Fe3O4和Bi2O3组成。扫描电子显微镜照片表明复合粒子形貌基本呈规则球形,并且具有花瓣状的三维多级结构。以罗丹明B的催化降解实验为模型考察了不同反应组成、不同反应介质、不同反应温度条件下制备的复合粒子的催化活性。结果表明,当反应条件中m(Bi(NO3)3·5H2O)/m(Fe3O4)为1.9 g∶0.2 g,水作反应介质在160℃时,所制备的复合粒子催化活性最高,对罗丹明B的降解率达95.4%。降解完成后,用磁铁吸附,Fe3O4/Bi2O3很快从体系中分离,可以重新催化降解罗丹明B,实现磁场控制的循环催化。实验发现,Fe3O4/Bi2O3经6次循环利用后,对罗丹明B的降解率仍达88.5%。     

PVDF/SiO_2原位复合纳米纤维膜的制备及性能研究

采用原位复合溶胶一凝胶法配制复合纺丝液,通过高压静电纺丝制备出PVDF／SiO2复合纳米纤维膜。采用FTIR分析了PVDF与Si02分子间的相互作用,并通过TEM表征了纳米二氧化硅的具体分散状态。研究了纳米si02的加入对膜的热性能、结晶行为及力学性能的影响。结果表明,原位复合溶胶一凝胶法使纳米Si02在PVDF中具有...     

RP2突变体RP2-dser6的克隆和表达

视网膜色素变性是遗传性视觉损害以致失明的最常见原因之一,ＲＰ２是最近定位克隆的一个视网膜色素变性基因。为研究突变ＲＰ２蛋白与正常ＲＰ２蛋白的空间结构的差异及其对功能的影响,用突变的寡聚核苷酸引物自重组质粒ｐＥＴＲＰ２ ＰＣＲ扩增得到突变的ＲＰ２－ｄｓｅｒ６基因,克隆至ｐＥＴ１１Ｃ载体中,转化大肠杆菌ＢＬ２１菌株,重组子经序列分析鉴定后,在３７℃诱导Ｒ２－ｄｓｅｒ６突变蛋白表达,５ｍｍｏｌ／Ｌ ＩＰ     

靛蓝色素酶基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

将来源于Ralstonia eutropha磁中的靛蓝色素酶基因IDG与从棉花基因组DNA中克隆到的棉纤维特异启动子PTL12相连构建了真核表达载体。该表达载体中包含靛蓝色素酶基因的原核启动子，它能在大肠杆菌中启动靛蓝色素酶基因的表达。     

龙须菜藻红蛋白亚基基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

用PCR扩增方法得到真核红藻－龙须菜藻红蛋白亚基基因序列,与其它6种已知红藻相应序列比较,显示了很高的保守性。在7株藻中β亚基比α亚基保守,α亚基倾向于小区域保守,而β亚基倾向于大片段的保守。该蛋白必需氨基酸的含量较高。藻红蛋白亚基基因在大肠杆菌中达到较高的表达量,诱导4小时,特异表达产物占菌体可溶性蛋白的44％,表达产物呈溶解状态,而两亚基可能是分别翻译的。     

Changes in Gene Expression of E. coli under Conditions of Modeled Reduced Gravity

Relatively few studies have examined bacterial responses to the reduced gravity conditions that are experienced by bacteria grown in space. In this study, whole genome expression of Escherichia coli K12 under clinorotation (which models some of the conditions found under reduced gravity) was analyzed. We hypothesized that phenotypic differences at cellular and population levels under clinorotation (hereafter referred to as modeled reduced gravity) are directly coupled to changes in gene expression. Further, we hypothesized that these responses may be due to indirect effects of these environmental conditions on nutrient accessibility for bacteria. Overall, 430 genes were identified as significantly different between modeled reduced gravity conditions and controls. Up-regulated genes included those involved in the starvation response (csiD, cspD, ygaF, gabDTP, ygiG, fliY, cysK) and redirecting metabolism under starvation (ddpX, acs, actP, gdhA); responses to multiple stresses, such as acid stress (asr, yhiW), osmotic stress (yehZYW), oxidative stress (katE, btuDE); biofilm formation (lldR, lamB, yneA, fadB, ydeY); curli biosynthesis (csgDEF), and lipid biosynthesis (yfbEFG). Our results support the previously proposed hypothesis that under conditions of modeled reduced gravity, zones of nutrient depletion develop around bacteria eliciting responses similar to entrance into stationary phase which is generally characterized by expression of starvation inducible genes and genes associated with multiple stress responses.     

八肋游仆虫一种富含谷氨酸的蛋白GARP的表达与纯化

为研究游仆虫中含有三核苷酸重复序列的GARP基因编码的GARP蛋白在细胞中的功能,利用定点突变技术,将GARP基因中的TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGT.突变后的GARP基因构建于原核表达载体pRSETc中,得到重组质粒pRSETc-GARP,将pRSETc-GARP质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,带有纯化标签的重组蛋白His6-GARP获得可溶表达,表达产物与抗His抗体在约26 kDa处有很强的交叉反应.His6-GARP蛋白在不同pH条件下通过两次阴离子交换层析和一次凝胶层析三步纯化达到电泳纯.     

BMP－3和5在不同组织、细胞中的检测及其在大肠杆菌中的表达

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测了ＢＭＰ－３及ＢＭＰ－５在不同组织中的表达，并将ＰＣＲ扩增出的ｂｍｐ－３和ｂｍｐ－５ｃＤＮＡ克隆入ｐＧＥＸ表达载体．在大肠杆菌中得到高效表达。     

利用自剪切融合蛋白在大肠杆菌中表达并纯化兔防御素

将源自兔嗜中性细胞的防御素基因NP-1插入原核表达载体pTYB2,并将重组质粒pTYB2-NP1转入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导使防御素以融合蛋白的形式表达。然后,通过亲和层析利用自剪切融合蛋白分离提纯目的蛋白。蛋白电泳检测到以二聚体形式存在的防御素,但此蛋白没有对大肠杆菌的抑菌活性。同时,对该表达纯化系统的特点和用原核生物大肠杆菌表达真核生物防御素的问题进行了分析和讨论。     

热休克后表达受抑基因的mRNA差别显示和克隆

以人成骨肉瘤细胞株（ＨＯＳ－８６０３）作为热休克模型，用差别显示ｍＲＮＡ法（ｄｄｍＲＮＡ）筛选，发现和克隆了一个热休克后表达受抑的ｃＤＮＡ片段。在４３℃、４０分钟热处理后１小时，ＨＯＳ－８６０３细胞总ｃＤＮＡ图谱未见明显变化，但以该ｃＤＮＡ片段作为探针，ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，热休克后该基因的ｍＲＮＡ的量明显下降，而ｍＲＮＡ未见明显降解。我们将这个因热休克而选择性的表达受抑的基因命名为ＨＳＳＧ－１。对全长３１２ｂＰ的ｃＤＮＡ片段的序列分析表明，ＨＳＳＧ－１可能是一个未知的新基因。     

腺病毒载体介导的人凝血因子IX基因的离体和活体表达

为血友病Ｂ的基因治疗探索了高效转移和表达载体，建立了重组腺病毒载体介导的基因转移系统（Ａｄｈｆｉｘ），并进行了离体和活体表达研究。结果显示：腺病毒离体基因转移效率可达９８％以上并可在多种细胞中高效表达，ｈＦＩＸ蛋白最高可达６．８６μｇ／１０６细胞／２４ｈｒ。小鼠血浆中ｈＦＩＸ蛋白含量最高可达１０７２ｎｇ／ｍｌ血浆，并可持续表达１０周左右；以腹腔注射效果最好；免疫抑制剂环磷酰胺可明显延长表达持续时间。结果表明重组腺病毒载体可介导ｈＦＩＸｃＤＮＡ在离体细胞和活体组织中高效转移和表达。     

小白鼠心肌核DNA片段中的基因表达的分子开关的研究

原位染色发现,LDH（1－5）…nNAD^ (LDH：乳酸脱氢酶,NAD^ ,氢化型辅酶）可以进入核孔,可能与自己编码基因特异结合,体外表达实验中,稀释心肌DNA片段,促进LDH／DNA表达LDH（1－5）,LDH（1－5）表达量与LDH／DNA中可解离的LDH（1－5）量呈正相关性。同位素^14C标记L if impglk ty LDH(1-5)…NAD^ 可以抑制LDH／DNA体外表达,LDH（1－5）表达抑制量与加入LDH（1－5）…nNAD^ 量呈正相关性,AFM直接观察到活性基因两头的调控序列可能结合自己编码的蛋白等活性因子,基因表达与调控的分子开关主要是自己编码的蛋白等活性因子,展示了未来运用AFM和同位素标记法相结合研究生物学反应的前景。