C9orf72突变致病的分子机制

C9orf72突变是导致肌萎缩侧索硬化症和额颞叶痴呆最主要的突变形式,该突变由GGGGCC长重复序列插入C9orf72基因的内含子中造成.该突变有3种致病机制:由C9orf72蛋白表达量降低造成的功能缺失、长重复序列RNA造成的细胞毒性、长重复RNA转录产物造成的细胞毒性.本文就从3个方面综合分析了该突变的分子学致病机制,从RNA和蛋白质代谢以及核仁应激三方面总结了3种致病机制之间的联系,并对该突变致病机制研究遇到的困难和未来发展方向进行了总结和预测.     

Taura 综合征病毒主要结构蛋白的表达与纯化

根据Taura综合征病毒(TSV)基因组,设计特异性引物,从感染病毒组织中提取组织总RNA后扩增,分别将3个主要结构蛋白基因VP1、VP2和VP3克隆到pGEM TEasyVector.与表达载体连接后,导入大肠杆菌中诱导表达,并纯化目的蛋白.诱导表达的融合蛋白分子量分别为54.2×103、43×103和57.1×103,在变性条件下过柱纯化VP1和VP2,一次可以纯化10mg以上纯度较高的蛋白.     

污水中环丙沙星对活性污泥胞外蛋白质组学的影响研究

为了考察活性污泥法处理含环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)废水时污泥与CIP的相互作用,本文采用液相色谱-串联质谱研究CIP影响下活性污泥中胞外蛋白质的表达谱,并进行基因本体注释分析.在未投加CIP的对照组和CIP组中分别鉴定出高可信度蛋白质89和97种,相同表达蛋白质仅13种,差异显著.对照组和CIP组胞外蛋白质具有相似的等电点分布, CIP组大分子量胞外蛋白质增多.从亚细胞定位来看,对照组和CIP组分别有62.9%和66.0%的蛋白质细胞定位已知,说明大部分胞外蛋白质源于细胞裂解释放,CIP加入后胞外蛋白质发生了更新和重组,为CIP的吸附提供了结合位点;CIP的加入导致定位于细胞核的蛋白质显著减少.从分子功能和生物学过程来看, CIP的加入抑制了与DNA和RNA的结合、合成、转录等分子功能相关的蛋白质的表达,阻碍了DNA和RNA的转录、分解代谢等生物学过程;激发了具有核酸修复、蛋白质结合和架桥等分子功能的蛋白质的表达,促进了核酸损伤修复、应急反应、萜类化合物合成、蛋白质合成和代谢等生物学过程. CIP抑制了对照组中高丰度蛋白质的表达.可见, CIP通过影响活性污泥的生物...     

人乙醇脱氢酶ADH1B2在毕赤酵母中的表达及活性分析

根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115;重组毕赤酵母工程菌经0.5%（v/v）甲醇诱导72 h后目的蛋白以可溶形式表达,经DEAE-Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8 000 U·mg^-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADH1B2转染HepG2人肝癌细胞,发现细胞内ROS/GSH水平降低,Akt磷酸化水平降低,细胞活性下降.为临床酒精中毒预防和治疗药物的研发以及ADH在肝脏肿瘤方面的研究提供了理论基础.     

白粉病胁迫下甜瓜叶片蛋白组学分析

为深入研究甜瓜抗白粉病的分子机制,本文在蛋白质水平上探讨甜瓜应对白粉病胁迫的可能机理,寻找特定的白粉病胁迫应激反应蛋白,为分离、鉴定和克隆抗白粉病的基因奠定基础.本研究采用蛋白质双向电泳技术(twodimensional gel electrophoresis,2-DE),对甜瓜白粉病的感病品种"JS"和抗病品种"MR-1"叶片中差异超过1.5倍的36个蛋白质点进行MALDI-TOF-TOF/MS分析和数据库检索.鉴定出31个差异蛋白质,将鉴定出的可能与甜瓜白粉病相关的差异蛋白进行了初步分析.结果表明:白粉病诱导处理对两种甜瓜的叶片蛋白质表达有明显的影响,两种甜瓜的电泳图谱间存在较为明显的差异.相比而言",MR-1"中表达量下调的蛋白质点数要明显少于"JS",而表达量上调和特异性表达的蛋白质点则明显多于"JS",这种表达差异的存在可能是"MR-1"具有较强抗性的一种重要生理响应.     

草原兔尾鼠ZP3基因密码子优化及其在酵母中的表达

目的:提高草原兔尾鼠(L agurus lagurus)卵透明带3(LZP 3)基因在酵母细胞中表达的水平.方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP 3基因上6个稀有的密码子簇,将LZP 3基因中11个稀有的密码子更换成毕赤酵母(P ich ia Pastoris)最常用的相应密码子.将获得的LZP 3突变基因(LZP 3m)插入pGAPZαA中,构建穿梭表达载体.以重组体转化P ich ia Pastoris SM D 1168菌株进行表达.结果:LZP 3m基因的表达量比野生型LZP 3基因明显提高.结论:通过密码子优化,能显著提高LZP 3基因在酵母细胞中的表达水平.     

TEAD4与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系及分子机制探讨

探讨TEAD4表达与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系。用免疫组化MaxVision法结合光密度分析检测目标蛋白的组织表达。通过真核表达质粒pCMV3-TEAD4转染子宫颈鳞癌SiHa细胞以获得TEAD4基因过表达;应用Western blotting法检测细胞中目标蛋白的表达。分别利用CCK-8实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖和侵袭能力。子宫颈鳞癌组织中TEAD4平均表达水平(0.186±0.0355)显著高于正常宫颈上皮组(0.0494±0.0105,P<0.001),且TEAD4的表达与子宫颈鳞癌的淋巴结转移、脉管浸润和宫旁浸润有关(P<0.05),与子宫颈鳞癌的患者年龄、肿瘤大小、和分化程度无关。TEAD4的表达与MMP9的表达呈正相关关系(r=0.394,P<0.01)。TEAD4基因转染后的宫颈鳞癌细胞的增殖能力和侵袭能力显著增强。TEAD4基因转染诱导宫颈鳞癌细胞P-ERK1/2和MMP9蛋白表达上调,而ERK抑制剂(U0126)能显著抑制TEAD4诱导的MMP9上调。TEAD4高表达于子宫颈鳞癌,促进子宫颈鳞癌增殖和侵袭能力,其机制可能与TEAD4激活ERK1/2-MMP9信号通路有关。     

葡萄膜炎患者外周血单核细胞表达的疾病相关细胞因子的检测

用ELISA测IL-12、IFN—γ水平；用原位杂交染色法测IL—12 mRNA表达；电泳迁移率改变试验(EM—SA)测NF—AT活性。结果表明：葡萄膜炎患者PBMCIL—12、IFN—γ水平和IL—12m RNA表达以及NF—AT活性都显著高于正常对照和其他眼疾病患者(P＜0．01)．IL—12、IFN—γ水平异常增高是葡萄膜炎患者Th1／Th2功能紊乱、Th1细胞功能亢进主要原因之一；而在转录水平上NF—AT活性异常增高可能与患者IFN—γ基因转录增强密切相关。     

密码子优化的人溶菌酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及抗菌活性分析

人溶菌酶（human lysozyme,hLYZ）是一种天然活性蛋白质,具有抗菌性,目前主要应用于食品添加剂、动物饲料、药物治疗领域。根据毕赤酵母表达偏爱密码子特点,通过优化hlyz基因密码子,人工合成目的基因,构建了分泌表达载体pPIC9K-hlyz。通过电击转化法将pPIC9K-hly质粒重组至毕赤酵母GS115染色体中,经筛选得到重组毕赤酵母GS115-pPIC9K-hlyz。在28 ℃、pH 6.0、转速240 r·min^-1、1%甲醇诱导下表达120 h,发酵液上清酶活达到最高,为（2 414.9±108.1）U·mL^-1,蛋白浓度为166.7 μg·mL^-1。发酵液上清经过Sephadex G50纯化,获得较纯的hLYZ,经SDS-PAGE分析,在近14.7 kDa处显示单一条带。抗菌实验结果表明,重组hLYZ对革兰氏阳性菌的抗菌效果大于革兰氏阴性菌;重组hLYZ的抗菌效果是hLYZ标准品的10~20倍。     

丙型肝炎病毒NS5B基因在昆虫细胞中的表达

将含有丙型肝炎病毒（HCV）NS5B基因的转移载体pBlueBac5B与野生型杆状病毒(AcNPV)DNA共转染Sf9昆虫细胞,通过空斑纯化获得带有NS5B基因的重组病毒AcNS5B.提取重组病毒基因组DNA进行Southern分析,发现有一条1.8kb的DNA片段与标记的探针发生杂交.AcNS5B感染Sf9细胞后,在细胞中表达了分子量为66×103的蛋白,用Westernblot方法检查这种蛋白质,能与兔抗HCVNS5B抗血清发生特异的强烈反应.     

研究蛋白质相互作用的新系统——酵母双杂交系统

自酵母双杂交系统创建以来,已经成为研究蛋白质相互作用的重要手段,被广泛用于各个生物学研究领域,揭示了大量未知蛋白质之间的相互作用. 近来,在经典的酵母双杂交系统基础上,又相继提出许多新的研究方法,如:三杂交系统,单杂交系统,逆向双杂交系统,SOS富集系统等等. 酵母双杂交及其衍生系统已经成功地运用于蛋白质之间,蛋白质与DNA、RNA、配体之间的相互作用的研究     

室内窄频带低频噪声烦恼度与治理对策研究

低声级噪声对人们产生的影响目前尚未引起足够的重视，针对住宅楼底层箱式变压器引起的室内结构声污染，采用模糊数学原理进行了噪声烦恼度研究，发现在低频低噪声环境下（等效连续A声级＜35dB），仍能引起较高的烦恼概率，且噪声大小与噪声烦恼度仍存在着较好的关联关系；对于同一中心声级的噪声，室内噪声烦恼概率的改变主要是由于室内噪声频谱特性改变所致；在低噪声级环境下，小幅度增强中高频噪声，利用噪声的掩蔽效应，可降低噪声烦恼。这为改变工作或生活场所室内声环境质量提供了一个新的思路。在声学分析的基础上，提出了以隔振为主防治对策，获得理想效果。     

芳烃溶剂法合成对硝基苯甲酸的研究(Ⅰ)——合成对硝基苯甲酸的反应条件研究

以芳烃为溶剂,在自制催化剂存在下用空气氧化对硝基甲苯合成了对硝基苯甲酸,并对反应条件进行了研究. 实验结果表明,对硝基苯甲酸收率可达94.55% ,母液可以多次直接循环使用.     

基于基本对称函数产生器的模拟开关实现

开关－信号理论与传统的电路设计理论不同,它不是以门电路或其它集成块为基本单元,而是以开关元件为构造单元,本文应用形状－信号理论指导二变量基本对函数产处理品在及双向对称模拟开关的设计,并提出了基于双向对称模拟开关的对称函数的电路实现。     

电解沉积的分形维数与ZnSO_4溶液浓度的关系

用电沉积方法得到了不同浓度硫酸锌电解液的分形凝聚图像;进行图像处理,得到了其分形维数与浓度的关系曲线;用粒子扩散限制凝聚模型解释了此关系     

多值模运算的I2L电路实现

根据多值模代数运算理论及开关信号理论，建立了运用于I^2L电路设计的三值模运算的接地开关运算表示式。在此基础上，成功指导了对模3加、减、乘和除等运算电路的开关级设计，从而进一步完善了对多值模代数系统电路设计的研究。     

细 胞 凋 亡 的 研 究 进 展

本文介绍了细胞凋亡的基因调控及最新研究进展 . 介绍 ced-3,ced-4, ced-9, p53, bc1-2, c-myc 基因在细胞凋亡中的调控作用 . 强调了氧化诱导、 Caspase-3在细胞凋亡中的重要作用 .     

射频溅射法制备Pb_(1-x)Co_xSe薄膜及物性研究

利用复合靶共溅射法制备了半磁性半导体 Ｐｂ１－ ｘ Ｃｏｘ Ｓｅ 薄膜．研究了薄膜的成分结构以及电阻率温度特性和磁化率温度特性间的关系．结果表明：由于 Ｃｏ 离子介入, Ｐｂ１－ ｘ Ｃｏｘ Ｓｅ 发生了由金属特性向半导体特性的转变,在充分低的温度下,并伴有磁相转变．磁相转变温度与磁性离子浓度相关,磁化率的相对变化幅度与磁性离子浓度有关     

江汉平原典型区域洪涝调蓄能力估算研究

根据江汉平原渍涝灾害的多发性和重灾性的特点，选择江汉平原典型区域作为研究区，利用GIS技术建立微等高距数字高程模型，并利用回归分析方法确定试验区内淹没水位，淹没面积与淹水量之间的关系，结合试验区的农业用地的耕作线和农作物的耐淹时间及试验区的排涝能力，计算出试验区的洪涝调蓄容量，为江汉平原防灾减及区域农业规划提供科学依据。     

推移质运动的动力学模型

近底水充中推移质的输称属于固液二相流问题,本文针对固相推移质具有的随机和力学双重特性,通过类似分子运动论中Boltzmann方程的推导方法,建立起推移质运动的控制微分方程,其中碰撞项主要考虑推移层颗粒与床面层颗粒的碰撞效应,据此获得推移质输移问题的固液二相流模型－－动力学模型,将推移质通量与所受外力联系起来,便于揭示推移质运动的力学本质,开辟推移质理论研究的新途径。